一種蟲草素/O‑羧甲基殼聚糖納米粒及其製備方法與流程
2023-09-23 18:13:00 1
本發明涉及生物醫藥納米緩釋技術領域，具體涉及一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒及其製備方法。
背景技術：
蟲草素又稱蟲草菌素、3′-脫氧腺苷，是一種核苷類抗菌素，經研究證明蟲草素有抗腫瘤、免疫調節、抗白血病、抗菌、抗病毒、消炎、降血糖、降血脂、抗衰老等作用，具有良好的臨床應用前景。但蟲草素在體內腺苷脫氨酶的代謝下容易快速脫氨基成為無生物活性的代謝產物3′-脫氧次黃嘌呤核苷，只有少部分被轉化為3-磷酸蟲草素，藥效的發揮需要維持在一定濃度，限制了其單獨用於臨床，而與ada抑制劑聯合應用易出現嚴重的不良反應。如何延緩蟲草素的代謝、延長蟲草素的作用時間和提高它的藥效，成為蟲草素開發應用中的關鍵問題。
納米粒作為藥物緩、控釋傳遞系統的載體具有特殊的優越性：可以改善藥物的溶解度；改善藥物的吸收、提高生物利用度；改善藥物的藥動學來延長藥物的半衰期，從而增強藥物療效還可維持藥物長期緩慢釋放，從而延長藥物在祀部位的作用時間，減少藥物在達到療效期間所產生的降解和損失。
o-羧甲基殼聚糖是一種既含有活性氨基有含有羧基的生物可降解性陽性多糖，可與多種生物活性物質連接，可以大大提高承載性能，已經成為新一代基因和藥物靶向控釋載體材料研究重點。
《蟲草素羧甲基殼聚糖納米粒的製備、釋藥性能及體外抗腫瘤作用研究》以及《蟲草素羧甲基殼聚糖納米粒的製備及表徵》呂丹著，公開了一種蟲草素羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，其以液體石蠟為油相，羧甲基殼聚糖為水相，三聚磷酸鈉為交聯劑，採用乳化離子交聯法製備得到蟲草素羧甲基殼聚糖納米粒。然而，該蟲草素羧甲基殼聚糖納米粒其相應的製備方法相對複雜，生產成本相對較高，在製備過程中使用有機溶劑，易著火爆炸，具有較高的危險性，不利於環保和安全。
有鑑於此，特提出本發明。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，所述方法反應條件溫和安全，不使用酸鹼及有機溶劑，可操作性強。
為實現上述目的，本發明所述的蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法為：將蟲草素分散在含o-羧甲基殼聚糖的氯化鈉溶液中，然後向體系中加入三聚磷酸鈉溶液，經離心、洗滌、真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
優選地，所述蟲草素的純度為99.0％以上；所述蟲草素為常規市售產品或通過本領域已知方法製備得到。
優選地，所述蟲草素與所述o-羧甲基殼聚糖的質量比為1:2-6，優選為1:4。
優選地，所述o-羧甲基殼聚糖在所述氯化鈉溶液中的質量濃度為3.0-7.0mg/ml，優選為5mg/ml。在該濃度下，所述o-羧甲基殼聚糖能夠在氯化鈉溶液中形成無色無味澄清的凝膠狀溶液。
優選地，所述氯化鈉溶液的濃度為0.5-1.5％，優選為0.9％。
優選地，所述蟲草素通過攪拌分散在含o-羧甲基殼聚糖的氯化鈉溶液中。
優選地，所述分散在20-40℃的溫度下進行，優選為30℃。
所述攪拌只要能夠使蟲草素均勻分散在含o-羧甲基殼聚糖的氯化鈉溶液中，即可。
優選地，所述攪拌的轉速為200-1000r/min，優選為600r/min。
優選地，所述攪拌的時間為10-90min，優選為30min。
優選地，所述三聚磷酸鈉與所述o-羧甲基殼聚糖的質量比為1:4-6；優選為1:5。
優選地，所述三聚磷酸鈉溶液的質量濃度為0.5-5.0mg/ml，優選為2.5mg/ml。
優選地，向體系中加入所述三聚磷酸鈉水溶液後，通過攪拌，使溶液形成穩定的乳化體系。
優選地，所述洗滌採用去離子水進行洗滌。
作為本發明的一個優選的實施方案，所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法包括以下步驟：
1)將o-羧甲基殼聚糖溶於0.5-1.5％氯化鈉溶液中，得o-羧甲基殼聚糖濃度為3.0-7.0mg/ml的凝膠狀溶液；
2)在20～40℃條件下，將蟲草素加入到步驟1)得到的凝膠狀溶液中，攪拌均勻；其中，所述蟲草素與所述o-羧甲基殼聚糖的質量比為1:3-6；
3)將0.50-5.0mg/ml的三聚磷酸鈉水溶液加入到步驟2)所得體系中，攪拌得穩定的乳化體系；其中，所述三聚磷酸鈉與所述o-羧甲基殼聚糖的質量比為1:4-6；
4)將步驟3)所得乳化體系離心、洗滌、真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
本發明的另一目的在於提供由上述方法製備得到的蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。本發明所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒能夠延緩蟲草素使用過程中的代謝、延長蟲草素的作用時間，提高生物利用度。
優選地，所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的粒徑為100-200nm。
本發明所述的蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒，通過以o-羧甲基殼聚糖作為蟲草素納米藥物載體，載藥量較高，具有良好的緩釋性能。同時本發明所述的蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法採用離子交聯法，以三聚磷酸鈉為交聯劑，製備蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒，其粒徑較小，分布均勻，且反應條件溫和安全，不使用酸鹼及有機溶劑，對包封藥物傷害小，可操作性強。
具體實施方式
下面結合實施例，對本發明的具體實施方式作進一步詳細描述。以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。以下實施例的各原料均為常規市售產品。
以下實驗例所製得的各蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的72h總釋藥量通過以下方法測得：
精確稱取所製得的蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒10mg，懸於2ml水，置於透析袋內，紮緊後置於30ml磷酸鹽緩衝液(ph＝7.4)中，保持恆溫(37士1)℃，轉速60r/min，並開始計時，分別於0.5、l、2、4、6、8、24、48、72h時取透析液3ml，同時補充3ml新鮮磷酸鹽緩衝液(ph＝7.4)維持釋放介質體積不變，採用紫外分光光度法，於260nm處測定樣品中蟲草素的含量，進而計算出累積釋放率，並繪製體外釋放曲線，從而得出各蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的72h總釋藥量。
實施例1
本實施例提供一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，所述方法包括如下步驟：
1)將4g的o-羧甲基殼聚糖溶於1000ml的0.9％氯化鈉溶液，得無色無味澄清的凝膠狀溶液；
2)在30℃條件下，將1g蟲草素加入到步驟1)得到的凝膠狀溶液中，以600r/min的速度攪拌20min，使其攪拌均勻；
3)將300ml的濃度為2.5mg/ml的三聚磷酸鈉水溶液加入到步驟2)所得體系中，攪拌30min，得穩定的乳化體系；
4)將步驟3)所得乳化體系離心，用去離子水洗滌三次，真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
本實施例製得的所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的質量為5.3g，粒徑為100-200nm，包封率為61.8％，體外釋放度試驗表明，蟲草素72h總釋藥量為59％。
實施例2
本實施例提供一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，所述方法包括如下步驟：
1)將5g的o-羧甲基殼聚糖溶於1000ml的0.9％氯化鈉溶液，得無色無味澄清的凝膠狀溶液；
2)在30℃條件下，將1g蟲草素加入到步驟1)得到的凝膠狀溶液中，以600r/min的速度攪拌20min，使其攪拌均勻；
3)將400ml的濃度為2.5mg/ml的三聚磷酸鈉水溶液加入到步驟2)所得體系中，攪拌30min，得穩定的乳化體系；
4)將步驟3)所得乳化體系離心，用去離子水洗滌三次，真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
本實施例製得的所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的質量為6.7g，粒徑為100-200nm，包封率為69.8％，體外釋放度試驗表明，蟲草素72h總釋藥量為55％。
實施例3
本實施例提供一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，所述方法包括如下步驟：
1)將6g的o-羧甲基殼聚糖溶於1000ml的0.9％氯化鈉溶液，得無色無味澄清的凝膠狀溶液；
2)在30℃條件下，將1g蟲草素加入到步驟1)得到的凝膠狀溶液中，以600r/min的速度攪拌20min，使其攪拌均勻；
3)將467ml的濃度為2.5mg/ml的三聚磷酸鈉水溶液加入到步驟2)所得體系中，攪拌30min，得穩定的乳化體系；
4)將步驟3)所得乳化體系離心，用去離子水洗滌三次，真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
本實施例製得的所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的質量為7.6g，粒徑為100-200nm，包封率為68.2％，體外釋放度試驗表明，蟲草素72h總釋藥量為54％。
實施例4
本實施例提供一種蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的製備方法，所述方法包括如下步驟：
1)將5g的o-羧甲基殼聚糖溶於1000ml的0.9％氯化鈉溶液，得無色無味澄清的凝膠狀溶液；
2)在30℃條件下，將1g蟲草素加入到步驟1)得到的凝膠狀溶液中，以600r/min的速度攪拌20min，使其攪拌均勻；
3)將467ml的濃度為2.5mg/ml的三聚磷酸鈉水溶液加入到步驟2)所得體系中，攪拌30min，得穩定的乳化體系；
4)將步驟3)所得乳化體系離心，用去離子水洗滌三次，真空乾燥，即得所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒。
本實施例製得的所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒的質量為6.6g，粒徑為100-200nm，包封率為68.3％，體外釋放度試驗表明，蟲草素72h總釋藥量為56％。
由此可知，本發明所述蟲草素/o-羧甲基殼聚糖納米粒具有良好的緩釋性能，具有廣闊的應用前景。
雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施例對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬於本發明要求保護的範圍。