一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及產品的應用的製作方法

2023-09-27 08:23:40

專利名稱：一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及產品的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，更具體地說，特別是涉及一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及產品的應用。
背景技術：
隨著社會的發展和經濟的繁榮以及人類健康觀念的改變，回歸自然、天人合一的觀念越來越受到推崇，「餐桌安全」受到了極大的關注，人們對飲食安全的要求也愈來愈高。 在禽疾病中，病毒感染對禽養殖業造成的損失是具大的。雞傳染性法氏囊病、雞新城疫病、 雞傳染性支氣管炎是危害養禽業的三大主要疫病，在一些養雞比較密集地區，已取代非典型性雞新城疫而居傳染病發病率的首位，不分品種，蛋雞、肉雞、肉雜雞；不管免疫與否，均有可能發病，這些病引起雛雞的免疫抑制，使病雞對大腸桿菌、腺病毒、沙門氏菌、雞球蟲等病原體更易感，對馬立克疫苗、雞傳染性法氏囊病疫苗等接種的反應能力下降，因此該病對養雞業造成了巨大的危害。在預防禽感染性疾病時，多採用抗生素，但抗生素的濫用給禽產品的食用帶來了極大的飲食隱患，藥物殘留已經成為影響禽產品安全的主要因素之一。如何找到一種對病毒病原體有直接殺滅或抑制作用，同時通過調節禽的機體內在的抗病原體機制(如免疫系統、補體系統等)來達到抑殺病毒的作用是亟待解決的一個問題。植物血球凝集素(PHA)是一種有效分裂原，主要用於激活淋巴細胞，是一種天然的幹擾誘導劑。本品能激活小淋巴細胞轉化為淋巴母細胞，繼而分裂增殖、釋放淋巴因子、 並能提高巨噬細胞的吞噬功能，促進骨髓造血和促使白細胞數量上升，對受病毒侵襲的細胞有殺傷作用，並具有誘生幹擾素、白細胞介素的作用。PHA能提高動物免疫器官重量並有對抗環磷醯胺對免疫抑制劑的作用。總之PHA是自然界中天然免疫增強劑，PHA的每一種功能都與強化機體免疫力有關。某些植物的種子含有天然植物凝集素，如豆類、蓖麻子、槲寄生與歐商陸等等，均為大分子蛋白質類物質。一些豆類的提取物如美洲菜豆提取物、芸豆提取物和鷹嘴豆提取物等含有豐富的植物凝集素，可以作為提高人類免疫力和預防感冒的保健產品。紅腎豆又叫大紅公雞豆、雞子豆、紅芸豆、紅扁豆等，是PHA含量最高的農作物，生的紅腎豆含含量高達20000 0000凝集素單位，煮熟後仍有200 00單位。白腎豆中PHA 含量相對較低。紅腎豆在中國各地均有栽培，主產區為雲南、貴州、陝西、河北、黑龍江、山西、吉林及臺灣等省，每公頃產量為1100-1500kg。菜豆宜種植於有機質豐富、土層深厚、排水良好的壤土。pH值以6. 0-7.0為佳。籽粒含蛋白質17-23%，脂肪1. 3-2. 6%，碳水化合物56-61 %，還含有鈣、磷、鐵及各種維生素。籽粒用作主食，幹籽粒含有PHA具有醫用價值。常規製備PHA的工藝是1.提取取青豌豆、芸豆等100克，用0. 15M氯化鈉浸泡過夜，經膨脹後用組織搗碎機搗碎，倒入布袋中壓榨出水提液；2.蛋白質沉澱邊攪邊向水提液中加入固體硫酸銨達80%飽和過夜。棄上清液，沉澱再用二層濾紙抽氣過濾至幹，即得粗製青豌豆素蛋白沉澱物硫酸銨糊。3.親和層析分離稱硫酸銨糊0. 3克溶於:3ml IM氯化鈉中，離心3000rRnl0分鐘，取上層懸液上kphadex G25層析柱，用IM NaCl洗脫收集每管3. 5!111，在^Onm紫外光上比色檢測，直至吸光值下降到接近零為止。此洗脫峰為植物血凝素峰。4.透析除鹽後乾燥。目前市場上使用的PHA都是精製純化的，成本較高，不適合在養殖業中推廣使用。因此，提供一種成本較低、效果好的紅腎豆提取物的製備方法，是該技術領域科研人員急需開發的新課題之一。

發明內容
本發明的目的是提供一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及其產品的應用，克服現有技術中的不足，。為實現上述目的本發明所述製備方法採用的技術方案如下(1)選紅腎豆10g，用蒸餾水衝洗後用濃度為75%的酒精浸泡5-20分鐘，倒掉酒精，放置37 °C恆溫箱內12-48小時；(2)在無菌條件下用無菌生理鹽水或蒸餾水漂洗二次，加入含0.01-0. 2%的 β-巰基乙醇的生理鹽水10ml，研碎紅腎豆；(3)加生理鹽水30-100ml浸泡過夜，無菌條件下移入離心管內，3000-4000rpm離心30分鐘；(4)棄沉澱，取上清液。向上清液中加入固體硫酸銨達50-80%，放置過夜；(5) 3000-4000rpm離心30分鐘，棄上清液，在沉澱物中加入蒸餾水50ml後，用活性炭進行脫色；(6)經過濾除菌，分裝後置冰箱中保存；(7)乾燥將紅腎豆提取物真空乾燥或冷凍乾燥；(8)所述步驟(3)中生理鹽水中β -巰基乙醇含量為0. 05% ；(9)所述步驟中向上清液中加入固體硫酸銨達90%飽和度；(10)所述步驟(5)中脫色工藝條件為活性炭用量1.5%，脫色溫度40°C，pH值 4. 5，脫色時間60min。所述的紅腎豆提取物應用於製備防治禽病毒性疾病的藥物中，使用劑量為0. 5 5mg/Kg體重，每日1-2次，應用方法是注射或口服。本發明涉及的各項成分均為市售品，其規格是食品級。紅腎豆提取物主要對治療禽病毒性疾病的預防和治療具有顯著的優勢。研究證實紅腎豆提取物對人工感染雞馬立克病毒的雞模型和雞傳染性支氣管炎發病雞亦有顯著治療作用。可見，紅腎豆提取物是治療禽病毒性疾病的天然藥物。紅腎豆提取物是一種綠色天然、無殘留危害，符合綠色健康的理念的天然藥物。它既對病原體有直接殺滅或抑制作用，同時通過調節動物機體內在的抗病原體機制(如免疫系統、補體系統等)來達到抑殺病毒作用。紅腎豆提取物含有大量的PHA，PHA對受病毒侵襲的細胞有殺傷作用，並具有誘生幹擾素、白細胞介素的作用，提高動物免疫力，預防動物病毒病發生和傳播。紅腎豆提取物能提高免疫細胞的活性，促進幹擾素的合成，誘導細胞內產生抗病毒蛋白，達到殺傷動物病毒的作用。臨床研究證實紅腎豆提取物對禽病毒性疾病有良好的治療效果，尤其能解除病毒感染引起的臨床症狀、降低病禽的死亡率，促進病禽恢復採食，一般5 7天痊癒，療效顯著。本發明的製備工藝簡單、提取率高、成本低。本發明有益效果是(1)為臨床開發出一種防治禽類病毒性疾病的新藥物。(2)工藝簡單、成本低。( 製劑穩定，貯存期長。(4)藥物來源廣泛，天然綠色環保，無毒副作用。 特別用於治療禽類雞馬立克病毒病、非典型新城疫病、傳染性支氣管炎病等效果顯著。
具體實施例方式以下結合實施例，對依據本發明提供的具體實施方式
詳述如下實施例1一種紅腎豆提取物的製備方法，具體實施步驟如下(1)選紅腎豆100g，用蒸餾水衝洗後用75%酒精浸泡10分鐘，倒掉酒精，放置 37 °C恆溫箱內24小時；(2)在無菌條件下用無菌生理鹽水漂洗二次，加入含0. 的β -巰基乙醇的生理鹽水100ml，研碎紅腎豆；(3)加生理鹽水400ml浸泡過夜，3000-4000rpm離心30分鐘；(4)向上清液中加入固體硫酸銨達80%飽和度，放置過夜；(5) 3000-4000rpm離心30分鐘，棄上清液，在沉澱物中加入蒸餾水IOOml後，用活性炭進行脫色；(6)經過濾除菌，真空乾燥。實施例2—種紅腎豆提取物的製備方法，具體實施步驟如下(1)選紅腎豆50g，用75%酒精浸泡15分鐘，倒掉酒精，室溫放置16小時；(2)用無菌生理鹽水漂洗二次，加入含0. 05%的β -巰基乙醇的生理鹽水100ml， 組織搗碎機研碎紅腎豆；(3)加生理鹽水250ml浸泡過夜，3000-4000rpm離心30分鐘；(4)向上清液中加入固體硫酸銨達60%飽和度，放置M小時；(5)3000-4000rpm離心30分鐘，在沉澱物中加入PBS 80ml後，用活性炭進行脫色；(6)經過濾除菌，分裝後置冰箱中保存。(7)乾燥將紅腎豆提取物冷凍乾燥。實用例1紅腎豆提取物對雞馬立克病的治療作用在人工致病病毒模型中治療試驗將M只SPF雞用人工感染雞馬立克病毒的方法使雛雞發生雞馬立克，同時隨機分成為3組，每組18隻。A組為「紅腎豆提取物」治療組， 紅腎豆提取物的質量百分含量為30% ；B組為黃芪多糖治療組，黃芪多糖的質量百分含量為30%;C組為對照組，用生理鹽水治療，對3組雞同時用雞馬立克病毒染毒，每隻雞用雞馬立克病毒強毒滴鼻0. anl，待出現臨床症狀後，給A組雞注射「紅腎豆提取物」(使用劑量為 0. 5/Kg體重)，每天一次，B組雞注射芪多糖(使用劑量為0. 5/Kg體重)，每天一次，C組雞注射生理鹽水0. 3ml/只，每天一次，連用2-3天，然後觀察雞的發病死亡及病理變化，並詳細記錄。人工致病治療效果染毒24h後，試驗雞開始出現臨床症狀精神不振，呆立不動，羽毛蓬亂，飲食減少或廢絕。用藥後，A組和B組雞從第2d病情開始好轉，第3d、4d有死亡雞隻出現，5d後存活的雞隻基本康復，C組在出現症狀第2天後病情惡化，開始出現死亡，第3-5d達到死亡高峰， 未死亡雞第6d後自愈。紅腎豆提取物治療組與對照組差異極顯著(P <0.01)，說明「紅腎豆提取物」對雞馬立克有一定的治療作用。表1三組治療結果比較(例，％)
權利要求
1.一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法，其特徵在於實施步驟如下(1)選紅腎豆10g，用蒸餾水衝洗後用濃度為75%的酒精浸泡5-20分鐘，倒掉酒精，放置37 °C恆溫箱內12-48小時；(2)用無菌生理鹽水或蒸餾水漂洗二次，加入含0.01-0.2%的β-巰基乙醇的生理鹽水10ml，研碎紅腎豆；(3)加生理鹽水30-100ml浸泡過夜，移入離心管內，3000-4000rpm離心30分鐘；(4)棄沉澱，取上清液。向上清液中加入固體硫酸銨達50-90%飽和度，放置過夜；(5)3000-4000rpm離心30分鐘，棄上清液，在沉澱物中加入蒸餾水50ml後，用活性炭進行脫色；(6)經過濾除菌，分裝後置冰箱中保存；(7)乾燥將紅腎豆提取物真空乾燥或冷凍乾燥；(8)所述步驟(3)中生理鹽水中β-巰基乙醇含量為0.05%；(9)所述步驟中向上清液中加入固體硫酸銨飽和度為80%；(10)所述步驟(5)中脫色工藝條件為活性炭用量1.5%、脫色溫度40°C、pH值4.5、脫色時間60min ；
2.一種通過權利要求1所述防治禽病毒性疾病藥物的製備方法所得產品的應用，其特徵是紅腎豆提取物適用於防治禽病毒性疾病，使用劑量為0. 5 5mg/Kg體重，每日1-2次， 應用方法是注射或口服。
全文摘要
一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及其產品的應用，涉及醫藥領域，更具體地說，特別是涉及一種防治禽病毒性疾病藥物的製備方法及產品的應用。本發明的製備方法包括以下步驟用75％酒精浸泡紅腎豆，加入含β-巰基乙醇的生理鹽水提取，研碎紅腎豆；加生理鹽水浸泡過夜，離心後向上清液中加入固體硫酸銨進行沉澱；在沉澱物中加入蒸餾水溶解，脫色、過濾除菌、乾燥即得。本發明的紅腎豆提取物應用於防治禽病毒性疾病，不但具有抗病毒作用，而且起到免疫調節作用，療效確切，無毒副作用。本發明特別用於治療雞馬立克病毒病、非典型新城疫病、傳染性支氣管炎病等效果顯著。
文檔編號A61K36/48GK102151295SQ20091030363
公開日2011年8月17日 申請日期2009年6月25日 優先權日2009年6月25日
發明者王麗莉, 王文彪 申請人:天津艾森生物工程有限公司