人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的製作方法
2023-10-05 16:21:04 2
專利名稱：人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒技術領域[0001]本實用新型涉及生物應用技術領域，特別是一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。
背景技術：
[0002]人類免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus,HIV),顧名思義它會造成人類免疫系統的缺陷。1981年，人類免疫缺陷病毒在美國首次發現。它是一種感染人類免疫系統細胞的慢病毒(Lentivirus)，屬反轉錄病毒的一種。至今無有效療法的致命性傳染病。該病毒破壞人體的免疫能力，導致免疫系統失去抵抗力，從而各種疾病及癌症得以在人體內生存，發展到最後，導致愛滋病(獲得性免疫缺陷綜合症)。[0003]自美國1981年診斷出首例愛滋病患者以來，至2009年全球新增愛滋病感染者260萬人，180萬人死於愛滋病，截止到2009年底，全球共有愛滋病感染者3330萬人。截至2010年10月底，中國累計報告愛滋病病毒感染者和病人37萬餘例，其中死亡6.8萬餘例。局部地區和特定人群疫情嚴重，雲南、廣西、河南、四川、新疆和廣東6省區累計報告感染者和病人數佔全國77.1%[0004]人類免疫缺陷病毒有I型和II型，即HIV-1和HIV-2兩種類型，其生物學特徵很相似，HIV-1是引起全球愛滋病流行的病原，HIV-2是後來在西非發現的，最初只在西非流行，現已擴散到世界很多地區。由於HIV的易變性，目前控制HIV傳播最有效的手段就是儘早發現病毒攜帶者，儘早隔絕傳染源。[0005]現有檢測HIV的方法有聚合酶鏈式反應、HIV抗體檢測和P24抗原檢測。HIV抗體檢測最常用的試劑為酶聯免疫試劑盒免疫層析類試劑，一般靈敏度和特異性都很高，最短在HIV感染後十餘天即可檢測出來。但由於部分HIV感染在5-8個月才開始出現抗體，世界衛生組織將HIV感染的窗口期定為6個月。HIV在窗口期內已經具有傳染性，為了進一步減少窗口期傳染情況的發生，目前已出現可同時檢測HIV抗體和抗原的方法，能較HIV感染後抗體轉陽前4-7天檢測出HIV感染。HIV感染後最早出現的是P24抗原，然後才出現相應的特異性HIV抗體，隨抗體滴度的升高P24逐漸下降至檢測不出。在病情發展後期P24抗原在血液中又可檢測出。發明內容[0006]本實用新型的目的是為了解決上述問題，設計了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒。[0007]實現上述目的本實用新型的技術方案為，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結構為底板上粘貼上樣墊、標記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線、2號檢測線和3號檢測線及質控線。[0008]所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。[0009]所述2號檢測線是由HIV gp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。[0010]所述3號檢測線是由HIV P24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。[0011]所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。[0012]所述標記物墊上標記有HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成的。[0013]利用本實用新型的技術方案製作的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，進一步縮短了檢測窗口期，提高檢測靈敏度和特異性，操作簡單、省時、判斷直觀，適用於血清、血漿、全血樣本中HIV病毒抗體和P24抗原的快速檢測。
[0014]圖1是本實用新型所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結構示意圖；[0015]圖2是本實用新型所述HIV試紙條的結構示意圖；[0016]圖中，1、加樣孔；2、檢測窗；3、塑卡；4、底板；5、上樣墊；6、標記物墊；7、硝酸纖維膜；8、吸水紙；9、1號檢測線；10、2號檢測線；11、3號檢測線；12、質控線。
具體實施方式
[0017]
以下結合附圖對本實用新型進行具體描述，圖1是本實用新型所述人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒的結構示意圖，圖2是本實用新型所述HIV試紙條的結構示意圖，如圖1所示，一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔I和檢測窗2的塑卡3，塑卡內插裝HIV試紙條；如圖2所示，所述HIV試紙條結構為底板4上粘貼上樣墊5、標記物墊6、硝酸纖維膜7和吸水紙8，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線9、2號檢測線10、3號檢測線11和質控線12。其中，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的；所述2號檢測線是由HIVgp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的；所述3號檢測線是由HIVP24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的；所述標記物墊是由無紡布上標記HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成的。[0018]標記物墊的製備:用氯金酸-檸檬酸三鈉還原法製備直徑為40nm的膠體金溶液，製備完成後取IOOml膠體金溶液，用0.2MK2C03將溶液pH調到pH9.0,然後將溶液置於磁力攪拌器上緩慢攪拌，按每IOOml溶液加入0.5mg、l.0mg、l.5mg重組抗原或抗體緩慢滴加到膠體金溶液中，繼續攪拌I小、時，再加入終濃度為0.2% BSA,0.1%聚乙二醇20000進行封閉30分鐘，12000轉離心30分鐘，棄上清，用膠體金工作液復溶至76.5ml，按Iml溶液鋪16cm2的比例均勻地鋪在無紡布上，再置於溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥間乾燥2 4小時，製成標記物墊。[0019]HIVgp41抗原和HIVgp 120抗原、HIVgp36抗原和P24抗體的包被:用0.0lMpH9.0CBS 將 HIVgp41 抗原、HIVgpl20 抗原、HIVgp36 抗原分別稀釋成 0.5mg/ml、l.0mg/ml、1.5mg/ml，然後將稀釋後的HIVgp41抗原和HIVgpl20抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成I號檢測線；將稀釋後的HIVgp36抗原包被液用噴膜儀在硝酸纖維膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成2號檢測線；用0.0lM pH7.2PBS將HIVP24抗體分別稀釋成1.0mg/ml> 1.5mg/ml、2.0mg/ml,然後用噴膜儀將包被液在NC膜上按1.0ul/cm劃線包被，構成3號檢測線，最後包被羊抗鼠IgG抗體在硝酸纖維膜上作為質控線，包被完成後將硝酸纖維膜置於乾燥間乾燥3 4小時。[0020]HIV試紙條的裝配:在溫度20 25°C、溼度小於30%的乾燥室內，取底板，將已包被的硝酸纖維膜放置在底板的中部粘貼，在硝酸纖維膜I號檢測線一側搭接標記物墊，在標記物墊另一側搭接粘貼上樣墊，在硝酸纖維膜質控線一側距邊緣搭接吸樣墊；然後用裁剪機將貼好的底板切成適當寬度的試紙條。[0021]本實用新型在實際檢測時，首先撕開鋁箔袋取出試劑卡平放，取2-3滴樣本滴加至加樣孔中，靜止20-30分鐘觀察結果。若出現兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為I號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-1型抗體；若也出現兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為2號檢測線時，說明待檢樣本中含有HIV-2型抗體；若出現兩條紅線，其中一條為質控線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中含有P24抗原；若出現三條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，另一條為2號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有HIV-2抗體；若出現三條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有P24抗原；若出現三條紅線，即一條為質控線，一條為2號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-2抗體又有P24抗原；若出現四條紅線，即一條為質控線，一條為I號檢測線，一條為2號檢測線，另一條為3號檢測線時，說明待檢樣本中既含有HIV-1抗體又有含有HIV-2抗體和P24抗原；若只出現一條紅色質控線，說明檢樣本無HIV抗體和P24抗原。若無紅色質控線出現。說明實驗無效。本技術領域的技術人員對其中某些部分所可能做出的一些變動均體現了本實用新型的原理，屬於本實用新型的保護範圍之內。[0022]上述技術方案僅體現了本實用新型技術方案的優選技術方案，現了本實用新型的原理，屬於本實用新型的保護範圍之內。
權利要求1.一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔(I)和檢測窗(2)的塑卡(3)，其特徵在於，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條的結構為底板(4)上粘貼上樣墊(5)、標記物墊￠)、硝酸纖維膜(7)和吸水紙(8)，且標記物墊和吸水紙分別搭接在硝酸纖維素膜的兩端，上樣墊搭接在標記物墊的另一端上，同時硝酸纖維膜上包被有I號檢測線(9)、2號檢測線(10)、3號檢測線(11)和質控線(12)。
2.根據權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特徵在於，所述I號檢測線是由HIVgp41抗原和gpl20抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。
3.根據權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特徵在於，所述2號檢測線是由HIVgp36型抗原包被在硝酸纖維膜上構成的。
4.根據權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特徵在於，所述3號檢測線是由HIV P24抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。
5.根據權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特徵在於，所述質控線是由羊抗鼠IgG抗體包被在硝酸纖維膜上構成的。
6.根據權利要求1所述的人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，其特徵在於，所述標記物墊是由無紡布上標記HIVgp41抗原、HIVgpl20抗原和HIVgp36抗原以及P24抗體構成 的。
專利摘要本實用新型公開了一種人類免疫缺陷病毒抗體和抗原檢測試劑盒，包括設有加樣孔和檢測窗的塑卡，塑卡內插裝HIV試紙條，且所述HIV試紙條結構為底板上粘貼上樣墊、標記物墊、硝酸纖維膜和吸水紙，同時硝酸纖維膜上包被有1號檢測線、2號檢測線、3號檢測線和質控線。本實用新型的有益效果是，可同時檢測並分型HIV病毒抗體I型或II型，同時檢測出P24抗原，進一步縮短了檢測窗口期，提高了檢測靈敏度和特異性。
文檔編號G01N33/569GK202975019SQ20122035281
公開日2013年6月5日 申請日期2012年7月20日 優先權日2012年7月20日
發明者李洲, 許俊豔 申請人:天津中新科炬生物製藥有限公司