甘草素在製備用於預防和治療腫瘤藥物的應用的製作方法
2023-10-24 06:06:22 2
專利名稱：甘草素在製備用於預防和治療腫瘤藥物的應用的製作方法
涉及領域本發明涉及醫藥領域，具體地說，本發明涉及將天然植物甘草中提取的二氫黃酮類單體化合物甘草素(Liquiritigenin)或人工合成的甘草素製備用於預防和治療腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
20世紀70年代以來，我國的癌症發病率一直呈上升趨勢，目前我國每年癌症的發病人數約200萬人，死於癌症的人數超過140萬人，其中，肝癌死亡率位於癌症死亡率的第三位，每年有11萬人死於肝癌，約佔世界肝癌死亡總數的45％。我國肝癌高發情況十分嚴重，目前我國約有1.3億HBV攜帶者，25％的病毒攜帶者最終將發展成為慢性肝炎、肝硬化和肝癌。WHO預計到2020年，每年可發生2千萬新癌症病例，其中大多數在發展中國家。對此，我國提出重點預防的癌症依次為肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結直腸癌、乳腺癌、宮頸癌及鼻咽癌，它們合計佔癌症死因的80％。面臨癌症高發的挑戰。通過研究天然植物中的化學抗癌物質預防癌症的發生和發展，已成為癌症化學預防研究的一個重要領域，並受到世界各國科學界的普遍關注。
天然植物甘草在我國資源豐富，甘草具有多種藥理功能及人體保健作用，它被衛生部列入既是食品又是藥品的保健食品名單。甘草在中醫臨床治療腫瘤病人的中藥配方中是一味重要的常用中藥，探討甘草中具有抗腫瘤活性的單體成分是研究的重要方向。雖然許多化學分析者已從化學分析的角度，對甘草成分進行了系統的分析，但對於甘草中存在的抗癌活性成分的研究尚不全面。目前研究認為甘草中三萜類和黃酮類化合物是抗腫瘤的主要活性成分，其中甘草三萜類化合物甘草酸和甘草甜素抗腫瘤的研究較多，如黃煒等研究發現，三萜類單體甘草酸濃度為2.5mmol/L、5mmol/L、10mmol/L作用肝癌細胞96h後，細胞增殖抑制率分別為32.2％、59.4％、85.1％[1]。而對甘草黃酮類化合物抗癌作用的研究很少，並均為甘草黃酮類混合物，非黃酮類單體化合物。例如傅乃武等研究發現甘草黃酮類混合物具有抗癌、抗突變和抗氧化作用，認為甘草黃酮很有希望發展成為一個有效預防腫瘤的藥物[2]。日本Hatano研究發現甘草黃酮類物質可引起大鼠腹上肝癌和小鼠艾氏腹水癌細胞形態學上的變化[3]。甘草素屬二氫黃酮化合物，以往的研究報導甘草素具有抗病毒作用，如甘草素有治療感染HIV和慢性C型肝炎病毒的作用，還具有抗愛滋病毒的作用[4]，近兩年來，Crance等研究又發現甘草素能抑制SARS相關冠狀病毒的複製[5]，但迄今為止，對於甘草素抗腫瘤作用及其機制的研究尚未見有報導。
發明內容
本發明的目的就是提供一種天然植物甘草中提取或人工合成的二氫黃酮類單體化合物甘草素(Liquiritigenin)在製備用於預防和治療治腫瘤藥物中的應用，所述的治癌藥物用於治療和預防肝癌、肺癌、胃癌、結腸癌、白血病、等多種癌症。
本發明的目的、優點等，將通過下面優先實施例的非限制性說明進行圖示和解釋，這些實施例是參照附圖僅作為例子給出的。
圖1為顯示甘草素200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L對肝癌細胞生長的抑制呈劑量反應關係示意圖。
圖2為甘草素對結腸癌細胞的抑制作用示意圖具體實施方式
如圖1、圖2及表1、表2、表3、表4、表5、表6所示，本發明的研究過程中，進行了體外不同腫瘤細胞的篩選實驗，包括人肺癌細胞A549、人胃癌細胞(SGC7901)、人肝癌細胞(SMMC7721)、人結腸癌細胞(LOVO)、人早幼粒細胞白血病細胞HL-60，經多次篩選，發現甘草素具有明顯抑制癌細胞生長的作用，並呈劑量反應關係，初步結果為本項目的深入研究提供了良好的基礎。
一、細胞株與篩選方法細胞株人肺癌細胞A549人低分化胃腺癌細胞BGC-823人肝癌細胞SMMC-7721人早幼粒細胞白血病細胞HL-60方法1.取處於指數生長期狀態良好的細胞一瓶，加入0.25％胰蛋白酶消化液，消化使貼壁細胞脫落，計數2-4×104個/ml，製成細胞懸液。
2.取細胞懸液接種於96孔板上，180/孔，置恆溫CO2培養箱中培養24小時。
3.換液，加入受試藥物，20/孔，培養72小時。
4.將MTT加入96孔板中，20/孔，培養箱中培養4小時。
5.吸去上清液，加入DMSO，150/孔，平板搖床上振搖5分鐘。
6.用酶聯免疫檢測儀在波長570nm處測定每孔的吸光值，並計算細胞抑制率。
表1 抗腫瘤活性判斷標準
二、篩選結果表2 甘草素對癌細胞的抑制作用
表3 阿黴素對癌細胞的抑制作用
表4結果顯示，甘草素250μmol/L、500μmol/L對胃癌細胞的抑制分別為54.5％、58.1％。
表4 甘草素對胃癌細胞(SGC7901)的抑制作用(48h)
與DMSO比較*＜0.05，**＜0.01表5結果顯示，甘草素250μmol/L、500μmol/L對肝癌細胞生長抑制率分別為42.0％和89.9％。
本發明在經反覆體外抗腫瘤篩選實驗，發現甘草中提取的黃酮類單體化合物甘草素(liquiritigenin)，對SMMC7721肝癌細胞生長具有明顯的抑制作用，甘草素200μmol/L、300μmol/L、500μmol/L作用肝癌細胞48h，對肝癌細胞生長抑制率分別為23.5％、45.2％、84.0％，其抑制腫瘤的作用明顯高於甘草三萜類單體化合物甘草酸。
表5 甘草素對肝癌細胞(SMMC7721)的抑制作用(48h)
與DMSO比較*＜0.05，**＜0.01表6結果顯示，甘草素125μmol/L、250μmol/L對結腸癌細胞生長抑制率分別為57.6％和91.9％。
表6 甘草素對LOVO(結腸癌)細胞的抑制作用(48h)
與DMSO比較*＜0.05，**＜0.013.3、結論甘草素具有抑制人肝癌細胞(SMMC7721)、人肺癌細胞A549、人胃癌細胞(SGC7901)、人低分化胃腺癌細胞BGC-823、人結腸癌細胞(LOVO)、人早幼粒細胞白血病細胞HL-60生長的作用。
權利要求
1.甘草素在製備預防和治療治癌藥物中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其中所述的甘草素為二氫黃酮化合物。
3.根據權利要求1或2所述的應用，其中所述的治癌藥物用於治療和預防肺癌。
4.根據權利要求1或2所述的應用，其中所述的治癌藥物用於治療和預防肝癌。
5.根據權利要求1或2所述的應用，其中所述的治癌藥物用於治療和預防胃癌。
6.根據權利要求1或2所述的應用，其中所述的治癌藥物用於治療和預防結腸癌。
全文摘要
本發明涉及醫藥領域，具體地說，本發明涉及天然植物甘草中的活性物質甘草素在製備預防和治療治癌藥物中的應用。所述的治癌藥物用於治療和預防肺癌、肝癌、胃癌、結腸癌等多種癌症。
文檔編號A61P35/00GK101036638SQ20061003888
公開日2007年9月19日 申請日期2006年3月16日 優先權日2006年3月16日
發明者蔡雲清 申請人:南京醫科大學