噬菌體相關裂解酶對各種疾病的預防性和治療性處理的用途的製作方法

2023-09-13 02:50:45 4

專利名稱：噬菌體相關裂解酶對各種疾病的預防性和治療性處理的用途的製作方法
下面的申請是1999年9月14日提交的美國專利申請09/395,636的延續部分。
2.現有技術的描述過去，抗生素被用於治療各種感染。Selman Waksman引入和生產鏈黴素的工作，Fleming博士對青黴素的發現，與抗生素領域中的許多其它工作一樣知名。許多年來，對「基本的」抗生素進行了加成和化學修飾，試圖使它們的作用更強，或治療對這些抗生素過敏的人。
其它人發現了這些抗生素的新用途。美國專利5,260,292(Robinson et al.)公開了用氨基青黴素局部治療痤瘡。用於局部治療痤瘡和痤瘡形式的真皮疾病的方法和組合物包括應用一定量的選自氨苄青黴素、阿莫西林、其它氨基青黴素、以及頭孢菌素及其衍生物和類似物的，有效治療痤瘡和痤瘡形式的真皮疾病的抗生素。美國專利5,409,917(Robinson et al.)公開了用頭孢菌素局部治療痤瘡。
然而，由於為治療各種疾病而以不斷增加的速率配方或使用更多抗生素，越來越多的細菌建立了對抗生素的耐藥性。現在正使用大劑量的更強的抗生素治療更耐藥的菌株。因此已經發展出多種耐抗生素的細菌。更多抗生素的使用和表現出耐藥性的細菌的數目導致了需要使用抗生素的時間延長。現在更經常使用廣譜的非特異性抗生素，它們中的一些對病人有害。同樣，抗生素不容易通過黏膜表層。另外，對抗生素過敏的人表現得越來越多。
因此，為首先識別然後殺滅細菌尋求了其它努力。
為通過使用噬菌體治療細菌疾病進行了嘗試。美國專利5,688,501(Merril，et al.)公開了用特定細菌的特異性裂解或非裂解噬菌體治療動物體內由細菌導致的感染性疾病的方法。
美國專利4,957,686(Norris)公開了改善口腔衛生的程序，它包含將具有容易粘附唾液腺膜特性的寄生於細菌的噬菌體引入口腔。
注意直接將噬菌體引入動物而預防或治療疾病有一些缺陷。具體說，細菌必需在恰當的生長階段以便噬菌體附著。細菌和噬菌體都必須處於正確的和同步的生長循環。另外，必須有恰當數目的噬菌體附著於細菌；如果噬菌體太多或太少，則會沒有附著或不產生裂解酶。噬菌體也必需是有足夠活性的。噬菌體也受許多事物的抑制，包括它將攻擊的生物體的細菌碎片。進一步使直接使用噬菌體治療細菌感染複雜化的是免疫反應的可能性，它使噬菌體無功能。
所以，其他人探尋了使用更安全和更有效的方法治療和預防細菌感染。
美國專利(申請號08/962,523)(Fischetti，et.al.)和美國專利(申請號09/257,026)(Fischetti et al.)公開了為一般稱作鏈球菌喉的鏈球菌A咽喉感染的預防和治療性處理而使用口服運送方式，如含有由C1噬菌體感染的C族鏈球菌產生的裂解酶的糖果、口香糖、錠劑、含片、片劑、粉末、氣溶膠、液體或液體噴霧。
美國專利09/395,636(Fischetti et al.)公開了用於細菌感染的預防或治療性處理的方法和組合物，包括給予感染部位有效量的至少一種由感染了細菌特異性噬菌體的細菌產生的裂解酶。裂解酶優選包含適於運送裂解酶到感染位點的載體。此方法和處理可以用於治療上呼吸道感染、局部感染、陰道感染、眼感染、耳感染，用於腸外治療，以及用於大多數其它細菌感染。
然而，除了本發明者，還沒有人探究這些裂解酶對細菌性疾病的預防和治療性處理的用途。因此，本發明公開了用於治療多種由細菌感染導致的疾病的多種與噬菌體相關的裂解酶、打孔酶、嵌合酶、以及混排酶的提取和用途。
使用由細菌特異性噬菌體感染細菌產生的噬菌體相關裂解酶對治療疾病有許多益處。由於噬菌體定向於特定細菌，裂解酶不幹擾正常菌群。裂解噬菌體也主要攻擊不受質粒變異影響的細胞壁結構。裂解酶的作用很快並不依賴於細菌生長。
裂解酶可以定向於黏膜表層，在其中它們可以殺滅克隆的細菌。
混排酶是這樣一些酶，通常一個以上特定酶的一個以上序列在一個或更多位置被切開，並以特定或隨機順序重構而增加它們的活性。
在本發明的一種優選實施方案中，混排酶被用於治療細菌感染，因此增加了殺滅細菌的速度和效率。
嵌合酶是有兩個或更多活性位點的兩個或更多酶的組合的酶，這樣嵌合酶可以獨立作用於相同或不同分子。這將允許同時治療兩種或更多不同細菌感染。嵌合酶也用於通過在一個以上位置剪切細胞壁而治療細菌感染。
已經生成和研究了許多嵌合裂解酶。E-L基因、由噬菌體phi X174和MS2裂解蛋白E和L構建的嵌合裂解酶分別接受內部缺失而創建一系列裂解或殺滅特性改變的新E-L克隆。在本實驗中研究了親代基因E，L，E-L和E-L的內部截短形式的裂解活性，以不同跨膜結構域的不同結構為基礎鑑定不同的裂解機制。電子顯微鏡和細胞質及質周間隙的標記酶釋放揭示了可以根據穿透大腸桿菌內膜蛋白或內膜和外膜蛋白而區分兩種不同的裂解機制。FEMS Microbiol.Lett.1998 Jul 1，164(1)；159-67。
在另一實驗中，通過融合編碼乳球菌噬菌體Tuc2009溶素N端部分的區域和編碼主要肺炎球菌自溶素C端結構域的區域構建活性嵌合細胞壁裂解酶(TSL)。此嵌合酶顯示出可以水解含膽鹼的肺炎球菌細胞壁的糖苷酶的活性。
本發明的一種優選實施方案公開了用嵌合裂解酶同時治療兩種感染性細菌，或在兩個不同位置切開細菌細胞壁。
打孔酶在細胞膜產生孔。更具體地說，打孔酶形成終止呼吸的致死性膜損害。與裂解酶相似，打孔酶由噬菌體編碼並攜帶。實際上，經常發現打孔酶的遺傳密碼在噬菌體中鄰接裂解酶的遺傳代碼或甚至在其內部。大多數打孔酶序列很短，並總體上具有疏水性，有高度親水的羧基端結構域。在許多情況下，公認打孔酶在噬菌體酶活性結構域內的不同閱讀框架編碼。在其它情況下，在編碼噬菌體的DNA的鄰接或附近的DNA上編碼。打孔酶通常在噬菌體感染晚期合成並出現在漿膜中，在此導致膜損害。
可以根據初級結構分析將打孔酶分為兩個主要類型。I型打孔酶通常為95個殘基或更長並可以有三個潛在的跨膜區。II型打孔酶通常較小，約65-95個殘基，帶電和疏水殘基的分布提示有兩個TM結構域(Young，et al.Trends in Microbiology v.8，No.4，March2000)。然而至少對於宿主為革蘭氏陽性菌的噬菌體，雙成分的裂解系統可能不是普遍的。儘管一些噬菌體表示或提示打孔酶的存在，還沒有發現編碼所有噬菌體的公認打孔酶的基因。已經表明打孔酶存在於或提示存在於乳球菌噬菌體Tuc2009，乳球菌ΦLC3，肺炎球菌噬菌體EJ-1，加氏乳桿菌噬菌體Φadh，金黃色葡萄球菌噬菌體Twort，單核細胞增生利斯特氏菌噬菌體，肺炎球菌噬菌體Cp-I，枯草桿菌噬菌體Φ29，德氏乳桿菌噬菌體LL-H溶素，以及金黃色葡萄球菌噬菌體Φ11。(Loessner，et al.，Journal of Bacteriology，Aug.1999，p.4452-4460)。
在本發明的另一種實施方案中，將打孔酶與裂解酶結合使用而增加殺滅細菌的速度和效率。打孔酶也可以以嵌合和/或混排酶的形式存在。打孔酶也可以在細菌感染的治療中單獨使用。
本發明的一個目的是將噬菌體相關裂解酶與嵌合或混排裂解酶結合使用而預防性和治療性處理細菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，用嵌合裂解酶預防性和治療性處理細菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，用混排裂解酶預防性和治療性處理細菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，將打孔酶與噬菌體相關裂解酶結合使用而預防性和治療性處理細菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，單獨用打孔酶預防性和治療性處理細菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，打孔酶為混排打孔酶或嵌合打孔酶，與裂解酶結合或獨立於裂解酶。
本發明(引入美國專利5,604,109的全部內容作為參考)使用感染了特定噬菌體的細菌生物體產生的裂解酶作為防止暴露於其他有感染症狀的人的人群產生疾病的預防性處理，或作為已經由此感染導致患病的人群的治療性處理。本發明是以感染特定噬菌體的細菌的特異性噬菌體裂解酶可以有效破壞導致問題的細菌細胞壁的發現為基礎的。同時，半純化酶缺乏蛋白溶解酶活性因此當存在於細菌細胞壁消化中時對哺乳動物蛋白和組織無破壞性。如前面所討論的，裂解酶可以是嵌合的、混排的或「天然的」，並可以與至少一種打孔酶結合，打孔酶也可以是嵌合的、混排的或「天然的」。
在本分明的一種實施方案中，公開了由肺炎鏈球菌、fasciae鏈球菌和流感嗜血桿菌導致的各種疾病的預防性和治療性處理。在本發明的另一種實施方案中，通過使用裂解酶治療了由利斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌導致的革蘭氏陰性細菌感染。可以通過將裂解酶摻入栓劑灌腸劑、糖漿或其它載體而直接進入感染位點從而治療這些和其它可以感染消化系統的細菌。
在本發明的另一種實施方案中，將裂解酶摻入繃帶而預防或治療燒傷和創傷感染。在本發明的另一種實施方案中，將葡萄球菌和假單孢菌相關噬菌體裂解酶摻入繃帶，從而預防或治療燒傷和創傷感染。
由B族鏈球菌導致的陰道感染可以導致早產和合併症，導致產生新生兒膿毒症。摻入棉塞的B族鏈球菌特異性溶素可以防止出生過程中的新生兒感染而不幹擾正常陰道菌群，因此使女性不會由於抗菌素治療導致酵母菌感染。
在本發明的另一種實施方案中，含嗜血桿菌、假單孢菌和/或葡萄球菌裂解酶的眼藥水可以用於直接治療眼感染。用裂解酶治療比抗生素更快和更有利。
在本發明的另一種實施方案中，將噬菌體相關裂解酶加入載體中置於吸入器而治療或預防局限在口腔和肺黏膜表層的疾病的擴散。可以分離和使用結核的特異性裂解酶。
在本發明的另一種實施方案中，為預防和治療與上呼吸道疾病相關的細菌感染，以糖果、口香糖、錠劑、含片、片劑、粉末、氣溶膠、液體、液體噴霧或牙膏的形式給予裂解酶。
在本發明的另一種實施方案中，種特異性裂解酶可以用於治療與局部或皮膚感染相關的細菌感染，以局部藥膏或霜劑的形式給藥。在本發明的另一種實施方案中，可以以液體形式給予裂解酶。在本發明的另一種實施方案中，可以將溶葡萄球菌素，即溶解金黃色葡萄球菌的酶包括在治療劑中。在本發明的另一種實施方案中，可以將常規抗生素與裂解酶一起包括在治療劑中，可以有或沒有溶葡萄球菌素。也可以在預防或治療劑中包括一種以上的裂解酶。發明詳述治療細菌感染的方法包括用包含有效量的至少一種由細菌特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶修飾譯本的治療劑治療感染，其中裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其組合。裂解酶優選處於具有允許該裂解酶活性的pH的環境。打孔酶可以與修飾裂解酶給藥結合使用。打孔酶可以處於「天然」狀態，可以是混排打孔酶或可以是嵌合裂解酶。
混排和嵌合酶可以酶促或通過重組DNA方法產生。可以用任何方法產生這些酶。
裂解酶可以用於治療或預防流感嗜血桿菌、假單孢菌、肺炎鏈球菌、fasciae鏈球菌、B組鏈球菌、利斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌、彎曲桿菌和其它細菌，以及其結合。這種裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。
例如，如果存在上呼吸道細菌感染，可以用包含有效量的至少一種由感染了細菌特異性噬菌體的細菌產生的裂解酶，以及一種將裂解酶運送到口腔、咽喉或鼻通道的載體的組合物預防性或治療性處理感染。裂解酶優選處於具有允許該裂解酶活性的pH的環境。如果個體暴露於有上呼吸道疾病的人，裂解酶將停留在黏膜表層並防止感染性細菌的集群。
感染上呼吸道系統的細菌的兩個例子是肺炎鏈球菌和流感嗜血桿菌。近年來，越來越多的人，特別是兒童和老人感染或攜帶耐青黴素的肺炎鏈球菌和嗜血桿菌。儘管這些細菌通常是無害寄居在宿主中，它們是機會生物體，當宿主的抵抗力下降時會導致感染。通過去除或減少上呼吸道中這些生物體的數目，可以相當地減少由這些細菌導致的感染。
由噬菌體HP1(類P2噬菌體族的成員之一，與大腸桿菌噬菌體P2和186非常相似，與逆轉錄子噬菌體Ec67有一定的相似性)導致的嗜血桿菌感染產生可以裂解細菌的裂解酶。以前鑑定為N-乙醯-胞壁醯-L-丙氨酸醯胺酶的肺炎鏈球菌裂解酶由Pal噬菌體感染肺炎鏈球菌產生。治療劑可以含這兩種細菌產生的任意一種或全部兩種裂解酶，並可以含其它細菌的其它裂解酶。可以用於預防性和治療性處理鏈球菌感染的組合物包括溶素酶和應用於口腔和鼻腔的黏膜表層的方法(如載體系統或口腔運送方式)，使得置於載體系統或口腔運送方式的酶到達黏膜表層。另一種可以預防性處理的感染是A族鏈球菌，它可以產生通常所說的「鏈球菌」喉。當用C1噬菌體感染C族鏈球菌時，產生特異性裂解A族鏈球菌的溶素酶。
在將溶素酶置於載體系統或口腔運送方式之前或同時，酶優選處於穩定緩衝液的環境中，從而保持約4.0到約9.0，更優選約5.5到約7.5，最優選約6.1的pH範圍。
穩定緩衝液應該允許溶素酶的最佳活性。緩衝液可以是還原劑，如二硫蘇糖醇。穩定緩衝液也可以是或包括金屬螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉鹽，或者它也可以包含磷酸或檸檬酸-磷酸緩衝液。
應用的方式包括，但不限於直接、間接、載體和特殊方式或這些方式的任意結合。裂解酶的直接應用可以通過鼻噴霧、滴鼻液、鼻藥膏、鼻洗液、鼻注射液、鼻填塞材料、支氣管噴霧和吸入器，或通過使用喉錠劑，或通過使用漱口液或含漱劑，或通過使用藥膏間接應用於鼻孔、鼻梁或面部或通過這些和相似應用方法的結合。可以給藥的溶素酶形式包括但不限於錠劑、含片、糖果、注射劑、口香糖、片劑、粉末、噴霧、液體、藥膏和氣溶膠。
加入裂解酶的錠劑、片劑或口香糖可以含糖、玉米漿、各種顏料、無糖增甜劑、調味品；任何粘合劑或其結合。同樣，基於口香糖的產物可以含阿拉伯樹膠、巴西棕櫚臘、檸檬酸、玉米澱粉、食物色素、調味品、無糖增甜劑、明膠、葡萄糖、甘油、樹膠基團、蟲膠、糖精鈉、糖、水、白蠟、纖維素、其它粘合劑及其結合。
錠劑可以進一步包含蔗糖、玉米澱粉、阿拉伯樹膠、黃蓍膠、茴香腦、亞麻子、油性樹脂、礦物油和纖維素、其它粘合劑及其結合。在本發明的另一種實施方案中，使用糖替代物取代葡萄糖、蔗糖或其它糖。
也可以將酶置於鼻噴霧中，其中鼻噴霧為載體。鼻噴霧可以是長效或控釋噴霧，可以通過本領域公知的方法生產。也可以使用吸入劑，使得噬菌體酶可以到達支氣管腔更下部，包括進入肺。
裂解酶的任何載體都可以通過常規方法生產。然而，優選漱口液或類似產品中不含醇，從而避免酶變性。同樣，當在生產過程中將裂解酶置於止咳藥水、口香糖、糖果或錠劑中時，這种放置應該在錠劑或糖果變硬之前但在止咳片劑或糖果稍微冷卻之後進行，以避免酶的熱變性。
可以將酶以液態或凍幹狀態加入這些物質，於是當它遇到體液如唾液時可以被增溶。酶也可以以微團或脂質體存在。
治療感染的裂解酶有效劑量比或量將部分取決於裂解酶是治療性還是預防性使用，接受者暴露於感染性細菌的持續時間、個體的大小和體重等。使用含酶組合物的持續時間也取決於是否用於預防目的，其中可以是每小時、每天或每周，短期使用，或者是否用於治療目的，其中將需要更強的使用組合物的方案，使作用可以持續數小時、天或周，和/或以日為基礎，或在每日中的定時間隔中。使用的任何劑型應該在最少時間提供最小數目的單位。確信可以提供有效量或劑量酶的酶活性單位的濃度在鼻和口通道溼性或潮溼環境液體中可以為約100單位/ml到約100,000單位/ml，並可能為約100單位/ml到約10,000單位/ml。更具體地說，暴露於活性酶單位的時間可能影響所需每毫升活性酶單位的濃度。應該注意分類為「長」或「慢」釋放載體(如，例如，某些鼻噴霧或錠劑)的載體可以具有或提供低濃度的每毫升活性(酶)單位，但持續時間長，而「短」或「快」釋放載體(如，例如，含漱劑)可以具有或提供高濃度的每毫升活性(酶)單位，但持續時間短。每毫升的活性單位量和暴露持續時間取決於感染的性質，處理為預防性還是治療性，以及其它變量。
儘管此處理可以用於任何哺乳動物種，本產物優選用於人。
此組合物和方法也可以用於治療呼吸道鏈球菌A感染。當將此組合物用於鏈球菌A感染時，溶素噬菌體酶應該用於預防鏈球菌感染。同樣，在本發明的另一種實施方案中，此方法可以用於治療，並優選用於結核的預防性處理。在本發明的一種優選實施方案中，將結核桿菌噬菌體相關裂解酶置於吸入器中的載體。載體可以是無菌水或水基質，或任何其它用於吸入器中將藥物分散到支氣管腔中的載體。結核的特異性噬菌體相關裂解酶接受與其它裂解酶的噬菌體相關裂解酶相同的條件。具體說，在將酶置於載體系統或口腔運送方式之前或同時，優選使酶處於穩定緩衝液環境，從而保持約4.0到約9.0的pH範圍。
穩定緩衝液應該允許裂解酶的最佳活性。緩衝液可以是還原劑，如二硫蘇糖醇。穩定緩衝液也可以是或包括金屬螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉鹽，或者它也可以包含磷酸或檸檬酸-磷酸緩衝液。
為用於結核的預防性和治療性處理，結核相關的噬菌體相關裂解酶可以通過直接、間接、載體和特殊方式或這些方式的任意結合而應用。裂解酶的直接應用可以通過鼻噴霧、滴鼻液、鼻藥膏、鼻洗液、鼻注射液、鼻填塞材料、支氣管噴霧和吸入器，或通過使用喉錠劑，或通過使用漱口液或含漱劑，或通過使用藥膏間接應用於鼻孔、鼻梁或面部或通過這些和相似應用方法的結合。可以給藥的溶素酶形式包括但不限於錠劑、含片、糖果、注射劑、口香糖、片劑、粉末、噴霧、液體、藥膏和氣溶膠。對於結核的治療性處理，支氣管噴霧和氣溶膠是最有益的，因為這些載體，或分散組合物的方法，允許裂解酶到達支氣管和肺。適當的運輸載體可以附著於酶，將酶跨膜運送到細菌位點。
加入裂解酶的錠劑、片劑或口香糖可以含糖、玉米漿、各種顏料、無糖增甜劑、調味品，任何粘合劑或其結合。同樣，基於口香糖的產物可以含阿拉伯樹膠、巴西棕櫚臘、檸檬酸、玉米澱粉、食物色素、調味品、無糖增甜劑、明膠、葡萄糖、甘油、樹膠基團、蟲膠、糖精鈉、糖、水、白蠟、纖維素、其它粘合劑及其結合。
錠劑可以進一步包含蔗糖、玉米澱粉、阿拉伯樹膠、黃蓍膠、茴香腦、亞麻子、油性樹脂、礦物油和纖維素、其它粘合劑及其結合。在本發明的另一種實施方案中，使用糖替代物取代葡萄糖、蔗糖或其它糖。然而，為處理肺部細菌感染，優選使用載體中有裂解酶的吸入器載體。
裂解酶的另一種用途是治療消化道細菌感染。治療消化道細菌感染的方法包含用含有效量的至少一種由細菌特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶，以及一種運送該裂解酶到消化道的載體的組合物處理細菌。在本發明的一種優選實施方案中，被治療的細菌感染是由選自利斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌的革蘭氏陰性菌導致的。然而，當使用適當裂解酶時，此方法和組合物將有效處理其它細菌。用於消化道的裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。
在一種優選實施方案中，載體選自栓劑灌腸劑、糖漿或腸衣片。這些建議的載體可以用常規方法製作。然而，它們的生產過程中的唯一不同就是置於載體中的酶必須不能變性。因此，酶應該被摻入不含醇，並且被降溫到不導致酶變性的溫度的載體。酶可以在置於栓劑、糖漿或腸衣片之前以凍幹狀態摻入，或可以以脂質體形式摻入。置於組合物或載體中的酶應該處於具有允許裂解酶活性的pH的環境中。因此，此組合物的pH優選保持在約2到約11的範圍，更優選在約4.0到約9.0的範圍，甚至更優選在約5.5到約7.5的範圍。如前面所描述的另一種裂解酶一樣，可以使用緩衝液調節pH。緩衝液可以含還原劑，更具體說是二硫蘇糖醇。緩衝液也可以是金屬螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉鹽，或者緩衝液可以包含檸檬酸-磷酸緩衝液。對於本專利描述的所有組合，組合物可以進一步包括殺菌劑或抑菌劑作為防腐劑。
裂解酶優選以胃腸道溼性環境中每毫升液體約100到約500,000活性酶單位的濃度存在，優選為每毫升液體約100到約100,000活性酶單位，優選以胃腸道溼性環境中每毫升液體約100到約10,000活性酶單位的濃度存在。
栓劑是本領域中公知的，由甘油、脂肪酸和在體溫下溶解的相似類型的物質製作。當栓劑溶解時，噬菌體相關裂解酶將被釋放。
裂解酶的另一種組合物和用途是用於皮膚燒傷和創傷處細菌感染的治療性或預防性處理。此組合物包含有效量的至少一種由感染了細菌特異性噬菌體的細菌產生的裂解酶和運送至少一種裂解酶到創傷皮膚的載體。用於局部治療燒傷的裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。應用裂解酶的方式包括許多不同類型的載體及其結合，包括但不限於水成液、醇基液、水溶性凝膠、洗液、藥膏、非水成基質、礦物油基質、礦物油和礦脂混合物、羊毛脂、脂質體、蛋白載體如血清白蛋白或明膠、粉末狀纖維素carmel，及其結合。含治療劑的載體的運送方式包括但不限於塗劑、噴霧、控釋貼劑、吸收液體的擦布，及其結合。裂解酶可以直接或在其它載體之一中應用於繃帶。繃帶可以是溼的或乾燥的，其中酶在繃帶上以凍幹形式存在。此應用方法對治療燒傷最有效。
本發明組合物的載體可以含包括聚合物增稠劑、水、防腐劑、活性表面活性劑或乳化劑、抗氧化劑、防曬劑和溶劑或混合溶劑系統的半固體和類凝膠的載體。美國專利5,863,560(Osborne)討論了可以幫助皮膚暴露於藥物的許多不同載體的結合。
可以使用的聚合物增稠劑包括本領域技術人員所公知的，如常用於化妝品和製藥行業的親水和水醇膠凝劑。親水或水醇膠凝劑優選包含″CARBOPOL.RTM.″(B.F.Goodrich，Cleveland，Ohio)，″HYPAN.RTM.″(Kingston Technologies，Dayton，N.J.)，″NATROSOL.RTM″(Aqualon，Wilmington，Del.)，″KLUCEL.RTM.″(Aqualon，Wilmington，Del.)，或″STABILEZE.RTM.″(ISPTechnologies，Wayne，N.J.)。膠凝劑優選包含組合物重量的約0.2％到約4％。更具體說，″CARBOPOL.RTM″的優選組合物重量百分比為約0.5％到2％，″NATROSOL.RTM″和″KLUCEL.RTM.″的優選組合物重量百分比為約0.5％到4％。″HYPAN.RTM.″和″STABILEZE.RTM.″的優選組合物重量百分比為約0.5％到4％。″CARBOPOL.RTM.″是通用名為卡波姆(carbomer)的多種交聯丙烯酸聚合物之一。這些聚合物溶解於水並在用腐蝕性物質如氫氧化鈉、氫氧化鉀、三乙醇胺、或胺鹼中和後形成透明或略模糊的凝膠。″KLUCEL.RTM.″是一種分散於水並在完全水化後形成均一凝膠的纖維素聚合物。其它優選的凝膠聚合物包括羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、MVE/MA癸二烯交聯聚合物、PVM/MA共聚物，或其結合。
防腐劑也可以用於本發明並優選包含總組合物約0.05％到約0.5％wt％。防腐劑的使用保證如果產物被微生物汙染，配方將防止或減少微生物生長。本發明中的一些有用的防腐劑包括對羥苯甲酸甲酯、對羥苯甲酸丙酯、對羥苯甲酸丁酯、氯二甲苯酚、苯甲酸鈉、DMDM乙內醯脲、3-碘-2-丙基丁基氨基甲酸酯，山梨酸鉀、雙氯苯雙胍己烷二葡萄糖酸，或其結合。
二氧化鈦可以用作防曬劑作為對光過敏的預防。其它的防曬劑包括肉桂酸甲酯。另外，BHA可以用作抗氧化劑，以及防止乙氧基二甘醇和/或氨苯碸由於氧化而變色。另一種抗氧化劑為BHT。
用於本發明所有實施方案中的藥物包括抗微生物劑、抗炎劑、抗病毒劑、局部麻醉劑、皮質類固醇、破壞性治療劑、抗真菌劑和抗雄激素物質。在痤瘡的治療中，可以使用的活性藥物包括抗微生物劑，特別是有抗炎特性的抗微生物劑，如氨苯碸、紅黴素、二甲胺四環素、四環素、克林黴素和其它抗生素。抗生素的優選重量百分比為0.5％～10％。
局部麻醉劑包括丁卡因、鹽酸丁卡因、利多卡因、鹽酸利多卡因、達克羅寧、鹽酸達克羅寧、鹽酸二甲異喹、待布卡因、鹽酸待布卡因、布坦本、和鹽酸普拉莫星。局部麻醉劑的優選濃度為總組合物的約0.025～5％wt％。麻醉劑如苯坐卡因也可以以優選濃度約2～25wt％使用。
可以使用的皮質類固醇包括二丙酸倍他米松、膚輕鬆、戊酸倍他米松、去炎松、丙酸氯倍他索、去氧米松、二乙酸二氟松、醋酸環戊酮縮去炎松、丙酮縮氟氫羥龍、戊酸氫化可的松、丁酸氫化可的松和丙酮縮羥強的松龍，推薦濃度為約0.01wt％到約1.0wt％。優選皮質類固醇如氫化可的松或乙酸甲基強的松龍濃度為約0.2wt％到約5.0wt％。
也可以使用破壞性治療劑如水楊酸或乳酸。優選濃度為約2wt％到約40wt％。斑蝥素優選以約5wt％到約30wt％的濃度使用。可以用於本發明的典型抗真菌劑及它們的優選重量濃度包括硝酸奧昔康唑(0.1％到5.0％)，環吡酮胺(0.1％到5.0％)，酮康唑(0.1％到5.0％)，硝酸咪康唑(0.1％到5.0％)，硝酸布託康唑(0.1％到5.0％)。對於脂溢性皮炎、多毛症、痤瘡和脫髮的局部治療，活性藥物可以包括優選重量百分比為約0.5％到10％的抗雄激素藥物如氟利坦或非那甾胺。
一般說來，用幾種藥物的結合包括抗生素與局部麻醉劑結合，如硫酸多鏈絲黴素B和硫酸新黴素與丁卡因結合為局部抗生素凝膠，以便提供抗感染的預防和減輕疼痛。另一個例子是使用長壓定與皮質類固醇如二丙酸倍他米松結合治療脫髮。抗炎藥如可的松與抗真菌劑如酮康唑結合治療癬感染也是一個例子。
在一種實施方案中，本發明包含一種皮膚病學組合物，它包含約0.5％-10％的卡波姆和約0.5％-10％的溶解狀態和微粒狀態的藥物。溶解的藥物具有跨過角質層的能力，而微粒狀藥物不能。加入胺鹼、鉀、氫氧化物溶液或氫氧化鈉溶液完成凝膠的形成。更具體說，藥物可以包括一種有抗炎特性的抗菌劑氨苯碸。微粒與溶解氨苯碸的優選比例為5或更小。
在另一種實施方案中，本發明包含約1％的卡波姆，約80-90％的水，約10％的乙氧基二甘醇，約0.2％的對羥基苯甲酸甲酯，約0.3％到3.0％的氨苯碸，包括微粒氨苯碸和溶解氨苯碸，以及約2％的腐蝕性物質。更具體說，卡波姆可以包括″CARBOPOL.RTM.980″，腐蝕性物質可以包括氫氧化鈉溶液。
在一種優選實施方案中，此組合物包含氨苯碸和乙氧基二甘醇，允許微粒藥物與溶解藥物的最優比例。此比例決定了與保持在角質層內或在其上面的藥物量相比運送的在角質層上區域作用藥物的量。氨苯碸和乙氧基二甘醇系統可以包括與″CARBOPOL.RTM.″凝膠聚合物、對羥基苯甲酸甲酯、對羥基苯甲酸丙酯、二氧化鈦、BHA和中和″CARBOPOL.RTM.″的腐蝕性物質結合的純淨水。
裂解酶的任何載體可以通過常規方法生產。然而，如果醇用於載體，酶應該以微團、脂質體或「反」脂質體存在，預防酶變性。同樣，當裂解酶置於載體，並且載體正在或已被加熱，這种放置應在載體稍微冷卻之後進行，以避免酶熱變性。在本發明的一種優選實施方案中，載體為無菌的。
酶可以以液體形式或以凍幹狀態加入這些物質，於是它遇到液體時將被溶解。
治療感染的裂解酶的有效劑量比或數量，以及治療持續時間將部分取決於感染的嚴重程度、接受者暴露於感染性細菌的持續時間、感染皮膚或組織的平方釐米數、感染深度、感染的嚴重程度、以及各種其它變量。可以將組合物應用於任何部位，從每日一次到幾次，並可以短期或長期應用。使用可以持續數日或數周。使用的任何劑型應該在最少時間提供最小數目的單位。確信可以提供有效數量或劑量酶的酶活性單位的濃度可以為約100單位/ml組合物到約500,000單位/ml組合物，優選為約1000單位/ml組合物到約100,000單位/ml組合物，最優選為約10,000單位/ml組合物到約100,000單位/ml組合物。每毫升的活性單位的量和暴露持續時間取決於感染性質，以及載體允許裂解酶具有的接觸量。應該記得酶在液體環境中時作用最強。所以，酶的效率部分與載體收集的水分相關。在另一種優選實施方案中，一種溫和的表面活性劑以有效量加強裂解酶的治療效果。適當的溫和表面活性劑包括，但不限於，聚氧乙烯山梨醇和脂肪酸(Tween系列)的酯，辛基苯氧基聚乙氧基乙醇(Triton-X系列)，n-辛基-β-D-吡喃葡萄糖苷，n-辛基-β-D-硫吡喃葡萄糖苷，n-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷，n-癸基-β-D-吡喃葡萄糖苷，以及生物學上存在的表面活性劑，如脂肪酸、甘油酯、單甘油酯、脫氧膽酸鹽和脫氧膽酸酯。
為促進感染的治療，治療劑可以進一步包括至少一種也可以加強裂解酶殺菌活性的補充劑。補充劑可以是以有效協同增強裂解酶治療作用的量存在的青黴素、合成青黴素桿菌肽、甲氧苯青黴素、頭孢菌素、多粘菌素、氯頭孢菌素、頭孢羥氨苄、頭孢孟多酯鈉、頭孢唑啉、頭孢克肟、頭孢美唑、頭孢尼西、頭孢哌酮、頭孢雷特、頭孢噻肟、頭孢氨噻、頭孢替坦、頭孢西丁、頭孢泊肟丙酯、頭孢他定、頭孢去甲噻肟、頭孢曲松、cefriaxone moxalactam、頭孢氨呋肟、頭孢氨苄、頭孢菌素C、頭孢菌素C鈉鹽、頭孢噻酚、頭孢噻酚鈉鹽、頭孢吡硫、頭孢拉定、頭孢呋肟酯、二水合頭孢噻酚、羥羧氧醯胺菌素、loracarbef mafate，螯合劑、及其任何結合。
另外，治療劑可以進一步包含用於治療金黃色葡萄球菌的溶葡萄球菌素。粘液溶解肽，如溶葡萄球菌素被認為在治療人金黃色葡萄球菌感染(Schaffner et al.，Yale J.Biol. Med.，39230(1967))和由金黃色葡萄球菌導致的牛乳腺炎(Sears et al.，J.Dairy Science，71(Suppi.1)244(1988))中有效。一種溶血性葡萄球菌的基因產物溶葡萄球菌素，通過酶促降解細胞壁的聚甘氨酸交聯對金黃色葡萄球菌發揮抑菌和殺菌作用(Browder et al.，Res.Comn.，19393400(1965))。美國專利3,278,378描述了從葡萄球菌溶解性葡萄球菌(S.Staphylolyticus)，後來命名為溶血性葡萄球菌的培養基中產生溶葡萄球菌素的發酵方法。其它產生溶葡萄球菌素的方法進一步描述於美國專利3,398,056和3,594,284。後來對溶葡萄球菌素的基因進行了克隆和測序(Recsei et al.，Proc.Natl.Acad.Sc.USA，841127-1131(1987))。重組粘液溶解殺菌蛋白，如r溶葡萄球菌素可以潛在解決與當前抗生素治療相關的問題，這是由於它的靶特異性、低毒性和可能的生物活性基團還原。另外，溶葡萄球菌素對非分裂細胞也是有活性的，而大多數抗生素要求活躍分裂的細胞介導它們的作用(Dixon et al.，Yale J.Biology and Medicine，4162-68(1968))。溶葡萄球菌素和溶素酶的結合可以在列出的抗生素存在或不存在時使用。在同一治療劑中同時使用溶葡萄球菌素和溶素酶有一定程度增加的意義。通常，當機體有細菌感染時，一種細菌導致的感染使機體變弱或改變機體的菌群，允許其它潛在病原菌感染機體。有時共同感染機體的細菌之一是金黃色葡萄球菌。許多金黃色葡萄球菌株產生青黴素酶，使得葡萄球菌、鏈球菌和其它革蘭氏陽性細菌不被常規抗生素殺滅。因此，溶素和溶葡萄球菌素的使用，可能與抗生素結合，可以作為細菌感染的最迅速和有效的處理。在另一種優選實施方案中，本發明可以包括變溶菌素和溶菌酶。
在本發明的優選實施方案中，假單孢菌、葡萄球菌和鏈球菌的裂解酶可以一起或單獨摻入載體或用於燒傷病人的繃帶，或用於溶液或霜載體。
裂解酶的另一種用途是用於陰道感染的預防或治療性處理。此處理包含用有效量的至少一種由細菌特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶治療陰道感染，其中裂解酶被摻入載體放置於陰道。用於治療陰道感染的裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。優選載體為棉塞或陰道灌洗液。儘管不夠有效，墊也可用作載體。儘管可以用此組合物和方法治療任何數目的細菌，認為此治療組合物和方法的最優用途是治療大腸桿菌和鏈球菌B感染。由B族鏈球菌導致的陰道感染可以引起新生兒腦膜炎，導致腦損傷和早產死亡。摻入棉塞的B族鏈球菌的特異性裂解酶將去除B族生物體而不幹擾正常菌群，使婦女在抗生素治療後不會被酵母菌感染。儘管治療性使用也是可行的，裂解酶在陰道中的使用最好提供預防性作用。
為產生含酶的墊或棉塞，裂解酶可以在溶液中應用於棉塞並允許乾燥。可以用本領域公知的其它方法將裂解酶摻入墊或棉塞，包括凍幹或噴霧。也可以使棉塞或墊保持略微潮溼，並置於密封包裝材料中直到準備使用。在這種情況下，殺菌和抑菌化合物和抑制劑應該存在於棉塞和墊中。用於將裂解酶摻入墊或棉塞的方法可以是藥品摻入領域中公知的方法之一。在本發明的另一種實施方案中，插入裂解酶的陰道栓可以是標準陰道栓，由甘油酯、藻酸鹽、澱粉、其它標準粘合劑及其任意結合。
當用棉塞作為載體時，最好將棉塞插入陰道並使其留在其中最多到12小時，從而使酶在陰道中分布。
對於其它裂解酶，pH優選保持在約4.0到約9.0的範圍，更優選保持在約5.5到約7.5的範圍。象前面描述的另一種裂解酶一樣，可以通過使用緩衝液調節pH。緩衝液可以含還原劑，更具體說是二硫蘇糖醇。緩衝液也可以含金屬螯合劑，如乙二胺四乙酸二鈉鹽或緩衝液可以是檸檬酸-磷酸緩衝液。對於本專利描述的所有組合物，組合可以進一步包括殺菌劑或抑菌劑作為防腐劑。
裂解酶優選以陰道溼性環境中每毫升液體約100到約500,000活性酶單位的濃度存在，優選每毫升液體約100到約100,000活性酶單位，優選以陰道溼性環境中每毫升液體約100到約10,000活性酶單位的濃度存在。
本發明的另一種用途是用於眼感染的預防和治療性處理。治療的方法包括給予含有效量的至少一種由細菌特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶和可以安全應用於眼的載體的眼藥水，其中載體含裂解酶。在本發明的一種優選實施方案中，治療的細菌為嗜血桿菌或葡萄球菌。眼藥水以等滲溶液的形式存在。應該調節溶液的pH，使得沒有眼刺激，眼刺激會導致其它生物體感染的可能性，並可能損害眼。儘管pH範圍應該與其它裂解酶的pH範圍相同，最適pH應該是6.0到7.5。同樣，用該也使用前面描述的用於其它裂解酶的緩衝液類型。可以將其它適用於眼藥水的抗生素加入含裂解酶的組合物。也可以加入殺菌和抑菌化合物。如前面所敘述的，裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。
應記住所有酶都可用於酶的特異性細菌的預防和治療性處理。
也應該記住載體可以有一種以上裂解酶。例如，咽喉錠劑可以僅含一種裂解酶(裂解導致「鏈球菌」喉的鏈球菌A株)，或者它也可以包括嗜血桿菌的裂解酶。同樣，治療燒傷和創傷，或皮膚感染的載體可以僅含一種裂解酶，或治療假單孢菌、鏈球菌、葡萄球菌或其它一些細菌的裂解酶的結合。
裂解酶也可以用於抗齲齒。具體地說，可以將突變鏈球菌的特異性裂解酶摻入牙膏或漱口液。同樣，也可將裂解酶摻入口香糖或錠劑。可以使用任何其它使口腔、牙床和牙齒暴露於裂解酶的載體。
也可以在牙粉中以凍幹或乾燥形式摻入裂解酶。如果裂解酶將用於漱口液，漱口液優選不含醇，以免酶變性。當與牙膏或漱口液混合時，酶也可以以脂質體的形式存在。每毫升牙膏或漱口液中的酶單位濃度可以為100單位/毫升組合物到約500,000單位/毫升組合物，優選為1000單位/毫升組合物到約100,000單位/毫升組合物，最優選為10,000單位/毫升組合物到約100,000單位/毫升組合物。牙膏和漱口液的pH應該在允許酶的最優作用的範圍，並且不使牙膏或漱口液的使用者感到不適。同樣，與裂解酶的其它用途一樣，用於治療齲齒的裂解酶可以由嵌合和/或混排裂解酶補充，或者可以自身為嵌合和/或混排裂解酶。同樣，可以包括打孔酶，它也可以是嵌合和/或混排裂解酶。
根據上述教導，本發明的許多修飾和變化都是可能的。所以，應該理解，在從屬權利要求的範圍內，應該保護本發明，而不需要特別描述。
權利要求
1.一種用於細菌感染的預防性或治療性處理的方法，包含給予感染部位有效量的至少一種由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
2.權利要求1的方法，進一步包含給予至少一種打孔酶和至少一種裂解酶。
3.權利要求2的方法，其中所述至少一種打孔酶為混排打孔酶。
4.權利要求2的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
5.權利要求1的方法，進一步包含至少一種既不是混排裂解酶也不是嵌合裂解酶的裂解酶。
6.權利要求1的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到感染部位的載體中運送修飾裂解酶。
7.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於流感嗜血桿菌的治療。
8.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於假單孢菌的治療。
9.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於肺炎鏈球菌的治療。
10.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於fasciae鏈球菌的治療。
11.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於利斯特氏菌的治療。
12.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於沙門氏菌的治療。
13.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於大腸桿菌的治療。
14.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於彎曲桿菌的治療。
15.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於假單孢菌的治療。
16.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於突變鏈球菌的治療。
17.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於結核桿菌的治療。
18.權利要求1的方法，其中至少一種修飾裂解酶用於鏈球菌的治療。
19.權利要求6的方法，其中載體為吸入劑。
20.權利要求6的方法，其中載體為局部霜劑。
21.權利要求6的方法，其中載體為鼻噴霧。
22.權利要求6的方法，其中載體為糖漿。
23.權利要求6的方法，其中載體為片劑。
24.權利要求6的方法，其中載體為棉塞。
25.權利要求6的方法，其中載體為栓劑。
26.權利要求6的方法，其中載體為眼藥水。
27.權利要求6的方法，其中載體為糖果。
28.權利要求6的方法，其中載體為口香糖。
29.權利要求6的方法，其中載體為錠劑。
30.權利要求6的方法，其中載體為含片。
31.權利要求6的方法，其中載體為粉末。
32.權利要求6的方法，其中載體為氣溶膠。
33.權利要求6的方法，其中載體為液體。
34.權利要求6的方法，其中載體為液體噴霧。
35.權利要求6的方法，其中載體為繃帶。
36.權利要求6的方法，其中載體為牙膏。
37.權利要求6的方法，其中載體為漱口液。
38.一種用於上呼吸道細菌感染的預防性或治療性處理的方法，包含給予含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
39.權利要求38的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述的修飾裂解酶。
40.權利要求39的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
41.權利要求39的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
42.權利要求38的方法，進一步包含至少一種既不是混排裂解酶也不是嵌合裂解酶的裂解酶。
43.權利要求38的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到口腔、咽喉或鼻通道的載體中運送修飾裂解酶。
44.權利要求38的方法，其中被治療的細菌為肺炎鏈球菌。
45.權利要求38的方法，其中被治療的細菌為流感嗜血桿菌。
46.權利要求43的方法，其中載體為糖果、口香糖、錠劑、含片、片劑、粉末、氣溶膠、液體或液體噴霧。
47.權利要求38的方法，其中組合物進一步包含使組合物pH保持在約4.0～約9.0的緩衝液。
48.權利要求48的方法，其中緩衝液使組合物pH保持在約5.5～約7.5。
49.權利要求47的方法，其中緩衝液包含還原劑。
50.權利要求49的方法，其中還原劑為二硫蘇糖醇。
51.權利要求47的方法，其中緩衝液包含金屬螯合劑。
52.權利要求51的方法，其中金屬螯合劑為乙二胺四乙酸二鈉鹽。
53.權利要求47的方法，其中緩衝液為檸檬酸-磷酸緩衝液。
54.權利要求38的方法，其中所述至少一種修飾裂解酶為凍幹的。
55.權利要求43的方法，其中載體進一步包含增甜劑。
56.權利要求38的方法，進一步包含給予鼻或口通道溼性環境中每毫升液體約100到約100,000活性酶單位的濃度。
57.權利要求56的方法，進一步包含給予鼻或口通道溼性環境中每毫升液體約100到約10,000活性酶單位的濃度。
58.權利要求38的方法，進一步包含將組合物用於鏈球菌感染的治療性處理。
59.權利要求38的方法，進一步包含將組合物用於鏈球菌感染的預防性處理。
60.權利要求38的方法，進一步包含將組合物用於嗜血桿菌感染的預防性處理。
61.權利要求38的方法，進一步包含將組合物用於嗜血桿菌感染的治療性處理。
62.一種用於上呼吸道細菌感染的預防性或治療性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合；以及一種運送所述至少一種裂解酶到口腔、咽喉或鼻通道的載體。
63.權利要求62的組合物，進一步包含一種打孔酶。
64.權利要求63的組合物，其中打孔酶為混排打孔酶。
65.權利要求63的組合物，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
66.權利要求62的組合物，其中被治療的細菌為肺炎鏈球菌。
67.權利要求62的組合物，其中被治療的細菌為流感嗜血桿菌。
68.權利要求62的組合物，其中載體選自糖果、口香糖、錠劑、含片、片劑、粉末、氣溶膠、液體或液體噴霧。
69.權利要求62的組合物，其中組合物進一步包含使組合物pH保持在約4.0～約9.0的緩衝液。
70.權利要求62的組合物，其中緩衝液使組合物pH保持在約5.5～約7.5。
71.權利要求62的組合物，進一步包含殺菌或抑菌劑作為防腐劑。
72.權利要求62的組合物，其中修飾裂解酶為凍幹的。
73.權利要求62的組合物，其中所述至少一種裂解酶以鼻或口通道溼性環境中每毫升液體約100到約100,000活性酶單位的濃度存在。
74.權利要求71的組合物，其中所述至少一種裂解酶以鼻或口通道溼性環境中每毫升液體約100到約10,000活性酶單位的濃度存在。
75.一種用於消化道細菌感染的治療的方法，包含給予消化道含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
76.權利要求75的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
77.權利要求76的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
78.權利要求76的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
79.權利要求75的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到消化道的載體中運送所述裂解酶。
80.權利要求75的方法，其中細菌感染由選自利斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌的革蘭氏陰性細菌導致。
81.權利要求73的方法，其中載體選自栓劑灌腸劑、糖漿和腸衣片。
82.一種用於治療消化道細菌感染的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合；以及一種運送裂解酶到消化道的載體。
83.權利要求82的組合物，進一步包含一種打孔酶。
84.權利要求83的組合物，其中打孔酶為混排打孔酶。
85.權利要求84的組合物，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
86.權利要求82的組合物，其中治療的細菌選自利斯特氏菌、沙門氏菌、大腸桿菌和彎曲桿菌。
87.權利要求82的組合物，其中運送所述至少一種修飾裂解酶到消化道的載體選自栓劑灌腸劑、糖漿和腸衣片。
88.權利要求82的組合物，其中組合物進一步包含使組合物pH保持在約4.0～約9.0的緩衝液。
89.權利要求82的組合物，其中所述至少一種修飾裂解酶以消化道溼性環境中每毫升液體約100到約100,000活性酶單位的濃度存在。
90.權利要求89的組合物，其中所述至少一種修飾裂解酶以消化道溼性環境中每毫升液體約100到約10,000活性酶單位的濃度存在。
91.一種用於皮膚燒傷或創傷細菌感染的治療性或預防性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合；以及一種運送所述至少一種裂解酶到皮膚的載體。
92.權利要求91的組合物，進一步包含一種打孔酶。
93.權利要求92的組合物，其中打孔酶為混排打孔酶。
94.權利要求92的組合物，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
95.權利要求91的組合物，其中載體為繃帶。
96.權利要求91的組合物，進一步包含將此組合物用於細菌感染的預防性處理。
97.權利要求91的組合物，進一步包含將此組合物用於細菌感染的治療性處理。
98.權利要求91的組合物，其中治療的細菌為假單孢菌。
99.權利要求91的組合物，其中治療的細菌為葡萄球菌。
100.權利要求91的組合物，其中治療的細菌為葡萄球菌和假單孢菌。
101.一種治療性或預防性處理皮膚燒傷或創傷細菌感染的方法，包含給予皮膚感染區含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
102.權利要求101的組合物，進一步包含一種打孔酶。
103.權利要求102的組合物，其中打孔酶為混排打孔酶。
104.權利要求102的組合物，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
105.權利要求101的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到皮膚的載體中運送所述至少一種修飾裂解酶。
106.權利要求105的方法，其中載體為繃帶。
107.權利要求101的方法，進一步包含將此組合物用於細菌感染的預防性處理。
108.權利要求101的方法，進一步包含將此組合物用於細菌感染的治療性處理。
109.權利要求101的方法，其中治療的細菌為假單孢菌。
110.權利要求101的方法，其中治療的細菌為葡萄球菌。
111.權利要求101的方法，其中治療的細菌為葡萄球菌和假單孢菌。
112.一種預防性或治療性處理陰道感染的方法，包含給予陰道含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
113.權利要求112的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
114.權利要求11 3的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
115.權利要求113的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
116.權利要求111的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到陰道的載體中運送修飾裂解酶。
117.權利要求115的方法，其中載體被放置於陰道。
118.權利要求116的方法，其中載體為棉塞。
119.權利要求116的方法，其中載體為墊。
120.權利要求116的方法，其中載體為灌洗液。
121.權利要求112的方法，其中裂解酶特異性針對B族鏈球菌。
122.一種用於陰道感染的預防性或治療性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合，以及一種運送裂解酶到陰道的載體。
123.權利要求112的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
124.權利要求123的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
125.權利要求122的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
126.權利要求122的組合物，其中載體為棉塞。
127.權利要求122的組合物，其中載體為灌洗液。
128.權利要求122的組合物，其中載體為墊。
129.權利要求122的組合物，其中裂解酶特異性針對B族鏈球菌。
130.一種預防性或治療性處理眼感染的方法，包含給予眼含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
131.權利要求130的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
132.權利要求131的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
133.權利要求131的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
134.權利要求130的方法，進一步包含在適於運送裂解酶到眼的載體中運送修飾裂解酶。
135.權利要求130的方法，其中治療的細菌為嗜血桿菌。
136.權利要求130的方法，其中治療的細菌為葡萄球菌。
137.權利要求134的方法，其中載體為眼藥水。
138.權利要求134的方法，其中載體為洗眼液。
139.權利要求138的方法，其中該溶液為等滲溶液。
140.一種用於眼感染的預防性或治療性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合，以及一種運送裂解酶到眼的載體。
141.權利要求140的組合物，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
142.權利要求141的組合物，其中打孔酶為混排打孔酶。
143.權利要求141的組合物，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
144.權利要求140的組合物，其中治療的細菌為嗜血桿菌。
145.權利要求140的組合物，其中治療的細菌為葡萄球菌。
146.權利要求140的組合物，其中載體為等滲溶液。
147.權利要求146的組合物，其中等滲溶液在眼藥水分配器中。
148.一種預防性或治療性處理皮膚感染的方法，包含將含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本的組合物局部給予皮膚感染區，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合。
149.權利要求148的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
150.權利要求149的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
151.權利要求149的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
152.權利要求148的方法，進一步包含在可藥用載體中運送組合物。
153.權利要求152的方法，其中載體選自水成液、醇基質、水溶性凝膠、洗液、藥膏、非水成基質、礦物油基質、礦物油和礦脂的混合物、羊毛脂、脂質體、親水膠凝劑、交聯丙烯酸聚合物(卡波姆)、纖維素聚合物、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、MVE/MA癸二烯交聯聚合物、PVM/MA共聚物，及其任意結合。
154.權利要求152的方法，其中組合物的運送形式選自噴霧、塗劑、控釋貼劑、吸收液體的擦布及其任意結合。
155.權利要求148的方法，其中裂解酶處於具有允許溶素酶活性的pH的環境。
156.權利要求155的方法，其中進一步包含使組合物pH保持在約4.0～約9.0的緩衝液。
157.權利要求148的方法，其中組合物進一步包含以有效加強裂解酶作用的量存在的溫和表面活性劑。
158.權利要求148的方法，其中組合物進一步包含至少一種加強裂解酶殺菌活性的補充劑，該補充劑選自以有效協同增強裂解酶作用的量存在的青黴素、合成青黴素桿菌肽、甲氧苯青黴素、頭孢菌素、多粘菌素、氯頭孢菌素、頭孢羥氨苄、頭孢孟多酯鈉、頭孢唑啉、頭孢克肟、頭孢美唑、頭孢尼西、頭孢哌酮、頭孢雷特、頭孢塞肟、頭孢氨塞、頭孢替坦、頭孢西丁、頭孢泊肟丙酯、頭孢他定、頭孢去甲噻肟、頭孢曲松、cefriaxone moxalactam、頭孢氨呋肟、頭孢氨苄、頭孢菌素C、頭孢菌素C鈉鹽、頭孢噻酚、頭孢噻酚鈉鹽、頭孢吡硫、頭孢拉定、頭孢呋肟酯、二水合頭孢噻酚、羥羧氧醯胺菌素、loracarbef.mafate，螯合劑。
159.權利要求148的方法，其中組合物進一步包含治療金黃色葡萄球菌的溶葡萄球菌素。
160.權利要求148的方法，其中裂解酶以每毫升約100到約500,000單位的量存在。
161.一種治療皮膚感染的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合；及載體。
162.權利要求161的組合物，其中載體選自水成液、醇基質、水溶性凝膠、洗液、藥膏、非水成基質、礦物油基質、礦物油和礦脂的混合物、羊毛脂、脂質體、親水膠凝劑、交聯丙烯酸聚合物(卡波姆)、纖維素聚合物、羥乙基纖維素、羧甲基纖維素、MVE/MA癸二烯交聯聚合物、PVM/MA共聚物，及其任意結合。
163.權利要求161的組合物，其中組合物以選自噴霧、塗劑、控釋貼劑、吸收液體的擦布及其任意結合的形式存在。
164.權利要求161的組合物，其中至少一種裂解酶處於具有允許裂解酶活性的pH的環境。
165.權利要求164的組合物，其中組合物進一步包含使組合物pH保持在約4.0～約9.0的緩衝液。
166.權利要求165的組合物，其中緩衝液使組合物的pH保持在約5.5到約7.5。
167.權利要求166的組合物，進一步包含殺菌或抑菌劑作為防腐劑。
168.權利要求167的組合物，進一步包含以有效加強組合物治療作用的量存在的表面活性劑。
169.權利要求161的組合物，其中組合物進一步包含至少一種加強裂解酶殺菌活性的補充劑，該補充劑選自以有效協同增強裂解酶作用的量存在的青黴素、合成青黴素桿菌肽、甲氧苯青黴素、頭孢菌素、多粘菌素、氯頭孢菌素、頭孢羥氨苄、頭孢孟多酯鈉、頭孢唑啉、頭孢克肟、頭孢美唑、頭孢尼西、頭孢哌酮、頭孢雷特、頭孢塞肟、頭孢氨塞、頭孢替坦、頭孢西丁、頭孢泊肟丙酯、頭孢他定、頭孢去甲噻肟、頭孢曲松、cefriaxone moxalactam、頭孢氨呋肟、頭孢氨苄、頭孢菌素C、頭孢菌素C鈉鹽、頭孢噻酚、頭孢噻酚鈉鹽、頭孢吡硫、頭孢拉定、頭孢呋肟酯、二水合頭孢噻酚、羥羧氧醯胺菌素、loracarbef.mafate，螯合劑，及其結合。
170.權利要求161的組合物，其中組合物進一步包含治療金黃色葡萄球菌的溶葡萄球菌素。
171.權利要求161的組合物，其中組合物進一步包含溶菌酶。
172.權利要求161的組合物，進一步包含至少一種乳化劑。
173.權利要求161的組合物，進一步包含至少一種抗氧化劑。
174.權利要求161的組合物，進一步包含至少一種防曬劑。
175.權利要求161的組合物，進一步包含至少一種抗炎劑。
176.一種用於上呼吸道細菌感染的治療性或預防性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合，以及吸入器中的可藥用載體，允許給予支氣管和肺至少一種裂解酶。
177.權利要求176的方法，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
178.權利要求177的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
179.權利要求177的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
180.權利要求176組合物，其中組合物用於上呼吸道系統細菌感染的治療性處理。
181.權利要求176組合物，其中組合物用於上呼吸道系統細菌感染的預防性處理。
182.一種用於口腔或牙齒細菌感染的治療性或預防性處理的組合物，包含有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本，其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶及其結合，以及用於至少一種裂解酶的局部應用的可藥用載體。
183.權利要求182組合物，進一步包含給予一種打孔酶和所述修飾裂解酶。
184.權利要求183的方法，其中打孔酶為混排打孔酶。
185.權利要求183的方法，其中打孔酶為嵌合打孔酶。
186.權利要求182組合物，其中組合物用於齲齒的預防性處理。
187.權利要求182組合物，其中組合物用於齲齒的治療性處理。
188.權利要求182組合物，其中載體為牙膏。
189.權利要求182組合物，其中載體為漱口液。
190.權利要求182組合物，其中載體為口香糖。
191.權利要求182組合物，其中載體為錠劑。
192.權利要求182組合物，其中治療的細菌為突變鏈球菌。
193.權利要求182組合物，其中所述裂解酶以每毫升約100到約500,000單位的量存在。
194.權利要求193組合物，其中所述裂解酶以每毫升約10,000到約100,000單位的量存在。
全文摘要
公開了一種用於細菌感染的預防性和治療性處理的方法,包含用有效量的由細菌的特異性噬菌體感染的細菌產生的裂解酶的修飾譯本,其中所述至少一種裂解酶的修飾譯本選自混排裂解酶、嵌合裂解酶,其中裂解酶處於具有允許裂解酶活性的pH的環境;以及運送裂解酶的載體處理個體。另外,用於將膜打孔的打孔酶也可以包括在組合物中。此方法和組合物可以用於處理上呼吸道感染、皮膚感染、創傷、以及燒傷、陰道感染、眼感染、腸道疾病和牙齒問題。
文檔編號A61P31/04GK1390134SQ00815660
公開日2003年1月8日 申請日期2000年9月14日 優先權日1999年9月14日
發明者V·菲舍蒂, L·洛米斯 申請人:新眼界診斷公司