一種幹細胞球切割收集裝置及幹細胞球的切割分離傳代方法與流程

2023-09-22 11:56:15 1

本發明屬於細胞培養技術領域，具體來說，涉及一種幹細胞球切割收集裝置及幹細胞球的切割分離傳代方法。

背景技術：
在培養神經幹細胞或神經前體細胞，腫瘤幹細胞，胚胎幹細胞時，常常出現幹細胞團塊或稱幹細胞球，在長期培養中傳代都使用胰蛋白酶或胰蛋白酶加EDTA的分離細胞球的方法分離傳代。由於長期使用這些酶的化學分離法對細胞膜受體產生不同程度的損傷，嚴重影響長期培養中幹細胞的壽命。神經系統疾病的發生和發展是由於神經細胞數量減少或功能改變造成的。通過移植神經幹細胞可治療相關神經退行性疾病。胚胎幹細胞不但在作用機制等研究領域中起到很重要的作用，而且在多種疾病防治中也有極其重要的作用。培養腫瘤幹細胞在研究腫瘤發生和防治中起到重要作用。所以一種快速簡便的、不損傷細胞的幹細胞球分離法十分重要。神經幹細胞是一種多能幹細胞，在相關細胞因子刺激下，可在體外增殖並形成特殊的球狀結構，此球狀結構被稱為神經球。神經球具有特殊的微環境，可保持球內幹細胞的存活和增殖，並賦予神經幹細胞向外胚層細胞(神經元和神經膠質細胞)分化的潛能。神經球的製備是神經幹細胞治療的關鍵步驟，它們的質量直接影響到神經幹細胞臨床的治療療效。目前常用的方法包括酶消化法或機械吹打法。酶消化法是利用單獨胰酶或胰酶與EDTA合用的方法消化神經球。研究顯示酶消化法可導致幹細胞發生突變，也存在操作時間長和細胞損傷大等缺點。機械吹打法採用滴管或移液管對組織進行反覆吹打，儘管操作時間短，但同樣對細胞損傷大。並且所得到的細胞團塊大小不均，導致部分神經球體積過大，影響神經幹細胞的存活、生長和分化。最近有人用鋒利刀片切割法，這種方法比以前的方法有大的改進，但是可以造成很多細胞碎片，這些碎片可能會影響幹細胞的正常生長發育。因此，建立一種簡便、快速、無誘發基因突變、對細胞損傷較小以及可製備大小均勻的神經球的製備方法，是目前亟待解決的問題。

技術實現要素：
本發明為解決神經幹細胞傳代過程導致的神經幹細胞易發生細胞凋亡、突變、細胞損傷、神經幹細胞分化以及操作時間長和神經球大小不均一等問題，提供一種幹細胞球切割收集裝置。本發明還提供利用上述裝置進行的具有簡便、快速、無誘發基因突變、對細胞損傷較小的幹細胞球的切割分離傳代方法。本發明解決其技術問題所採用的技術方案是：一種幹細胞球切割收集裝置，該裝置包括幹細胞球切割器、幹細胞球收集瓶和具有正壓和負壓雙向抽氣功能的抽氣泵，幹細胞球切割器和幹細胞球收集瓶之間由管路連接，該幹細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網。作為優選，所述的篩網為不鏽鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350±40μm和104±20μm，孔徑較大的篩網靠近幹細胞球收集瓶。作為優選，兩個篩網之間的距離為20mm。進一步的，兩個篩網的孔徑分別為350±10μm和104±5μm，孔徑的大小控制對幹細胞球的切割具有重要意義。作為優選，該裝置還包括空氣緩衝瓶、三通管、培養瓶和切割後小幹細胞球收集瓶，抽氣泵與空氣緩衝瓶通過管路連接，空氣緩衝瓶與幹細胞球收集瓶通過管路連接，培養瓶和幹細胞球收集瓶通過管路分別與三通管的兩個接口相連，三通管的第三個接口與幹細胞球切割器連接。該結構用於幹細胞的大規模培養。作為優選，幹細胞球切割器的出口端設有一個縮口的連接管。一種幹細胞球切割收集裝置，該裝置包括注射器和與注射器相連的幹細胞球切割器，該幹細胞球切割器具有一管體，管體內固定兩個間隔設置的篩網。所述的篩網為不鏽鋼篩網，兩個篩網的孔徑分別為350±40μm和104±20μm，孔徑較大的篩網靠近幹細胞球收集瓶。一種幹細胞球的切割分離傳代方法，該方法包括如下步驟：a.採用所述的幹細胞球切割收集裝置對幹細胞球進行切割分離：將含有幹細胞的培養液吸入幹細胞球收集瓶後，利用流體壓力使幹細胞球經細胞球...