鴕鳥血及其相關製品的活性功能的製作方法

2023-09-13 04:38:45 2

專利名稱：鴕鳥血及其相關製品的活性功能的製作方法
鴕鳥飼養繁殖在我國大體上有三種來源，有非洲鴕鳥、歐美鴕鳥和澳洲鴕鳥；其中以非洲鴕鳥高大、兇猛彪悍，歐美、澳洲鴕鳥相對要小一些，但性情稍溫和，它們具備修長強悍的大腿肌肉，其奔跑時速高達70～90Km，證明鴕鳥的血液存在特殊的酶使肌肉與血液中瞬間釋放出巨大的能量。本發明中所使用的鴕鳥為歐美、澳洲鴕鳥。
鴕鳥全身都是寶，但在世界範圍對鴕鳥血液尚無利用的先例和報導，一頭成年鴕鳥宰殺後可產生10立升血，卻被鴕鳥養殖場白白浪費，還要交納排汙費。一個中型養殖場每年宰殺600～700頭，大約每年白白浪費6500立升鴕鳥血。
本發明首先發現鴕鳥血具有抗疲勞、抗缺氧、抗低溫、抗高溫、壯陽(亦稱助陽藥)、抗癌的功能，現將鴕鳥血液的製備及其複合配方(簡稱複方)的活性功能，抗疲勞實驗及其質量指標、21種胺基酸含量分別敘述於後1、鴕鳥血液的製備1.1實施例1 取12升鮮鴕鳥血(ostrich blood，縮寫OB)將凝血塊用慢速攪拌機打碎，置於冰凍乾燥機中，降溫至-40℃，迅速升溫同時減壓0.095MPa，升至0℃破細胞壁，蒸除大量水分，得2.16Kg凍乾粉TOB(簡稱Total ostrich blood，縮寫TOB，即鴕鳥全血)，收率為18％，粉碎過60目篩網，包裝1Kg/袋。(見附


圖1)1.2實施例2 向10升(約10kg)雄性鴕鳥血中加入0.1％檸檬酸鈉抗凝劑在3000轉/分離心機離心10分鐘後，分出血清(45％，約4.5kg)、血漿(55％，約5.5kg)，分別將血清、血漿注入透析袋，透析除去檸檬酸鈉，血清按上述操作(同實施例1，附
圖1)冰凍乾燥，得0.81kg血清凍乾粉(serum)，得率18.0％。將5.5kg血漿用慢速勻漿後注入水解罐，加入木瓜蛋白酶27.5-55g(相當於血漿的0.05％)，保溫在50-55℃，PH＝6.8-7.5，保溫1H，降溫至45-50℃，加入胰蛋白酶5.5g(相當於血漿的0.1％)和枯草桿菌蛋白酶2.75g(相當於血漿的0.05％)，再在45-50℃保溫4H後，將水解液在水解罐夾套水浴50-60℃條件下，減壓濃縮(0.098Mpa)，濃縮至含水量≤3％，粉碎過100目，多肽乾粉(polypeptide dry powder，縮寫為PPDP)，得產品0.9625kg，得率17.5％。將多肽乾粉(PPDP)包裝500g/袋。進行動物實驗時將serum與PPDP等量混合加生理鹽水溶解，簡稱SPPDP。(見附圖2)1.3實施例3 複方1(簡稱No.1)TOB400mg、燕子掌提取物200mg、西洋參提取物200mg、桑椹子提取物200mg。
1.4實施例4 複方2(簡稱No.2)TOB 400mg、乾花豆提取物200mg、西洋參提取物200mg、淫羊霍提取物200mg。
1.5實施例5 複方3(簡稱No.3)TOB 400mg、枸杞子提取物200mg、西洋參提取物200mg、螺旋藻粉200mg。
2、實驗材料2.1 原料將No.1、No.2、No.3再粉碎後在乳缽內充分研細，加生理鹽水配製成均勻的混懸液供灌胃用。
2.2 動物ICR小鼠，體重18-22g、SD大鼠，體重120-150g，均由北京大學動物學部提供。經口服方式給藥。
3、方法與結果3.1 抗疲勞實驗取ICR種雄性小鼠120隻，體重18～22g，隨機分為6組，每組20隻，對照組灌服等量生理鹽水，劑量組均根據推薦的人體每公斤體重日攝入量，擴大10倍作為劑量組，連續給予受試物30天，末次給予受試物30min後，置小鼠在遊泳箱中遊泳，水深不少於30cm，水溫25±0.5℃，鼠尾根部負重5％體重的鉛皮，記錄小鼠自遊泳開始至死亡時間，作為小鼠遊泳時間(min)，結果見表3-1。
表3-1 TOB、SPPOP、No.1、No.2、No.3對抗疲勞的影響(x±SD)
*P＜0.01**P＜0.001 均與對照組比較3.2 抗缺氧實驗雄性小鼠120隻，體重18～22g，隨機分為6組，每組20隻，給藥組灌服上述劑量的TOB(凍乾粉)，No.1、No.2、No.3；對照組灌服等量生理鹽水，30min後將小鼠分別放入盛有鈉石灰的125ml密閉廣口瓶中，記錄小鼠死亡時間，結果見表3-2。TOB(凍乾粉)在常壓條件下可明顯延長小鼠在缺氧條件下的存活時間。
表3-2 TOB、SPPOP、No.1、No.2、No.3對缺氧小鼠生存時間的影響(x±SD)
*與對照組比較P＜0.013.3 抗低溫實驗雄性小鼠60隻，體重18～22g，隨機分為3組，每組20隻，給藥的二組每天灌服上述劑量的TOB，SPPDP(TOB，SPPDP組均為正常人用量10倍)，對照組灌服等量生理鹽水，連續10d，末次給藥後0.5h，放入-4～-0.5℃冰箱內，每隔15min觀察一次，直至死亡。計算動物的平均存活時間，結果見表3-3。小鼠灌服TOB，SPPDP後在寒冷環境下能延長存活時間，說明它具有抗寒耐凍的作用。
表3-3 TOB，SPPDP對低溫條件下小鼠生存時間的影響(x±SD)
*與對照組比較P＜0.013.4 抗高溫實驗雄性大鼠45隻，體重120～150g，隨機分為3組，每組15隻，用藥前先測定正常體溫。給藥的二組分別灌服TOB，SPPDP均為10mg/kg，對照組灌服等量生理鹽水。30min後將動物放入45±2℃的恆溫箱中，20min後取出，重新測溫一次，記錄溫差，結果見表3-4。灌服TOB(乾粉)的大鼠體溫升高值比對照組低，顯示應用TOB，SPPDP後SD大鼠抗高溫能力增強。
表3-4 TOB，SPPDP對大鼠高溫能力的影響(x±SD)
*P＜0.05**P＜0.01均與對照組比較3.5 對「陽虛」小鼠的治療作用「陽虛」模型的製造，(參照文獻《中藥藥理研究方法學》陳奇主編 P982-984)。ICR種雄性小鼠105隻，體重18～22g，隨機分為7組，每組15隻，「陽虛」組每天灌服375mg/kg羥基脲，兩組除每天給予羥基脲外，每天分別均加服TOB10mg/kg，SPPOP、No.1、No.2、No.3各25mg/kg，正常對照組給予等量的生理鹽水，每天灌胃給藥1次，共計14d，觀察動物死亡情況、體重變化，並取小鼠脾臟、睪丸反覆衝洗後，用濾紙吸乾，溼組織稱重。比較各組織間差異，結果見表3-5。「陽虛」組15隻動物中有2隻死亡，體重及脾臟、睪丸的重量減輕，與正常對照組比較差異顯著(P＜0.01)。給予TOB、SPPOP、No.1、No.2、No.3 14d，動物無死亡，動物體重及脾臟、睪丸重量與正常對照組相近，與「陽虛」組比較差異顯著(P＜0.05)，說明TOB、SPPOP、No.1、No.2、No.3對羥基脲所造成的「陽虛」小鼠有明顯的治療作用。
表3-5 TOB、SPPOP、No.1、No.2、No.3對陽虛小鼠體重、脾臟、睪丸重量的影響(x±SD)
與正常對照組比較**P＜0.01，與「陽虛」組比較#P＜0.053.6 急性毒性試驗健康小鼠40隻，雌雄各半，體重18～22g，取TOB12g充分研細，加生理鹽水配製成均勻的混懸液40ml，每隻鼠灌胃1ml(即12000mg/40ml＝300mg/ml/20g/日，推出300×50mg/20×50g＝15g/kg，加上複方300mg，即最大濃度為600mg/ml/20g，30g/kg，相當於臨床600倍)，給藥後每天觀察動物情況，共觀察7d，未發現任何異常表現，動物全部存活。無毒副作用。
3.7 亞急性毒性試驗大鼠40隻，雌雄各半，體重120～150g，隨機分為4組，即3個給藥組，分別灌服TOB0.5、1和2g/kg，和另一個對照組(灌服等量的生理鹽水)。每天灌胃給藥1次，實驗共進行60d。給藥前、給藥期間及實驗結束時分別稱量體重，檢查血、尿常規、肝、腎功能。實驗結束時解剖動物，取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胃、腸、腦及生殖腺等組織進行內服及組織形態學檢查。結果表明，TOB、SPPDP、No.1、No.2、No.3對大鼠的生長、血、尿常規檢查，肝、腎功能及心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胃、腸、腦及生殖腺等均無影響。
4、抗癌活性試驗4.1 體外抗癌活性試驗表皮癌A431，人胃癌細胞(BGC-823)和人結腸癌(HCT)細胞，由北京市腫瘤研究所提供。該化合物篩選測試由北京大學醫學部天然藥物及仿生藥物國家重點實驗室採用MTT比色法進行。
其具體實驗結果如下4.11 實驗方法四甲基偶氮唑鹽(MTT)比色法基本原理MTT進入細胞後作為反應底物，被氧化形成藍色的甲瓚(Formazan)，沉積於細胞內或周圍，用酶標光度計直接測定各孔的OD值，即可反應甲瓚的量，由此判斷細胞內線粒體氧化酶活性，亦可間接反應細胞的增殖水平。
試劑MTT[3-(4，5-dimethylthiazal-2yl)2，5-diphenyltetrazolium bromide]用含0.5％葡萄糖的磷酸緩衝液(0.02mol/L，PH7.2)配成1mg/ml使用液，4℃避光保存。
酸化異丙醇，含0.04mol/L，HCI的異丙醇。
實驗用的細胞株BGC-823(人胃癌細胞)、HCT(人結腸癌細胞)、皮癌A431，NFC(正常成人纖維細胞)4.1.2 實驗結果細胞生長抑制率(％)
初步實驗結果表明，一定濃度的藥液(1-5％)對實驗所用的BGC-823、皮癌A431和HCT細胞的生長都有不同程度的抑制作用，而對正常成人纖維細胞(NFC)的生長則無明顯影響，該TOB(鴕鳥全血凍乾粉)確有進一步開發的價值。
測試表明，TOB凍乾粉無任何毒副作用，對人胃癌細胞(BGC-823)和人結腸癌(HCT)細胞抑瘤率分別為41.39％和28.24％。對表皮癌A431抑瘤率為47.21％，具良好抗癌活性。
4.2 體內抑制腫瘤實驗4.2.1 抑制動物體內S180腫瘤生長
30隻小鼠，雌雄各半，皮下接種0.2ml/只(相當於300萬細胞)S180實體瘤勻漿液(1∶4)，接種後第2天，分3組，空白對照，人參對照和TOB組，按實驗2.2方式給藥。連續9d後，處死動物，摘取實體瘤稱重並計算抑制生長率。結果見表4-1，TOB抑制移植性動物體內S180腫瘤生長效果明顯。
表4-1 TOB抑制S180腫瘤生長的作用
5、No.1 No.2 No.3的抗疲勞試驗採用3.1小鼠遊泳法，取40隻ICR雄性小鼠，20隻雌性小鼠，小鼠尾部不負重，餘同前。結果見表5-1。
表5-1 No.1、No.2、No.3、偉力邦對小鼠遊泳時間的影響比較(x±SD)
與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01注中國衛生部批准的抗疲勞保健食品。
6、No.1 No.2 No.3、偉哥(注)的壯陽人群試驗正常與異常(陽虛)人群各選擇男性10人，分成4組，口服6天結果以+，-表示有無作用，或加快、升高等表示。見表6-1。
注美國輝瑞藥業發明的壯陽藥品。
表6-1 No.1、No.2、No.3、偉哥的壯陽人群試驗
7、試驗結果討論7.1 壯陽藥的藥理作用十分廣泛，TOB、SPPDP加上西洋參、枸杞子、淫羊霍等單味藥的藥理已有大量的研究和論述，複方的藥理作用與單味藥的藥理基本相似，但由於各藥之間的配伍協同關係，複方的作用應是各藥效應的總的體現，故使得其藥理活性更顯廣泛，作用也更為明顯，本實驗也說明了這一點。
7.2 中醫認為「陽虛」的主要臨床表現是畏寒喜暖、四肢不溫或厥逆、小便清長、脈細、舌淡胖等。動物應用羥基脲後出現蜷縮、活動遲緩等「陽虛」表現，特別是免疫抑制現象和臨床上「陽虛」病人表現的免疫功能低下基本一致，同時有人也發現「陽虛」動物的這種表現與核酸代謝，尤其是與DNA代謝低下有關，因此，我們認為應用能夠明顯影響核酸代謝的羥基脲製造「陽虛」模型，較為切合臨床實際。
7.3 從表5-1可見，配以雄性血、No.1和No.3，抗疲勞效果高於雌性血，大約是偉力邦抗疲勞效果的2.15倍。
7.4 從表6-1可見，大劑量做人群實驗無任何毒副作用，偉哥和配以雄性血的No.1 No.2和No.3，抗疲勞效果高於雌性血，大約是偉力邦抗疲勞效果的2.15倍。
7.5 TOB(鴕鳥全血凍乾粉)與SPPDP有效成分均高效活性蛋白質，但SPPDP由等量血清與經複合酶水解血漿蛋白形成多肽組成，血清中含全血中各種免疫球蛋白及多種活性因子，而活性多肽極易被動物、人的機體所吸收，因此從上述動物實驗可見用TOB複合配方和用SPPDP複合配方比較，後者作用更快更強一些。
7.6 TOB、SPPDP的複方配合劑中主要作用是鴕鳥全血凍乾粉與等量血清跟經複合酶將血漿蛋白水解成活性多肽的混合體，而複方配合劑只起增強和協同作用。
8、TOB成分分析(見表1)表1TOB成分分析
9、鴕鳥血粉中胺基酸的檢測結果(見表2)表2鴕鳥血粉中胺基酸的檢測結果
權利要求
1.本發明首次發現的鴕鳥全血凍乾粉(TOB)和等量血清跟血漿經複合酶在特定PH和溫度下將血漿量白水解成多肽的混合體(SPPDP)具有抗疲勞、抗缺氧、抗高寒、抗高溫、抗癌、壯陽等用途；；
2.根據權利要求1所述，複合酶包括木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、枯草桿菌蛋白質三種，特定PH在6.8-7.5之間，溫度為45-55℃，各種酶的用量為0.05-1.0％；
3.根據權利要求1所述，TOB、SPPDP中均含有活性蛋白與活性多肽，活性蛋白均高達91.6％，富含21種胺基酸(見表2)，SPPDP含活性多肽極易被人體、動物體所吸收；
4.根據權利要求1所述，抗疲勞、抗缺氧、抗高寒、抗高溫等應激功能，按急性毒性與動物實驗推導劑量為100∽240mg/人/日；
5.根據權利要求1所述，按急性毒性與動物實驗設計劑量，臨床抗癌劑量為300∽600mg/人/日，壯陽劑量為260∽300mg/人/日；
6.本發明的複方配合劑可用TOB與其他配合劑復配成NO.1；NO.2；NO.3。也可用SPPDP與TOB的配合劑依次復配成NO.4；NO.5；NO.6，起主導作用的是SPPDP和TOB，而其他配合劑只起增強與協同作用；
7.根據權利要求6所述，加入複方配合劑為純TOB、純SPPDP，例如NO.1；NO.2；NO.3見實施例3-5；而SPPDP複方配合劑，例如NO.4SPPDP400mg、燕子掌粉200mg、西洋參200mg、桑椹子200mg；NO.5SPPDP400mg、乾花豆200mg、西洋參200mg、淫羊霍200mg；NO.6SPPDP400mg、枸杞子200mg、西洋參200mg、螺旋藻粉200mg。
全文摘要
本發明的鴕鳥全血凍乾粉(簡稱TOB乾粉)涉及肉製品、保健食品、醫藥品的領域。鴕鳥血不僅是含有21種胺基酸的高蛋白食品，而且又是一種新型抗疲勞的營養補劑，並有抗缺氧、抗高寒、抗高溫三種應激功能，同時可在體內外均有抗癌功能。本發明的產品適於保健食品、醫藥品等企業生產。
文檔編號A01K67/00GK1745627SQ20041007463
公開日2006年3月15日 申請日期2004年9月10日 優先權日2004年9月10日
發明者丁慶 申請人:丁慶