Per2蛋白激動劑多肽及其應用的製作方法
2023-10-22 01:29:17
Per2蛋白激動劑多肽及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及藥物領域，具體涉及具有促進PER2蛋白表達，治療治療食道癌的多肽。其序列為SALFLSPFQTDDGMM是全新的序列，該多肽可體內促進PER2蛋白表達，治療食道癌。提高在體內荷瘤小鼠生存率；抑制人食道癌細胞Eca109的增殖，遷移；具有潛在的新藥開發價值。
【專利說明】PER2蛋白激動劑多肽及其應用
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及PER2蛋白激動劑多肽及其應用，具體涉及具有促進PER2蛋白表達、治療食道癌的多肽。
【背景技術】
[0002]食管癌的治療上根據病灶的不同位置、疾病分期可以選擇手術、放療、化療、生物靶向治療方式。食管癌的手術常切除癌變組織與轉移淋巴結，管狀胃代替其功能。但是手術難以完全切除癌組織與亞臨床病灶。其次就是放化療，但是這兩種治療方式均對正常組織器官有明顯副反應，進一步提高療效並減少對正常組織的損傷是值得研究的課題。目前生物靶向治療腫瘤是非常有前景的，靶向治療是針對腫瘤發生過程中阻斷某個或多個信號通路，達到治療腫瘤的目的。
[0003]在探索腫瘤病因，尋找對腫瘤的治療方法過程中，發現生物節律的紊亂與腫瘤的發生發展有很大關係。生物節律的紊亂與食管癌的發生發展有一定關係。在用現代時間生物學手段來探測腫瘤節律基因的變化已成為食管癌治療的新興研究課題。
[0004]生物節律基因/--?表達的PER2蛋白與正常光暗循環條件下均成自發性節律變化。/--?在/--系列基因中與腫瘤關係最為密切。研究表明，PER2蛋白在食管癌組織中低表達，而在癌旁組織中高表達，PER2可以看做是一個保護性基因，其表達可以上調抑癌基因P53，下調癌基因c-cmyc的表達。PER2的表達可以抑制瘤細胞的增殖、使永生化能力的喪失，同時可以通過阻滯瘤細胞的G2/M期，達到調控細胞周期增加放療敏感性的目的。
[0005]PER2蛋白功能降低是食管癌發生的一個重要因素。因此，促進PER2蛋白表達，抑制食管癌發展，是治療食管癌的新靶點。但是，尚未有開發成熟的PER2蛋白激動劑多肽的治療食管癌的藥物
本專利中的PER2蛋白激動劑多肽已證明在食管癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發的前景。
【發明內容】
[0006]發明目的
本發明提供全新的序列，該序列PER2蛋白激動劑，對食管癌具有很好的療效。
[0007]技術方案
PER2蛋白激動劑多肽，其特徵在於其序列為SALFLSPFQTDDGMM。
[0008]一種藥物組合物，其特徵在於其包含如權利要求1所述多肽與一種以上藥學上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩定劑。
[0009]所述的藥物組合物，其特徵在於，所述組合物為注射劑。
[0010]所述的多肽，其特徵在於有效劑量為10mg/kg。
[0011]所述的PER2蛋白激動劑多肽在製備、治療食道癌藥物中的應用。
[0012]有益效果利用固相合成法化學合成PER2蛋白激動劑多肽，該多肽可體內促進PER2蛋白表達，治療食道癌。提高在體內荷瘤小鼠生存率；抑制人食道癌細胞Ecal09的增殖，遷移；具有潛在的新藥開發價值。
【具體實施方式】
[0013]本發明涉及多肽由吉爾生化(上海)合成。
[0014]實施例1
PER2蛋白激動劑多肽對人食道癌細胞Ecal09增殖的作用。
[0015]採用MTT比色法。將對數生長的Ecal09細胞，以1.0X 105加入96孔培養板中，培養24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽和陽性對照藥物長春新鹼；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入 MTT，作用 4h 後，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為5.ΟΙμΜ。當濃度為5.01 μ M時，對Ecal09增殖抑制率為62.3%。
[0016]實施例2
PER2蛋白激動劑多肽對人食道癌細胞Ecal09遷移的作用。
[0017]採用劃痕實驗。 先用marker筆在24孔板背後，用直尺比著，均勻得劃橫線，大約每隔0.5~Icm—道，橫穿過孔。每孔穿過3條線；將成對數生長的Ecal09細胞，以1.0X105加入24孔培養板中，培養24h。第二天用10μ I槍頭比著直尺，垂直於背後的橫線劃痕，以劃痕和背後橫線的交叉點為固定觀察位點；實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽和陽性對照藥物長春新鹼；空白組加入相同體積的溶劑，每孔設五個復孔；放入37°C、5%C02培養箱，培養。按0，6，12，24，36小時，拍照；測量0，6，12，24，36h劃痕寬度。以不同的時間點，記錄每孔三個固定位置處劃痕寬度的變化，即為細胞遷移距離。按照公式計算遷移率(migration rate, MR):遷移率(MR)=(實驗第η小時的劃痕寬度一實驗第O小時的劃痕寬度)X 100%/實驗第O小時的劃痕寬度。結果，隨PER2蛋白激動劑多肽2濃度增加，遷移抑制率逐漸下降，說明PER2蛋白激動劑多肽2能夠抑制人食道癌細胞Ecal09遷移。
[0018]表1多肽對人食道癌細胞Ecal09遷移抑制作用
【權利要求】
1.PER2蛋白激動劑多肽，其特徵在於其序列為SALFLSPFQTDDGMM。
2.一種藥物組合物，其特徵在於其包含如權利要求1所述多肽與一種以上藥學上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩定劑。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特徵在於，所述組合物為注射劑。
4.如權利要求1所述的多肽，其特徵在於有效劑量為10mg/kg。
5.如權利要 求1所述的PER2蛋白激動劑多肽在製備治療食道癌藥物中的應用。
【文檔編號】A61P35/00GK104017054SQ201410288285
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月25日 優先權日:2014年6月25日
【發明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司