用於治療痤瘡的組合物的製作方法

2023-10-05 08:07:44 4

本發明描述了用於在痤瘡治療中使用的化妝品或皮膚病學組合物，其包含在水楊苷中滴定的植物提取物和1,2-鏈烷二醇的組合，優選1,2-癸二醇和柳樹皮(白柳(salixalba))提取物。

尋常痤瘡是年齡在11至30歲之間的患者最常診斷的皮膚病。認為痤瘡影響該年齡組中約80％的人，或者考慮到低強度的病變，甚至100％的年輕人。痤瘡的病理髮病機制是多因素的。在所有患有痤瘡的患者中，出現下述症狀：皮脂過度產生、皮脂腺的排洩管和開口的過度角化、細菌菌群的發展和炎症介質在皮膚中的釋放。

在95％的患者中，病變位於面部和軀幹的上部，偶爾在身體的其他部位，並且由於該位置和疾病的慢性性質，患者具有嚴重的心理問題。

過度的皮脂產生和積聚以及阻塞的皮脂腺開口有利於細菌定殖。微粉刺主要由痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)佔據，所述痤瘡丙酸桿菌是主要涉及痤瘡發展的微生物。其他細菌尤其是表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)和糠秕馬拉色菌(malasezziafurfur)。由於脂肪酶的存在，該微生物將皮脂甘油二酯和甘油三酯水解為游離脂肪酸。在水解過程期間出現的游離脂肪酸具有刺激性、促炎效應，並且加劇毛囊角化病。另外，由痤瘡丙酸桿菌產生的透明質酸酶、蛋白酶和神經氨酸酶也具有促炎效應。此外，這種微生物釋放低分子趨化因子(肽)，吸引嗜中性粒細胞，並且它激活替代補體途徑和經典免疫應答兩者。替代補體途徑的活化劑是丙酸桿菌屬(propionibacterium)的細胞壁(b.bergler-czop,internationaljournalofcosmeticscience,2014,36,187–194)。

微生物如痤瘡丙酸桿菌可促使各種皮膚抗微生物肽(amp)的分泌。痤瘡丙酸桿菌的炎症效應並不要求生物是活的或整體存在。在體外，含有膜肽聚糖(pg)和脂多糖(lps)的上清液或者細胞溶質內容物或膜蛋白能夠增加tlr2和tlr4的角質形成細胞表達。

眾所周知的是更多的細胞因子在痤瘡炎症中起重要作用。痤瘡丙酸桿菌通過toll樣受體2(tlr2)的活化來觸發促炎介質。在這些介質中有il-8，其表達由痤瘡丙酸桿菌誘導。

腫瘤壞死因子-α(tnf-α)是涉及痤瘡發病機制的另一種促炎細胞因子(archivesofdermatologicalresearch2008，第300卷，第7期，第371-376頁)。

白柳樹皮(白柳)的提取物含有水楊苷及其衍生物，其已經作為解熱藥和在許多風溼病的治療中使用超過一個世紀。

草藥產品例如來自柳屬(salix)物種的樹皮的各種製劑在整個歐洲充分公認用於治療不同起源的炎症狀況和疼痛。

柳屬提取物已在各種動物模型中證實了鎮痛、消炎和解熱效應(loniewski等人2002)。

例如，對於含有12％水楊苷的柳屬提取物，劑量依賴性效應已在熱板和角叉菜膠誘導的爪水腫測試(分別為了證實鎮痛和抗炎效應建立的測試程序)中得到報導(loniewski等人2002)。

水楊苷當口服時已知為有效的抗炎劑。

認為當局部應用於人皮膚時，水楊苷可能具有抗衰老能力。來自研究的數據顯示局部應用含有0.5％水楊苷的精華製劑提供了廣譜抗衰老益處，目標是可見的人皮膚衰老的主要徵兆。針對基線在皮膚衰老的結構相關徵兆中指出統計學改善。這些包括皺紋、細紋、顎線輪廓、緊緻度、延展性和密度。針對基線還在斑點狀色素沉著、皮膚色調不均勻、光澤、水合和觸覺粗糙度中可見統計學改善。當在產品製劑中局部應用於人皮膚時，這些結果證實了水楊苷改善可見的衰老徵兆的能力。(gopaulremona等人，anevaluationoftheeffectofatopicalproductcontainingsalicinonthevisiblesignsofhumanskinagingjournalofcosmeticdermatology,9,196–201)

根據現有技術已知水楊苷可用作化妝品和局部皮膚病學製劑中的抗刺激活性化合物(ep0801946)。

水楊苷也可用於與另外的草藥提取物組合。de10034328公開了用於外部應用於皮膚，尤其是因紅斑痤瘡(acnerosacea)而變紅的皮膚的化妝品製劑，所述化妝品製劑含有在水性介質中的槲皮素、蘆丁、水楊苷和七葉素。

1,2-鏈烷二醇如1,2-戊二醇(inci：戊烯二醇)、1,2-己烷二醇(inci：1,2-己二醇)和1,2-辛二醇(inci：辛醯二醇)及其組合是在個人護理產品中廣泛用作增溼劑和抗菌劑的多功能成分。本領域技術人員眾所周知，這些物質顯示針對痤瘡丙酸桿菌的特異性抗菌活性。

wo2011117126描述了1,2-癸二醇和甘草查耳酮a和肉毒鹼的組合，所述組合針對痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)(痤瘡丙酸桿菌(p.acnes))有效而不刺激皮膚。

ep1731036公開了用於痤瘡治療的含有不同1,2-鏈烷二醇的混合物。

用於治療油性和有瑕疵皮膚的常規產品，例如含有水/乙醇和/或表面活性劑的清潔產品具有通常使皮膚變得乾燥的缺點，並且僅發揮很少的皮膚護理作用。特別不利的是，身體對經過較長時間段的含有乙醇和/或洗滌劑的溶液使用的反應可能是皮脂的過度產生，這抵消了在油性、有瑕疵和痤瘡傾向皮膚中的皮脂減少的主要治療目標。

對於痤瘡的局部治療，存在痤瘡劑，如強氧化劑，如過氧化苯甲醯；α-羥基酸，如水楊酸和乳酸；脂肪族二羧酸如壬二酸；類視黃醇如維甲酸(同義詞：全反式視黃酸)、全反式視黃醛和13-順式視黃酸(異維a酸)；抗雄激素(5α-還原酶)和抗生素如克林黴素、四環素和紅黴素。

所述物質通常針對痤瘡丙酸桿菌僅具有非常溫和的抗微生物活性，並且必須在化妝品和皮膚病學製劑中以相對高的濃度使用-例如高達5重量％過氧化苯甲醯和高達20重量％的壬二酸。

然而，由於高劑量，皮膚被非常不利地過度使用，這特別表現在非常乾燥的皮膚中，這通常部分與由於皮膚ph的強烈降低的嚴重皮膚刺激相關。

強氧化劑如過氧化苯甲醯、α-羥基酸如水楊酸和乳酸、以及脂肪族二羧酸如壬二酸的有效性是基於痤瘡丙酸桿菌的抑制。

期望具有提供痤瘡治療的化妝品或皮膚病學製劑，所述化妝品或皮膚病學製劑具有針對痤瘡丙酸桿菌(propionibacteriumacnes)(痤瘡丙酸桿菌(p.acnes))改善的活性，且尤其是針對發炎的黑頭粉刺改善的炎症活性，而不嚴重刺激皮膚。

該問題通過包含1,2-癸二醇和柳樹皮提取物的組合的化妝品或皮膚病學組合物得到解決。與單一物質相比，該製劑令人驚訝地顯示協同的抗菌和抗炎效應。

實驗部分

測定對革蘭氏陽性菌的mic和mbc

測試目的

測試的目的是測定一種或多種樣品針對微生物的抗微生物活性。在測定的測試條件下，獲得的值必須視為測試樣品對於測定的微生物物種特有的。

方法描述

製備含有用測試微生物接種的培養肉湯的一系列試管，並且要測試的物質以遞減的標量濃度引入。

將培養物在預選微生物的最佳溫度和最佳生長條件下溫育足夠的時間段，以證實發展。

然後通過目視觀察指示生長的濁度來確定其中發展微生物群體的試管。其中物質以足夠濃度存在以抑制生長的試管保持澄清。當樣品本身的性質阻止視覺讀數時，或者如果希望確定發展的缺乏是由於微生物抑制作用還是由於微生物殺死作用，則轉移到適當的瓊脂培養基用於確認。

解釋標準

在其下微生物的生長被抑制的樣品濃度視為最低抑制濃度(mic)，而在其下不再存在活微生物的樣品濃度視為最低殺菌濃度(mbc)

a)不同物質針對葡萄球菌屬菌種的抗菌活性的評估

進行評估針對革蘭氏陽性菌的抗菌活性的測試，評估下述物質：

補骨脂酚、乳鐵蛋白、月桂酸、白藜蘆醇、白柳提取物。

根據上述方法測試了這些物質針對痤瘡金黃色葡萄球菌(staphylococcusaureusacnes)atcc25923和表皮葡萄球菌(staphylococcusepidermidis)atcc12228的抗菌活性。結果顯示於表1中。

表1

不同物質針對痤瘡金黃色葡萄球菌和表皮葡萄球菌的最低抑制濃度(mic)和最低殺菌濃度(mbc)

測試顯示，就測試的其他物質而言，白柳提取物針對革蘭氏陽性菌的活性較弱。

b)不同物質針對痤瘡丙酸桿菌的抗菌活性的評估

在另一組實驗中，我們根據上述方法測試了單獨和組合的白柳提取物和1,2-癸二醇的抗菌活性，所述1,2-癸二醇是已知顯示針對痤瘡丙酸桿菌的抗菌活性的物質。

所使用的微生物菌株是以2.6x104細胞/毫升培養基的濃度滴定的痤瘡丙酸桿菌atcc11827。

結果顯示於表2中。

表2

1,2-癸二醇和白柳提取物針對痤瘡丙酸桿菌的最低抑制濃度(mic)和最低殺菌濃度(mbc)

白柳提取物單獨僅顯示弱抗菌活性。

1,2-癸二醇已知針對痤瘡丙酸桿菌有效。

白柳提取物和1,2-癸二醇的組合(1:1)令人驚訝地展示針對痤瘡丙酸桿菌的協同抗菌效應。

1,2-癸二醇和白柳提取物的組合能夠獲得兩倍濃度的1,2-癸二醇的相同mic，並且極大改善其mbc。

所選擇的順序關聯度與過氧化苯甲醯一致，所述過氧化苯甲醯通常已知為針對痤瘡丙酸桿菌的強抗菌劑。

白柳提取物和1,2-癸二醇的抗炎活性的體外評估

該測試的目的是藉助於在生物實驗模型(角質形成細胞培養物hacat)中tnfα、il1α、il8合成調節的研究，來評估白柳提取物、1,2-癸二醇及其組合的抗炎活性。

tnfα、il1α、il8是與痤瘡過程相關的炎症介質。

基於痤瘡過程在皮脂腺毛囊內部執行，選擇角質形成細胞培養物作為實驗模型，所述皮脂腺毛囊是由角質形成細胞組成的組織。

為了在我們的實驗模型中刺激炎症過程，選擇了脂多糖(lps)。lps是由細菌例如痤瘡丙酸桿菌分泌的促炎介質。

1,2-癸二醇(smal)在機械攪拌和培養基的添加下用玉米油(37℃)乳化，從下述比率開始：在1ml培養基的最終體積(37℃)中，用100μl玉米油乳化的0.05g。

將白柳提取物(wmal)在培養基中直接稀釋，從下述比率開始：在1ml(37℃)中的0.05g；在培養基(37℃)中的後續稀釋。

對於測試執行，用lps(來自大腸桿菌(escherichiacoli)的脂多糖，10ng/ml)和以3個濃度的測試產品處理人角質形成細胞(hacat)，在初步細胞毒性測試後在非細胞毒性試劑中加以選擇。

在監測的實驗期結束時，藉助於elisa測定來測量細胞因子水平。

將結果與陰性對照(未經受lps的細胞，ctr-)和陽性對照(用lps處理的細胞，ctr+)進行比較。

通過使用5.0％至0.0012％的濃度範圍(連續稀釋1:2)，對兩種產品進行初步細胞毒性測試。根據所獲得的結果，選擇下述濃度來分析抗炎活性：

1,2-癸二醇(smal)：0.002％

白柳提取物(wmal)：0.04％-0.02％-0.01％

對測試開始初期的兩種原材料的混合物執行第二次細胞毒性測試，以驗證抗炎活性中的作用協同性；測試濃度如下：

smal0.002％+wmal:0.04％-0.02％-0.01％

對照和用測試產品處理的細胞的培養基用於藉助於elisa法的促炎細胞因子tnfα、il1α和il8的劑量。

商業elisa試劑盒用於細胞因子數量的測定。

定量測定使用由已知標準和不斷增長濃度的標準細胞因子組成的校準曲線。

不同實驗組中獲得的數據經受統計學分析，並且根據t檢驗進行比較。對於p<0.05，變化視為顯著的。

在下表3中，報告了對於每個測試系列獲得的數據。

結果表示為在實驗期過程中釋放到培養基內的細胞因子(平均值±標準差)以及與對照相比的平均％變化。

為了比較兩個不同的工作期，所獲得的數據以0-100％的尺度標準化，其中ctr-為0，並且ctr+為100％；所有其他數據在此間隔內計算。

對這些數據執行通過t檢驗的統計學分析，並且p<0.05的變化視為顯著的。

在獲得的結果的基礎上，觀察到smal和wmal能夠顯著降低lps誘導的炎症標記物tnfα、il1α和il8的釋放，所述炎症標記物都與痤瘡有關。

對於分析的所有物質，以組合的物質wmal和smal顯示協同效應。

表3

用smal、wmal及其結合處理的細胞培養物ctr-、ctr+中的細胞因子的劑量。結果表示為平均值±標準差(以ng/l表示)和與對照相比的平均％變化。

製劑可具有各種性質，基於水的、水-醇和無水的。在最常用中的有表面活性劑體系(甚至包括例如洗髮劑、泡浴劑、沐浴露、液體肥皂和固體肥皂、膠束水、液體洗滌劑)、油包水乳液、水包油乳液、精華、凝膠、油、水性溶液、水醇溶液、無水棒、粉餅、洗劑、乳、防曬霜、曬後產品和遮瑕(camouflage)產品(即cc霜、bb霜)。

任選可能和有利的是使用根據本發明的組合物作為藥物製劑的基質。

本領域技術人員當然知道，如果沒有常規助劑和添加劑，化妝品組合物通常是不可想像的。在其中包括例如稠度賦予劑、填料、香料、著色劑、乳化劑、另外的活性化合物例如維生素或蛋白質、防曬劑、穩定劑、驅蟲劑、醇、水、鹽、具有蛋白水解或角質水解活性的物質、增稠劑、潤膚劑、脂肪酸、螯合劑、舒緩劑、二醇、著色劑、緩衝物質。

柳樹皮提取物根據歐洲藥典專著「extracta」進行製備。用水和/或乙醇提取柳屬的各個物種包括紅皮柳(s.purpureal.)、s.saphnoidesvill.和爆竹柳(s.fragilisl.)的完整或成碎片的乾燥的嫩枝樹皮或者完整的乾燥的當年小枝小片。以水楊苷表示的水楊酸衍生物的總含量必須為至少5％；優選10％至20％。

根據本發明的白柳提取物必須滴定至不小於20％(w/w)的表示為水楊苷的水楊酸衍生物的總濃度。

白柳提取物和1,2-癸二醇之間的比率為1:100至100:1，或1:50至50:1，或1:10至10:1，優選1:5至5:1；更優選1:1。

製劑中白柳提取物的總量在0.001％至10％，優選0.01％(w/w)至5％(w/w)，更優選0.3％(w/w)至1％(w/w)的範圍內。

製劑中1,2-癸二醇的總量在0.001％(w/w)至10％(w/w)，優選0.01％(w/w)至5％(w/w)，更優選0.3％(w/w)至1％(w/w)的範圍內。

實例

下述實例不應表示對本發明的限制。

實例1

防曬霜

實例2

精華

實例3

保溼膏

實例4

凝膠

實例5

液體洗滌劑

實例6

cc霜

實例7

增溼霜

實例8

洗滌劑

實例9

防曬霜

實例10

防曬霜2