一種尿同型胱氨酸快速測定方法
2023-10-05 07:18:59 1
一種尿同型胱氨酸快速測定方法
【專利摘要】本發明提供了一種快速檢測尿液中同型胱氨酸的方法，包括以下檢測步驟：在測試孔內順序加入試劑A100μl、尿液50μl、試劑B50μl和試劑C50μl，在對照孔內順序加入試劑A100μl、尿液50μl、試劑D50μl、試劑B50μl和試劑C50μl；2分鐘內觀察兩孔顏色變化，若測試孔顯藍色、對照孔未顯色或測試孔顯色明顯重於對照孔則為陽性，表明尿標本內含有同型胱氨酸；若兩孔均未顯色或顯色無明顯差異則為陰性，表明尿標本內不含有同型胱氨酸；本發明提供的檢測方法，簡單實用，成本低廉，安全可靠，可快速的篩查出尿液中是否含同型胱氨酸。
【專利說明】一種尿同型胱氨酸快速測定方法
[0001]
【技術領域】
[0002]本發明涉及一種檢測方法，具體涉及一種快速檢測尿同型胱氨酸的方法。
【背景技術】
[0003]總同型胱氨酸(Total Homocystine, tHcy)包括同型胱氨酸和血眾中的雙硫衍生物。tHcy的正常水平是<15μπιο1/1。同型半胱氨酸是蛋氨酸降解的中間代謝物，正常情況下它可以再甲基再生成蛋氨酸。正常人的血和尿液中一般檢測不到同型半胱氨酸。如果胱硫醚合成酶(Cystat1nine β -synthase, CBS)或/和5-10-甲烯四氫葉酸還原酶(5，10-methylene-tetrahydrofolate reductase, MTHFR)缺乏，就會引起同型半胱氨酸及其硫醚衍生物在體內聚集。測定尿同型胱氨酸就可以了解體內同型胱氨酸的存在水平。
[0004]尿同型胱氨酸測定目前使用的方法是硝普鈉試驗:尿液Iml加入5%氰化鈉水溶液，放置5分鐘,加入5%硝普鈉水溶液一滴，出現紅色或紫紅色為陽性,表示尿中有過量的含硫胺基酸。該法涉及劇毒物質一氰化鈉，生物安全度極低，給生產和使用均造成極大隱患。因此，發明一種安全無毒、操作簡單、成本低廉的檢測方法及檢測裝置快速的確定尿液中是否含有同型胱氨酸，成為一個亟需解決的問題。
【發明內容】
[0005]為了解決現有技術中檢測尿液中的同型胱氨酸方法毒性高、生物安全度低的問題，本發明提供了新的尿同型胱氨酸快速測定方法，本發明提供的方法其生物安全度高，而且靈敏度高，成本低廉，方便快捷。
[0006]本發明提供的快速檢測尿液中同型胱氨酸的方法，包括以下檢測步驟:
在測試孔內順序加入試劑A100 μ 1、尿液50 μ 1、試劑Β50 μ I和試劑C50y 1，在對照孔內順序加入試劑A100 μ 1、尿液50 μ 1、試劑D50 μ 1、試劑B50 μ I和試劑C 50μ I ； 2分鐘內觀察兩孔顏色變化，若測試孔顯藍色、對照孔未顯色或測試孔顯色明顯重於對照孔則為陽性，表明尿標本內含有同型胱氨酸；若兩孔均未顯色或顯色無明顯差異則為陰性，表明尿標本內不含有同型胱氨酸；
所述試劑A為2Μ ΡΗ5.0的醋酸緩衝液，配製方法如下:
2Μ醋酸鈉溶液:醋酸鈉8.2g，加淨化水溶解，定容至100ml，
2M醋酸溶液:冰醋酸6g，加淨化水溶解，定容至100ml，
2M醋酸鈉溶液1ml加2M醋酸溶液2ml，混勻，冰箱冷存48小時；
所述試劑B為1%鐵氰化鉀溶液，配製方法如下:鐵氰化鉀lg，加淨化水溶解，定容至10ml ；
所述試劑C為2%三氯化鐵溶液，配製方法如下:三氯化鐵(含6分子 H20) 2g,加淨化水溶解，定容至10ml ； 所述試劑D為0.1M 二氯化汞溶液，配製方法如下:二氯化汞2.7g，加淨化水溶解，定容至 10ml ο
[0007]同型胱氨酸是含巰基(一SH)的胺基酸。同型胱氨酸中所含的巰基作為一種還原齊IJ，可以使鉄氰化鉀還原成亞鉄氰化鉀，後者與三氯化鐵反應生成普魯士藍而呈現藍色；
3K4Fe(CN)6 + 4FeC13 — Fe4[Fe (CN)6]3 + 12KC1
利用上述化學反應可以測定尿中巰基含量，並以此作為定論性定性指標，用於同型胱氨酸的檢測。
[0008]但是，尿中存在的尿酸作為還原性物質也能使鉄氰化鉀還原，故有幹擾。研究發現:巰基在酸性環境中還原性較強，而尿酸在鹼性環境中具有還原性。製作一個酸性環境則可基本排除尿酸對巰基檢測的幹擾。此外，二氯化汞可以與巰基特異性結合而使其失去還原功能，故以加用二氯化汞作為空白對照，可以排除尿酸等幹擾物。
[0009]本發明提供的檢測方法，簡單實用，成本低廉，安全可靠，可快速的篩查出尿液中不含同型胱氨酸的樣本、含同型胱氨酸的樣本和可能含有同型胱氨酸的樣本，為進一步檢查做準備。
【具體實施方式】
[0010]下面結合實施例對本發明做進一步的說明。
[0011]實施例1
(1)請受檢者留取尿液2ml以上；
(2)向測試孔和對照孔內分別滴入試劑A各100μ L ;
(3)再向測試孔和對照孔內分別滴入標本尿液各50μ L,；
(4)再向對照孔內滴入試劑D50μ L ;
(5)再向測試孔和對照孔內分別滴入試劑B各50μ L ;
(6)再向測試孔和對照孔內分別滴入試劑C各50μ L ;
(7)2分鐘內觀察測試孔和對照孔內液體的顏色變化。
[0012]檢測結果判定如下:
(1)測試孔和對照孔均不顯色則為陰性，說明尿液中無同型胱氨酸；
(2)測試孔和對照孔均顯同等顏色(藍色)，亦為陰性，說明尿液中無同型胱氨酸；
(3)測試孔顯色(藍色)，對照孔不顯色則為陽性，說明尿液中含同型胱氨酸；測試孔顯色越深，說明尿液中含同型胱氨酸越多；
(4)測試孔和對照孔均顯色，但測試孔顏色明顯比對照孔深，亦為陽性，說明尿液中含同型胱氨酸；二者顏色差距越大，說明尿液中含同型胱氨酸越多。
[0013](5)測試孔顯色較淺，或測試孔和對照孔顯色差距較小，為可疑陽性，說明尿液中可能含有同型胱氨酸。
【權利要求】
1.一種尿同型胱氨酸快速測定方法，其特徵在於，包括以下檢測步驟: 在測試孔內順序加入試劑AlOO μ 1、尿液50 μ 1、試劑B50 μ I和試劑C50y 1，在對照孔內順序加入試劑AlOO μ 1、尿液50 μ 1、試劑D50 μ 1、試劑B50 μ I和試劑C 50μ I ； 2分鐘內觀察兩孔顏色變化，若測試孔顯藍色、對照孔未顯色或測試孔顯色明顯重於對照孔則為陽性，表明尿標本內含有同型胱氨酸；若兩孔均未顯色或顯色無明顯差異則為陰性，表明尿標本內不含有同型胱氨酸； 所述試劑A為2Μ ΡΗ5.0的醋酸緩衝液，配製方法如下: 所述試劑B為1%鐵氰化鉀溶液； 所述試劑C為2%三氯化鐵溶液； 所述試劑D為0.1M 二氯化汞溶液。
【文檔編號】G01N21/78GK104237218SQ201410345429
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年7月19日 優先權日:2014年7月19日
【發明者】溫鑫, 崔子倫 申請人:青島貝爾奧生物科技有限公司