一種篩選雙孢蘑菇溫度敏感型菌株的方法與流程
2023-10-30 02:56:57 3
本發明涉及一種篩選雙孢蘑菇溫度敏感型菌株的方法，屬於食用菌育種
技術領域：
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背景技術：
：雙孢蘑菇（agaricusbisporus），中文別名為蘑菇、洋蘑菇、白蘑菇。其含有豐富的蛋白質、多糖、維生素、核苷酸和不飽和脂肪酸，不僅營養豐富，肉質肥美，味道鮮美，而且熱能低，具有很高的醫療保健作用，日益受到各國人民的喜愛。在國外，雙孢蘑菇至今仍佔食用菌消費的主導地位，以世界食用菌生產第二大國-美國（約佔世界總產量16%）為例，雙孢蘑菇佔其總產量90%以上。在中國，雙孢蘑菇消費市場發展迅速，鮮菇市場銷售日益漸旺。隨著國內外對雙孢蘑菇需求的增加，雙孢蘑菇的生產也從最初的農戶生產向專業化、規模化和工廠化生產的模式轉變。工廠化栽培雙孢蘑菇已經成為世界雙孢蘑菇栽培業的最重要的發展方向。在國外，從栽培原料的發酵、接種到出菇管理均採用工廠化的生產工藝。在中國，工廠化栽培雙孢蘑菇也在發展壯大中。國外雙孢蘑菇的種植業發展的迅速，不僅和他們的栽培工藝的先進，還和他們有適合本國工廠化生產的菌種有關。國外雙孢蘑菇主要栽培品種有sylvan公司的a15，s512、s608、130和荷蘭horst蘑菇試驗站的u1、u3等。這些品種均適合本國的設施化栽培。在國內，雙孢蘑菇的種質資源十分缺乏，給雙孢蘑菇菌種改良和選育工作帶來了相當大的困難。我國幅員廣闊，各地自然條件差異很大，各地栽培的雙孢蘑菇品種的性狀也差異很大。目前，國內雙孢蘑菇主要栽培品種有as2796，2000，192，浙農1號等。但是，國內雙孢蘑菇的工廠化品種大部分是進口國外的，缺少真正的適合當前國內生產條件和工藝的工廠化品種。溫度是影響雙孢蘑菇生長的主要因素。雙孢蘑菇對溫度的要求分為菌絲體和子實體兩個階段。雙孢蘑菇菌絲體生長發育溫度範圍為4-32℃，菌絲體生長階段的適宜溫度為22-27℃。雙孢蘑菇子實體生長發育的溫度範圍是4-25℃，子實體適宜溫度為16-19℃。因此，對栽培環境進行溫度調控是工廠化生產雙孢蘑菇的主要調控因子之一。技術實現要素：本發明針對雙孢蘑菇育種周期長和國內缺乏合適的工廠化菌種等缺點，找到一種通過溫度調控能夠簡便快速地篩選對溫度敏感，菌絲形態發生顯著改變的方法，並確定了調控的溫度和調控的方式。為達到上述目的，本發明採用的技術方案是：一種篩選雙孢蘑菇溫度敏感型菌株的方法，包括下列步驟：第一步：將雙孢蘑菇菌種接種於pda培養基中於25℃條件下暗培養9-11天得到第一培養物；第二步：將所述第一培養物分別於4℃、32℃和25℃溫度條件下暗培養40-55小時得到第二培養物、第三培養物和第四培養物；第三步：將所述第二培養物、第三培養物和第四培養物轉移到培養箱中於25℃條件下培養2.5-3.5天得到第五培養物、第六培養物和第七培養物；與第七培養物的性狀相比，第五培養物和第六培養物的菌絲形態和菌絲顏色發生差異時，說明該菌株為溫度敏感菌株。優選的技術方案為：所述pda培養基先在121℃、0.1mpa下滅菌15min，然後在每個直徑為9cm的平皿中倒入20mlpda培養基。由於上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點和效果：本發明的方法與以往食用菌選育菌種的方法相比，其操作簡便，效果更突出，提高了選育雙孢蘑菇菌種的效率。該方法只需要在傳統育種和栽培實驗之前，對菌絲進行高低溫的處理，就可以初步判定雙孢蘑菇菌株對溫度的敏感度，以及此菌株對工廠化調控條件的靈敏度，為菌種的選育節省時間，提高育種效率。附圖說明附圖1為不同溫度對菌絲形態的影響。具體實施方式下面結合實施例對本發明作進一步描述：實施例1-15：一種篩選雙孢蘑菇溫度敏感型菌株的方法1.不同雙孢蘑菇菌株的培養將pda培養基以121℃，1.0mpa，滅菌15min。直徑為9mm的平板中導入滅菌後的pda培養基20ml。將15個雙孢蘑菇分別接種到pda培養基中，25℃在暗處培養10天。2.不同溫度處理將培養10天的菌株檢測其在25℃下的菌絲生長速度。然後，分別將平板再分別放在4℃，25℃和32℃進行培養48h。最後，將放置在4℃和32℃的平板再放到25℃條件下繼續培養。菌絲形態和菌絲顏色的狀態如下表：上表中，「+」表示菌絲氣生形態相比較溫度處理前增加；菌絲顏色相比較溫度處理前變深；「-」表示菌絲形態或者顏色相比較溫度處理前沒有差異。3.數據採集和分析統計15個菌株從25℃轉移到4℃和32℃後的菌絲生長速度和記錄菌絲形態，並且與在25℃同時間生長的菌絲生長速度進行比較和數據分析，結果如下表：溫度非敏感型菌株溫度敏感型菌株8301、a-02、8302、192、2796、2000美國種、a15、f-01、32、j6、442、01-1、u3、浙農1號上述實施例只為說明本發明的技術構思及特點，其目的在於讓熟悉此項技術的人士能夠了解本發明的內容並據以實施，並不能以此限制本發明的保護範圍。凡根據本發明精神實質所作的等效變化或修飾，都應涵蓋在本發明的保護範圍之內。技術特徵：技術總結本發明公開了利用溫度篩選適合工廠化調控的雙孢蘑菇菌株的方法與應用，屬於食用菌育種領域。方法包括處理的溫度和溫度的處理方式等步驟。與傳統方法相比，此方法操作簡便，顯著性地縮短選育雙孢蘑菇菌株的時間。當得到以下雙孢蘑菇菌株，只要在實驗室提前驗證這些菌株對不同溫度處理下，菌絲生長速度和菌絲形態，就能初步判定那些菌株對工廠化的調控是比較敏感的，可能比較適合工廠化的生產，這樣為後續的栽培實驗的驗證節省時間和工作量。技術研發人員：張津京;黃建春;陳輝;王倩;宋曉霞受保護的技術使用者：上海市農業科學院技術研發日：2017.06.30技術公布日：2017.09.22