黃花苜蓿組培快速繁殖方法
2023-10-17 00:34:49 4
專利名稱：黃花苜蓿組培快速繁殖方法
技術領域：
本發明涉及野生牧草繁殖方法，具體指黃花苜蓿組培快速繁殖方法。
背景技術：
黃花苜蓿(Medicago falcata L.)是一種分布廣泛的野生豆科牧草，與紫花苜蓿相比，黃花苜蓿具有耐寒、抗病蟲害、抗逆性強等特點。在我國乾旱、寒冷地區推廣種植黃花苜蓿能發揮重要的生態、經濟價值。但是，由於黃花苜蓿是野生種，自身也有一些缺點，如 黃花苜蓿花期不一致，這導致種子成熟不一致、收穫產量低，硬實率高達83 %、發芽率較低。 這都影響了黃花苜蓿的擴大種植。因此，提高黃花苜蓿種子產量及繁殖係數有著重要的理論價值及現實意義。目前，國內外對黃花苜蓿的研究主要集中在栽培引種馴化、遺傳多樣性及抗性基因等方面，其中涉及種子發芽及繁殖體系的相關研究報導較少。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種黃花苜蓿組培快速繁殖方法，這種方法具有繁殖速度快、成本低、培育周期短的特點。本發明要解決的技術問題由如下方案來實現黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的滅菌，無菌苗的獲得，愈傷組織的誘導及分化，植株的再生，煉苗移栽。具體方法如下一、種子的滅菌及無菌苗的獲得取黃花苜蓿種子在流水條件下衝洗20 30min， 用濃度為70%的乙醇浸泡20 40s，濃度為0. I^HgCl2消毒4 12min，置於MS和1/2MS 固體培養基中發芽，獲得無菌苗；二、愈傷組織的誘導取上述無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4mmX4mm、下胚軸切割成4mm，接入愈傷組織誘導培養基中，愈傷組織誘導培養基為MS+濃度為0. 5 ang/L 2，4-D+濃度為0 1.5mg/L6-BA+3%蔗糖+0. 7%瓊脂，pH值均調至5. 89 5. 92，經高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內散射光條件下培養， 即獲得愈傷組織；三、分化培養及植株的再生將上述愈傷組織轉接到分化培養基上，分化培養基為MS+濃度為0. 15 1. 5mg/L KT+濃度為0. 1 0. 2mg/LNAA+0. 7%瓊脂，初次分化時加蔗糖3%、繼代時加蔗糖2%，pH值均調至5. 89 5. 92，經高溫120°C高壓滅菌20min， 在19 25°C室內散射光並開白熾燈條件下培養，培養約50d，即可再生出部分完整的分化苗；四、煉苗及移栽煉苗移栽前，去掉封口膜，將完整的分化苗進行煉苗1 2d，將煉好的苗從瓶中取出，洗淨根部培養基後，將小苗移植到經消毒處理的基質中，基質配比為壤土花卉土 蛭石=1 1 1，覆上遮陰網，保溼保溫，經IOd後，去掉遮陰網，幼苗便可成活。本發明與現有技術相比所具有的優點1、黃花苜蓿種子硬實率較高，前處理採用砂紙打磨，破除硬實，發芽率可提高 64. 9%。
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2、黃花苜蓿種子在打磨，流水下衝洗20min，散射光未開白熾燈室內培養條件下， 用0. 的升汞消毒Smin後，其發芽率最高，可達79.6%。3、利用組織培養技術在短期內可獲得黃花苜蓿大量愈傷組織和再生苗，分化率高達 80%。
圖1為黃花苜蓿組培快速繁殖方法流程圖。具體實施方法一、種子的滅菌及無菌苗的生產選取大小一致，光滑飽滿的黃花苜蓿種子(打磨和未打磨)用比重清選法進行清選，下沉的種子作為試驗樣品。將種子在流水下分別衝洗20 30min，移入超淨工作檯， 70 %的酒精浸泡20 40s，用0. 1 %的升汞消毒不同時間梯度後G 12min)，無菌水衝洗4 5遍，接種於MS和1/2MS固體培養基中，培養溫度為19 25 °C，培養條件為室內散射光並開白熾燈下培養、室內散射光未開白熾燈培養和培養箱光暗交替培養(光暗= 16 8)，發芽8d左右，觀察種子無菌苗萌發及生長狀況。二、愈傷組織的誘導取上述發芽8d左右的無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4X4mm、下胚軸切割成4mm左右，接入經高壓滅菌的愈傷組織誘導培養基上，愈傷組織誘導培養基成分如下基本培養基MS，蔗糖3 %，瓊脂0.7%，激素種類及用量見表1。pH值均調至5. 89 5. 92，在 19 25°C室內散射光條件下培養，約4d左右開始形成愈傷，3周後進行數據統計。表1黃花苜蓿愈傷組織誘導培養基激素種類與用量
激素濃度(mg/L)
激素種類 ----------------------------------------------------
AlA2A3A4A5 A6 A7 A8A9AlOAllA122,4-D0.50.50.50.5111122226-BA00.511.50 0.5 1 1.500.511.5三、愈傷組織分化及植株再生將上述誘導出的胚性愈傷組織轉接到分化培養基中，分化培養基成分如下基本培養基MS,初次分化時蔗糖3 %，繼代時蔗糖2 %，瓊脂0. 7 %，激素種類及用量見表2。pH 值均調至5. 89 5. 92，經高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內散射光並開白熾燈條件下培養，每隔20d繼代1次。培養50d後，即可再生出分化苗，並且40%以上分化苗都會有根系產生。將未形成根系的分化苗放入生根培養基中，20d後長出幼根。表2黃花苜蓿愈傷組織分化培養基激素種類與用量
權利要求
1.黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的滅菌，無菌苗的產生，愈傷組織的誘導及分化，植株的再生，煉苗移栽，其特徵是一、種子的滅菌及無菌苗的獲得取黃花苜蓿種子在流水條件下衝洗20 30min，用濃度為70%的乙醇浸泡20 40s，濃度為0. 1 % HgCl2消毒 4 12min，置於MS和1/2MS固體培養基中發芽，獲得無菌苗；二、愈傷組織的誘導取上述無菌苗的子葉和下胚軸，子葉切割成4mmX4mm、下胚軸切割成4mm，接入愈傷組織誘導培養基中，愈傷組織誘導培養基為MS+濃度為0. 5 ang/L 2，4-D+濃度為0 1. 5mg/L6-BA+3% 蔗糖+0. 7%瓊脂，pH值均調至5. 89 5. 92，經高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25 V 室內散射光條件下培養，即獲得愈傷組織；三、分化培養及植株的再生將上述愈傷組織轉接到分化培養基上，分化培養基為MS+濃度為0. 15 1. 5mg/L KT+濃度為0. 1 0. 2mg/ LNAA+0. 7%瓊脂，初次分化時加蔗糖3%、繼代時加蔗糖2%，pH值均調至5. 89 5. 92，經高溫120°C高壓滅菌20min，在19 25°C室內散射光並開白熾燈條件下培養，培養約50d， 即可再生出部分完整的分化苗；四、煉苗及移栽煉苗移栽前，去掉封口膜，將完整的分化苗進行煉苗1 2d，將煉好的苗從瓶中取出，洗淨根部培養基後，將小苗移植到經消毒處理的基質中，基質配比為壤土 花卉土 蛭石=1 1 1，覆上遮陰網，保溼保溫，經IOd後，去掉遮陰網，幼苗便可成活。
全文摘要
本發明公開了一種黃花苜蓿組培快速繁殖方法，包括種子的處理、無菌苗的獲得、愈傷誘導、增殖、分化、再生植株的獲得及煉苗移栽等技術。本試驗以黃花苜蓿無菌苗的子葉和下胚軸為外植體，接種到不同激素配比的愈傷組織誘導培養基中誘導愈傷形成，然後接種到分化培養基中分化成苗。將完整的分化苗進行煉苗，將煉好的苗從瓶中取出，洗淨根部培養基後，將小苗移植到經消毒處理的基質中，覆上遮陰網，保溼保溫，經10d後，去掉遮陰網，幼苗便可成活。本方法能得到較高的種子發芽率及組培苗分化率。
文檔編號A01H4/00GK102388802SQ20111022165
公開日2012年3月28日 申請日期2011年7月18日 優先權日2011年7月18日
發明者烏雲塔娜, 井樂, 伊風豔, 姜圓圓, 展春芳, 張宇, 李慧, 石鳳翎, 高霞 申請人:內蒙古農業大學