香豆素衍生物及其製法的製作方法

2023-10-06 06:32:04

本發明屬於生物醫藥領域，特別是本發明涉及新型具有抗炎活性的7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯氨基醯-2-氨基甲基嘧啶(9a-g)的製備方法及其應用。

背景技術：

炎症是一種保護性的防禦反應，也是導致許多重要的人類疾病的共同通路，並參與人體感染、腫瘤、心腦血管疾病、阿爾茨海默氏病和神經系統疾病、過敏性疾病、精神病等其他重要疾病的發生和發展過程。在臨床上，抗炎藥物排在常用藥物第二位，僅次於抗感染藥，典型的反應是紅、腫、熱、痛以及功能障礙等。

非甾體類抗炎藥(NSAIDS)和選擇性環加氧酶-2(COX-2)抑制劑是用於治療急性或慢性炎症疾病的傳統藥物，但是研究發現NSAIDS可誘發嚴重的胃腸道不良反應，包括胃腸道出血和誘發潰瘍，而選擇性COX-2抑制劑可增加患者出現心肌梗死，心臟猝死和腦卒中的風險。因此，開發新的高效、低毒、的抗炎藥物一直是新藥研究的重要課題之一，而環氧合酶和脂氧合酶COX/5-LOX雙重抑制劑更是研究的重點。

香豆素(Coumarin)是一類具有苯並α吡喃酮母核的天然產物，廣泛存在於植物界，同時也是COX/5-LOX雙重抑制劑。文獻中曾公開報導過香豆素在10μmol/kg劑量下顯示良好的抗炎活性。

技術實現要素：

本發明披露一種通式(I)的化合物：

其中在通式(I)中AA選自Ala，Leu，Val，Met，Phe，Tyr或者Asp(OBzl)。

本發明得到的香豆素衍生物分別是：

9a：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9b：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯亮氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9c：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯纈氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9d：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯蛋氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9e：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯苯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9f：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯酪氨醯-2-氨基甲基嘧啶

9g：7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯天冬氨醯苄酯-2-氨基甲基嘧啶

本發明還涉及通式(I)的製備方法，該方法包括以下步驟：

將2，4-二羥基苯甲醛在哌啶催化下與丙二酸二乙酯縮合生成7-羥基香豆素-3-羧酸乙酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-羧酸乙酯在濃鹽酸作用下生成7-羥基香豆素-3-羧酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-羧酸與β-胺基酸-OBzl偶聯得到7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸苄酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸苄酯在鈀碳的催化下氫解生成7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸與L-胺基酸苄酯偶聯得到7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯胺基酸苄酯，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯胺基酸苄酯在鈀碳的催化下氫解生成7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯胺基酸，

得到的所述7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯胺基酸與2-氨基甲基嘧啶偶聯得到7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯氨基醯-2-氨基甲基嘧啶，

將叔丁氧醯胺基酸與2-氨基甲基嘧啶偶聯得到叔丁氧醯氨醯-2-氨基甲基嘧啶，

得到的所述叔丁氧醯氨醯-2-氨基甲基嘧啶在HCl/EtOAc(4N)溶液中生成N-氨醯-2-氨基甲基嘧啶，

將N-氨醯-2-氨基甲基嘧啶與7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸偶聯得到7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯氨基醯-2-氨基甲基嘧啶。

本發明還進一步涉及運用二甲苯誘導的小鼠耳朵腫脹模型評價它們的抗炎作用。因而本發明公開了新型2-氨基甲基嘧啶和胺基酸修飾的7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙酸作為抗炎藥物的臨床應用前景。

通過本發明的進一步研究，本發明人認識到，以7-香豆素作為先導化合物，以β-氨基丙酸修飾後的7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨酸為母核，以胺基酸為連接臂，與另一個具有較強抗炎活性的COX-2抑制劑2-氨基甲基嘧啶拼合在一起，不僅可以減少臨床上現有化合物的毒副作用，同時可以改善先導化合物香豆素以及2-氨基甲基嘧啶在有機溶劑和水溶液中溶解性不好的缺點，提高了化合物的生物利用度，極大地降低化合物的口服劑量，增強化合物的的抗炎活性。通過這種修飾，獲得具有更好抗炎活性的化合物，具有良好的臨床應用前景。

附圖說明

圖1表示7-香豆素-3-甲醯-β-丙酸的合成路線，其中，i)哌啶，乙二酸二乙酯；ii)濃鹽酸，H2O；iii)β-氨基丙酸-OBzl，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)1-羥基苯並三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF；iv)5％Pd，H2，甲醇。

圖2表示通式(I)香豆素衍生物(9a-g)的合成路線，其中，v)Boc-AA-OH，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，1-羥基苯並三唑 (HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF；vi)4N HCl/EtOAc；vii)1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)，1-羥基苯並三唑(HOBt)，N-甲基嗎啉(NMM)，THF。

具體實施方式

為了進一步闡述本發明，下面給出一系列實施例。這些實施例完全是例證性的，它們僅用來對本發明進行具體描述，不應當理解為對本發明的限制。

實施例1製備7-羥基香豆素-3-甲酸乙酯(2)

在90℃溫度下，稱取2，4-二羥基苯甲醛(0.500g，3.60mmol)和量取丙二酸二乙酯(0.70ml，4.00mmol)置於100ml茄瓶中，溶解在95％乙醇(20ml)中，此時溶液顏色為紅棕色透明液體；再加入哌啶(0.40ml，4.00mmol)，溶液表面泛綠色光，開始回流，反應約6h後，溶液變為深棕色。冷卻至室溫，減壓濃縮至紅色粘稠狀，乙醇重結晶，過濾得到化合物3(0.758g，3.24mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為90％。ESI-MS m/z 233(M-1)。

實施例2製備7-羥基香豆素-3-羧酸(3)

在90℃溫度下，稱取化合物3(2.00g，8.55mmol)溶解在水(20ml)中，加入濃鹽酸(6ml)後，回流8h。將反應液冷卻至室溫，過濾，水洗，得到化合物4(1.32g，6.41mmol)，性狀為淡紅色固體，產率為75％。ESI-MS m/z 205(M-1)。

實施例3製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙酸苄酯(4)

稱取3(1.00g，4.85mmol)置於100ml茄瓶中，冰浴冷卻條件下加入四氫呋喃(30ml)，依次加入N-羥基苯並三唑(HOBt)(0.720g，5.33mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(1.02g，5.33mmol)，反應30分鐘。加入用四氫呋喃(20ml)溶解的化合物Tos·β-氨基丙酸-OBzl(1.87g，5.33mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.60ml)調pH值至8。反應全程進行TLC檢測，約8小時反應完全。過濾，減壓濃縮至幹，加入乙酸乙酯(100ml)使殘餘物溶解，將溶液加入到250ml的分液漏鬥中，依次使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)、5％硫酸氫鉀水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(50mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(50mL×3)，將得到的三種水溶液再使用乙酸乙酯分別進行反萃取，合併各次的乙酸乙酯層，加入無水Na2SO4乾燥約30分鐘，過濾，將濾液減壓濃縮至幹，使用矽膠柱層析對殘餘物進行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝50∶1)，得到中 間體化合物4(1.07g，2.93mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為55％。ESI-MS m/z 364(M-1)。

實施例4製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙酸(5)

在50ml茄瓶中加入4(1.29g，3.29mmol)，加入甲醇(20ml)溶解，再加入Pd/C(5％)(65mg)，抽真空後通入H2進行室溫下反應過夜，經TLC板監測，反應完全。過濾，減壓濃縮至幹，得到化合物5(620mg，2.24mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為68％。ESI-MS m/z 276(M-1)。

實施例5製備叔丁氧醯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7a)

稱取Boc-A-OH(300mg，3.03mmol)置於100ml茄瓶中，加入四氫呋喃(40ml)溶解，冰浴下依次加入N-羥基苯並三唑(HOBt)(405g，3.03mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(573mg，3.03mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.50ml)調節PH為8，反應30分鐘。稱取2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(401mg，2.50mmol)置於小燒杯中，加入四氫呋喃(10ml)溶解，同時滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.20ml)調節PH為8。將小燒杯中的溶液加入茄瓶中，室溫反應，經TLC監測反應，約10小時反應完全。將反應液減壓濃縮至幹，加入50ml乙酸乙酯進行萃取，依次使用飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)、5％硫酸氫鉀水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和碳酸氫鈉水溶液洗(30mL×3)、飽和氯化鈉水溶液洗(30mL×3)，將得到的三種水溶液再使用乙酸乙酯反萃取，合併各次的乙酸乙酯層，加入無水Na2SO4乾燥約30分鐘，過濾，將濾液減壓濃縮至幹，使用矽膠柱層析對殘餘物進行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝40∶1)，得到化合物7a(560mg，2.00mmol)，性狀為無色油狀物，產率為＝72％。ESI-MS m/z 281(M+1)。

實施例6製備叔丁氧醯亮氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7b)

按照實施例5的操作，將Boc-L-OH(500mg，2.16mmol)，HOBt(292mg，2.16mmol)和EDC·HCl(413g，2.16mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(287mg，1.97mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7b(460mg，1.43mmol)，性狀為無色油狀物，產率為70％。ESI-MS m/z 323(M+1)。

實施例7製備叔丁氧醯纈氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7c)

按照實施例5的操作，將Boc-V-OH(500mg，2.30mmol)，HOBt(311mg，2.30mmol)和EDC·HCl(440mg，2.30mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(305mg，2.09 mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7c(487mg，1.58mmol)，性狀為無色油狀物，產率為75％。ESI-MS m/z 309(M+1)。

實施例8製備叔丁氧醯蛋氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7d)

按照實施例5的操作，將Boc-M-OH(500mg，2.01mmol)，HOBt(270mg，2.00mmol)和EDC·HCl(382mg，2.00mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(266mg，1.83mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7d(440mg，1.29mmol)，性狀為無色油狀物，產率為70％。ESI-MS m/z 341(M+1)。

實施例9製備叔丁氧醯苯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7e)

按照實施例5的操作，將Boc-F-OH(500mg，1.89mmol)，HOBt(255mg，1.88mmol)和EDC·HCl(360mg，1.88mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(250mg，1.72mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7e(320mg，0.90mmol)，性狀為無色油狀物，產率為52％。ESI-MS m/z 357(M+1)。

實施例10製備叔丁氧醯酪氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7f)

按照實施例5的操作，將Boc-Y-OH(500mg，1.78mmol)，HOBt(240mg，1.78mmol)和EDC·HCl(340mg，1.78mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(236mg，1.62mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7f(379mg，1.02mmol)，性狀為無色油狀物，產率為62％。ESI-MS m/z 373(M+1)。

實施例11製備叔丁氧醯苄酯天冬氨醯-2-氨基甲基嘧啶(7g)

按照實施例5的操作，將Boc-D(OBzl)-OH(500mg，1.55mmol)，HOBt(209mg，1.55mmol)和EDC·HCl(296mg，1.55mmol)和2-氨基甲基嘧啶鹽酸鹽(205mg，1.41mmol)在無水THF(50ml)縮合得到7g(380mg，0.92mmol)，性狀為無色油狀物，產率為65％。ESI-MS m/z 415(M+1)。

實施例12製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9a)

在100ml茄瓶中加入7a(742mg，2.65mmol)，加入4N HCl/EA(30ml)，冰浴下反應，TLC監測，反應約3小時完全。減壓抽乾溶劑，得到化合物8a(286mg，1.59mmol)，將其溶解於四氫呋喃(40ml)中，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.30ml)調節PH為8。稱取5(400mg，1.44mmol)溶解於四氫呋喃(30ml)中，冰浴下依次加入N-羥基苯並三唑(HOBt)(215mg，1.59mmol)，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC·HCl)(303mg，1.59mmol)，滴加N-甲基嗎啉(NMM)(0.30ml)調節PH為8，反應30分鐘。將小燒杯中的溶液加入茄瓶中，室溫反應，經 TLC監測反應，約8h反應完全。將反應液減壓濃縮至幹，使用矽膠柱層析對殘餘物進行分離純化(二氯甲烷∶甲醇＝20∶1)，得到目標化合物9a(334mg，0.76mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝53％。Mp 252.6-254.4℃；[α]D25＝-12.1(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3287，2875，1700，1633，1567，1526，1439，1410，1365，1317，1216，1138，795，639cm-1；ESI-MS(m/e)438[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.05(s，1H，O-H)，8.81(t，J＝6.0Hz，1H，N-H)，8.78(s，1H，CH)，8.73(d，J＝5.1Hz，2H，CH，CH)，8.35(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.19(d，J＝7.8Hz，1H，N-H)，7.80(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.35(t，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.60(d，J＝5.7Hz，2H，CH2)，4.41(m，1H，CH)，3.56-3.49(m，2H，CH2)，2.43(t，J＝6.6Hz，2H，CH2)，1.24(d，J＝6.9Hz，3H，CH3)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 172.81，170.80，167.13，164.07，161.89，161.34，157.75(2C)，156.71，148.50，132.44，120.21，114.76，113.99，111.55，102.23，48.48，45.20，35.97，35.30，18.73。

實施例13製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯亮氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9b)

按照實施例12的操作，7b(708mg，2.20mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8b(292mg，1.32mmol)，與HOBt(195mg，1.45mmol)，EDC·HCl(276mg，1.45mmol)和5(400mg，1.44mmol)縮合得到9b(221mg，0.46mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝35％。Mp 215.3-216.8℃；[α]D25＝-24.4(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3296，2959，1700，1635，1566，1530，1437，1416，1366，1321，1214，1144，794，637cm-1；ESI-MS(m/e)480[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.09(s，1H，O-H)，8.80(m，2H，N-H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.38(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.13(d，J＝8.4Hz，1H，N-H)，7.82(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.35(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.42(m，3H，CH2，CH)，3.53(m，2H，CH2)，2.42(m，2H，CH2)，1.64-1.39(m，3H，CH2，CH)，0.82(t，J＝6.0Hz，6H，CH3，CH3)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 172.61，170.93，167.16，164.14，161.88，161.33，157.71(2C)，156.73，148.48，132.43，120.19，114.80，113.95，111.57，102.24，51.33，45.27，41.35，36.08，35.40，24.65，23.49，21.98。

實施例14製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯纈氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9c)

按照實施例12的操作，7c(611mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8c(248mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9c(243mg，0.52mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝48％。Mp 249.6-251.3℃；[α]D25＝-10.2(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3290，2968，1702，1636，1568，1527，1453，1370，1218，1142，794，639cm-1；ESI-MS(m/e)466[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.07(s，1H，O-H)，8.83(t，J＝ 5.7Hz，1H，N-H)，8.79(s，1H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.46(t，J＝5.4Hz，1H，N-H)，7.99(d，J＝9.0Hz，1H，N-H)，7.82(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝5.1Hz，1H，CH)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.79(d，J＝1.8Hz，1H，Ar-H)，4.46(t，J＝5.4Hz，2H，CH2)，4.30(m，1H，CH)，3.52(m，2H，CH2)，2.46(m，2H，CH2)，2.01(m，2H，CH2)，0.86(t，J＝6.9Hz，6H，CH3，CH3)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 171.59，171.08，167.25，164.09，161.85，161.33，157.71(2C)，156.72，148.52，132.45，120.21，114.77，113.96，111.55，102.24，58.01，45.30，36.11，35.30，30.94，19.71，18.44。

實施例15製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯蛋氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9d)

按照實施例12的操作，7d(440mg，1.33mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8d(183mg，0.80mmol)，與HOBt(107mg，0.80mmol)，EDC·HCl(152mg，0.80mmol)和5(200mg，0.72mmol)縮合得到9d(155mg，0.31mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝43％。Mp 219.0-221.2℃；[α]D25＝-11.9(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3279，2914，1694，1636，1515，1532，1450，1372，1219，1144，794，639cm-1；ESI-MS(m/e)498[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.06(s，1H，O-H)，8.81(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.78(s，1H，CH)，8.73(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.43(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.20(d，J＝8.1Hz，1H，N-H)，7.81(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，4.55-4.38(m，3H，CH2，CH)，3.53(m，2H，CH2)，2.47(m，2H，CH2)，2.00(s，3H，CH3)，1.97-1.78(m，2H，CH2)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 171.72，171.15，167.13，164.08，161.91，161.34，157.72(2C)，156.73，148.48，132.43，120.22，114.77，114.01，111.56，102.24，52.27，45.25，36.04，35.39，32.41，30.06，15.06。

實施例16製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯苯丙氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9e)

按照實施例12的操作，7e(706mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8e(305mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9e(319mg，0.62mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝57％。Mp 194.3-195.7℃；[α]D25＝-11.3(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3270，2917，1694，1639，1614，1544，1452，1416，1375，1225，1149，1118，850，794，640cm-1；ESI-MS(m/e)514[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.04(s，1H，O-H)，8.76-8.71(m，4H，N-H，CH，CH，CH)，8.52(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.23(d，J＝8.7Hz，1H，N-H)，7.81(d，J＝8.4Hz，1H，Ar-H)，7.37(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，7.26-7.17(m，4H，Ar-H)，7.08(m，1H，Ar-H)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.79(d，J＝2.4Hz，1H，Ar-H)，4.63(m，1H，CH)，4.48(d，J＝6.0Hz，2H，CH2)，3.42(m，2H，CH2)，3.18-2.73(m，2H，CH2)，2.35(m，2H，CH2)；13C-NMR(75 MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 171.76，170.90，167.09，164.07，161.84，161.25，157.76(2C)，156.72，148.43，138.51，132.43，129.59(2C)，128.38(2C)，126.49，120.24，114.76，114.03，111.55，102.23，54.26，45.33，38.08，35.93，35.29。

實施例17制各7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯酪氨醯-2-氨基甲基嘧啶(9f)

按照實施例12的操作，7f(738mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8f(324mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9f(244mg，0.46mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝43％。Mp257.8-259.4℃；[α]D25＝-11.2(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3285，2982，1702，1625，1543，1516，1442，1419，1370，1267，1216，1149，966，794，636cm-1；ESI-MS(m/e)530[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.04(s，1H，O-H)，9.11(s，1H，O-H)，8.77(m，2H，N-H，CH)，8.74(d，J＝4.8Hz，2H，CH，CH)，8.46(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.16(d，J＝8.4Hz，1H，N-H)，7.80(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.36(t，J＝4.8Hz，1H，CH)，7.02(d，J＝8.4Hz，2H，Ar-H)，6.87(dd，J1＝8.4Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.78(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.59(d，J＝8.1Hz，2H，Ar-H)，4.54(m，1H，CH)，4.54(m，1H，CH)，4.47(d，J＝5.7Hz，2H，CH2)，3.43(m，2H，CH2)，3.43(m，2H，CH2)，3.00-2.94(m，2H，CH2)，2.35(m，2H，CH2)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 171.87，170.87，167.10，164.04，161.87，161.29，157.75(2C)，156.73，156.13，148.46，132.43，130.51(2C)，128.51，120.23，115.25(2C)，114.73，114.01，111.56，102.24，54.64，45.30，37.32，35.97，35.31。

實施例18製備7-羥基香豆素-3-甲醯-β-丙氨醯天冬氨醯苄酯-2-氨基甲基嘧啶(9g)

按照實施例12的操作，7g(821mg，1.98mmol)在4N HCl/EA(30ml)中得到8g(374mg，1.19mmol)，與HOBt(161mg，1.19mmol)，EDC·HCl(228mg，1.19mmol)和5(300mg，1.08mmol)縮合得到9g(241mg，0.42mmol)，性狀為淡黃色固體，產率為＝39％。Mp 213.7-215.5℃；[α]D25＝-16.1(c＝0.10，CH3OH)；IR(KBr)：3287，2942，1706，1647，1616，1570，1525，1425，1367，1326，1217，1178，1137，822，793，637cm-1；ESI-MS(m/e)530[M-H]-；ESI-MS(m/e)572[M-H]-；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 11.08(s，1H，O-H)，8.82(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，8.76(s，1H，CH)，8.72(d，J＝5.1Hz，2H，CH，CH)，8.41(d，J＝8.1Hz，1H，N-H)，8.34(t，J＝5.7Hz，1H，N-H)，7.79(d，J＝8.7Hz，1H，Ar-H)，7.37-7.28(m，6H，Ar-H，CH)，6.87(dd，J1＝8.7Hz，J2＝2.1Hz，1H，Ar-H)，6.77(d，J＝2.1Hz，1H，Ar-H)，5.06(s，2H，CH2)，4.82(m，1H，CH)，4.45(t，J＝6.0Hz，2H，CH2)，3.60-3.50(m，2H，CH2)，2.91-2.59(m，2H，CH2)，2.44(m，2H，CH2)；13C-NMR(75MHz，DMSO-d6)：δ/ppm 171.28，170.85，170.52，166.84，164.07，161.96，161.30，157.72(2C)，156.71， 148.41，136.52，132.40，128.79(2C)，128.35，128.23(2C)，120.19，114.77，114.07，111.04，102.24，66.06，49.72，45.37，36.72，36.00，35.48。

實驗例1抗炎作用實驗

1)實驗方法

18-22g ICR雄性小鼠隨機分為空白對照組，阿司匹林陽性藥組，受試化合物給藥組，小鼠使用前靜息1天，操作間保持室內溫度22℃，每組小鼠12隻。一次性給藥30分鐘後往小白鼠的左耳外廓塗二甲苯(0.03mL)，2小時後將小鼠用乙醚麻醉之後頸椎脫臼處死。將小鼠的左，右耳剪下，用直徑7mm的打孔器在兩耳的相同位置，取圓形耳片，分別稱重，求出兩圓耳片的重量差作為腫脹度。腫脹度＝左耳圓片重量-右耳圓片重量，抑制率(％)＝(空白組腫脹度-受試化合物腫脹度)/空白組腫脹度。

2)給藥方法和劑量

給藥方式為灌胃給藥。空白對照：0.5％的CMC，給藥劑量為0.2mL/20g；陽性對照：阿司匹林，給藥劑量為1.11mmol/kg；受試化合物的給藥劑量為1umol/kg和0.1umol/kg.

3)統計方法

本實驗數據統計均採用t檢驗和方差分析，腫脹度以表示。

4)實驗結果列入表1。

由表1可以看出，給藥劑量在1μmol/kg時，受試化合物除9a，9g外，其餘6個目標化合物都有顯著的抗炎活性，有統計學差異(p＜0.05)；給藥劑量在0.1μmol/kg時，9e和9f仍有顯著的抗炎活性，有統計學差異(p＜0.05)，與文獻報導中的母核香豆素在10μmol/kg下的抗炎活性(抑制率為30.2％)相當，說明化合物9e和9f的有效劑量低達0.1μmol/kg，這個有效劑量比文獻中曾經公開的母核香豆素的有效劑量10μmol/kg低100倍。

表1二甲苯誘導的小鼠耳朵炎症抑制活性

n＝12。

a)與空白組(CMC)相比，P＜0.05；

b)與空白組(CMC)相比，P＞0.05。