用於polyq蛋白的生物測定試驗的製作方法

2023-10-04 06:07:49

專利名稱：用於polyq蛋白的生物測定試驗的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於與疾病相關的突變POLYQ蛋白的生物測定試驗，以及其作為診斷工具用於監測疾病進展或用於監測治療疾病的效力的用途。
背景技術：
許多疾病與具有多穀氨醯胺重複序列的蛋白質的表達有關，例如亨廷頓病(HD)、脊延髓肌萎縮症、數種脊髓小腦共濟失調和齒狀核紅核蒼白球路易體萎縮症 (dentatorubral-pallidoluysian atrophy)。這些病症被共同地稱作『多聚穀氨醯胺病，。 HD是最常見的遺傳性神經變性疾病，流行率為5 8/100，OOO0其主要臨床表現包括運動功能障礙、精神病學障礙和痴呆。已經嘗試了很多HD的對症治療，但沒有任何實質性成功 (Bonelli和Wenning, 2006)，也沒有經批准的HD療法存在(Bates, 2003)。HD是由九種常染色體顯性遺傳疾病組成的多聚穀氨醯胺(polyQ)疾病家族的創建成員，這些疾病的共同特徵是在不同遍在表達的蛋白質中polyQ-重複序列的擴展(Ross，200 。引起HD的遺傳突變是在亨廷頓蛋白(himtingtin protein)中的多穀氨醯胺擴展。超過36個穀氨醯胺的擴展變為致病性的，似乎影響蛋白質摺疊和毒性胞內片段與聚集體的後續形成。亨廷頓蛋白基因(Htt)中擴展的polyQ重複序列位於外顯子1中，引起突變型polyQ-Htt蛋白的表達(Gusella等人，198；3)。polyQ-重複序列擴展可促使從天然無規捲曲構象轉化成由多穀氨醯胺鏈之間的氫鍵限定的圓柱狀平行摺疊構象(Perutz等人，1994)。與具有蛋白質錯摺疊特徵的其它神經變性疾病(如阿爾茨海默病或帕金森病)類似，具有螺旋摺疊構象的這些蛋白質傾向於形成不可溶蛋白聚集體(Benzinger等人，2000)。當通過RNA幹擾(DiFiglia等人，2007)或通過四環素調節的條件表達(Yamamoto 等人，2000)使HD小鼠模型的腦中突變型Htt的表達下調時，HD樣症狀逆轉。有意思的是， 突變型polyQ-Htt和野生型-Htt被細胞有差異地代謝，並顯示不同模式的翻譯後修飾(磷酸化(Warby 等人，2005)、蛋白水解斷裂(Gafni 等人，2004 ；Graham 等人，2006 ；Wellington 等人，2002)、細胞定位(Davies 等人，1997 ;van Roon-Mom 等人，2002)和降解(Ravikumar 等人，2002)。這些發現激勵了對如下HD療法的研發工作，所述HD療法目的在於例如通過分子伴侶系統的上調或自體吞噬降解途徑的誘導而影響突變型Htt的錯摺疊或清除 (Yamamoto等人，2006)。這些方法可以在由蛋白錯摺疊引起的其它神經變性疾病中應用。目前，尚沒有可用的生物測定試驗可以在例如臨床試驗或治療中評價此類療法對突變型多穀氨醯胺蛋白質，例如突變型Htt水平的影響。發明概述本發明涉及用於與疾病相關的可溶性突變POLYQ蛋白的生物測定試驗，以及其作為診斷工具用於監測疾病進展或用於監測治療疾病的效力的用途。在優選的實施方案中，所用的生物測定試驗是一種用於Htt檢測的新的均相時間分辨Fiirster共振能量轉移法，該方法適宜在神經元細胞系中的高通量篩選。我們證實， 可以修改這種「時間分辨Fiirster共振能量轉移免疫測定試驗」(在下面稱作「生物測定試驗」)，以定量細胞、動物和人樣品中的內源性全長可溶性polyQ-Htt。該生物測定試驗的應用使得可以在臨床前和臨床試驗以及在治療性處理中將可溶性突變型Htt用作疾病進展的標誌或用於監測藥物處理的效力。由於本方法的設計具有高靈活性，所以其適用于于在其它疾病中使用，尤其是與PolyQ-家族的其它成員相關的疾病。這些蛋白質通常被胞內表達，迄今還沒有對診斷和/或監測疾病進展/治療有用的測定法。在本發明的一個優選的實施方案中，該生物測定試驗測量POLYQ蛋白，例如polyQ 亨廷頓蛋白的可溶性形式。在本發明的另一個優選的實施方案中，該生物測定試驗測量 POLYQ蛋白，例如polyQ亨廷頓蛋白的聚集形式。在本發明的又一個優選的實施方案中，該生物測定試驗既測量可溶性形式的POLYQ蛋白(例如polyQ亨廷頓蛋白)，又測量聚集形式的POLYQ蛋白(例如polyQ亨廷頓蛋白)。因此，一方面，本發明提供了用於測量生物樣品中突變形式(polyQ形式)的蛋白質的量的免疫測定試驗，其中該蛋白質選自亨廷頓蛋白、雄激素受體、萎縮蛋白 (atrophin) 1、共濟失調蛋白(ataxin) 1、共濟失調蛋白2、共濟失調蛋白3、共濟失調蛋白7、 TATA盒結合蛋白或α Ia電壓依賴性鈣通道亞基。在根據本發明的免疫測定試驗的一個優選的實施方案中，在該免疫測定試驗中還測量樣品中相應野生型蛋白的絕對量或相對量。在根據本發明的免疫測定試驗的又一個優選的實施方案中，還測量突變蛋白的翻譯後修飾的程度，例如表達蛋白的細胞修飾，例如通過例如蛋白水解斷裂的片段化、磷酸化、乙醯化、泛素化、SUMO化、脂質修飾或多肽主鏈的其它共價修飾。在根據本發明的免疫測定試驗的再一個優選的實施方案中，該免疫測定試驗是單步驟測定試驗，即，其中無需分離或洗滌且可以優選地在單個生物化學操作後運行的免疫測定試驗。在根據本發明的免疫測定試驗的另一個優選的實施方案中，該免疫測定試驗的檢測技術以時間分辨Fiirster共振能量轉移或電化學發光為基礎。在根據本發明的免疫測定試驗的又一個優選的實施方案中，該免疫測定試驗的檢測技術是時間分辨Fiirster共振能量轉移。在根據本發明的免疫測定試驗的再一個優選的實施方案中，該免疫測定試驗包括下列步驟a)將生物樣品與用鑭系元素離子穴狀化合物(例如銪或鋱穴狀化合物)標記的第一抗體和用適於檢測鑭系元素髮射的信號的螢光團標記的第二抗體接觸，其中一種抗體對突變型蛋白的polyQ部分具有特異性，而另一抗體對該突變型亨廷頓蛋白的不同部分具有特異性，和b)通過時間分辨FSrster共振能量轉移，測量來自螢光團的螢光，而定量樣品中突變型POLYQ蛋白的量。在根據本發明的免疫測定試驗的另一個優選的實施方案中，還通過將樣品與對該蛋白質的野生型形式具有特異性且用適於檢測鑭系元素髮射的信號的不同螢光團標記的第三抗體接觸，在生物樣品中另外測量樣品中相應野生型蛋白的絕對量或相對量。在根據本發明的免疫測定試驗的又一個優選的實施方案中，polyQ-蛋白質是 polyQ-亨廷頓蛋白。在根據本發明的免疫測定試驗的再一個優選的實施方案中，生物樣品源自腦、血、肌肉或心，或源自任何其它的外周組織，例如皮膚或毛髮。在本發明的另一方面，免疫測定試驗用於測量生物樣品中蛋白質的突變POLYQ形式的量，其中該蛋白質選自亨廷頓蛋白、雄激素受體、萎縮蛋白1、共濟失調蛋白1、共濟失調蛋白2、共濟失調蛋白3、共濟失調蛋白7、TATA盒結合蛋白或α Ia電壓依賴性鈣通道亞基；作為診斷工具，用於監測疾病進展或用於監測與蛋白質的突變POLYQ形式有關的疾病的治療效力。該免疫測定試驗優選是如本申請中所述的免疫測定試驗。附圖簡述

圖1 優化檢測尾(detection tag)、cDNA構建體和分析原理A.示出了用抗體對β 1和25Η10進行分析的肽的胺基酸序列，各表位以粗字體表示。Β.Α.中所示的肽的時間分辨FRET分析(3ng/孔，一式兩份)。選擇Hl序列用於加尾突變型Htt，選擇16序列用於加尾野生型Htt。C.在可誘導的HNlO細胞系中表達的cDNA 構建體的示意圖，還示出25H10、32A7和β 1在C端尾上的抗體結合位點。2Β7對Htt的內源性氨基端表位具有特異性。D.用於基於細胞的時間分辨FRET測定法的方案的示意圖。圖2 通過時間分辨FSrster共振能量轉移檢測突變型和野生型HttA.蛋白質印跡分析，相比於內源性全長Htt，野生型(573-Q25)和突變型(573-Q72)Htt在HNlO細胞中的誘導表達。B.誘導3天後，被突變型和野生型Htt轉染的HNlO細胞系顯示跨時間和多個細胞代的穩定Htt表達。C. 3天誘導後，用所示抗體組合，通過時間分辨FRET對野生型或突變型Htt進行的靈敏且特異的檢測(平均值，η = 3，標準差)。D.利用2Β7和β 1抗體對在誘導3天的細胞中檢測突變型Htt573-Q72的細胞裂解條件的優化(時間分辨FRET在加入抗體後50min測量，11 = 6，標準差)。E.細胞裂解和加入檢測抗體後Z，-因子在35_1 IOmin 之間保持穩定，但絕對時間分辨FRET信號隨時間而增加(未顯示)，573-Q72HN10細胞誘導 3天(n = 6，標準差)。F.在用不同誘導劑濃度處理的細胞中突變型Htt573-Q72表達的劑量依賴性增加(n = 6，標準差，EC50 250nM)。A_C.這些數據在96孔板格式中產生。D-F. 這些數據在1536孔板格式中產生。圖3 =Htt生物測定試驗所用方案的示意圖通過單個移液步驟將被標記用於時間分辨FRET的單克隆抗體加至細胞裂解物或組織勻漿物中。與Htt的同時結合使兩種抗體靠近，由此使得能量可以從銪穴狀化合物轉移至D2-螢光團。由鑭系元素穴狀化合物發射的獨特長壽命螢光允許時間分辨測量，並由此允許在時間上區別於幹擾性的短壽命背景螢光。因而，在具有強色彩和自體螢光的生物樣品(如血液)中可以實現準確的Htt測量。B.人Htt(加尾的Htt573片段)上的抗體結合位點的圖示。2B7和MWl分別對位於Htt的氨基端和polyQ重複序列上的Htt表位具有特異性。三種單克隆抗體β1、32Α7和25H10對加在該加尾的Htt573片段的羧基端上的表位具有特異性。MWl與PolyQ-重複序列的結合隨著polyQ-長度的變化而導致與Htt的更強的和增加的結合(由在圖中顯示的兩個抗體表示)。圖4 亨廷頓病的細胞模型中突變型亨廷頓蛋白的檢測A 使用Htt抗體對2B7和麗1，在誘導的HNlO細胞的裂解物中，對加尾的野生型 (25Q)和突變型(72Q)Htt 573片段進行時間分辨FRET檢測。由未誘導的細胞製備的裂解物用作陰性對照。B 用2B7和麗1通過時間分辨FRET對HNlO細胞中誘導的未加尾的Htt 外顯子1片段進行特異性檢測。C 用2B7和麗1通過時間分辨FRET對標準量的經純化的重組野生型05Q)或突變型G6Q)Htt 573蛋白質進行定量。D.用2B7和麗1通過時間分辨FRET分析ESC衍生神經元中慢病毒介導的未加尾野生型(25Q)和突變型(72Q)Htt 548 片段的表達，表明Htt信號作為polyQ-長度的函數而增加，但是用2B7進行的蛋白質印跡顯示相似的Htt表達水平。模擬感染的細胞中未檢測出Htt片段。微管蛋白為上樣參照。 E 特異性檢測140Q-敲入(knock-in)ESC中的內源性Htt。Htt敲除ESC(KO)用作陰性對照。2B7和麗1未檢測出具有7Q的鼠野生型Htt。F:從表達具有增加的polyQ長度的內源性Htt的敲入ESC衍生神經元獲得細胞裂解物，分析該裂解物證實了 Htt的該時間分辨 FRET測定對polyQ的依賴性。圖中所示的細胞裂解物中的Htt表達均獨立地通過蛋白質印跡分析進行了確認(未示出)。所有圖均顯示η = 3的平均值，其中誤差柱指示標準差值。圖5 通過雙重時間分辨FSrster共振能量轉移，同時測定野生型和突變型Htt對同一樣品中加尾的野牛型和突變型Htt573的表達水平進行測定。HNlO細胞表達在胺基酸573截短的且分別用β 1和32Α7抗原或用β 1和25Η10抗原加尾的野生型 Htt (25Q)和突變型Htt (72Q)兩者。β 1攜帶鋱穴狀化合物部分，將螢光能量轉移至D2標記的25Η10和Alexa488標記的32A7。在兩個不同波長通道中測量了 D2和Alexa488信號。圖6 純的重組Htt蛋白的生產SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳在細菌中產生的純化的野生型(Htt573Q20和突變型 (Htt573Q46)蛋白。規定量的牛血清白蛋白(BSA)被上樣用作對照以評估在所用的純化方法中獲得的純化Htt的量。圖7 用抗體對2B7和麗ι以及2B7和4C9通過雙重時間分辨Fiirster共振能量
轉移對重組野生型和突變型Htt進行測定使用所示抗體對，通過雙重時間分辨Fiirster共振能量轉移，對確定量的重組野生型Htt (25Q)和突變型Htt (46)進行分析。儘管2B7和MWl (Alexa488通道)以polyQ-依賴性方式更好地識別突變型Htt，但是2B7和4C9 (D2通道)導致對野生型Htt比對具有延長PolyQ的突變型Htt蛋白更強的信號。圖8 用抗體對2B7和MWl以及2B7和2166通過雙重時間分辨FSrster共振能量
轉移對重組野生型和突變型Htt進行測定使用所示抗體對，通過雙重時間分辨Fiirster共振能量轉移，對確定量的重組野生型Htt (25Q)和突變型Htt (46)進行分析。儘管2B7和MWl (Alexa488通道)以polyQ-依賴性方式更好地識別突變型Htt，但是2B7和2166 (D2通道)導致對野生型Htt比對具有延長polyQ的突變型Htt蛋白更強的信號。圖9 用抗體對4C9和2166通過時間分辨Fiirster共振能量轉移對重組野生型和突變型Htt進行測定使用抗體對4C9和2166，通過時間分辨Fiirster共振能量轉移，對確定量的重組野生型Htt(25Q)和突變型Htt (46)進行分析，兩個抗體對同等良好地識別突變型Htt和野生型Htt。圖10 對小鼠HD模型中可溶性突變型亨廷頓蛋白的檢測A 對在R6/2小鼠的腦中具有200Q的Htt外顯子1進行時間分辨FRET檢測。野生型小鼠用作陰性對照。相比於症狀發生前的4周齡小鼠，具有症狀的12周齡小鼠中用2B7 和麗1抗體對測量到的Htt的相對濃度顯著下降。B 通過AGERA測定R6/2小鼠中的腦Htt聚集物(在A中所分析的相同樣品)。正如預期的那樣，在年長的小鼠組中發現了聚集物載荷顯著增加。C:用2B7和MWl抗體對，特異性檢測可溶性Htt。通過超速離心將R6/2腦勻漿物分離成可溶性物質和不可溶性物質。沉澱物中回收了通過AGERA測量的不可溶性Htt 聚集物的主要部分。相反，時間分辨FRET主要顯示上清液中的可溶性Htt。D 對R6/2組織中Htt的檢測。相比於野生型同胞，來自6周齡R6/2小鼠的皮層和肌肉樣品含有顯著量 Htt (n = 3)。相比於野生型小鼠(n = 4)，還在9-12周齡R6/2小鼠(n = 9)的血漿和CSF 中檢測出突變型Htt。E 以內源性水平表達具有140Q的Htt的敲入Hdhl40小鼠(n = 3) 的不同腦區中全長Htt的檢測。野生型同胞(n = 3)用作陰性對照。所有數據為平均值加標準差。圖11 對小鼠腦中Htt聚集物的分析A 4周齡和12周齡的R6/2或野生型(WT)小鼠的腦樣品的AGERA印跡的代表性實例。Htt聚集物載荷的年齡依賴性增加在R6A小鼠腦中是明顯的。B:在通過超速離心分離為可溶性物質(上清液)和不可溶性物質(沉澱)之前(開始)和之後，4周齡和12 周齡動物的R6/2腦勻漿物用AGERA分析。聚集物有效地回收在不可溶性級份中。在上清液級份中未檢測出聚集物。圖12 對人組織中Htt的檢測A 用2Β7和麗1通過時間分辨FRET對三個死後的人HD皮質勻漿物(HD)進行了分析，顯示出與三個對照(HV)相比更高的polyQ-依賴性Htt信號；技術性一式三份加標準差(HV與HD之間ρ < 0. 001)。B 在分離自HD(n = 5)以及對照(HV，η = 4)個體的速凍人全血樣品、用EDTA處理的紅細胞和血沉棕黃層中，用時間分辨FRET測量(技術性一式三份)的ζ-轉換的Htt相對量的箱式圖。箱顯示50%值的分布範圍，直條顯示所有值的分布，水平條顯示中位值。圖13 =A 時間分辨Fiirster共振能量轉移的原理。銪-穴狀化合物在320nm的激發導致D2-螢光團在665nm處的接近度依賴性的、時間延遲的FRET發射。B =Tb2+-穴狀化合物的發射不同於Eu3+-穴狀化合物，因此除紅色D2受體之外，還可以使用綠色受體 (Alexa488,螢光素)。C 我們將兩種捕獲抗體A β 42 (抗相應加尾的野生型25Q-亨廷頓蛋白)和Αβ40(針對突變型72Q-亨廷頓蛋白)點在4點/孔板上。當分析抗_Αβ42點時， 僅有這樣的樣品產生信號該樣品含有誘導表達了野生型25Q-亨廷頓蛋白的細胞的裂解物。相反，含有誘導表達了突變型72Q-亨廷頓蛋白的細胞的裂解物的樣品在抗-A β 40點中呈陽性。用生物素化Novl抗體檢測與板結合的Htt。圖14 使用測定試驗分析了一大組來自健康志願者和HD患者的血沉棕黃層PBMC 樣品(由Sarah Tabrizi友情提供)100位個體，每位個體兩個時間點。在此項雙盲研究中，當應用通過早期實驗(使用Meven Hersch提供的樣品)建立的信號閾值時，我們正確地將44個樣品中的43個分配至屬於健康對照。因此，該測定試驗可以異常良好地使用血液級份作為起始材料將健康者與HD分開。發明詳述本發明涉及與疾病相關的POLYQ蛋白的生物測定試驗，以及其作為診斷工具用於監測疾病進展或用於監測疾病的治療效力的用途。為了可以更容易地理解本發明，首先定義了某些術語。其它定義在整個詳述中給出。
術語「突變POLYQ蛋白」或「P0LYQ蛋白，，是指含有多穀氨醯胺擴展的與疾病發展有關的POLYQ蛋白的形式。例如「突變POLYQ亨廷頓蛋白」是指具有超過36個穀氨醯胺的多穀氨醯胺擴展且與亨廷頓病有關的亨廷頓蛋白。術語「單步驟測定試驗」是指其中無需分離或洗滌且通常可以在單個生物化學操作後運行的免疫測定。術語「翻譯後修飾」是指表達蛋白的細胞修飾，例如蛋白水解斷裂、磷酸化、乙醯化、泛素化、SUMO化或多肽主鏈的其它共價修飾。本發明的生物測定試驗可以用於的多聚穀氨醯胺疾病在下表中列出。
權利要求
1.用於測量生物樣品中可溶性形式的突變POLYQ蛋白的量的免疫測定試驗的用途，其中該蛋白質選自亨廷頓蛋白、雄激素受體、萎縮蛋白1、共濟失調蛋白1、共濟失調蛋白2、共濟失調蛋白3、共濟失調蛋白7、TATA盒結合蛋白或α Ia電壓依賴性鈣通道亞基；作為診斷工具，用於監測治療與該蛋白質的突變POLYQ形式有關的疾病的效力或用於監測疾病進展。
2.根據權利要求1的用途，其中在所述免疫測定試驗中還測量樣品中相應野生型蛋白的絕對量或相對量。
3.根據權利要求1或2的用途，其中還測量所述突變蛋白的翻譯後修飾的程度，例如表達蛋白的細胞修飾，例如通過例如蛋白水解斷裂的片段化、磷酸化、乙醯化、泛素化、SUMO 化、脂質修飾或多肽主鏈的其它共價修飾。
4.根據權利要求1至3中任一項的用途，其中所述免疫測定試驗是單步驟測定試驗，即其中不需要分離或洗滌且可優選地在單個生物化學操作後運行的免疫測定試驗。
5.根據權利要求1至4中任一項的用途，其中所述免疫測定試驗檢測技術以時間分辨 Fiirster共振能量轉移或電化學發光為基礎。
6.根據權利要求5的用途，其中所述免疫測定試驗檢測技術是時間分辨Fiirster共振能量轉移。
7.根據權利要求5的用途，其中所述免疫測定試驗包括下列步驟a)將所述生物樣品與用鑭系元素離子穴狀化合物(例如銪或鋱穴狀化合物)標記的第一抗體和用適於檢測鑭系元素髮射的信號的螢光團標記的第二抗體接觸，其中抗體之一對突變型蛋白的PolyQ部分具有特異性，而另一個抗體對該突變型亨廷頓蛋白蛋白的不同部分具有特異性，和b)通過用時間分辨FSrster共振能量轉移測量來自螢光團的螢光而定量樣品中突變型POLYQ蛋白的量。
8.根據權利要求5的用途，其中通過另外將所述樣品與對所述蛋白質的野生型形式具有特異性且用適於檢測鑭系元素髮射的信號的不同螢光團標記的第三抗體接觸，還在所述生物樣品中測量該樣品中的相應野生型蛋白的(相對)量。
9.根據前述權利要求中任一項的用途，其中所述polyQ-蛋白是polyQ-亨廷頓蛋白。
10.根據前述權利要求中任一項的用途，其中所述生物樣品源自腦、血、肌肉或心，或源自外周組織例如皮膚或毛髮。
11.用於測量生物樣品中可溶性形式的突變(擴展POlyQ)蛋白質的量的免疫測定試驗，其中所述蛋白質選自亨廷頓蛋白、雄激素受體、萎縮蛋白1、共濟失調蛋白1、共濟失調蛋白2、共濟失調蛋白3、共濟失調蛋白7、TATA盒結合蛋白或α Ia電壓依賴性鈣通道亞基。
12.根據權利要求11的免疫測定試驗，其中在所述免疫測定試驗中還測量所述樣品中相應野生型蛋白的絕對量或相對量。
13.根據權利要求11或12的免疫測定試驗，其中還測量所述突變蛋白的翻譯後修飾的程度，例如表達蛋白的細胞修飾，例如通過例如蛋白水解斷裂的片段化、磷酸化、乙醯化、泛素化、SUMO化、脂質修飾或多肽主鏈的其它共價修飾。
14.根據權利要求11至13中任一項的免疫測定試驗，其中所述免疫測定試驗是單步驟測定試驗，即其中不需要分離或洗滌且可優選地在單個生物化學操作後運行的免疫測定試
15.根據權利要求11至14中任一項的免疫測定試驗，其中所述免疫測定試驗檢測技術以時間分辨Fiirster共振能量轉移或電化學發光為基礎。
16.根據權利要求15的免疫測定試驗，其中所述免疫測定試驗檢測技術是時間分辨 Fiirster共振能量轉移。
17.根據權利要求15的免疫測定試驗，其中所述免疫測定試驗包括下列步驟a)將所述生物樣品與用鑭系元素離子穴狀化合物(例如銪或鋱穴狀化合物)標記的第一抗體和用適於檢測鑭系元素髮射的信號的螢光團標記的第二抗體接觸，其中抗體之一對突變型蛋白的POlyQ部分具有特異性，而另一個抗體對該突變型亨廷頓蛋白蛋白的不同部分具有特異性，和b)通過用時間分辨FSrster共振能量轉移測量來自螢光團的螢光而定量樣品中突變型POLYQ蛋白的量。
18.根據權利要求17的免疫測定試驗，其中通過另外將所述樣品與對所述蛋白質的野生型形式具有特異性且用適於檢測鑭系元素髮射的信號的不同螢光團標記的第三抗體接觸，在所述生物樣品中還測量該樣品中相應野生型蛋白的(相對)量。
19.根據前述權利要求中任一項的免疫測定試驗，其中所述polyQ-蛋白是polyQ-亨廷頓蛋白。
20.根據前述權利要求中任一項的免疫測定試驗，其中所述生物樣品源自腦、血、肌肉或心，或源自外周組織例如皮膚或毛髮。
全文摘要
本發明涉及與疾病相關的突變POLYQ蛋白的生物測定試驗，以及其作為診斷工具用於監測疾病進展或用於監測治療疾病的效力的用途。在優選的實施方案中，該polyQ-蛋白是polyQ-亨廷頓蛋白。
文檔編號G01N33/68GK102171573SQ200980139060
公開日2011年8月31日 申請日期2009年8月3日 優先權日2008年8月4日
發明者P·帕加內蒂 申請人:諾瓦提斯公司