豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒的製作方法
2023-10-06 06:10:14
專利名稱：豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及醫療設備，特別一種豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒。二、 背景技術目前，用於豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒很多，根據疫苗株所 缺失的糖蛋白可將鑑別ELISA分為gE-ELISA、 gC-ELISA和gG-ELISA，其 中gE-ELISA敏感性最高，應用較多。目前商業化應用的gE-ELISA試劑盒多採用細胞培養物來增殖病毒製備 抗原，這種方法的成本高，勞動強度大，還存在散毒的危險。而近年來報導 了用在杆狀病毒系統中表達的gE蛋白作為抗原，雖然比前者安全，但也存在 成本高，操作繁瑣等不足。大腸桿菌表達系統是人們應用最多，研究最為透徹的外源蛋白表達系統， 大腸桿菌(Escherichia coli)表達系統的主要優點是其遺傳背景和生化特性清 楚、易於操作、生產迅速、培養基成本低、易於製備等。因此對於一些非糖 基化蛋白或只要求其抗原性的蛋白，大腸桿菌表達系統是一個極好的選擇。 目前許多診斷試劑用的抗原都是由大腸桿菌表達的。但所用試劑盒多存在勞 動強度大，不安全，不易操作，且成本高的問題，難以有效推廣應用。三、 實用新型內容針對上述情況，本實用新型之目的就是提供一種新型的豬偽狂犬病病毒 gE-ELISA診斷試劑盒，可有效克服現有設備不易操作，成本高，勞動強度大， 難以快速進行豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷的問題，其解決的技術方案是， 包括有盒體，盒體內向上開口隔置成前後兩排存物槽，在兩排存物槽的後部 有微量滴定板存放室，其室內放置有微量滴定板，所說的兩排存物槽，其前 排依次為酶標記物存放槽、濃縮樣品稀釋液存放槽、濃縮樣品洗滌液存放槽 和陽性對照試劑存放槽，後排依次是陰性對照試劑存放槽、TMB底物液存放 槽、終止液存放槽和酶標抗體稀釋液存放槽，本實用新型結構簡單，使用方 便，易於操作，工作效率高，勞動強度小，成本低，易推廣應用，經濟和社 會效益良好。四、
圖l為本實用新型的結構立體圖。圖2為微量滴定板結構圖。 五具體實施方式
以下結合附圖對本實用新型的具體實施方式
作詳細的說明。由圖l、圖2給出，本實用新型包括有盒體10，盒體10內向上開口隔置 成前後兩排存物槽，在兩排存物槽的後部有微量滴定板存放室ll，其室內放 置有微量滴定板l，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標記物存放槽2、濃 縮樣品稀釋液存放槽3、濃縮樣品洗滌液存放槽4和陽性對照試劑存放槽5， 後排依次是陰性對照試劑存放槽6、 TMB底物液存放槽7、終止液存放槽8 和酶標抗體稀釋液存放槽9。所說的微量滴定板1為96孔12的長方形微孔板，每排12孔，共8排， 其長度與微量滴定板存放室11的長度相同，寬高於盒體10的高度，便於存 放或取出。該試劑盒表達的蛋白質為抗原包被微孔板或致敏乳膠，故無散毒 危險，安全可靠，該試劑盒可顯著區分基因缺失疫苗注射豬與自然感染豬， 且成本低，操作簡單，存物槽內各種液體均為已知的現有技術(即已有產品)， 本實用新型的使用情況是，將重組抗原和空白載體抗原用0.05mol/L碳酸鹽 緩衝液(pH9.5)稀釋至最佳濃度後隔列包被96孔酶標板，100uL/孔，37 。C放置lh後轉移至4。C過夜。甩去包被液，用PBST洗板3次，每次2-3min。 然後加入200uL/孔的封閉液於37。C封閉2h。取出洗板同上，用封閉液將血 清樣品稀釋至最佳稀釋度後，每孔加100uL，每份血清樣品設兩個重複，37 。C反應45min後。取出洗板同上，再加入兔抗豬酶標二抗，100uL/孔，37 。C反應45min後。取出洗板同上，然後加入底物溶液，避光反應3-5min後加 2mol/LH2S04終止反應，立即於ELISA儀上讀出490nm處每孔吸光度值。同時 設定陽性對照孔、陰性對照孔和調零孔(調零孔同樣包被抗原，不加血清和 二抗,但加TMB底物液和終止液)。經對建立的豬偽狂犬病病毒gE-ELISA 180 例豬血清檢測，結果陽性率為72.5%;陰性率為27.5%。該試劑盒與進口診斷 試劑盒的符合率為96. 3%，取得了滿意效果。本實用新型的設計成功，為豬偽狂犬病毒gE-ELISA檢測提供了簡單易操 作的設備，快速而準確，經濟和社會效益顯著。
權利要求1、一種豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，包括有盒體(10)，其特徵在於，盒體(10)內向上開口隔置成前後兩排存物槽，在兩排存物槽的後部有微量滴定板存放室(11)，其室內放置有微量滴定板(1)，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標記物存放槽(2)、濃縮樣品稀釋液存放槽(3)、濃縮樣品洗滌液存放槽(4)和陽性對照試劑存放槽(5)，後排依次是陰性對照試劑存放槽(6)、TMB底物液存放槽(7)、終止液存放槽(8)和酶標抗體稀釋液存放槽(9)。
2、 根據權利要求1所述的豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，其 特徵在於，所說的微量滴定板(1)為96 L (12)的長方形微孔板，每排 12孔，共8排，其長度與微量滴定板存放室(11)的長度相同，寬高於盒 體(10)的高度。
專利摘要本實用新型涉及豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷試劑盒，可有效克服現有設備不易操作，成本高，勞動強度大，難以快速進行豬偽狂犬病病毒gE-ELISA診斷的問題，其解決的技術方案是，包括有盒體，盒體內向上開口隔置成前後兩排存物槽，在兩排存物槽的後部有微量滴定板存放室，其室內放置有微量滴定板，所說的兩排存物槽，其前排依次為酶標記物存放槽、濃縮樣品稀釋液存放槽、濃縮樣品洗滌液存放槽和陽性對照試劑存放槽，後排依次是陰性對照試劑存放槽、TMB底物液存放槽、終止液存放槽和酶標抗體稀釋液存放槽，本實用新型結構簡單，使用方便，易於操作，工作效率高，勞動強度小，成本低，易推廣應用，經濟和社會效益良好。
文檔編號G01N33/569GK201107316SQ200720175109
公開日2008年8月27日 申請日期2007年12月6日 優先權日2007年12月6日
發明者吳鳳筍, 唐桂芬, 李文剛, 樊淑華 申請人:鄭州牧業工程高等專科學校