去除幹擾的幹化學定量測試試條、谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條及檢測方法
2023-10-05 09:59:54
專利名稱：去除幹擾的幹化學定量測試試條、谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條及檢測方法
技術領域：
本發明涉及一種幹化學測試試條及測試方法，尤其涉及一種轉氨酶的幹化學測試試條及檢測方法。
背景技術：
幹化學測試中的幹擾物很多，比如氧化還原反應測定中的尿酸、抗壞血酸等的幹擾，轉氨酶檢測中的丙酮酸幹擾，尤其以轉氨酶中的丙酮酸幹擾較為嚴重。轉氨酶的種類很多，其中以谷丙轉氨酶(GPT/ALT)和穀草轉氨酶(GOT/AST)最為重要。谷丙轉氨酶又稱丙氨酸氨基轉移酶，是催化穀氨酸與丙酮酸之間的轉氨作用；穀草轉氨酶又稱門冬氨酸氨基轉移酶，是催化穀氨酸與草醯乙酸之間的轉氨作用。臨床上，全血、 血清、血漿、組織液中這兩種轉氨酶的測定，是心臟病、肌肉疾病、尤其是肝病診斷中非常重要的指標。臨床上測定上述兩種轉氨酶的方法，主要是使用生化分析儀的液體試劑的方法， 此方法是利用乳酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶分別催化谷丙轉氨酶產物丙酮酸和穀草轉氨酶產物草醯乙酸脫氫，消耗煙醯胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，引起吸光值在340nm的變化。此變化率與谷丙轉氨酶、穀草轉氨酶活性有比例關係，從而得出酶活性。上文提到的反應如下谷丙轉氨酶
權利要求
1.一種去除幹擾的幹化學定量測試試條，所述測試試條包括底襯，所述底襯上設置一固定有去幹擾試劑和信號提供試劑的加樣區，所述底襯上還設置一固定有測試反應啟動試劑的啟動區，其特徵在於所述加樣區和啟動區是以在通常狀態下保持非接觸、在測試狀態下可互相接觸的方式布設在所述測試試條上。
2.根據權利要求1所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於所述加樣區直接固定在所述底襯上，所述啟動區通過一粘結件連接在所述底襯上，該粘結件具有足夠的高度使所述啟動區的大部分區域懸置於所述加樣區上方，且該啟動區可通過下壓與所述加樣區保持接觸。
3.根據權利要求1所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於所述加樣區和啟動區被一分隔層隔開，該分隔層為可抽離式連接方式，以使得該分隔層被抽離出測試試條後所述加樣區和啟動區能保持接觸。
4.根據權利要求1所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於所述加樣區直接固定在所述底襯上，所述啟動區通過一鉸接件鉸接於所述底襯的一端，所述鉸接件的轉軸軸向與水平面平行或垂直，以使得啟動區通過旋轉後能與所述的加樣區保持接觸。
5.根據權利要求1所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於所述加樣區和啟動區分別固定在所述底襯同一面的不同區域，所述加樣區和啟動區中間的底襯上設有一摺痕線，以使得所述底襯沿摺痕線彎折後能使啟動區與加樣區保持接觸。
6.根據權利要求1 5中任一項所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於 所述啟動區上方覆蓋有一保護層，所述保護層選用透明的聚碳酸酯或聚氯乙烯材料製作。
7.根據權利要求1 5中任一項所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於 所述加樣區包括固定於底襯上的流動墊、酶結合墊、濾血膜、樣品墊、擴散層中的一種或疊加設置其中的多種。
8.根據權利要求6所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條，其特徵在於所述底襯選用聚氯乙烯、聚碳酸酯、聚醯胺高分子聚合材料製作，所述流動墊選用玻璃纖維、硝酸纖維素膜、聚酯纖維膜或濾紙製作，所述酶結合墊選用玻璃纖維、纖維素濾紙、聚酯纖維或濾紙製作，所述濾血膜選用不對稱聚碸膜或玻璃纖維製作，所述樣品墊選用玻璃纖維或聚酯纖維製作，所述擴散層選用聚酯纖維或尼龍纖維製成的網布形式。
9.一種用權利要求1 8中任一項所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條檢測生物酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區，所述加樣區上固定的去幹擾試劑和信號提供試劑均復溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內源性幹擾物質與待測樣品液中的去幹擾試劑和信號提供試劑開始進行信號反應，經過一段孵化過程後，獲取該信號反應的特徵值，並以該特徵值設定為內源性幹擾物質的背景信號值；再使所述測試試條的啟動區與加樣區相接觸，啟動區上固定的測試反應啟動試劑復溶到待測樣品液中，並開始啟動分析物的測試反應，測試反應啟動後生成的產物再與所述信號提供試劑進行二次信號反應，根據二次信號反應測得的二次特徵值和前述測得的背景信號值， 測算出待測生物酶的含量。
10.根據權利要求9所述的去除幹擾的幹化學定量測試試條檢測生物酶的方法，其特徵在於所述信號反應所產生的可識別信號為顯色信號、螢光信號、化學發光信號中的一種。
11.一種穀丙或穀草轉氨酶定量測試試條，其特徵在於所述定量測試試條是由權利要求1 6中任一項所述的幹化學定量測試試條製成，所述啟動區上固定的測試反應啟動試劑主要是指能夠啟動轉氨酶反應的底物，所述加樣區上固定的去幹擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化物酶，所述加樣區上固定的信號提供試劑包括適用於所述過氧化物酶的顯色底物、螢光底物或化學發光底物。
12.一種穀丙或穀草轉氨酶定量測試試條，其特徵在於所述定量測試試條是由權利要求7或8所述的幹化學定量測試試條製成，所述啟動區上固定的測試反應啟動試劑主要是指能夠啟動轉氨酶反應的底物，所述加樣區上固定的去幹擾試劑包括丙酮酸氧化酶和過氧化物酶，所述加樣區上固定的信號提供試劑包括適用於所述過氧化物酶的顯色底物、螢光底物或化學發光底物；所述酶結合墊上設有濾血膜，所述濾血膜上設有樣品墊，所述樣品墊上設有擴散層。
13.根據權利要求11或12所述的谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條，其特徵在於所述丙酮酸氧化酶的濃度為30KU/L 600KU/L，所述過氧化物酶的濃度為30KU/L 600KU/L， 所述顯色底物、螢光底物或化學發光底物的濃度為ImM 50mM。
14.根據權利要求11或12所述的谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條，其特徵在於所述啟動轉氨酶反應的底物包括α -酮戊二酸，所述α -酮戊二酸的濃度為5mM 300mM ；所述啟動轉氨酶反應的底物還包括用於檢測谷丙轉氨酶的L-丙氨酸或者用於檢測穀草轉氨酶的L-門冬氨酸，所述L-丙氨酸的濃度為0. OlM 1M，所述L-門冬氨酸的濃度為0. OlM 1M。
15.一種用權利要求11所述的谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條檢測谷丙或穀草轉氨酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液添加到所述測試試條的加樣區，所述加樣區上固定的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶及顯色底物均復溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內源性幹擾物質丙酮酸與待測樣品液中的酶及顯色底物開始進行顯色反應，經過一段孵化過程後，獲取該顯色底物顯色的反射率值，該反射率值即設定為內源性幹擾物質的背景顯色值；再使所述測試試條的啟動區與加樣區相接觸，啟動區上固定的底物復溶到待測樣品液中，並開始啟動轉氨酶反應，轉氨酶反應啟動後生成的丙酮酸參與偶聯反應，偶聯反應後生成的雙氧水與所述顯色底物進行二次顯色反應，根據顯色底物顯色的二次反射率值的終點或者變化率和所述背景顯色值，通過終點法或速率法測定出谷丙或穀草轉氨酶的含量。
16.一種用權利要求12所述的谷丙或穀草轉氨酶定量測試試條檢測谷丙或穀草轉氨酶的方法，包括以下步驟首先將待測樣品液滴加到所述測試試條加樣區的擴散層上，使待測樣品液依次流經樣品墊和濾血膜並逐漸浸潤到所述酶結合墊上，所述加樣區上固定的丙酮酸氧化酶、過氧化物酶及顯色底物均復溶到待測樣品液中，所述待測樣品液中含有的內源性幹擾物質丙酮酸與待測樣品液中的酶及顯色底物開始進行顯色反應，經過一段孵化過程後，獲取顯色劑顯色的反射率值，該反射率值即設定為內源性幹擾物質的背景顯色值；再使所述測試試條的啟動區與加樣區相接觸，啟動區上固定的底物復溶到待測樣品液中，並開始啟動轉氨酶反應，轉氨酶反應啟動後生成的丙酮酸參與偶聯反應，偶聯反應後生成的雙氧水與所述顯色底物進行二次顯色反應，根據顯色底物顯色的二次反射率值的終點或者變化率和所述背景顯色值，通過終點法或速率法測定出谷丙或穀草轉氨酶的含量。
全文摘要
本發明公開了一種去除幹擾的幹化學定量測試試條，包括底襯，其上設置一固定有去幹擾試劑和信號提供試劑的加樣區，還設置一固定有測試反應啟動試劑的啟動區，加樣區和啟動區是以在通常狀態下保持非接觸、在測試狀態下可互相接觸的方式布設在測試試條上。測試方法是將待測樣品液添加到加樣區，加樣區上固定的物質復溶到待測樣品液中，開始進行信號反應獲取背景信號值；再使啟動區與加樣區接觸，啟動區上固定的物質復溶，開始測試反應，產物再進行二次信號反應，根據測得的二次特徵值和前述背景信號值測算出待測生物酶的含量。本發明的檢測方法操作簡便、測試成本較低、檢測結果準確、檢測精度高，能夠具體用於谷丙或穀草轉氨酶的定量測試。
文檔編號G01N33/52GK102288747SQ20111023992
公開日2011年12月21日 申請日期2011年8月19日 優先權日2011年8月19日
發明者吉翔, 李宗祥, 謝光, 車宏莉 申請人:長沙三諾生物傳感技術股份有限公司