一種雪菊提取物在製備治療肝臟脂肪沉積藥物中的應用的製作方法

2023-10-28 10:53:40

本發明涉及含有來自藻類、苔蘚、真菌或植物或其派生物領域，具體是一種雪菊提取物在製備治療肝臟脂肪沉積藥物中的應用。
背景技術：
：隨著現代社會經濟的飛速發展，人民生活水平的不斷提升，高血脂症的發病率越來越高，並且患者趨向於年輕人群。高血脂症通常是由於人體脂質代謝發生異常所引發的一種普遍的多發性病症，此病對人類的健康構成嚴重威脅的主要原因是高血脂症通常與糖尿病、高血壓、脂肪肝、動脈粥樣硬化等高死亡率疾病的形成密切相關，並且是促使這些疾病形成的一個重要因素。因而高血脂的預防及治療近年來受到特別的關注，成為當今醫藥科學領域研究的熱點。目前，西藥治療高血脂症取得了一定的進展，並且其作用機理在不斷被闡明，這為高血脂症藥物的研發提供了一定的理論依據。西藥主要包括他汀類；貝特類；煙酸類；膽酸隔置劑等。雖然這些藥物對高血脂病人有較好的作用，但是這些藥物在降低血脂的同時所產生的副作用已成為不容忽視的問題，其中包括胃腸道的副反應，血清胺基酸轉移酶濃度過高引發肌酸酐和肌炎等。此外，許多高血脂病是由於多種因素引起的，因此通常作為單靶點作用的西藥治療高血脂症的效果並不理想。同時，西藥價格昂貴且停藥後血脂容易出現反彈。中醫藥治療高血脂已有幾千年的歷史，目前有大量的中藥及經典的中藥複方廣泛用於臨床，顯示出良好的降血脂效果。同時，中藥治療高血脂症具有其獨特的優勢，素以治療作用廣，毒副作用小，安全性高而著稱。中藥及其複方越來越廣泛的用於高血脂症的治療或預防，因此中藥及其複方治療高血脂的研究也受到了科學界的高度重視。崑崙雪菊為新疆特有植物，學名為兩色金雞菊，屬菊科金雞菊屬，一年生草本植物，主要分布於和田地區海拔3000米以上的崑崙山。長期以來，崑崙雪菊被當地居民當花茶引用，新疆維吾爾醫院也將其作為一種維藥材應用，具有清熱解毒、活血化瘀、和胃健脾之功，用花泡茶飲，可治療「燥熱煩渴」、「高血壓」、「心慌」、「胃腸不適」、「食欲不振」、「痢疾」及「瘡癤腫毒」等疾病，是具有廣闊前景和研究價值的新品種。但是目前國內外仍對崑崙雪菊研究甚少，尤其是主要活性成分的藥用價值及療效方面。技術實現要素：本發明就是為了填補雪菊活性成分藥用價值及療效方面的空白，所提出的一種雪菊提取物在製備治療肝臟脂肪沉積藥物中的應用。本發明是按照以下技術方案實現的。一種雪菊提取物在製備治療肝臟脂肪沉積藥物中的用途。所述雪菊提取物的使用劑量為0.1g/kg-10g/kg。本發明獲得了如下的有益效果。本發明填補了雪菊活性成分藥用價值及療效方面的空白，本發明的雪菊提取物能降低肝臟脂肪的沉積，療效明確且無毒副作用，對臨床防治、提高患者生存質量具有十分重要的意義。本發明為降低肝臟脂肪沉積提供了一種安全、有效和經濟的新方法，對臨床及科研提供了理論技術和技術支撐，具有廣闊的應用前景。附圖說明圖1是本發明db/db鼠飼養12周後肝組織H＆E染色圖；圖2是本發明不同濃度雪菊提取物處理12周後db/db小鼠肝組織H＆E染色圖(×200)；圖3是本發明不同濃度雪菊提取物對小鼠體重的影響圖。具體實施方式下面結合附圖及實施例對本發明做進一步說明。實施例1：雪菊提取物的製備1.浸泡:稱取一定量的雪菊粉末，按1：8-20的比例浸泡在50-80%的乙醇溶液中，浸泡過夜。2.超聲及抽濾:將已經浸泡過夜後的雪菊乙醇溶液進行超聲，溫度為50-70℃，時間為10-30min，然後進行第一次抽濾。第一次抽濾後的雪菊固體以1:8-20的比例加50-80%乙醇溶液浸泡並再次超聲，溫度為50-70℃，時間為10-30min，然後進行第二次抽濾。兩次抽濾後的液體均倒入燒瓶中進行旋轉蒸發以製成浸膏。旋轉蒸發儀（RE-3000型，鄭州市亞榮儀器有限公司），溫度30-50℃轉速100r/min（轉數/分鐘）。提取物的最終pH值為7.2-7.4。實施例2：高效液相色譜分析法測定雪菊中黃酮的含量精密稱取雪菊提取液樣品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，經0.45μm微孔濾膜過濾後進行高效液相色譜檢測。色譜儀採用LC-20AB島津高效液相色譜儀（日本島津）。色譜柱InertsilODS-SP色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動相為甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱溫25℃，檢測波長330nm，進樣量10μL，外標法。實施例3：高效液相色譜分析法測定雪菊中綠原酸的含量精密稱取雪菊提取液樣品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，經0.45μm微孔濾膜過濾後進行高效液相色譜檢測。色譜儀採用LC-20AB島津高效液相色譜儀（日本島津）。色譜柱InertsilODS-SP色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動相為甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱溫25℃，檢測波長330nm，進樣量10μL，外標法。實施例4：高效液相色譜分析法測定雪菊中總皂苷的含量精密稱取雪菊提取液樣品7mg，置25mL量瓶中，加甲醇至刻度，經0.45μm微孔濾膜過濾後進行高效液相色譜檢測。色譜儀採用LC-20AB島津高效液相色譜儀（日本島津）。色譜柱InertsilODS-SP色譜柱（4.6mm×150mm，5μm）；流動相為甲醇-0.05%磷酸水溶液；流速0.6mL·min-1，柱溫25℃，檢測波長330nm，進樣量10μL，外標法。高效液相色譜分析法測定雪菊提取物中有效成分：總黃酮的含量為13.09-16.72%（質量百分比）；綠原酸的平均含量為0.56-0.62%（質量百分比）；總皂苷含量為7.91-8.28%(質量百分比)。實施例5：雪菊提取物(seneciocineraria,SC)對自發性2型糖尿病及肥胖C57BLKS/Jdb/db小鼠（簡稱db/db小鼠）血脂水平的影響選取8周齡db/db小鼠（購自美國JACSON實驗室）為實驗模型動物，同遺傳背景C57BLKS/Jdb/+不發病小鼠（簡稱db/m小鼠）為對照鼠，每組5隻。用實施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低劑量組）、1g/kg（中劑量組）、10g/kg（高劑量組），每日一次灌胃，連續給藥12周後空腹12小時後目內眥取血，離心分離血清，酶法檢測空腹血清TC和TG水平。血清生化指標測定用試劑盒：TC測定試劑盒及TG測定試劑盒（由南京建成生物工程研究所生產）。Allegra64R離心機（德國BECKMANCOULTER）；JA5002電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；RT-9600生化分析儀（深圳雷杜生命科學有限公司生產）。飼養12周後，模型組小鼠(第20周)空腹血清TG濃度為1.19±0.21、TC濃度為4.43±0.52，顯著高於正常對照組TG濃度（0.73±0.12）、TC濃度（2.56±0.44）（P＜0.05，P＜0.01）；雪菊中劑量組TG濃度為0.8±0.11、雪菊高、中劑量組TC濃度分別為2.76±0.48、3.35±0.41，顯著低於模型組TG、TC濃度（P＜0.05，P＜0.01）。試驗結果表明長期的雪菊提取物灌胃可以明顯改善db/db小鼠的高血脂症（見表1）。表1.1正常對照組、模型組與雪菊高、中、低劑量組小鼠血脂的比較TGTCdb/m0.73±0.122.56±0.44db/db1.19±0.21*4.43±0.52**SC（10g/kg）0.88±0.252.76±0.48#SC（1g/kg）0.8±0.11#3.35±0.41#SC（0.1g/kg）1.1±0.423.97±0.49註：與正常對照組比較，「*」表示P值小於0.05，「**」表示P值小於0.01；與模型組比較，「#」P值小於0.05，「##」表示P值小於0.01。實施例6：雪菊提取物對肝臟脂肪沉積的影響選取8周齡db/db小鼠（購自美國JACSON實驗室）為實驗模型動物，同遺傳背景C57BLKS/Jdb/+不發病小鼠（簡稱db/m小鼠）為對照鼠，每組5隻。用實施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低劑量組）、1g/kg（中劑量組）、10g/kg（高劑量組），每日一次灌胃，連續給藥12周後處死小鼠，切取肝臟，中性甲醛固定，石蠟包埋，切片（3μm），常規H＆E染色。切片常規用二甲苯脫蠟3次，每次15min；無水乙醇、90%、80%、70%各級乙醇依次脫水至蒸餾水，毎次2min；蘇木素染色5min，蒸餾水緩慢衝洗；鹽酸乙醇分色10s（提插數下）。蒸餾水衝洗15min，伊紅溶液染色2min；蒸餾水衝洗，乙醇梯度（70%至80%至90%至無水乙醇）脫水，二甲苯透明，輕輕擦拭組織周邊二甲苯，中性樹脂封片，注意不要產生氣泡。蘇木素和伊紅溶液均購自武漢博士德生物有限公司。試驗結果表明本發明雪菊提取物對肝臟脂肪沉積有明顯的抑制作用。（參見圖1、2，圖1中a:×100；b:×200；c:×400；圖2中a:0.1g/kg；b:1g/kg；c:10g/kg）實施例7：不同濃度雪菊提取物對小鼠體重的影響實驗期間動物每周稱重一次，密切觀察實驗動物精神狀態、毛髮變化及飲水情況。在整個實驗周期中，db/m小鼠體重較穩定，一直處於穩定增長；而db/db小鼠體重則增加至第12周（藥物處理第4周）開始下降，至實驗結束時體重明顯低於db/m小鼠；給予不同濃度的雪菊提取物後明顯延緩了db/db小鼠的體重下降，至實驗第16周（藥物處理第8周）db/db小鼠體重出現明顯下降（P＜0.05，P＜0.01）；實驗結束（第20周）時，雪菊提取物處理組db/db小鼠體重仍然高於模型組db/db小鼠（參見圖3）。實施例8：不同濃度雪菊提取物對小鼠肝、腎功能的影響選取8周齡db/db小鼠（購自美國JACSON實驗室）為實驗模型動物，同遺傳背景C57BLKS/Jdb/+不發病小鼠（簡稱db/m小鼠）為對照鼠，每組5隻。用實施例1得到的雪菊提取物，按0.1g/kg（低劑量組）、1g/kg（中劑量組）、10g/kg（高劑量組），每日一次灌胃，連續給藥12周空腹12小時後目內眥取血，離心分離血清，酶法檢測肝功（ALT、AST）和腎功（SCr、BUN）水平。血清生化指標測定用試劑盒（由南京建成生物工程研究所生產）；Allegra64R離心機（德國BECKMANCOULTER）；JA5002電子天平（上海精天電子儀器有限公司）；RT-9600生化分析儀（深圳雷杜生命科學有限公司生產）。飼養12周後，模型組小鼠(第20周)肝功ALT為208±10.15、AST為220±14.5、腎功SCr為47.67±2.52、BUN為15.15±1.4，顯著高於正常對照組ALT（44.67±2.52）、AST（150±2.65）、腎功SCr（13.8±0.95）、BUN（6.14±0.51）（P＜0.01）；不同濃度雪菊提取物處理後ALT、AST、SCr和BUN水平均顯著低於模型組（P＜0.05，P＜0.01）。試驗結果表明長期雪菊提取物灌胃對db/db小鼠無明顯肝腎毒性（參見表2）。表2正常對照組、模型組與雪菊高、中、低劑量組小鼠肝功、腎功水平比較ALTASTSCrBUNdb/m44.67±2.52150±2.6513.8±0.956.14±0.51db/db208±10.15**220±14.5**47.67±2.52**15.15±1.4**SC（10g/kg）73.67±9.45##103.33±13.1##19.99±8.7##10.77±1.44#SC（1g/kg）128±13.89##143±12.12##11.87±1.76##7.25±1.17##SC（0.1g/kg）154.33±19.6#167±8.54##10.71±1.4##7.18±2.2##註：與正常對照組比較，「*」表示P值小於0.05，「**」表示P值小於0.01；與模型組比較，「#」P值小於0.05，「##」表示P值小於0.01。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp