一種中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法

2023-09-23 17:50:40 5

一種中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法
【專利摘要】本發明公開了一種中藥組合物製劑中多種成分含量的測定方法，屬於中藥領域，具體製備步驟為：供試品溶液的製備、對照品溶液的製備、UPLC檢測、標準曲線的制定及結果計算。本發明的測定方法周期短、靈敏度高。
【專利說明】一種中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於中藥分析領域，具體涉及中藥成分的含量測定方法。

【背景技術】
[0002] 該中藥組合物具有清瘟解毒，宣肺洩熱的功效，適用於流行性感冒治療，症見：發 熱或高熱，惡寒，肌肉酸痛，鼻塞流涕，咳嗽，頭痛，咽乾咽痛，舌偏紅，苔黃或黃膩等。主要成 分包括連翹、金銀花、炙麻黃、炒苦杏仁、石膏、板藍根、綿馬貫眾、魚腥草、廣藿香、大黃、紅 景天、薄荷腦、甘草。
[0003] 為了能夠有效的控制產品質量，保證公眾的用藥安全，必須對生產工藝的中間環 節進行質量控制，但是該中藥組合物中成分比較多，而採用HPLC檢驗周期長，重複性、靈敏 度等無法滿足連續生產的需要。


【發明內容】

[0004] 本發明目的是提供一種周期短、靈敏度高的檢測一種中藥組合物中多種成分含量 的方法。
[0005] 本發明所採用的技術方案是： 一種中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法，該中藥組合物製劑由下列重量 份的原料藥製成：連翹200-300 金銀花200-300 板藍根200-300大黃40-60廣 藿香60-100綿馬貫眾200-300紅景天60-100 薄荷腦5-9 麻黃60-100 苦杏 仁60-100 魚腥草200-300 甘草60-100石膏200-300,該含量測定方法由以下步驟組 成： A、 供試品溶液的製備：稱取該中藥組合物製劑l_2g，加甲醇50mL，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補足重量，過濾，搖勻，即得； B、 對照樣品溶液的製備：分別稱取綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧 酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品，加70%甲醇，搖勻，即得不同濃度的各對照品溶液； C、UPLC檢測：色譜柱為C18，柱溫40°C，流動相為甲醇-乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脫：0-2min，3% 甲醇，3% 乙腈，94% 的 0? 1% 磷酸；2-3min，3%-5% 甲醇，3%-5% 乙腈，94%-90% 的 〇? 1% 磷酸；3-10min，5%-20% 甲醇，5% 乙腈，90%-75% 的 0? 1% 磷酸；10-13. 5min，20% 甲醇， 5%乙腈，75%的0. 1%磷酸；13. 5-22. 5min，85%甲醇，5%乙腈，10%的0. 1%磷酸；檢測波長 237nm，流速為 0? 2-0. 4mL/min； D、 標準曲線的制定及計算結果：分別將綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯 奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品溶液0. 5-10mL注入步驟c中超高效色譜儀中分析，以 色譜峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，得到各對照品溶液的標準曲線；然後將供試樣品溶 液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標準曲線中，得到綠原酸、連翹酯苷A、隱 綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸的含量。
[0006] 優選地，所述步驟C中色譜柱為ACQUITYBH!C18，規格為1. 7iim，2.IX100mm， 流速為 〇? 4mL/min。
[0007] 作為優選方式，中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法有以下步驟構 成： A、 供試品溶液的製備：稱取該中藥組合物製劑l_2g，加甲醇50mL，稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補足重量，過濾，搖勻，即得； B、 對照樣品溶液的製備：分別稱取綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧 酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品，加70%甲醇，搖勻，即得不同濃度的各對照品溶液，綠原酸 濃度為〇. 70mg.mL'連翹酯苷A為0. 2lmg.ml/1、隱綠原酸為0. 6lmg.mL'3, 4-二咖啡醯奎 寧酸為〇? 83mg.mL'4, 5-二咖啡醯奎寧酸為0? 18mg.ml/1 ; C、UPLC檢測：色譜柱為C18，柱溫40°C，流動相為甲醇-乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗 脫：0-2min，3% 甲醇，3% 乙腈，94% 的 0? 1% 磷酸；2-3min，3%-5% 甲醇，3%-5% 乙腈，94%-90% 的 0? 1% 磷酸；3-10min，5-20% 甲醇，5% 乙腈，90%-75% 的 0? 1% 磷酸；10-13. 5min，20% 甲醇， 5%乙腈，75%的0. 1%磷酸；13. 5-22. 5min，85%甲醇，5%乙腈，10%的0. 1%磷酸；檢測波長 237nm，流速為 0? 2-0. 4mL/min； D、 標準曲線的制定及計算結果：分別將綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯 奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品溶液0. 5-10mL注入步驟c中超高效色譜儀中分析，以 色譜峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，得到各對照品溶液的標準曲線；然後將供試樣品溶 液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標準曲線中，得到綠原酸、連翹酯苷A、隱 綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸的含量。
[0008] 作為優選，該中藥組合物由下列重量份的原料藥製成： 連翹200 金銀花300板藍根200大黃60廣藿香60 綿馬貫眾300紅景天60薄荷腦9麻黃60 苦杏仁100 魚腥草200 甘草 100石膏 200。
[0009] 作為優選，該中藥組合物由下列重量份的原料藥製成： 連翹300 金銀花200板藍根300大黃60廣藿香100 綿馬貫眾200紅景天60薄荷腦5麻黃100 苦杏仁60 魚腥草300 甘草 60石膏 300。
[0010] 作為優選，該中藥組合物由下列重量份的原料藥製成： 連翹255 金銀花255板藍根255大黃51廣藿香85 綿馬貫眾255紅景天85薄荷腦7. 5麻黃85苦杏仁85 魚渥草255 甘草 85石骨 255。
[0011] 為了驗證本發明的方法的可行性和精確度，作了如下的試驗： 精密度考察 分別吸取IUL綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯 奎寧酸對照品溶液，分別連續進樣6次，測定峰面積，結果綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、 3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品峰面積的RSD分別為I. 48%、1. 30%、 1. 20、1. 09%%和2. 06%，說明儀器精密度良好。
[0012] 穩定性試驗 吸取實施例1中的供試品溶液，於〇、2、4、8、12、24h進樣，測定峰面積，結果供試品中綠 原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品峰面積的RSD分別為1. 10%、1. 15%、1. 56%、1. 47%和1. 71%，說明24h內供試品溶液穩定。
[0013] 重複性試驗 取同一批樣品，按照實施例1中供試品溶液的製備方法製備6份，測定，結果樣品 中綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸的RSD分別為 1. 77%，1. 94%，1. 48%，0. 97%和1. 07%，說明方法重複性良好。
[0014] 加樣回收率試驗 採用加樣回收試驗，精密稱取實施例1中的中藥組合物樣品6份，每份都加入綠原酸、 連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品溶液，測定，計算 回收率，結果綠原酸、隱綠原酸、連翹酯苷A、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸的 回收率分別為：97. 2%、98. 2%、98. 1%、97. 5%和 96. 5%，RSD分別為L77%，L94%，L48%，0? 97% 和 1. 07%。
[0015] 由於採用了上述技術方案，本發明取得的技術進步是： 本發明採用UPLC同時測定該中藥組合物中多種成分的含量，重複性好、精密度高、分 析速度快，可以在比較短的周期內檢測出各成分的含量，可以更方便的控制藥物的質量。

【具體實施方式】
[0016] 下面結合【具體實施方式】對本發明做進一步詳細說明： 儀器和試藥 儀器 超高效液相色譜儀(型號ACQUITYUPLCHCLASS，美國Waters公司，包括四元高壓梯度 泵、真空脫氣機、自動進樣器、柱溫箱、二極體陣列檢測器、Emp〇wer3色譜工作站）;超聲波清 洗器（KQ5200B，崑山市超聲儀器有限公司）；分析天平（AG135，MEITLERT0-LED0)。
[0017] 試藥 對照品：綠原酸、連翹酯苷A、（批號分別為：110753-200413、111810-201001)，均購於 中國藥品生物製品檢定所。隱綠原酸，3. 4二咖啡醯奎寧酸，4. 5-二咖啡醯奎寧酸購於成 都曼思特生物科技有限公司（純度>98%)。該中藥組合物(石家莊以嶺藥業股份有限公司提 供，批號 110121、110601、110807、110610、110710、110220、110725、110147、110817、110910、 110241、120515)。乙腈、甲醇(色譜純，美國Fisher公司），磷酸(分析純，天津市科密歐化學 試劑有限公司），水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。
[0018]實施例1 : 原料藥配方為： 連翹255g金銀花255g板藍根255g大黃51g廣藿香85g綿馬貫眾255g紅景天85g薄荷腦7. 5g蜜麻黃85g 苦杏仁85g魚腥草255g甘草85g石膏255g 中藥組合物膠囊劑的製備方法為： (1) 按照上述處方稱取中藥材，淨選； (2) 廣藿香碎斷，加6倍量水提取揮髮油，提油時間4小時，收集揮髮油，備用；提取液 過濾後，殘渣棄去，濾液備用； (3) 連翹、麻黃、魚腥草、大黃，用8倍量70%的乙醇提取2次，第一次2小時，第二次 1. 5小時，提取液合併過濾，回收乙醇，濾液備用； (4) 金銀花、石膏、板藍根、綿馬貫眾、甘草、紅景天，加9倍量水煎煮至沸，加入苦杏仁 煎煮2次，第一次1. 5小時，第二次1小時，提取液合併過濾，所得濾液與步驟（2)廣藿香提 油後的濾液合併，濃縮成在60°C時測定相對密度為1. 10的清膏，加乙醇，調節至醇濃度為 70%，冷藏放置24小時，過濾，回收乙醇至無醇味，所得濾液與步驟（3)所得醇提液合併，濃 縮至在60°C時測定相對密度為1. 15的清膏，噴霧乾燥，得幹膏粉，備用； (5) 將步驟（4)所得幹膏粉加入澱粉138克，用85%乙醇制粒； (6) 將薄荷腦、步驟（2)所得揮髮油加入乙醇溶解，噴入步驟（5)所得顆粒，密閉，混 勻，裝入1000粒膠囊，即得。
[0019] 中藥組合物製劑中多種成分含量的測定方法，由以下步驟組成： A、 供試品溶液的製備：取該中藥組合物膠囊，倒出內容物，研細，稱取lg，加甲醇50mL， 稱定重量，超聲提取30min，放冷、稱重，用甲醇補足重量，過濾，搖勻，即得； B、 對照樣品溶液的製備：分別稱取綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧 酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品，加70%甲醇，搖勻，即得不同濃度的各對照品溶液，綠原酸 濃度為〇. 70mg.mL'連翹酯苷A為0. 2lmg.ml/1、隱綠原酸為0. 6lmg.mL'3, 4-二咖啡醯奎 寧酸為〇? 83mg.mL'4, 5-二咖啡醯奎寧酸為0? 18mg.ml/1 ; C、UPLC檢測：色譜柱為C18,色譜柱為ACQUITYBEHC18，規格為 1. 7iim，2.IX100mm， 柱溫40°C，流動相為甲醇-乙腈-0. 1%磷酸溶液，梯度洗脫：0-2min，3%甲醇，3%乙腈，94% 的 0? 1% 磷酸；2-3min，3%-5% 甲醇，3%-5% 乙腈，94%-90% 的 0? 1% 磷酸；3-10min，5%-20% 甲醇，5%乙腈，90%-75%的0? 1%磷酸；10-13. 5min，20%甲醇，5%乙腈，75%的0? 1%磷酸； 13. 5-22. 5min，85% 甲醇，5% 乙腈，10% 的 0? 1% 磷酸；檢測波長 237nm，流速為 0? 4mL/min; D、 標準曲線的制定及計算結果：分別精密吸取0.5mL的綠原酸、連翹酯苷A、隱綠原 酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸對照品溶液注入步驟c中超高效色譜儀中 分析，然後分別吸取I.OmL的各對照品溶液、2. 0mL的各對照品溶液、5. 0mL的各對照品溶 液、8.0mL的各對照品溶液、10mL的各對照品溶液，注入超高效色譜儀中進行色譜分析，以 色譜峰面積為縱坐標，進樣量為橫坐標，得到各對照樣品溶液的標準曲線；然後將供試樣品 溶液注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標準曲線中，得到綠原酸、連翹酯苷A、 隱綠原酸、3, 4-二咖啡醯奎寧酸、4, 5-二咖啡醯奎寧酸的含量，分別為3. 29mg/g、4. 21mg/ g、0. 95mg/g、2. 19mg/g、l. 15mg/g〇
[0020] 表I

【權利要求】
1. 一種中藥組合物製劑中多種活性成分含量的測定方法，該中藥組合物製劑由下列重 量份的原料藥製成：連翅200-300 金銀花200-300 板藍根200-300大黃40-60廣 蕾香60-100綿馬貫眾200-300紅景天60-100 薄荷腦5-9 麻黃60-100 苦杏仁 60-100 魚腥草200-300 甘草60-100石膏200-300,其特徵在於該測定方法由W下步 驟組成： A、 供試品溶液的製備；稱取該中藥組合物製劑l-2g，加甲醇5〇111以稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補足重量，過濾，搖勻，即得； B、 對照樣品溶液的製備：分別稱取綠原酸、連翅醋巧A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醜奎寧 酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸對照品，加70%甲醇，搖勻，即得不同濃度的各對照品溶液； C、 UPLC檢測；色譜柱為C18,柱溫4(TC，流動相為甲醇-己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脫；0-2min，3〇/〇 甲醇，3〇/〇 己膳，94〇/〇 的 0. 1〇/〇磯酸；2-3min，3〇/〇-5〇/〇 甲醇，3〇/〇-5〇/〇 己膳，94〇/〇-90〇/〇 的 0. 1% 磯酸；3-10min，5%-20% 甲醇，5% 己膳，90%-75% 的 0. 1% 磯酸；10-13. 5min，20% 甲醇， 5〇/〇己膳，75%的0. 1%磯酸；13. 5-22. 5min，85%甲醇，5%己膳，10%的0. 1%磯酸；檢測波長 237nm,流速為 0. 2-0. 4mL/min ； D、 標準曲線的制定及計算結果：分別將綠原酸、連翅醋巧A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醜 奎寧酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸對照品溶液0. 5-lOmL注入步驟C中超高效色譜儀中分析，W 色譜峰面積為縱坐標，進樣量橫坐標，得到各對照品溶液的標準曲線；然後將供試樣品溶液 注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標準曲線中，得到綠原酸、連翅醋巧A、隱綠 原酸、3, 4-二咖啡醜奎寧酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸的含量。
2. 根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於：所述步驟C中色譜柱為AC卵ITY BEH Ci8，規格為 1. 7 y m，2. 1 X lOOmm,流速為 0. 4 mL/min。
3. 根據權利要求1所述的測定方法，其特徵在於： A、 供試品溶液的製備；稱取該中藥組合物製劑l-2g，加甲醇5〇111以稱定重量，超聲提取 10-30min，放冷、稱重，用甲醇補足重量，過濾，搖勻，即得； B、 對照樣品溶液的製備：分別稱取綠原酸、連翅醋巧A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醜奎寧 酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸對照品，加70%甲醇，搖勻，即得不同濃度的各對照品溶液，綠原酸 濃度為0. 7〇mg. m。、連翅醋巧A為0. 21mg. m。、隱綠原酸為0. 61mg. mL-i、3, 4-二咖啡醜奎 寧酸為0. 83mg. mlA4, 5-二咖啡醜奎寧酸為0. 18mg. m。； C、 UPLC檢測；色譜柱為柱溫4(TC，流動相為甲醇-己膳-0. 1%磯酸溶液，梯度洗 脫；0-2min，3% 甲醇，3% 己膳，94% 的 0. 1% 磯酸；2-3min，3%-5% 甲醇，3%-5% 己膳，94%-90% 的 0. 1% 磯酸；3-10min，5%-20% 甲醇，5% 己膳，90%-75% 的 0. 1% 磯酸；10-13. 5min，20% 甲醇， 5〇/〇己膳，75%的0. 1%磯酸；13. 5-22. 5min，85%甲醇，5%己膳，10%的0. 1%磯酸；檢測波長 237nm,流速為 0. 2-0. 4ml/min ; D、 標準曲線的制定及計算結果：分別將綠原酸、連翅醋巧A、隱綠原酸、3, 4-二咖啡醜 奎寧酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸對照品溶液0. 5-lOmL注入步驟C中超高效色譜儀中分析，W 色譜峰面積為縱坐標，進樣量橫坐標，得到各對照品溶液的標準曲線；然後將供試樣品溶液 注入超高效色譜儀中分析，將各成分峰面積帶入標準曲線中，得到綠原酸、連翅醋巧A、隱綠 原酸、3, 4-二咖啡醜奎寧酸、4, 5-二咖啡醜奎寧酸的含量。
4. 根據權利要求1-3任一項所述的測定方法，其特徵在於該中藥組合物由下列重量份 的原料藥製成： 連翅200 金銀花300板藍根200大黃60廣蕾香60 綿馬貫眾300紅景天60薄荷腦9麻黃60 苦杏仁100 魚腥草200 甘草 100石膏 200。
5. 根據權利要求1-3任一項所述的測定方法，其特徵在於該中藥組合物由下列重量份 的原料藥製成： 連翅300 金銀花200板藍根300大黃60廣蕾香100 綿馬貫眾200紅景天60薄荷腦5麻黃100 苦杏仁60 魚腥草300 甘草 60石膏 300。
6. 根據權利要求1-3任一項所述的測定方法，其特徵在於該中藥組合物由下列重量份 的原料藥製成： 連翅255 金銀花255板藍根255大黃51廣蕾香85 綿馬貫眾255紅景天85薄荷腦7. 5麻黃85苦杏仁85 魚腥草255 甘草 85石膏 255。
7. 根據權利要求1-3任一項所述的測定方法，其特徵在於所述中藥組合物劑型為膠囊 齊U、片劑或丸劑。
【文檔編號】G01N30/88GK104345111SQ201310343004
【公開日】2015年2月11日 申請日期:2013年8月8日 優先權日:2013年8月8日
【發明者】劉敏彥, 趙韶華, 葉曉紅, 張永鋒, 範文成, 王海亮, 張靜 申請人:河北以嶺醫藥研究院有限公司