採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法
2023-10-05 02:13:54 3
採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法
【專利摘要】本發明公開了一種採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法，具有以下步驟：①將氯化鈉、瓊脂以及多聚蛋白腖加入到蒸餾水中溶解，然後進行高壓滅菌處理，接著加入氯化鈣溶液和硫酸鎂溶液，得到NGM培養基；②向NGM培養基表面塗布大腸桿菌OP50菌液，然後轉移到培養皿中；③將秀麗隱杆線蟲轉移到培養皿中，作為參照組；④將秀麗隱杆線蟲轉移到培養皿中，然後再將待測樣品加入到培養皿中，作為待測組；⑤將參照組和待測組置於培養箱中培養，直至秀麗隱杆線蟲成長為成蟲；⑥當待測組中秀麗隱杆線蟲成蟲體長小於參照組時，表明待測樣品中含有瘦肉精，反之則不含有。本發明的檢測方法成本較低，操作簡便，最低檢測限可達100μg/L。
【專利說明】採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於食品安全檢測【技術領域】，具體涉及一種採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法。
【背景技術】
[0002]瘦肉精是一類促進瘦肉生長、抑制肥肉生長的藥物統稱，主要包括鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺等，屬於β腎上腺素受體激動劑。
[0003]近年來，瘦肉精中毒事件屢屢發生，因此，對於瘦肉精的檢測越來越受到重視。
[0004]目前對於鹽酸克倫特羅、萊克多巴胺殘留的檢測方法主要有質譜法、高效液相色譜法、酶聯免疫吸附法、膠體金免疫層析法等，這些檢測方法不但費用昂貴，而且操作要求較聞。
[0005]秀麗隱杆線蟲是一種可以獨立生存的線蟲，隸屬於線形動物門，線蟲綱，小杆線蟲目，廣杆線蟲屬。秀麗隱杆線蟲飼養簡便，飼養成本極低，繁殖速度快，遺傳發育背景豐富，其成蟲體長約Imm?1.5mm。
[0006]目前尚未發現採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的文獻報導。
【發明內容】
[0007]本發明的目的在於解決上述問題，提供一種成本較低、操作簡便的採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法。
[0008]實現本發明目的的技術方案是:一種採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法，具有以下步驟:①將氯化鈉、瓊脂以及多聚蛋白腖加入到蒸餾水中溶解，然後在100°c?140°C的溫度下進行高壓滅菌處理，接著冷卻至50°C?60°C加入氯化鈣溶液和硫酸鎂溶液，得到NGM培養基；②向步驟①得到的NGM培養基表面塗布大腸桿菌0P50菌液，然後轉移到培養皿中；③將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，作為參照組；
④將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，然後再將待測樣品加入到培養皿中，作為待測組；⑤將步驟③的參照組和步驟④的待測組置於培養箱中培養，直至秀麗隱杆線蟲成長為成蟲當待測組中秀麗隱杆線蟲成蟲體長小於參照組中秀麗隱杆線蟲成蟲體長時，表明待測樣品中含有瘦肉精，反之則不含有。
[0009]上述步驟①的NGM培養基中氯化鈉的濃度為2g/L?4g/L，瓊脂的濃度為15g/L?20g/L，多聚蛋白腖的濃度為2g/L?3g/L。
[0010]上述步驟①的加入的氯化鈣溶液的濃度為0.9mol/L?1.lmol/L，加入量為ImL?2mL ;加入的硫酸鎂溶液的濃度為0.9mol/L?1.lmol/L，加入量為ImL?2mL。
[0011]本發明具有的積極效果:(1)本發明採用秀麗隱杆線蟲對瘦肉精進行檢測，不僅成本較低，而且操作簡便。(2)本發明的檢測方法具有較高的檢測靈敏度以及準確的檢測結果，最低檢測限可達100 μ g/Lo【具體實施方式】
[0012](實施例1)
本實施例的採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法如下:
①將3g的氯化鈉、17g的瓊脂以及2.5g多聚蛋白腖加入到975mL蒸餾水中溶解，然後在130°C的溫度下進行高壓滅菌處理，接著冷卻至55°C加入ImL濃度為lmol/L的氯化鈣溶液以及ImL濃度為lmol/L的硫酸鎂溶液，得到NGM培養基。
[0013]該NGM培養基中氯化鈉的濃度為3g/L，瓊脂的濃度為17g/L，多聚蛋白腖的濃度為
2.5g/L。
[0014]②向步驟①得到的NGM培養基表面塗布大腸桿菌0P50菌液，然後轉移到3cm的培養皿中。
[0015]③將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，作為參照組。
[0016]④將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，然後再將含有100μ g/L鹽酸克倫特羅的待測樣品加入到培養皿中，作為待測組。
[0017]⑤將步驟③的參照組和步驟④的待測組置於20°C的培養箱中培養24h，直至秀麗隱杆線蟲成長為成蟲。
[0018]⑥分別將參照組和待測組中的秀麗隱杆線蟲成蟲製片後，利用顯微鏡照相，並運用photoshop統計得到其體長。
[0019]其中參照組體長為1.2_，待測組體長為1.04_，差異顯著，表明該濃度的鹽酸克倫特羅對秀麗隱杆線蟲的發育產生了較大的影響，也即秀麗隱杆線蟲能夠檢測到該濃度的鹽酸克倫特羅。
[0020](實施例2~實施例10)
各實施例與實施例1基本相同，不同之處在於待測樣品中鹽酸克倫特羅的濃度以及待測組的體長，具體見表1。
[0021]表1
【權利要求】
1.一種採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法，其特徵在於具有以下步驟: ①將氯化鈉、瓊脂以及多聚蛋白腖加入到蒸餾水中溶解，然後在100°c?140°C的溫度下進行高壓滅菌處理，接著冷卻至50°C?60°C加入氯化鈣溶液和硫酸鎂溶液，得到NGM培養基; ②向步驟①得到的NGM培養基表面塗布大腸桿菌0P50菌液，然後轉移到培養皿中； ③將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，作為參照組； ④將同步化後到達L4時期的秀麗隱杆線蟲轉移到步驟②的培養皿中，然後再將待測樣品加入到培養皿中，作為待測組； ⑤將步驟③的參照組和步驟④的待測組置於培養箱中培養，直至秀麗隱杆線蟲成長為成蟲； ⑥當待測組中秀麗隱杆線蟲成蟲體長小於參照組中秀麗隱杆線蟲成蟲體長時，表明待測樣品中含有瘦肉精，反之則不含有。
2.根據權利要求1所述的採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法，其特徵在於:步驟①的NGM培養基中氯化鈉的濃度為2g/L?4g/L，瓊脂的濃度為15g/L?20g/L，多聚蛋白腖的濃度為2g/L?3g/L。
3.根據權利要求1或2所述的採用秀麗隱杆線蟲檢測瘦肉精的方法，其特徵在於:步驟①的加入的氯化鈣溶液的濃度為0.9mol/L?1.lmol/L，加入量為ImL?2mL ;加入的硫酸鎂溶液的濃度為0.9mol/L?1.lmol/L，加入量為ImL?2mL。
【文檔編號】G01N33/12GK104007242SQ201410262702
【公開日】2014年8月27日 申請日期:2014年6月13日 優先權日:2014年6月13日
【發明者】壯子恆, 劉海翠, 高巍, 李敏, 王大勇, 武中平, 張宇思 申請人:常州秀麗生物科技有限公司