從大豆廢糖蜜中回收異黃酮的製作方法

2023-06-11 06:16:46 1

>樣品染料木苷6」-OMAL-染料木苷6」-OAC-染料木苷染料木黃酮黃豆苷6」-OMAL-黃豆苷6」-OAC-黃豆苷黃豆苷原大豆異黃酮6」-OMAL-大豆異黃酮黃豆黃素大豆廢糖蜜ppm％異黃酮1∶4稀釋乳清ppm％異黃酮1∶4稀釋豆粕ppm％異黃酮1∶8稀釋乳清ppm％異黃酮1∶8稀釋豆粕ppm％異黃酮46787722219828621992852982751799132922171680241101000000000008813012611361272135337426529216133973356941261797928201796192118751381210429100000084221123212712452500523419214429640694114610010511288002860036037006640000在所有受到調節使異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷的樣品中，豆粕和液體部分二者中的異黃酮糖苷百分比明顯高於相應未轉化的大豆廢糖蜜樣品，且這些樣品中對應的異黃酮共軛物的百分比明顯地較低，這證明大部分異黃酮共軛物被轉化成它們的糖苷形式。另外，正如從大豆廢糖蜜起始原料與每個樣品中乳清和豆粕部分的相關濃度中可以看出，當分離過程時，大部分糖苷異黃酮被分離在豆粕中，形成了富含異黃酮糖苷的物質。實施例3再一個實驗，檢驗大豆廢糖蜜中異黃酮成為配基異黃酮的轉化率。將大豆廢糖蜜中的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷，再將異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮。測定異黃酮糖苷至配基異黃酮的轉化程度根據的是異黃酮族糖苷濃度的定量減少，同時同一異黃酮族配基百分比相應地定量增加。用水將大豆廢糖蜜起始原料稀釋成1∶4，並且分析各個異黃酮化合物的濃度。然後將廢糖蜜的pH調至11。大豆廢糖蜜置於室溫下持續1小時，以便產生富含糖苷的大豆廢糖蜜原料。分析富含糖苷的大豆廢糖蜜原料中各個異黃酮化合物的濃度。原料的pH調至4.5之後從富含糖苷的大豆廢糖蜜原料中準備四份樣品。在每份樣品中分別按廢糖蜜固體的重量添加10％的以下酶G-Zyme990，Biopectinase100L，Lactase50,000和α-Gal600L。然後在50℃將樣品處理6小時，形成富含配基異黃酮的大豆廢糖蜜原料。分析富含配基異黃酮大豆廢糖蜜的異黃酮含量。表3表示從前述試驗中所得各種形式異黃酮之間的分布。異黃酮濃度表示為樣品中的每百萬份中的份數(ppm)，還表示為具體異黃酮總量(共軛物、糖苷和配基形式的總和)的百分比。表3酶處理樣品的配基異黃酮含量明顯高於大豆廢糖蜜和富含糖苷的大豆廢糖蜜原料，這說明酶處理將基本數量上的糖苷異黃酮轉化成了配基異黃酮。通過Lactase50,000和α-Gal600L樣品中的異黃酮分布，證明了選擇合適的酶、酶濃度、轉化pH和溫度能允許將基本上全部的的異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮。實施例4最後一個實驗，檢驗富含異黃酮物質、富含異黃酮糖苷物質和富含配基異黃酮物質的異黃酮含量，並比較這些物質中異黃酮的分布。用水按1∶4比稀釋大豆廢糖蜜。將稀大豆廢糖蜜的一份樣品調至pH4.5，在冰浴中冷凝30分鐘至0.6℃溫度，並以3000rpm的速率離心30分鐘分離富含異黃酮物質的豆粕。然後將剩餘的稀大豆廢糖蜜用氫氧化鈉調至pH11，並在50℃下處理1小時，使廢糖蜜中異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。將富含糖苷廢糖蜜的一份樣品調至pH4.5，冰浴中冷凝30分鐘至0.6℃溫度，並以3000rpm的速率離心30分鐘分離富含異黃酮糖苷物質的豆粕。將剩餘的富含異黃酮糖苷大豆廢糖蜜原料調至pH4.5，並以2.6g酶/100g廢糖蜜原料的濃度加入酶G-Zyme990。然後在50℃下處理酶和富含異黃酮糖苷大豆廢糖蜜原料18-20小時，將異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮。將富含配基異黃酮的大豆廢糖蜜原料於冰浴中冷凝30分鐘至0.6℃溫度，並以3000rpm的速率離心30分鐘分離富含配基異黃酮物質的豆粕。然後分析富含異黃酮物質、富含異黃酮糖苷物質和富含配基異黃酮物質的豆粕中的異黃酮含量。表4表示富含異黃酮物質、富含異黃酮糖苷物質和富含配基異黃酮物質的豆粕中異黃酮的分布。異黃酮分布表示為具體異黃酮總量(共軛物、糖苷和配基形式的總和)的百分比。從物質的異黃酮分布中可以看到轉化步驟的效率。富含異黃酮糖苷物質含有異黃酮糖苷的量明顯高於富含異黃酮物質和富含配基異黃酮物質，它具有的異黃酮含量幾乎完全由異黃酮糖苷組成。富含配基異黃酮物質含有配基異黃酮的量明顯高於富含異黃酮物質和富含異黃酮糖苷物質，它具有的異黃酮含量幾乎全部由配基異黃酮組成。在以上實施例中，所有表示的6」-OMal-染料木苷、6」-OAc-染料木苷、6」-OMal-黃豆苷、6」-OAc-黃豆苷、大豆異黃酮、6」-OMal-大豆異黃酮和黃豆黃素的百分比皆是計算值。下面描述確定大豆產品中異黃酮數量的方法。將0.75g樣品(噴霧乾燥或精磨的粉)和50ml80/20甲醇/水溶劑混合，從大豆產品中提取異黃酮。用軌道搖動器在室溫下搖動混合物2小時。2小時後，通過WhatmanNo.42濾紙過濾除去剩餘的未溶物質。用4ml水和1ml甲醇稀釋5ml的濾液。使用HewlettPackardC18Hypersil反相柱，通過HPLC(高效液相色譜)分離提取異黃酮。將異黃酮注到柱上並用溶劑梯度洗脫，梯度開始時為88％甲醇、10％水和2％冰醋酸，結束時為98％甲醇和2％冰醋酸。在0.4ml/min的流速下，所有異黃酮-染料木苷、6」-0-乙醯染料木苷、6」-0-丙二醯染料木苷、染料木黃酮、黃豆苷、6」-0-乙醯黃豆苷、6」-0-丙二醯黃豆苷、黃豆苷、大豆異黃酮及其衍生物和黃豆黃素-被清晰地解析了。測定260mm下UV吸收的峰。用HPLC-質譜儀進行峰鑑定。使用由IndofineChemicalCompany，Sommerville，NJ得到的純標準樣(染料木苷、染料木黃酮、黃豆苷和黃豆苷原)作定量。計算上述每個化合物的響應係數(積分面積/濃度)並且用它測定未知樣品的數量。對沒有純標準樣可得到的共軛形式來說，假定響應係數是母體分子的響應係數，但母體分子對分子量差異作了校正。假定大豆異黃酮的響應係數是對分子量差異作過校正的染料木苷的響應係數。該方法提供了對各種異黃酮的定量。為方便起見，可以計算所有的染料木黃酮、所有的黃豆苷原和所有的黃豆黃素，並且如果所有的共軛形式都轉化成它們分別的非共軛形式，則表示為這些化合物的聚集重量。還可以使用酸水解轉化共軛形式的方法直接測定這些所有的異黃酮。前述的內容僅是本發明優選的實施方案。在不超出後面權利要求書要求的實質和更寬方面的範圍可以作出各種變化和改換，根據專利法包括DoctrineofEquivalents的基本原則可以解釋這一點。權利要求1.一種從大豆廢糖蜜中獲得富含異黃酮物質的方法，包括提供含有異黃酮的大豆廢糖蜜原料；在有效造成多數異黃酮將含在富含異黃酮物質的pH和溫度下，從所說的大豆廢糖蜜原料中分離所說的富含異黃酮物質。2.根據前述權利要求1的方法，其中所說的富含異黃酮物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。3.根據前述權利要求2的方法，其中所說的富含異黃酮物質是在pH約4.5時從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。4.根據前述權利要求2的方法，其中所說的富含異黃酮物質是在約0℃-約10℃溫度下從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。5.權利要求1的方法，還包括在從所說大豆廢糖蜜原料中分離所說富含異黃酮物質之前，形成具有固形物含量約3％-約28％的大豆廢糖蜜原料的含水混合物。6.根據前述權利要求1的方法，其中所說的富含異黃酮物質是通過離心從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。7.根據前述權利要求6的方法，其中所說的離心是當所說大豆廢糖蜜原料在溫度約0℃-約10℃且pH約3-約6.5時進行的。8.根據前述權利要求1的方法，其中所說的富含異黃酮物質是通過過濾從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。9.根據前述權利要求8的方法，其中所說的過濾是當所說大豆廢糖蜜原料在溫度約0℃-約10℃且pH約3-約6.5時進行的。10.權利要求1的方法，還包括形成所說的分離後的富含異黃酮物質的含水漿液，所說的富含異黃酮物質含有異黃酮共軛物；並且在一定溫度和一定pH下以足夠的時間處理所說的漿液，以便將所說漿液中的所說異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷，形成富含異黃酮糖苷的漿液。11.根據前述權利要求10的方法，其中所說的富含異黃酮物質的含水漿液具有約6％-約13％固形物含量。12.根據前述權利要求10的方法，其中將所說的漿液在pH約6-約13.5且溫度約2℃-約120℃下處理約15分鐘-約6小時的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。13.根據前述權利要求12的方法，其中將所說的漿液在pH約9-約11且溫度約5℃-約75℃下處理約15分鐘-約6小時的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。14.權利要求10的方法，還包括從所說的漿液中分離富含異黃酮糖苷的物質。15.根據前述權利要求14的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說漿液中分離的。16.根據前述權利要求15的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是在溫度約0℃-約10℃下從所說漿液中分離的。17.權利要求10的方法，還包括將所說異黃酮共軛物轉化成所說異黃酮糖苷之後，在一定溫度和一定pH下將酶和所說漿液中的異黃酮糖苷接觸足夠的時間，使異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮，形成富含配基異黃酮的漿液。18.根據前述權利要求17的方法，其中所說的酶與所說漿液中的所說異黃酮糖苷在pH約3-約9且溫度約5℃-約75℃下接觸至少約1小時。19.根據前述權利要求17的方法，其中酶與所說漿液中所說異黃酮糖苷的接觸包括向所說漿液添加有效量的補充酶。20.根據前述權利要求19的方法，其中所說的補充酶包括能夠裂解1，4-糖苷鍵的糖酶。21.權利要求17的方法，還包括從所說的漿液中分離富含配基異黃酮的物質。22.根據前述權利要求21的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說漿液中分離的。23.根據前述權利要求22的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在溫度約0℃-約10℃下從所說漿液中分離的。24.一種從含有異黃酮共軛物的大豆廢糖蜜中獲得富含異黃酮糖苷物質的方法，包括在有效使異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷的pH及溫度下以足夠的時間處理所說的大豆廢糖蜜，將所說異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷；並且從所說的大豆廢糖蜜中分離富含異黃酮糖苷的物質。25.根據前述權利要求24的方法，其中將所說的漿液在pH約6-約13.5且溫度約2℃-約120℃下處理，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。26.根據前述權利要求25的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約9-約11且溫度約5℃-約75℃下處理至少約15分鐘的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。27.根據前述權利要求26的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約11且溫度約5℃-約50℃下處理約15分鐘-約1小時的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。28.根據前述權利要求27的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約11且溫度約35℃下處理約30分鐘-約1小時，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。29.根據前述權利要求26的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約9且溫度約45℃-約75℃下處理約4小時-約6小時，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。30.根據前述權利要求24的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說大豆廢糖蜜中分離的。31.根據前述權利要求30的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是在溫度約0℃-約10℃下從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。32.根據前述權利要求30的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是在pH約4.5時從所說大豆廢糖蜜原料中分離的。33.根據前述權利要求30的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是通過離心從所說大豆廢糖蜜中分離的。34.根據前述權利要求30的方法，其中所說富含異黃酮糖苷的物質是通過過濾從所說大豆廢糖蜜中分離的。35.權利要求24的方法，還包括形成所說的分離後的富含異黃酮糖苷物質的含水漿液；並且在一定溫度和一定pH下以足夠的時間將酶與所說漿液中的所說異黃酮糖苷接觸以便將所說的異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮，形成富含配基異黃酮的漿液。36.根據前述權利要求35的方法，其中所說的酶與所說漿液中的所說異黃酮糖苷在pH約3-約9且溫度約5℃-約75℃下接觸至少約1小時。37.根據前述權利要求35的方法，其中酶與所說漿液中所說異黃酮糖苷的接觸包括向所說漿液添加有效量的補充酶。38.根據前述權利要求37的方法，其中所說的補充酶包括能夠裂解1，4-糖苷鍵的糖酶。39.權利要求35的方法，還包括在將所說異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮之後，從所說的漿液中分離富含配基異黃酮的物質。40.根據前述權利要求39的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說漿液中分離的。41.根據前述權利要求40的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在溫度約0℃-約10℃下從所說漿液中分離的。42.一種從含有異黃酮共軛物的大豆廢糖蜜中獲得配基異黃酮的方法，包括在一定pH和一定溫度下以足夠的時間處理所說的大豆廢糖蜜，使所說異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷；在一定pH及一定溫度下將酶和所說大豆廢糖蜜中異黃酮糖苷接觸足夠的時間，使所說的異黃酮糖苷轉化成配基異黃酮；並且從所說的大豆廢糖蜜中分離富含配基的異黃酮物質。43.權利要求42的方法，還包括在轉化所說異黃酮共軛物成異黃酮糖苷之前，形成具有固形物含量約3％-約28％的大豆廢糖蜜的含水混合物。44.根據前述權利要求42的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約6-約13.5且溫度約2℃-約120℃下處理至少約15分鐘以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。45.根據前述權利要求44的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約9-約11且溫度約5℃-約75℃下處理約15分鐘-約6小時的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。46.根據前述權利要求45的方法，其中將所說的大豆廢糖蜜在pH約11且溫度約5℃-約50℃下處理約30分鐘-約1小時的時間，以便將所說的異黃酮共軛物轉化成異黃酮糖苷。47.根據前述權利要求42的方法，其中所說的酶與所說大豆廢糖蜜中所說的異黃酮糖苷在pH約3-約9且溫度約5℃-約75℃下接觸至少約1小時。48.根據前述權利要求47的方法，其中所說的酶與所說大豆廢糖蜜中所說異黃酮糖苷是在溫度約35℃-約60℃下接觸的。49.根據前述權利要求42的方法，其中所說的酶與所說大豆廢糖蜜中所說異黃酮糖苷的接觸包括向所說大豆廢糖蜜中添加有效量的補充酶。50.根據前述權利要求49的方法，其中所說的補充酶包括能夠裂解1，4-糖苷鍵的糖酶。51.根據權利要求49的方法，其中補充酶選自α-葡糖苷酶、β-葡糖苷酶、β-半乳糖苷酶、萄糖澱粉酶、果膠酶，及其混合物。52.根據前述權利要求42的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在pH約3-約6.5且溫度約0℃-約35℃下從所說大豆廢糖蜜中分離的。53.根據前述權利要求52的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在溫度約0℃-約10℃下從所說大豆廢糖蜜中分離的。54.根據前述權利要求52的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是在pH約為4.5時從所說大豆廢糖蜜中分離的。55.根據前述權利要求52的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是通過離心從所說大豆廢糖蜜中分離的。56.根據前述權利要求52的方法，其中所說富含配基異黃酮的物質是通過過濾從所說大豆廢糖蜜中分離的。57.由前述權利要求1所述方法生產的富含異黃酮的物質。58.由前述權利要求14所述方法生產的富含異黃酮糖苷的物質。59.由前述權利要求21所述方法生產的富含配基異黃酮的物質。60.由前述權利要求24所述方法生產的富含異黃酮糖苷的物質。61.由前述權利要求39所述方法生產的富含配基異黃酮的物質。62.由前述權利要求42所述方法生產的富含配基異黃酮的物質。63.從大豆廢糖蜜中分離的富含異黃酮的物質。64.從大豆廢糖蜜中分離的富含異黃酮糖苷的物質。65.從大豆廢糖蜜中分離的富含配基異黃酮的物質。全文摘要本發明公開了從大豆廢糖蜜中回收異黃酮及其衍生物的方法。第一個實施方案中,公開了一種沒有任何明顯將異黃酮共軛物轉化成其它形式的回收異黃酮的方法。第二個實施方案中,公開了一種方法,其中於回收它們之前在大豆原料中將異黃酮共軛物轉化成糖苷。第三個實施方案中,公開了一種方法,其中於回收它們之前在大豆原料中將異黃酮轉化成配基形式。本發明還公開了從大豆廢糖蜜中得到的富含各種異黃酮的產品。文檔編號A23J3/16GK1174839SQ9711499公開日1998年3月4日申請日期1997年6月11日優先權日1996年6月11日發明者D·H·韋格爾,B·A·布賴恩申請人:蛋白質技術國際公司