一種在培養基中添加半乳糖以提高林可黴素產量的方法
2023-09-23 05:35:40 1
專利名稱：一種在培養基中添加半乳糖以提高林可黴素產量的方法
技術領域：
本發明屬於生物技術領域，具體地說，涉及一種在培養基中添加半乳糖 以提高林可黴素產量的方法。
背景技術：
林可黴素(Lincomydn，簡稱LCM)又稱潔黴素，對革蘭氏陽性菌有很 好的抑制作用，它沒有交叉耐藥性而且本身的毒性較低，所以被廣泛應用於 由革蘭氏陽性菌引起的疾病，同時，對革蘭氏陰性菌亦有一定的抑制作用。 林可黴素及其下遊半合成產品稱為林可醯胺類抗生素，林可醯胺類抗生素已
成為臨床應用上主要的抗生素之一。
一般所說的林可黴素是指其A組份，它是由古柯葉液鹼PHA (反式-N-甲基-4-正丙基脯氨酸(PPL)和甲硫林可醯胺MTL (6-氨基-6， 8-二脫氧-1-硫代-0-赤式-2-D-半乳糖吡喃糖苷)兩部分通過肽鍵連接而成的抗生素。如圖 1所示，林可黴素A的生物合成途徑分為兩個分枝，兩個分枝分別生成丙基 脯氨酸(PPL)和甲硫林可胺(MTL)。
國外研究發現，發酵過程中直接添加作為前體的丙基脯氨酸可以提高林 可黴素A的產量而相應減少林可黴素B的產量，但添加半乳糖(甲硫林可胺 的結構類似物)是否會提高林可黴素A的產量則尚未有相關報導。
發明內容
本申請的發明人在研究提高林可黴素產量的過程中發現，向林可黴素的 發酵培養基中加入適量的半乳糖，能提高林可黴素的產量。因此，本發明的目的在於，提供一種提高林可黴素產量的方法，該方法 通過向林可黴素的發酵培養基中加入適量的半乳糖來實現。
根據本發明的一個優選實施例，使用的林可黴素產生菌為林肯鏈黴菌
(5^e戶tom少cM //wco/"e"w、)，保藏號為CCTCC M 208064 。
根據本發明的一個優選實施例，半乳糖加入的量為培養基重量的0.01
0.1%,更優選的為0.05 0.1%;
根據本發明的一個優選實施例，加入的時間為在培養基中加入林肯鏈黴
菌0 144小時，更優選的加入時間為在培養基中加入林肯鏈黴菌48 120小時。
使用本發明提供的方法，通過在發酵培養基中添加適量的在林可黴素合 成中不作為前體物質的半乳糖，可明顯提高林可黴素的產量。
圖1是林可黴素A的生物合成途徑。
具體實施例方式
以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅 用於說明本發明而非用於限定本發明的範圍。
在本發明的下述實施例中，使用的林肯鏈黴菌(5^印towyc^ //wco/"em&) 已於2008年04月25日提交位於武漢大學的中國典型培養物保藏中心 (CCTCC)保藏，保藏號為CCTCCM 208064。
在本發明的實施例中，除特別說明外，所使用的比例均為重量百分比。 在本發明的實施例中，發酵培養基的配方為0.8% (NH4)2S04， 0.8%
NaN03， 0.5%NaCl， 0.02% K2HP04， 3%黃豆餅粉，0.2%玉米漿，0.8% CaC03，
5%葡萄糖，pH7.0。在本發明的實施例中，林可黴素的效價採用杯碟法進行檢測，中國藥典
2005版(二部)。
實施例1 、不同濃度半乳糖對林可黴素生物合成的影響 向林可黴素發酵培養基中分別加入不同濃度的半乳糖，同時以不添加半
乳糖的培養基作為對照，接入林肯鏈黴菌(&^ptom>^"//"c0/"em&)發酵培 養168小時後，取樣測定林可黴素的效價，結果如表l所示。
表l、不同濃度半乳糖對林可黴素生物合成
半乳糖添加量(％)0.010.050.10.51對照
相對效價(u/ml)1091121139597100
表l的結果顯示，在培養基中添加0.01 0.1%的半乳糖，使林可黴素的 產量提高9 13%，但隨著半乳糖加入量的逐步提高，林可黴素的產量開始 下降，當半乳糖加入量至0.5%時，林可黴素的相對效價下降至對照的95%。
實施例2、不同濃度半乳糖對林可黴素生物合成的影響 取添加半乳糖濃度為0.05%,在不同時間添加到林可黴素發酵培養基中，
發酵培養168小時後，取樣測定林可黴素的效價，同時以不添加半乳糖的培
養基作為對照，結果如表2所示。
表2、不同時間添加半乳糖對林可黴素生物合成
半乳糖添加時間(h)024487296120144對照
生物效價(u/ml)109112116117117117107100表2的結果顯示，在發酵過程中添加半乳糖能提高林可黴素的生物合成 產量，尤其在發酵的48h 120h，添加0.05°/。的半乳糖，可使林可黴素的產量 提高17%。
綜上所述，在林肯鏈黴菌(Sfre/ tow^c^/zV2co/"em&)的發酵培養基中添 加0.01 0.1%的半乳糖，可明顯提高林可黴素的產量，產量最高提高了 17%; 其最適添加量、最適添加時間分別為48h 120h添加0.05X脯氨酸。
權利要求
1、一種提高林可黴素產量的方法，其特徵在於，該方法通過向林可黴素產生菌的發酵培養基中加入半乳糖來實現。
2、 如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述林可黴素產生菌為林肯 鏈霄菌(5^，o附yces //"co/wms/sO 。
3、 如權利要求2所述的方法，其特徵在於，所述林肯鏈黴菌保藏號為 CCTCCM 208064。
4、 如權利要求l所述的方法，其特徵在於，所述半乳糖加入的量為培養 基重量的0.01 0.1%。
5、 如權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述半乳糖加入的量為培養 基重量的0.05 0.1%。
6、 如權利要求1所述的方法，其特徵在於，所述半乳糖加入的時間為在 培養基中加入林肯鏈黴菌0 144小時。
7、 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述半乳糖加入的時間為在 培養基中加入林肯鏈黴菌48 120小時。
8、 如權利要求l所述的方法，其特徵在於，所述林可黴素產生菌的發酵 培養基的配方為0.8% (NH4)2S04， 0.8D/。NaNO3， 0.5%NaCl， 0.02%K2HPO4， 3%黃豆餅粉，0.2%玉米漿，0.8%CaCO3, 5%葡萄糖，pH7.0。
全文摘要
本發明提供了一種在培養基中添加半乳糖以提高林可黴素產量的方法，該方法通過向林可黴素產生菌的發酵培養基中加入適量的半乳糖來實現。使用本發明提供的方法，通過在發酵培養基中添加適量的半乳糖，可明顯提高林可黴素的產量。
文檔編號C12R1/565GK101684482SQ20091005359
公開日2010年3月31日 申請日期2009年6月23日 優先權日2009年6月23日
發明者儲成亮, 葉蕊芳, 周曉芳, 銳 張, 張宏周, 朱義彬 申請人:華東理工大學;河南天方藥業股份有限公司