一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法
2023-10-19 12:13:47
專利名稱：一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法
一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法
技術 領域本發明涉及一種快速測定澱粉發酵液中葡萄糖含量的檢測技術，屬於糧食加工檢 測領域。
背景技術：
葡萄糖是最普通的、被人們所熟悉的單糖，又稱右旋糖，屬醇醛類。葡萄糖是生物 體內新陳代謝不可缺少的營養物質，是人類生命活動所需能量的重要來源。在食品、醫藥工 業上葡萄糖可直接使用，在印染製革工業中作還原劑，在制鏡工業和熱水瓶膽鍍銀工藝中 常用葡萄糖作還原劑，工業上還用大量用葡萄糖為原料合成維生素C。微生物發酵生產中常 以澱粉為基本原料，經水解生成還原糖或葡萄糖，供發酵使用，因此葡萄糖的檢測是澱粉發 酵生產過程控制的常規生化指標。而目前的葡萄糖檢測現行國家專業標準及AOAC推薦方 法中，均採用容量分析法，即斐林試劑滴定法和鐵氰化鉀滴定法。其中斐林試劑滴定法是利 用斐林甲液、乙液混合時，生成的天藍色氫氧化銅沉澱立即與酒石酸鉀鈉起反應，生成深藍 色的氫氧化銅和酒石酸鉀鈉的絡合物——酒石酸鉀鈉銅，酒石酸鉀鈉銅被葡萄糖還原，生 成紅色的氧化亞銅沉澱，然後加入硫酸鐵，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸鉀溶液滴定氧 化作用後生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀消耗量，計算氧化亞銅含量，即可算出葡萄糖含量。 雖然斐林試劑法沿用已久，但測定結果只是近似值，且操作過程異常複雜。和鐵氰化鉀滴定 法一樣，這兩種方法都要求溶液在微沸狀態下滴定，滴定操作在電爐上進行，反應溫度不易 控制，操作者對滴定終點的判斷帶有經驗性，幹擾因素多，人為誤差較大，對葡萄糖的評價 不夠準確，主觀影響因素較大，再者使用斐林溶液滴定葡萄糖時，其他具有還原能力的單糖 會干擾檢測結果，造成較大的系統誤差。上述方法只適用於實驗室操作，檢測速度慢，難以 滿足實際生產操作的需求。
發明內容
本發明的目的，就是針對上述測試方法的不足，向糧食加工行業提供一種具有檢 測速度快、準確度高、抗幹擾能力強、操作簡便等特點，且適用於現場應用的葡萄糖檢測技 術，從而建立一種方便快捷的澱粉發酵液中葡萄糖含量的檢測方法。為了達到上述目的，本發明是這樣實現的取100 μ L檢測試樣與2400 μ L自製的 葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起顯色反應，反應產物在380nm處有 最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs38tl值，制定標準曲線，根據待測樣品 的Abs38tl值，獲取待測物中葡萄糖的含量，從而實現本發明的目的。自製的葡萄糖光學檢測試劑由轉化酶、還原型染料、滷化物鹽組合而成。轉化酶由 過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖澱粉酶和葡萄糖 苷酶中的至少一種或一種以上組成，過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖氧化酶和葡萄糖澱粉酶 是轉化酶的優選，過氧化氫酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是轉化酶的最優選，轉化酶待加入 量的優選為10 100U。
還原型染料由澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚、N，N 二甲基苯胺和甲 基酚中一種或一種以上組成，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚和N，N 二甲基苯 胺是還原型染料的優選，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉和草酸鈦鉀是還原型染料的最優選， 還原型染料待加入量的優選為100 200mM。滷化物鹽由氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉和碘化鉀中一種或一種以上 組成，氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉和溴化鉀是商化物鹽的優選，氯化鈉和氯化鉀是商化物鹽的 最優選，滷化物鹽待加入量的優選為150 200mM。該檢測方法具有特異性強、靈敏度高、易於操作、準確度高等特點，可以用於澱粉 發酵液中葡萄糖的快速檢測。
圖1為與標準曲線比較判斷澱粉發酵液樣品中葡萄糖的含量的示意圖；
具體實施例方式本發明提供一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，具體實施過程是取 οομ L檢測試樣與2400μ L自製的葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起 顯色反應，反應產物在380nm處有最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs38Q 值，制定標準曲線，根據待測樣品的Abs38tl值，獲取待測物中葡萄糖的含量。在本發明的自製葡萄糖光學檢測試劑中，所述檢測試劑是由轉化酶、還原型染料、 滷化物鹽組合而成。所述轉化酶由過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡 萄糖澱粉酶和葡萄糖苷酶中的至少一種或一種以上組成，過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄 糖氧化酶和葡萄糖澱粉酶是轉化酶的優選，過氧化氫酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是轉化 酶的最優選。轉化酶加入量的優選為10 100U。所述還原型染料由澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚、N，N 二甲基苯胺 和甲基酚中一種或一種以上組成，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚和Ν，Ν 二甲 基苯胺是還原型染料的優選，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉和草酸鈦鉀是還原型染料的最優 選。還原型染料加入量的優選為100 200mM。所述滷化物鹽由氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉和碘化鉀中一種或一種 以上組成，氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉和溴化鉀是商化物鹽的優選，氯化鈉和氯化鉀是商化物 鹽的最優選。滷化物鹽加入量的優選為150 200mM。下面結合具體實施例對本發明進行 描述 實施例1 葡萄糖標準樣品Abs38tl值——濃度標準曲線1、取石英比色皿；2、用移液器準確移取100 μ L標準葡萄糖樣品至比色皿中；3、用移液器準確移取2400 μ L自製的葡萄糖光學檢測試劑至比色皿中，混合均 勻，室溫下反應1.5分鐘；4、在紫外分光光度計下測定380nm下的吸光值(Abs值)；5、繪製葡萄糖標準樣品Abs38tl值——濃度標準曲線。
實施例2 澱粉發酵液樣品的快速檢測方法1、準確量取ImL澱粉發酵液樣品，離心；2、用移液器準確移取100 μ L上清液至比色皿中；
3、用移液器準確移取2400 μ L自製的葡萄糖光學檢測試劑至比色皿中，混合均 勻，室溫下反應1.5分鐘；4、在紫外分光光度計下測定380nm下的吸光值(Abs值)；5、與標準曲線比較，判斷澱粉發酵液樣品中葡萄糖的含量。以上實施例只是為了說明本發明，而不是對本發明的限制。在上述說明的基礎上， 可以對本發明作許多改進和改變。在所附權利要求書的範圍內，本發明可以有不同於上述 的其它實現方式，選用其它試劑、改變試劑濃度等方法均在本發明專利要求範圍之內。
權利要求
1.一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在於取100 μ L檢測試樣與 2400 μ L自製的葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起顯色反應，反應產物 在380nm處有最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs380值，制定標準曲線， 根據待測樣品的Abs380值，獲取待測物中葡萄糖的含量。
2.根據權利要求1所述的一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在 於所述的自製葡萄糖光學檢測試劑由轉化酶、還原型染料、滷化物鹽組合而成。
3.根據權利要求2所述的一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在 於所述的轉化酶由過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖-6-磷酸脫氫酶、葡萄糖氧化酶、葡萄糖 澱粉酶和葡萄糖苷酶中的至少一種或一種以上組成，過氧化氫酶、己糖激酶、葡萄糖氧 化酶和葡萄糖澱粉酶是轉化酶的優選，過氧化氫酶、己糖激酶和葡萄糖氧化酶是轉化酶的 最優選，轉化酶待加入量的優選為10 100U。
4.根據權利要求2所述的一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在 於所述的還原型染料由澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚、N，N 二甲基苯胺和 甲基酚中一種或一種以上組成，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉、草酸鈦鉀、苯酚和N，N 二甲 基苯胺是還原型染料的優選，澱粉、碘化鉀、4-氨基替吡啉和草酸鈦鉀是還原型染料的最優 選，還原型染料待加入量的優選為100 200mM。
5.根據權利要求2所述的一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在 於所述的滷化物鹽由氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉、溴化鉀、碘化鈉和碘化鉀中一種或一種以上 組成，氯化鈉、氯化鉀、溴化鈉和溴化鉀是商化物鹽的優選，氯化鈉和氯化鉀是商化物鹽的 最優選，滷化物鹽待加入量的優選為150 200mM。
全文摘要
本發明提供一種澱粉發酵液中葡萄糖含量的快速檢測方法，其特徵在於樣品經前處理後，取100μL檢測試樣與2400μL自製的葡萄糖光學檢測試劑混合，樣品中葡萄糖與檢測試劑起顯色反應，反應產物在380nm處有最大吸收峰，通過比較不同濃度葡萄糖標準樣品的Abs380(吸光度)值，制定標準曲線，根據待測樣品的Abs380值，獲取待測物中葡萄糖的含量。該檢測方法具有檢測準確度高、測試方便、應用範圍廣等優點，可以用於澱粉發酵液中葡萄糖的快速檢測。
文檔編號G01N21/78GK102042979SQ201010522048
公開日2011年5月4日 申請日期2010年10月28日 優先權日2010年10月28日
發明者何保山, 王金水, 謝巖黎, 金華麗, 韓小賢 申請人:河南工業大學