肌酐含量測定方法及肌酐診斷試劑盒的製作方法

2023-06-11 16:59:16

專利名稱：肌酐含量測定方法及肌酐診斷試劑盒的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種測定肌酐含量的方法，同時本發明還涉及用於實現該方法的肌酐診斷試劑盒，屬於醫學檢驗測定技術領域。
背景技術：
測定肌酐主要有化學測定法(Jaffe法)、酶法、高效液相層析法和毛細管電泳法等。
化學測定法——成本低廉，操作簡便，是目前國內測定肌酐最常用的方法之一。標本中的肌酐與苦味酸鹽作用生成黃紅色的苦味酸肌酐複合物。此法的缺點是特異性不高，因為維生素C、丙酮、乙醯乙酸、甲基多巴以及高濃度葡萄糖、蛋白質和一些抗生素如青黴素G、頭孢西丁、頭孢唑啉等也能與鹼性苦味酸反應生成紅色。
高效液相層析法(HPLC)——肌酐在弱酸性環境中帶正電荷，通過陽離子交換層析柱可與其他成分很好分離，在234nm測定其光吸收。此法分析的精密度高、特異性好，但本法不適於大批量臨床標本分析，通常僅作為肌酐測定的參考方法，用於評價市售肌酐測定的試劑盒和某些科研目的。
毛細管電泳法——血清標本用高速離心作預處理，尿液標本可用低速離心，除去有形成分，上清液用膠束動電毛細管電泳分離後測定235nm處吸光度。本法測定線性範圍寬，操作較為簡便，但需用特殊設備和進行血清標本的預處理，臨床常規使用困難。
酶學測定法——主要有肌酐脫亞胺酶(Creatinine deiminase)和肌酐酶(Creatininase)兩大類。檢索發現，申請號為02139298.6、申請日為2002.11.15的專利申請公開了應用酶反應產物氧化型煙醯胺輔酶配製的測定試劑。該發明所指的酶法測定試劑並不加入測定反應所需的還原型煙醯胺輔酶或其類似物，而加入其反應產物氧化型煙醯胺輔酶或其類似物及其相應的生成還原型輔酶所需的酶和底物系統，通過在試劑內形成酶-底物-NAD或酶-底物-NADP等慢反應系統，將這類氧化型輔酶或其類似物緩慢循環還原為還原型煙醯胺輔酶或其類似物。當被還原的還原型煙醯胺輔酶或其類似物達到一定的濃度時，該發明所指的酶法試劑就可達到測定樣本中丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的目的。該發明的特點在於為丙氨酸氨基轉移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉移酶試劑、尿素養試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等的測試提供一個內源合成丙氨酸氨基轉移酶試劑、天門冬氨酸氨基轉移酶試劑、尿素養試劑、氨試劑、肌酐試劑和二氧化碳試劑等反應所需要的底物-還原型煙醯胺輔酶。其缺點之一為，這個系統在生成反應所需要的還原型煙醯氨輔酶的同時，也抵消了部分丙氨酸氨基轉移酶、天門冬氨酸氨基轉移酶、尿素、氨、肌酐和二氧化碳等的活性，造成試劑測試的準確性大大降低。其缺點之二是，該試劑在正式測試前必須事先反應一段時間，以便能夠產生足夠的還原型煙醯氨輔酶，這樣一來就造成了緩不濟急的結果，給測試帶來很大的不便。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提出一種可以克服以上現有技術缺點的肌酐含量的測定方法，同時給出實現該方法的肌酐診斷試劑盒，採用該試劑盒中的試劑不僅可以在紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀上進行肌酐含量測定，而且測定速度快、準確度高，因而可以得到切實的推廣應用。
本發明測定肌酐含量的方法步驟如下1)、將樣品與主要由輔酶、肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶、醛脫氫酶、還原型色原體組合組成的試劑混合，使之發生如下原理的反應肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水2)、檢測最終反應物在主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出肌酐含量的大小。
通常步驟2)將最終反應物置於紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器下，檢測主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出肌酐含量的大小。
以上樣品與試劑的混合比例按體積為1/10到1/250，以上過程的測定溫度控制在常規的20℃到50℃範圍，反應時間控制在常規的2-30分鐘。
本發明應用肌酐酶偶聯肌酸酶、肌氨酸氧化酶、醛脫氫酶、過氧化物酶反應連續監測法或比色法。肌酐酶將肌酐變成肌酸，再通過偶聯肌酸酶、肌氨酸氧化酶、醛脫氫酶、過氧化物酶等酶偶聯反應以及還原型色原體(Chromogen)組合系統，將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料，因此測量染料含量的高低(不同染料吸收波長不同，介於400--600nm之間)可以直接反映肌酐含量的大小。這個酶偶聯反應系統的優點有(1)它利用將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原或者吲嗒胺色原染料來反映肌酐含量，有精確度好的優點。(2)這個酶偶聯反應系統組成的反應成分都是外加的，不受內、外源物質的汙染，測試結果精確。
實現本發明方法的肌酐診斷試劑盒可以是單劑，包括緩衝液 40--200mmol/l輔酶 0.5--10mmol/l肌酐酶 l000--50000U/l肌酸酶 1000--50000U/l肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l過氧化物酶 500--50000U/l醛脫氫酶 500--50000U/l穩定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合 0.1--20mmol/l以上還原型色原體組合可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙(3-methyl-2-benzothiazolinone-hydrszone簡稱MBTH)或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒(4-aminoantipyrine)與0.1--20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸(phenol)N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺(N-ethyl-N-(3-sulfopropyl)-m-anisidine簡稱ESPAS)N，N-雙乙基-m-甲苯胺(N，N-Diethyl-m-toluidine)2，4-雙氯石碳酸(2，4-Dichloriphenol)
2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸(2，4，6-Tribromo-3-hydroxy-benzenesulfonic acid簡稱TBHB)3，5-雙氯石碳酸磺酸(3，5-Dichlorophenolsulfonic acid)3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸(3，5-Dichloro-2-hydroxy-benzenesulfonicacid簡稱DHBS)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽(N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine sodium簡稱TOOS)仨溴羥基苯甲酸(Tribromohydroxybenzoic acid)雙甲基苯胺(Dimethylaniline簡稱DMA)N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺(N-Ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine簡稱EHSPT)2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)(2，2′-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid)簡稱ABTS4-羥基-3-甲氧基苯甲酸(Vanillic acid(4-hydroxy-3-methoxybenzoic acid)簡稱HMB)3-甲基-乙基-羥基苯胺(3-methyl-ethyl-hydroxyaniline簡稱MEHA)也可以將以上單劑配成如下雙劑試劑I緩衝液40--200mmol/l輔酶 0.5--10mmol/l肌酸酶1000--50000U/l肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l過氧化物酶500--50000U/l醛脫氫酶 500--50000U/l
穩定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合(一)0.1--20mmol/l還原型色原體組合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
試劑II緩衝液 40--200mmol/l肌酐酶 1000--50000U/l穩定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合(二) 0.1--20mmol/l還原型色原體組合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四種成分之一石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
雙劑的配方不僅限於上述配方，還原型色原體組合(一)及(二)可以互換位置。其中的試劑I的成分，輔酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶、醛脫氫酶等可以放在試劑II。試劑II其中的成分，肌酐酶也可以放在試劑I，如此可以形成多種配方，不在此一一詳述。
還可以將試劑配成如下三試劑，更有利於試劑的穩定試劑I緩衝液 40--200mmol/l輔酶 0.5--10mmol/l穩定劑 10--50mmol/l
還原型色原體組合(一) 0.1--20mmol/l還原型色原體組合(一)可以是0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙或0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒二者中之一。
試劑II緩衝液40--200mmol/l肌酸酶1000--50000U/l肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l過氧化物酶500--50000U/l醛脫氫酶 500--50000U/l穩定劑10--80％(總體積)試劑III緩衝液40--200mmol/l肌酐酶1000--50000U/l穩定劑10--80％(總體積)還原型色原體組合(二) 0.1--20mmol/l還原型色原體組合(二)可以是0.1--20mmol/l以下十四種成分之一石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
三劑的配方不僅限於上述配方，還原型色原體組合(一)及(二)可以分開放在試劑I、II或III的任何位置。其中的試劑I的成分，輔酶可以放在試劑II或試劑III中。試劑II的成分，肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶、醛脫氫酶等等也可以放在試劑I或試劑III中。試劑III其中的成分，肌酐酶也可以放在試劑I或試劑II中，如此可以形成多種配方，不一一詳述。
緩衝劑的pH範圍可以是6.0～11.0。緩衝劑可以是三(羧甲基)氨基甲烷-鹽酸(Tris-HCl)緩衝液、磷酸鹽(Phosphate)緩衝液、三乙醇胺(Triethanolamine)緩衝液、2-氨基-2-甲基-1-丙醇(2-Amino-2-methyl-1-propanol)緩衝液、咪唑(Imidazole)緩衝液或雙甘氨肽(Glycylglycine)緩衝液等，但不僅限於這些緩衝液。
此外，為了減少各試劑成分之間的交叉影響、保持試劑的穩定性，以便長期儲存，以上單劑、雙劑的試劑I、試劑II或三劑的試劑I、試劑II、試劑III中通常加入穩定劑10～80％或者10～50mmol/l，穩定劑可以是乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、硫酸胺或鹽等中的一種或一種以上。
實驗表明，從測定結果的準確性和配製成本的經濟性兩方面綜合考慮，無論是單劑、雙劑還是三劑，如下配方成分關係的本發明肌酐診斷試劑盒較為理想緩衝液80--120mmol/l輔酶 1--5mmol/l肌酐酶8000--20000U/l肌酸酶8000--20000U/l肌氨酸氧化酶 6000--10000U/l醛脫氫酶 8000--20000U/l過氧化物酶10000--20000U/l穩定劑20--50％(總體積)還原型色原體組合 0.1--10mmol/l
由於本發明是完全利用酶學方法，酶解反應具有特異性高的特點，不易受到內、外源其他物質的幹擾。酶法方法簡便、易於操作。酶解反應的特異性促使測試結果精確。酶解反應都是在緩衝液條件下進行，沒有汙染環境問題。酶法方法不需要特殊、額外的儀器，測試成本低廉。因此可以保證具有較高的測試準確性，更便於推廣應用。
具體實施例方式
下面結合實施例子對本發明作進一步的說明。
實施例一(單劑)本實施例的肌酐診斷試劑盒包括緩衝液 80mmol/l輔酶 1mmol/l肌酐酶 8000U/l肌酸酶 8000U/l肌氨酸氧化酶 6000U/l醛脫氫酶 8000U/l過氧化物酶 10000U/l穩定劑 50％(總體積)4-氨基抗砒 2mmol/l石碳酸 10mmol/l在全自動生化分析儀上設定溫度37℃，反應時間10分鐘，測試主波長495～505nm，測試副波長600nm以上，被測肌酐樣品與試劑的體積比例為1/25，反應方向為正反應。
加入樣品和試劑後，使之混合，發生以下反應肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應物置於生化分析儀器下，檢測主波長495～505nm吸光度上升的速度，從而測算出肌酐的含量大小。
本實施例應用肌酐酶偶聯肌酸酶、肌氨酸氧化酶、醛脫氫酶、過氧化物酶反應連續監測法或比色法。肌酐酶將肌酐變成肌酸，再通過偶聯肌酸酶、肌氨酸氧化酶、醛脫氫酶、過氧化物酶等酶偶聯反應以及還原型色原體(Chromogen)組合系統，將無色的還原型色原體組合氧化成有顏色的醌亞胺色原(Quioneimine)或者吲嗒胺色原(Indamine)染料，因此測量染料含量的高低(不同染料吸收波長不同，介於400--600nm之間)可以直接反映肌酐含量的大小。
實施例二(雙劑)本實施例的肌酐診斷試劑有試劑I緩衝液 100mmol/l輔酶 3mmol/l肌酸酶 14000U/l肌氨酸氧化酶 8000U/l醛脫氫酶 14000U/l過氧化物酶 15000U/l穩定劑 50％(總體積)
4-氨基抗砒1mmol/l試劑II緩衝液100mmol/l肌酐酶14000U/l穩定劑50％(總體積)2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸1mmol/l測定肌酐含量時，溫度控制在30℃，反應時間15分鐘，測試主波長546nm，測試副波長630nm以上，被測肌酐樣品與試劑的體積比例為1/25，反應方向為正反應。
具體測定步驟為肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應物置於生化分析儀器下，檢測主波長546nm吸光度上升的速度，從而測算出肌酐的含量大小。
各反應步驟的反應時間控制在15分鐘。
實施例三(三劑)本實施例的肌酐診斷試劑為三劑，有試劑I緩衝液 120mmol/l
輔酶 5mmol/l穩定劑 20mmol/l3-甲基-2-苯噻唑酮腙 2mmol/l試劑II緩衝液 120mmol/l肌酸酶 20000U/l肌氨酸氧化酶 10000U/l醛脫氫酶 20000U/l過氧化物酶 20000U/l穩定劑 50％(總體積)試劑III緩衝液 120mmol/l肌酐酶 20000U/l穩定劑 50％(總體積)雙甲基苯胺 2mmol/l在全自動生化分析儀上設定溫度25℃，反應時間20分鐘，測試主波長578nm，測試副波長700nm以上，被測肌酐樣品與試劑的體積比例為1/25，反應方向為正反應。
具體測定步驟為肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應物置於生化分析儀器下，檢測主波長578nm吸光度上升的速度，從而測算出肌酐的含量大小。
各反應步驟的反應時間控制在10分鐘。
實施例四本實施例的肌酐診斷試劑有試劑I緩衝液 100mmol/l輔酶 2mmol/l穩定劑 20mmol/l4-氨基抗砒 1mmol/l試劑II緩衝液 100mmol/l肌酐酶 10000U/l肌酸酶 10000U/l肌氨酸氧化酶 8000U/l醛脫氫酶 10000U/l過氧化物酶 20000U/l穩定劑 50％(總體積)雙甲基苯胺 2mmol/l測定肌酐含量時，溫度控制在30℃，反應時間10分鐘，測試主波長578nm，測試副波長700nm以上，被測肌酐樣品與試劑的體積比例為1/25，反應方向為正反應。
加入樣品和試劑後，使之混合，發生以下反應
肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氧化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水將最終反應物置於生化分析儀器下，檢測主波長578nm吸光度上升的速度，從而測算出肌酐的含量大小。
各反應步驟的反應時間控制在10分鐘。
總之，實驗證明，採用本發明的測定方法完全可以通過紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀器得出所需的測定結果，並且靈敏度高、精確度好，不受內、外源物質的汙染。
權利要求
1.一種肌酐含量測定方法，步驟如下1)、將樣品與主要由輔酶、肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶、醛脫氫酶、還原型色原體組合組成的試劑混合，使之發生如下原理的反應肌酐+水肌酐酶肌酸肌酸+水肌酸酶肌氨酸+尿素肌氨酸+氧+水肌氨酸氧化酶過氫化氫+甲醛+甘氨酸甲醛+輔酶+水醛脫氫酶二氧化碳+過氧化氫+還原性輔酶+氫離子過氧化氫+還原型色原體組合過氧化物酶吲嗒胺色原或醌亞胺色原+水2)、檢測最終反應物在主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出肌酐含量的大小。
2.根據權利要求1所述肌酐含量測定方法，其特徵在於所述步驟2)為將最終反應物置於紫外/可見光分析儀或者半、全自動生化分析儀下，檢測主波長400--600nm吸光度上升的速度，測算出肌酐的含量。
3.根據權利要求1或2所述肌酐含量測定方法，其特徵在於溫度控制在20℃到50℃範圍，反應時間控制在2-30分鐘。
4.根據權利要求1或2所述肌酐含量測定方法，其特徵在於被測肌酐樣品與試劑的比例控制在1/10到1/250。
5.一種肌酐診斷試劑盒，由以下成分組成緩衝 40--200mmol/l輔酶 0.5--10mmol/l肌酐酶 1000--50000U/l肌酸酶 1000--50000U/l肌氨酸氧化酶 1000--20000U/l過氧化物酶 500--50000U/l醛脫氫酶 500--50000U/l穩定劑 10--80％(總體積)還原型色原體組合 0.1--20mmol/l
6.根據權利要求5所述肌酐診斷試劑盒，其特徵在於所述試劑配成單劑、雙劑或三劑。
7.根據權利要求5或6所述肌酐診斷試劑盒，其特徵在於所述穩定劑為乙二醇、丙二醇、甘油、聚糖、聚醇、鹽或腺苷二磷酸中的至少一種。
8.根據權利要求5或6所述肌酐診斷試劑盒，其特徵在於所述緩衝劑的pH範圍是6.0～11.0。
9.根據權利要求5或6所述肌酐診斷試劑，其特徵在於所述還原型色原體為0.1-20mmol/l的3-甲基-2-苯噻唑酮腙與0.1-20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
10.根據權利要求5和6所述肌酐診斷試劑，其特徵在於所述還原型色原體組合為由0.1-20mmol/l的4-氨基抗砒與0.1-20mmol/l以下十四種成分之一組合而成石碳酸、N-乙基-N-(3-硫丙基)-m-噻啶胺、N，N-雙乙基-m-甲苯胺、2，4-雙氯石碳酸、2，4，6-仨溴-3-羥基-苯磺酸、3，5-雙氯石碳酸磺酸、3，5-雙氯-2-羥基-苯磺酸、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺鈉鹽、仨溴羥基苯甲酸、雙甲基苯胺、N-乙基-N-(2-羥基-3-硫丙基)-m-甲苯胺、2，2′-AZINO-雙(3-乙基苯噻唑-6-磺酸)、4-羥基-3-甲氧基苯甲酸、3-甲基-乙基-羥基苯胺。
全文摘要
本發明涉及一種測定肌酐含量的方法，同時本發明還涉及肌酐診斷試劑盒，屬於醫學檢驗測定技術領域。該試劑盒包括緩衝液、輔酶、肌酐酶、肌酸酶、肌氨酸氧化酶、過氧化物酶、醛脫氫酶、還原型色原體組合、穩定劑，通過將樣品與試劑按一定的體積比混合，使之發生酶偶聯反應，再將最終反應物置於生化分析儀下，檢測主波長吸光度變化的情況(速度)，從而測算出肌酐的含量大小。採用本發明完全可以通過生化分析儀器得出所需的測定結果，並且靈敏度高、精確度好，不受內外源物質的汙染，便於推廣應用。
文檔編號C12Q1/32GK1769476SQ200410065299
公開日2006年5月10日 申請日期2004年11月5日 優先權日2004年11月5日
發明者王爾中 申請人:王爾中