高效酶促化學發光底物系統的製作方法
2023-09-21 00:12:40
專利名稱：高效酶促化學發光底物系統的製作方法
技術領域：
本發明涉及免疫檢測技術領域，特別涉及可用於化學發光免疫檢測的一種高效n^化學發光底物系統。
技術背景本世紀70年代中期Arakawe首次報導用發光信號進行酶免疫分析，利 用發光的化學反應分析超微量物質，特別是用於臨床免疫分析中檢驗超微量 活性物質。目前，這一技術己從實驗室的稀有技術過渡到臨床醫學的常皿 測手段。化學發光免疫分析(CLIA)是將化學發光或生物發光體系與免疫反應 相結合，用於檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。其檢測原 理與放射免疫(RIA)和酶免疫(EIA)基本相似，但與放射免疫試劑(RIA)比較， 化學發光避免了放射性核素的汙染以及對操作人員的傷害，大大縮短了反應 時間，同時兼具高靈敏度的優勢。化學發光的靈凝:度與可測範圍遠遠高於酶 免疫產品，同時兼具ELISA法簡便的操作方法與較短的反應時間。化學發光免疫分析既具有放射免疫的高靈敏度，又具有酶聯免疫的操作 筒便、快速的特點，易於標準化操作，且測試中不使用有害的試劑，試劑保 質期長，應用於生物學、醫學研究和臨床實旨斷工作，成為非放射性免疫 分析法中最有前途的方法之一。常規的化學發光免疫檢測試劑盒通常包括包被待測物抗體的聚苯乙烯 板或板條、待測物系列標準品、檢測試劑以及S^化學發光底物系統。目前市售的化學發光免疫檢測試劑盒中的酶促化學發光底物系統的缺 點在於檢測的靈敏度和特異性不夠高、試劑穩定性不夠、成>^艮高、檢測 不夠筒便快捷等等。為解決上述問題，本發明提供了 一種酶促化學發光底物系統以及含有該 底物系統的增強型化學發光免疫檢測試劑盒。發明內容本發明提供了 一種SI^化學發光底物系統，所述S^l化學發光底物系統由A液和B液兩組組份構成，A液中含化學發光底物，B液中含有複合增強 劑，在臨用前將A液與B液混合。在本發明的另 一方面，還提供了含有上述酶促化學發光底物系統的化學 發光免疫檢測試劑盒。在用於免疫檢測時具有如下優點精確性和特異性強、靈敏度和穩定性高、 汙染小，成本低、檢測筒便快捷等，適合於醫院檢驗部門對患者的血清進行 人體免疫分析，為臨床大夫提供診斷信息。
圖1示出了用某市售酶促化學發光底物系統進行HRP催化化學發光反應的 動力學曲線。圖2示出了用本發明的酶促化學發光底物系統進行HRP催化化學發光^！的動力學曲線。圖3示出了本發明的酶促化學發光底物系統的標準曲線。圖4示出了使用本發明的一種示例性試劑盒進行雌二醇(E2)檢測的標準曲線。圖5示出了使用本發明的一種示例性試劑盒進行三碘曱狀腺原氨酸(T3) 檢測的標準曲線。
具體實施方式
由於酶促化學發光底物系統直接影響檢測信號的大小，檢測靈敏度及測 量範圍。因此，本發明提供了一種高效穩定的S^1化學發光底物系統，所述 酶促化學發光底物系統由A液和B液兩組組份構成，A液中含化學發光底物， B液中含有複合增強劑，在臨用前將A液與B液等體積混合。本發明的媒促化學發光底物系統為基於HRP-魯米諾的發光系統，包括化 學發光底物和複合增強劑。在本發明的一個實施方案中，所使用的化學發光底物為魯米諾鈉鹽，其 分子式為C8H6N302Na,結構式為formula see original document page 6
在本發明的另 一個實施方案中，所使用的化學發光底物為魯米諾衍生 物，魯米諾衍生物的實例例如氨丁基乙基異魯米諾和氨己基乙基異魯米諾， 它們結構式分別如下formula see original document page 6氨丁基乙基異魯米諾氨己基乙基異魯米諾。在本發明的一個優選實施方案中，A液中的化學發光底物為魯米諾鈉鹽， 其濃度為0. 005% - 0. 09%。在本發明的另一個優選實施方案中，B液中的複合增強劑為3-氯-4羥基 乙醯苯胺和四水合過硼酸鈉，濃度分別為0. 003% - 0. 09%和0. 002% - 0. 05%。在本發明的另 一個優選實施方案中，上述A液和B液中還含有穩定劑、 防腐劑、金屬螯合劑或離子強度調節劑等輔助物質。在本發明的一個更優選的實施方案中，所述A液和B液的配方如下: A液發光底物魯米諾鈉鹽，濃度為0.001% - 0.8%; 穩定劑甘氨酸，濃度為0.003% — 0.7°yi; 金屬螯合劑DTPA，濃度為0. 0001% - 0. 5%;二水合檸檬酸三鈉，濃度為0. 001% — 0. 9%; 防腐劑苯甲酸鈉，濃度為0.001°/。 - 0.8%;疊氮鈉，濃度為0. 001% — 0. 07°/。； 緩衝系統pH8. 5的硼酸-硼酸鈉緩衝液；B液複合增強劑3-氯-4羥基乙醯苯胺，濃度為0.001% - 0.9%;四水合過硼酸鈉，濃度為0. 001% - 0. 9%; 離子強度調節劑NaCl，濃度為O.Ol - 0.9%; 防腐劑苯曱酸鈉，濃度為0.001% - 0.8%;疊氮鈉，濃度為0. 001% - 0. 07%; 緩衝系統pH5. 0的檸檬酸-檸檬酸鈉鹽緩衝液。在本發明的一個特別優選的實施方案中，所述A液和B液的配方如下 A液化學發光底物魯米諾鈉鹽，濃度為0. 005% - 0. 09%; 穩定劑甘氨酸，濃度為0. 003% - 0. 07%; ^r屬螯合劑DTPA，濃度為0. 0001% — 0. 07%;二水合檸檬酸三鈉，濃度為0.025% - 0.9%; 防腐劑苯曱酸鈉，濃度為0.001% - 0.02%;疊氮鈉，濃度為0. 002% - 0. 045%; 緩衝系統pH值為8. 5的硼酸-硼酸鈉緩衝液；B液複合增強劑3-氯-4羥基乙醯苯胺，濃度為0. 003% - 0. 09%;四 K合it硼酸鈉，濃度為0. 002% - 0. 05%; 離子強度調節劑NaCl,濃度為O. 02 - 0.9%; 防腐劑苯曱酸鈉，濃度為0.001% - 0,02%;疊氮鈉，濃度為0. 002% - 0. 045%; 緩衝系統pH值為5. 0的檸檬酸-檸檬酸鈉鹽緩衝液。上述的底物系統在鹼性條件下被HRP催化，發生偶合反應，產生光子， 通過化學發光儀檢測發光信號，根據光信號的強弱來進行HRP配合物定量檢 測。該底物系統具有如下優點發光信號強，起效迅速，2分鐘內可達發光 平臺，發光持續時間長，平臺期約為150分鐘，試劑在4。C可保存達15個月 以上。含有本發明的S^1化學發光底物系統的化學發光免疫檢測試劑盒。 本發明還提供了含有上述酶促化學發光底物系統的化學發光免疫檢測試劑盒。在所述試劑盒中包括上述的高效穩定的S^1化學發光底物系統、檢測分析試劑以及酶標記複合物。優選地，本發明的化學發光免疫檢測試劑盒包括如下組成部分盒體、 用於包被待測物的微孔板和多個裝有多種試劑的小瓶，在所述裝有多種試劑 的小瓶中提供了高效穩定的S^1化學發光底物系統、檢測分析試劑、酶標記 複合物以及待測物系列標準品。任選地，試劑盒中還包括該試劑盒的使用說 明書。本發明試劑盒中的用於包被待測物的微孔板可以是聚苯乙烯板或板條， 也可以是本領域已知的任何其他合適的板或板條。一般實驗方案本發明的實驗方案基於抗原-抗體的免疫反應和酶促化學發光反應，從 而對特異性的抗原或抗體進行檢測。除本說明書所給出的檢測方法以外，可 以使用本領域技術人員認為合適的其他任何方法。下面給出一種示例性的實驗方案將抗體包被於白色不透明聚苯乙烯微孔板或可拆卸板條中，標記物為 HRP標記的抗原或抗體，溫育反應採用37。C恆溫箱。使用時，取患者血清適 量加入包被孔中，同時加入酶標記物及分析檢測試劑，放小型震蕩器上震蕩 1分鐘，放恆溫箱內溫育，這時反應微孔中發生抗原抗體反應，形成免疫復 合物，用洗板機洗板，多餘的酶標記物及未反應物4皮除去，然後加入提前等 量混合好的化學發光底物，震蕩l分鐘，放入化學發光儀，讀取每孔的相對 發光值，然後與標準曲線對照，化學發光儀自動換算成相應的被測物的具 體含量，然後通過印表機將結果列印。應當理解的是，上述實驗方案以及在本說明書實施例中所使用的實驗方 案及有關參數並不是限制性的。本領域技術人員能夠根據具體情況以及待測 物質選擇合適的實驗方案以及有關參數。本發明試劑盒的應用使用本發明的檢測試劑盒，可以進行如下各類體外檢測 (l)腫瘤標誌物系歹'J:曱胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、血清鐵蛋白(SF)、 P 2微球蛋白(P 2-MG)、人絨毛膜促性腺激素(HCG)、前列腺特異性抗原 (PSA)、游離前列腺特異性抗原(F-PSA)、癌抗125(CA125)、癌抗原15-3 (CA15-3)、癌抗原19-9 (CA19-9) 、 CA50;(2) 甲狀腺功能系列曱狀腺素(T4)、游離曱狀腺素(F-T4)、三腆曱腺原 氨酸(T3)、游離三腆甲腺原氨酸(F-T3)、促曱狀腺素(TSH)、抗-TG、抗-TPO;(3) 生殖內分泌激素系列垂體泌乳素(PRL)、促黃體生成素(LH)、促卵 泡生成素(FSH)、孕酣(P)、睪酮(T)、雌二醇(E2);(4) 傳染病系列A肝(HAV)、B肝五項(HBsAg，抗-HBs， HBeAg,抗-HBe， 抗-HBc)、C肝(HCV)、 丁肝(HDV)、庚肝(HGV)、 HIV(l+2)、 TORCH;(5) 心肌標誌物系列cTnl， cTnT, Mb， CK-MB, TNP;(6) 糖尿病系列胰島素、血清C肽；(7) 其他檢測系列皮質醇、總I gE 。應當理解的是，在上述應用中，本領域技術人員能夠根據具體待測物質 選擇合適的抗原或抗體以及合適的實驗方案。實施例提出以下實施例，以便為本領域技術人員更好地理解和實施本發明，這 僅是出於示例性目的，並非意在限制本發明的範圍。對比實施例現有技術的S^1化學發光底物系統的發光效力。方法商購某市售含有酶促化學發光底物系統的試劑盒。按其實驗說明書，在微孔板中加入150juL該化學發光底物系統的底物液，再加入50pLHRP(50ng/L)，混勻，使用石家莊康普生科技有限公司KPS-n型化學發光免疫分析儀測量光子，每60秒測量一次，測量1小時。結果在圖1中示出了該市售化學發M物系統的HRP催化化學發M應的動力學曲線。圖1中橫坐標為測試時間(分鐘)，縱坐標為發光值(RLU值)。實施例l:本發明的S^l化學發光底物系統的發光效力。 方法在微孔板中加入如下配方的本發明的底物液 A液(75 nU:魯米諾鈉鹽，濃度為0. 082%; 甘氨酸，濃度為0. 016%; DTPA,濃度為0. 035%;二7jc合檸檬酸三鈉，濃度為0. 025%;苯曱酸鈉，濃度為0.001%;疊氮鈉，濃度為0. 002%;pH8. 5的硼酸-硼酸鈉緩衝液； B液(75|aL):3-氯-4羥基乙醯tt，濃度為0. 0716%;四7jc合過硼酸鈉，濃度為0. 0052%;NaCl，濃度為0. 033%;苯曱酸鈉，濃度為0. 001%;疊氮鈉，濃度為0. 002%;pH5. 0的檸檬酸-檸檬酸鈉鹽緩衝液。 將上述A液和B液等體積混合即成為150 ju L本發明的底物液，再加入 50pLHRP(50ng/L),混勻，使用石家莊康普生科技有限公司KPS-II型化學發 光免疫分析儀測量光子，每60秒測量一次，測量1小時。結果在圖2中示出了本發明化學發M物系統的HRP催化化學發光反應 的動力學曲線。圖2中橫坐標為測試時間(分鐘)，縱坐標為發光值ULU值)。 由圖l和圖2的結果可以看出，在相同實驗條件下，本發明化學發光底物 系統的發光值與某市售化學發光底物系統相比，發光值高，發光反應達到峰值 的時間縮短，且具有很好的發光持續性。這在臨床診斷中具特別重要意義， 可保證測量結果的準確性和可重複性。實施例2:本發明的B^l化學發光底物系統的標準曲線及靈敏度將HRP稀釋成系列濃度0.04、 0.02、 0.4、 2、 4、 20fmol/mL，每孔加入如實施例1所述的150 pi L底物液，2min後測量發光值。以HRP濃度為橫坐標，發光值RLU為縱坐標，取雙對數作標準曲線，示於圖3。靈敏度以分析緩衝液為"0"標準，平行測定10孔，以^+ 2S計算，對應於標準曲線上HRP濃度即為分析靈敏度，為2. 4amol/孔。實施例3:雌二醇(E2)化學發光免疫檢測試劑盒雌二醇(Estradiol)為C18類固醇激素，分子量為272. 4。它是雌性激素中 活性最強的一種，主要產自卵巢和胎盤，少量產自腎上腺皮質和男性睪丸。分泌進/ok液的E2中98%與性激素結合球蛋白(SHBG)結合循環，少量的與其#清蛋白如白蛋白結合，僅有很少部分以游離激素狀態循環。雌激素的活 性通過雌二醇-受體複合物在耙位上激發適當的反應。這些耙位包括卯泡、子 宮、胸腺、陰道、下丘腦、垂體，對肝臟和皮膚也有較小的作用。月經周期正常的未孕女性，E2的分泌遵循一種循環的兩階段模式，在排卵 前達到最高濃度，排卵後E2水平快速下降，直至黃體細胞活躍產生第二次平 緩的上升，並在黃體期形成平臺。在孕期母親血清E2水平明顯升高，遠高於 上述的排卵前峰值水平，而且高水平的E2濃度持續整個孕期。血清E2測定對評價各種月經異常是非常有用的指稱如女孩青春期提前或 延遲、原發性或繼發性閉經、卵巢早衰等。據報導，男性患有女性化症候群、 乳房女性化以及睪丸癌的病人也會有E2升高。在不育症患者中，血清E2的監 測對於監控誘導排卵及隨後的治療，例如用檸檬酸克羅米芬、LH釋放激素(LHRH) 或外源性的促性腺激素的治療是非常有用的。在體外受精(IVF)中，對卵巢進 行過激刺激時，通常每天對絨毛膜促性腺激素的使用和卯母細胞的收集進行最 佳的調整，也需要檢測血清E2濃度。本試劑盒用於測定人血清或血漿中的總E2濃度。 實驗原理本試劑盒應用竟爭抑制法測定血清中E2的含量。將E2標準品或病Ajk清、 兔抗E2抗體及E2-HRP結合物均加入抗兔IgG包被的微孔中一起溫育，血清樣 品中的E2和E2-HRP與恆定量的兔抗E2抗體竟爭結合，形成的複合物與固相 上的抗兔IgG結合,最終結合在固相上的E2-HRP的量與血清中E2濃度M比。 加入化學發光底物，測定每孔發光值，發光強度與標本中E2的含量夂良比。 以系列標準品發光值為縱坐標(y軸)，以標準品濃度為橫坐標(X軸)作圖，即 得到標準曲線。血清樣品中雌二醇濃度可相應從該標準曲線上查得。 操作步驟實驗前準備1. 確保操作環境在室溫(18-25'C)，取出試劑盒及待測樣品。將所有試劑 及樣品恢復至室溫(約需30分鐘)。2. 將恆溫箱或水g調至^^應溫度。3. 液體標準品可以直^f吏用；固體標準品按"要求充分溶解後佳月。4. 將化學發光底物A、 B液等比例混合至試驗所需體積(每孔需200 p 1)。 實驗過程1.取出一定量的包被孔編號，每孔分別加入25 y 1標準品或血清樣品。2. 每孔分別加入待測E2分析物50 jul。3. 每孔分別加入E2-HRP結合物100 p 1 ，充分混勻30秒。4. 37€溫育16分鐘。5. 洗板:甩盡板孔內液體，用蒸餾水或去離子水注滿各孔，甩去，重複5 次，最後在吸7jc紙上拍千。亦可用洗板機機洗7次。6. 每孔加入混合後的底物200 iu 1，室溫(18-25匸)^^應5分鐘。7. 化學發光檢測儀檢測發光強度。 結果計算本試劑盒採用4P-Logistic-1. 0擬和方式，以標準品發光強度值為橫坐標 (x軸)，以標準品濃度值為縱坐標(y軸)，建立標準曲線，進行計算。 在圖4中示出了 E2檢測的標準曲線。實施例4:三碘甲狀腺原氨酸(T3)化學發光免疫檢測試劑盒3， 5, 3，三腆曱狀腺原氨酸(T3)與T4相同，由曱狀腺合成及分泌入血。 血清中H的量約是TM的1/60，但其生物活性比T4大5倍。故血清中三碘曱 狀腺原氨酸(T3)的沐JLA評價曱狀腺功能的重要^t，尤其用在確診甲狀腺功 能亢進和檢查曱狀腺毒症時。T3的檢測一般主要用於1. 診斷曱狀腺功能亢進曱亢時血清中T3和T4濃度一般平行升高，但T3 升高的幅度更明顯。有些曱亢，T4升高不明顯或未見升高，但T3明顯升高， 即為T3型曱亢。另外，甲亢時T3升高可能先於T4升高，因此，T3的檢測對 診斷及早期診斷曱亢很有意義。2. 評價治療曱亢的療效曱亢在治療過程中T4及T3先於臨床症狀的改善 而下降，T4下降的速度快於T3，而且幅yl較大，有時T4己降至正常範圍，而 T3仍高於正常。往往症狀完全消失時，T3大多降至正常。因此要協同觀察T3 和T4作為治療效15L臨床變更藥物的指標。3. 低T3綜合症:許多疾病如肝硬化、腎病症候群、糖尿病酣症、惡性肺瘤、 傳染病、手術創傷後及心皿死等均可導致T3下降，下降的程M應病情惡 化的程度。實驗原理本試劑盒應用竟爭型化學發光免疫測定技木險測血清中T3含量。將抗T3抗體包被在微^m上，製成固相抗體，試劑盒中的酶結合物為辣根過氧化物酶標記的T3,往包被抗體的微孔中同時加入T3標準或待測血清以及酶標T3， 二者共同與抗體竟爭，反應後沖洗微^Ui去掉未結合物，再加化學發光底物測定每孔發光值，其發光強度與T3含量成反比。 操作步驟實驗前準備1. 將所有試劑恢復至室溫(約半小時)，整個操作環境應該控制在20到25度。2. 將恆溫箱或水S調至^^應溫度。3. 液體標準品可以直##:用；固體標準品要按要求充分溶解後使用。4. 將化學發光底物A、 B液等比例混合至實驗所需體積(每孔需200 ju 1)。 實驗過程1. 將所需用量的孩i:孔條;故置在支架上2. 在反應微孔中依次加入20 ji 1標準品或待測標本；3. 每孔分別加入 降測T3分析物80 n 1。4. 每孑L加入80 n 1的T3-酶結合物，輕輕震蕩微孔支架，充分混勻5. 貼封膜後，371C溫育30分鐘；6. 洗板，手動洗滌5次或洗^UM V洗7次。7. 每孑L加混合後的底物200 m 1,室溫反應5分鐘。8. 化學發光檢測儀檢測發光強度值。 結果計算本試劑盒採用4P-Logistic-1.0擬和方式，以標準品發光強度值為橫坐標 (x軸)，以標準品濃度值為縱坐標(y軸)，建立標準曲線，進行計算。 在圖5中示出了 T3檢測的標準曲線。在本說明書中，除非另有說明，在表示濃度時，固體溶質在溶液中的濃度 為重量百分比濃度，液體溶質在溶液中的份數為體積百分比濃度。實驗溫度以 匸為單位或者為環境溫度，實驗壓力接近或等於大氣壓。對於本領域技術人員顯而易見的是，在不背離本發明的範圍和精神的前提 下可對本發明進行各種修改和變動。通過本發明公開內容的教導，本發明的其 他實施方案對本領域技術人員來說是顯而易見的。本說明書和實施例應僅理解 為用於示例，；^發明實際的範圍以所附的權利要求書為準。
權利要求
1.一種酶促化學發光底物系統，其特徵在於所述酶促化學發光底物系統由A液和B液兩組組份構成，A液中含化學發光底物，B液中含有複合增強劑，在臨用前將A液與B液等體積混合。
2.根據權利要求1所述的SIKJ1化學發光底物系統，其特徵在於所述化學發光 底物選自魯米諾鈉鹽、氨丁基乙基異魯米諾或氨己基乙基異魯米諾，它們 的結構式分別為formula see original document page 2NaH 魯米諾鈉鹽formula see original document page 2氨丁基乙基異魯米諾 氨己基乙基異魯米諾。
3.根據權利要求2所述的酶促化學發光底物系統，其特徵在於所述A液中的 化學發光底物為魯米諾鈉鹽，其濃度為0. 005% - 0. 09%。
4. 根據權利要求2所述的i^l化學發光底物系統，其特徵在於所述B液中的 複合增強劑為3-氯-4羥基乙醯苯胺和四7jc合過硼酸鈉，濃度分別為0. 003% - 0. 09。/。和0. 002% - 0. 05%。
5.根據權利要求4所述的酶促化學發光底物系統，其特徵在於所述A液和B -液的配方力口下 A液魯米諾鈉鹽，濃度為0. 005% - 0. 09%; 甘氨酸，濃度為0. 003% - 0. 07%; DTPA,濃度為0. 0001% — 0. 07%; 二7jc合檸檬酸三鈉，濃度為0. 025% - 0. 9%;苯曱酸鈉，濃度為0. 001% - 0. 02%; 疊氮鈉，濃度為0. 002% — 0. 045%; pH值為8. 5的硼酸-硼酸鈉緩衝液； B液3-氯-4羥基乙醯苯胺，濃度為0. 003% - 0. 09%; 四7K合過硼酸鈉，濃度為0. 002% — 0. 05%; NaCl，濃度為0. 02 - 0. 9%; 苯曱酸鈉，濃度為0. 001% - 0. 02%; 疊氮鈉，濃度為0. 002% — 0. 045%; pH值為5. 0的檸檬酸-檸檬酸鈉鹽緩沖液。
6. 根據權利要求5所述的S^1化學發光底物系統，其特;^t於所述A液和B 液的配方如下A液魯米諾鈉鹽，濃度為0. 082%; 甘氨酸，濃度為0. 016%; DTPA,濃度為0. 035%; 二7jc合檸檬酸三鈉，濃度為0. 025%; 苯曱酸鈉，濃度為0. 001%; 疊氮鈉，濃度為0. 002%; pH8. 5的硼酸-硼酸鈉緩衝液； B液3-氯-4羥基乙醯苯胺，濃度為0.0716%;四水合過硼酸鈉，濃度為0. 0052%;NaCl,濃度為0. 033%;苯曱酸鈉，濃度為0. 001%;疊氮鈉，濃度為0. 002%;pH5. 0的檸檬酸-檸檬酸鈉鹽緩沖液。
7. —種化學免疫檢測試劑盒，其特徵在於所述試劑盒含有根據權利要求1 - 6 任一項所述的SI^化學發光底物系統。
8. 根據權利要求7所述的試劑盒，其特徵在於所述試劑盒還包括檢測分析試 劑和酶標複合物。
全文摘要
本發明涉及一種高效穩定的酶促化學發光底物系統。所述酶促化學發光底物系統由A液和B液兩組組份構成，A液中含化學發光底物，B液中含有複合增強劑，在臨用前將A液與B液等體積混合。其中A液中的化學發光底物為魯米諾鈉鹽或其衍生物，B液中的複合增強劑為3-氯-4羥基乙醯苯胺和四水合過硼酸鈉。該底物系統具有發光信號強，起效迅速，2分鐘內可達發光平臺，發光持續時間長等多種優點。另外還提供了含有該底物系統的化學發光免疫檢測試劑盒。
文檔編號G01N33/52GK101221170SQ20081000059
公開日2008年7月16日 申請日期2008年1月23日 優先權日2008年1月23日
發明者詢 何, 周鵬飛, 白仲虎 申請人:深圳華英生物技術有限公司