利用活性提取物改善皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的外觀的製作方法
2023-09-20 17:07:55 1
專利名稱：利用活性提取物改善皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的外觀的製作方法
技術領域：
本發明涉及局部用組合物，該局部用組合物含有來源於植物或植物材料的天然或合成活性成分。具體地說，本發明涉及特別是通過使皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲亮澤，來改善皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的外觀的局部用組合物。更具體地說，本發明涉及特別是通過使皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲亮澤，來增強上述部位的美觀的生物活性提取物。
背景技術：
消費者一直在尋找改善他們的毛髮、皮膚、嘴唇和指甲的外觀的方法。他們對有效亮澤及減少毛髮、皮膚、嘴唇和指甲中色素沉著的產品有需求。這類產品的一般申請包括，例如漂白色素沉著過度的毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲；減少老年斑；使皮膚變色均勻或優化；改善眼下黑眼圈的外觀；治療黑斑病、黃褐斑、雀斑、燒傷疤痕、和損傷後色素的過度沉著；漂白頭皮、腿、臉及其餘想漂白和退色部位的毛髮；及漂白指甲的著色斑。
皮膚、毛髮、嘴唇和指甲的色素沉著取決於表皮、毛髮纖維和甲床中存在的黑色素水平。表皮中存在三種不同類型的黑色素DHI-黑色素、DHICA-黑色素和褐黑素。不同類型的黑色素在顏色和形狀上不同。DHI-黑色素的顏色最深，是黑色的。DHICA-黑色素的顏色是褐色的。褐黑素的顏色最淺，是微紅色的。
在被稱為黑色素體的特化細胞器中，在色素生成細胞(黑色素細胞)內合成黑色素。黑色素細胞對刺激發生反應而調節黑色素的合成。
已將很多物質施用於皮膚以使皮膚亮澤。這些物質包括氫醌、曲酸、甘草和/或其衍生物、抗壞血酸和/或其衍生物、熊果苷、熊果、洋甘草(Glycyrrhiza glabra)及其衍生物、普通小球藻(Chlorella vulgaris)提取物、紫蘇提取物和椰子提取物。所述紫蘇提取物在以下專利及專利申請中作為增白劑公開美國專利5,980,904及日本公開號07025742、07187989、10265322、2001163759和2001181173。所述椰子提取物在日本專利2896815B2中作為增白劑公開。一種從椰子組織的海綿體中得到的提取物在美國專利5,756,099中被用於防止曬黑的遮光劑組合物中。
來源於植物和植物種子的活性成分已被用於多種以醫學、治療和化妝為目的的局部用組合物中。這些活性成分可從植物的多個部位獲得，所述部位例如種子、針葉、葉子、根、樹皮、球果、莖、根莖、愈傷組織細胞、原生質體、器官和器官系統及分裂組織。這些活性成分可以多種形式加入所述的組合物中。這些形式包括純化或半純化的成分、固態或液態的提取物或衍生物、或固態的植物物質。植物物質可以採用多種諸如完整的、切碎的、磨碎的或壓碎的等從屬形式加入。
印楝(Azadirachta indica)，即印度楝樹，以及楝科其他植物的提取物，已知具有殺蟲活性。印楝素是許多這些提取物的主要活性成分，其為四降三萜類化合物類型的liminoid，用於商業殺蟲劑中。已顯示四降三萜類化合物是有效的昆蟲生長調節劑和攝食抑制物。由印楝種子材料生產濃縮印楝素的方法是本領域公知的。授予Holowach-Keller等人的美國專利5,698,423就涉及一種通過對印楝進行細胞培養來生產印楝素的方法。
洋甘草(Glycyrrhiza glabra linn.)的提取物來源於亞熱帶和溫帶的多年生草本植物。洋甘草，一般稱為甘草，已被用作食物甜味劑。根提取物含有甘草酸和甘草次酸。甘草酸已知具有抗炎作用。甘草根的提取物和甘草次酸已知具有去氧皮質酮和類似ACTH(促腎上腺皮質激素)的作用。已被用於鎮痛劑和溫和的祛痰藥。體外研究已表明甘草次酸和甘草皂甙均具有抗病毒的特性(參見Badam「In Vitro Studies on the Effect ofGlycyrrhizin from Glycyrrhiza glabra linn.(洋甘草中甘草皂甙對於某些RNA和DNA病毒作用的體外研究)」，Ind.J.Pharma.，26，194～199(1994))。洋甘草的提取物可用Iyer等人的美國專利6,248,309中所描述的方法提取。
海巴戟(Morinda citrifolia)的提取物來源於茜草科植物。授予Yegorova的美國專利6,387,370中已將海巴戟用於降低哺乳動物血液中氧化固醇的累積和使膽固醇及血壓正常化的組合物中。Wadsworth等人的美國專利6,417,157描述了提取和純化海巴戟的精油產品的方法。
番茄糖脂提取物來源於番茄的果實。提取及合成番茄糖脂的方法在Mudd等人的美國專利4,745,186中公開。
紫鉚(Butea frondosa)，也被稱為膠蟲樹(Butea monosperma)的提取物來源於東印度落葉樹。紫鉚已被用作收斂劑以及用於治療腹瀉、痢疾和胃灼熱中。最近還檢測到紫鉚在眼用抗炎活性方面的應用(參見Mengi，「Evaluation of Ocular Anti-Inflammatory Activity(對於紫鉚的眼用抗炎活性的評價)」Ind.J.Pharma.27，116～119(1995))。
Naringi crenulata，也被稱為補血草(Limonia crenulata)的提取物來源於東印度本土的一種小樹。
烏蕨(Stenoloma chusana)是一種在東南亞發現的多年生草本植物。已知這種植物的提取物可用於治療傷風、流行性感冒、支氣管炎、燒傷、刀傷和皮膚疼痛(參見A Barefoot Doctor′s Manual，Running Press，Philadelphia，PA，第638頁)。
迄今，這些提取物還未用作亮澤皮膚、嘴唇、毛髮或指甲用途的組合物中的活性成分。
人們希望獲得使用新的生物提取物的組合物，這些組合物增強皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的美觀，尤其是提供有效程度的亮澤、漂白、淡化色素、增白和/或去除色素(在下文中單獨或共同稱為「亮澤」或「使亮澤」)。更進一步希望獲得有效亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲並且需要最小生物濃度的組合物。
發明內容
本發明的一個目的是提供增強皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的美觀包括矯正老化作用的化妝品組合物。
本發明的另外一個目的是提供亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的組合物，該組合物含有活性植物提取物，優選含有具有生物學活性的植物提取物。
本發明的另外一個目的是提供特別是通過使皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲亮澤來改善外觀的組合物，其中該組合物含有有效量的活性植物提取物。
本發明的另外一個目的是提供特別是通過使毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲亮澤來改善外觀的組合物，其中該組合物適合局部施用於毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲。
本發明的另外一個目的是提供通過改善皮膚和/或嘴唇的炎症來改善皮膚和嘴唇的外觀的組合物，所述炎症包括由外部因素引起或可能引起的炎症。
本發明更進一步的目的是提供適合口服的亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的組合物。
本發明更進一步的目的是提供使毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲亮澤的方法，該方法包括將所述組合物局部施用於毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲。
本發明的上述及其他目的和優勢是由改善外觀的組合物所提供的，該組合物尤其是通過亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲或通過減輕、預防或治療皮膚或嘴唇的炎症來改善外觀，所述炎症包括由皮膚或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，其中所述組合物含有有效量的至少一種下列活性提取物紫鉚、補血草、烏蕨或它們的任意組合。
此外，本發明也提供特別是通過亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲或通過減輕、預防或治療皮膚或嘴唇的炎症來改善外觀的組合物，所述炎症包括由皮膚或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，其中所述組合物含有有效量的至少一種活性提取物，和有效量的至少一種下列額外提取物印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它們的任意組合。
本發明還提供特別是通過亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲或通過減輕、預防或治療皮膚或嘴唇的炎症來改善外觀的方法，所述炎症包括由皮膚或嘴唇的小病、痛苦或疾病引起的炎症，或由外部因素引起或可能引起的炎症，該方法包括局部施用本發明的任一組合物。本發明還提供通過口服本發明的任一組合物來亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的方法。
具體實施例方式
本發明提供特別是通過亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲來改善毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的外觀的組合物。該組合物優選為施用於毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的局部用組合物。但該組合物可口服。在所有的應用中，該組合物導致毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的亮澤。本發明的組合物當施用於皮膚或嘴唇時同時還提供抗炎益處，由此改善皮膚的外觀。
所述組合物含有一種或多種下述提取物紫鉚、補血草、烏蕨或它們的任意組合，所述提取物作為具有生物學活性的植物提取物或成分，或者是活性量。發明人意外地發現這些活性提取物增強了毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的美觀，並且特別是，減少了色素沉著以及亮澤了毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲。更特別的是，這些活性提取物意外地顯示減少黑色素的生成並減少色素過度沉著的狀態。
現在還發現將至少一種這些活性提取物(即紫鉚、補血草、烏蕨或它們的任意組合)與至少一種下述其他或額外提取物(即印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它們的任意組合)合用可減少毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的黑色素沉著。
本發明所述的使毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲亮澤是指達到下述一種或多種優點。這些優點包括漂白色素沉著過度的毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲；減少老年斑；使皮膚變色均勻或優化；改善眼下黑眼圈的外觀；治療黑斑病、黃褐斑、雀斑、燒傷疤痕、和損傷後的過度色素沉著；漂白頭皮、腿、臉及其餘想漂白和退色部位的毛髮；及漂白指甲的著色斑。
概括地講，本發明還提供用於皮膚以增強皮膚美觀的局部用組合物，該組合物含有有效量的一種或多種本發明所述的活性成分。優點在下述任一方面中顯示出來減小毛孔的大小；改善皮膚色澤、亮澤、透明度和/或緊度；提高抗氧化劑活性；改善皮膚的結實度、飽滿度、柔軟度和/或柔和度；改善原膠原和/或膠原的生成；改善皮膚肌理和/或促進肌理重建；改善皮膚屏障的修復和/或功能；改善皮膚輪廓的外觀；恢復皮膚的光澤和/或亮度；補充皮膚中由於老化和/或更年期而減少的必需營養物質和/或成分；改善皮膚細胞間的通訊；增加細胞的分裂和/或增殖；提高由於老化和/或更年期而降低的皮膚細胞的新陳代謝；改善皮膚的含水性；促進和/或加速細胞的更新；增加皮膚厚度；降低皮膚的敏感性；增加皮膚的彈力和/或彈性；並且在同時使用或不用α或β羥酸、酮酸或其他表皮剝脫素時增加脫落。
其次，本發明還提供用於皮膚以提供抗老化益處的局部用組合物。該組合物含有有效量的一種或多種本發明所述的活性成分，當將該組合物用於人皮膚時，其預防、治療和/或改善被施用部分皮膚區域的多種老化症狀。本發明特別提供治療皮膚的組合物和方法以防止、抑制、減少和/或改善由於例如歲月所致老化、激素所致老化和/或光老化所產生的皮膚病學老化症狀。這些老化症狀包括，但不限於，皮膚脆弱；膠原和/或彈性蛋白的喪失；皮膚中的雌激素不均衡；皮膚萎縮；紋路和/或皺紋的外觀和/或深度，包括細微的紋路；皮膚的變色，包括黑眼圈；皮膚松垂；皮膚疲勞和/或緊張，例如由於環境壓力如汙染和/或溫度改變所致的皮膚發疹；皮膚乾燥；皮膚剝落；細胞老化；失去皮膚色澤、彈性和/或光澤；失去皮膚結實度；皮膚肌理差；失去皮膚彈力和/或彈性；以及皮膚變薄。
從最概括的方面來說，本發明不受活性提取物或試劑的生理和/或化學效果的任何特定性質描述的限制。但是，據信用於本發明所述組合物及方法中的活性提取物通過以下方式減少色素過度沉著區域中的黑色素，所述方式為降低黑色素細胞中的暗色色素的形成；以及通過降低黑色素細胞的pH，和/或與黑色素合成或著色有關的諸如銅等金屬的直接螯合作用，將黑色素的合成途徑轉向生成淺色黑色素。
在本發明的另一方面，本發明所述的局部施用組合物抑制、減輕、改善和預防皮膚和嘴唇由小病、疾病狀態或疾病引起的刺激或炎症，或由外部因素例如環境因素、化學試劑、醫學試劑和化妝劑引起的刺激或炎症。這樣的皮膚刺激可由於受風、熱或冷、空氣汙染物和香菸的煙的影響而產生。化妝品和藥用品也可能含有一些成分或成分的組合，這些成分作為副作用產生可見的皮膚刺激。對皮膚刺激的敏感性在個體與個體之間可有差異，並且經常限制某些產品的使用或活性成分的某些濃度的使用，所述活性成分在更大量可以產生更有利的效果但作為副作用卻產生皮膚刺激。皮膚刺激的症狀和狀況包括，但不限於，紅斑、牛皮癬、浮腫、色素沉著過度、色素沉著不足、粉刺、疣、輪形體、斑點、膚色不均勻、起鱗屑、剝落、癢或瘙癢、緊繃、灼熱、刺痛、螫刺、麻刺、麻木、風刺激、溫度刺激、煙刺激、化學刺激、或它們的任意組合。因此，本發明的所述方法提供了佔組合物重量大約0.001重量％至大約20重量％的有效量，在治療一種或多種下述情況中是有效的減少或防止膠原的喪失；改善皮膚結實度/飽滿度；改善皮膚肌理；減少或防止紋路和皺紋；改善皮膚的色澤；增加皮膚厚度；減小毛孔大小；減少皮膚變色；減少粉刺；減少牛皮癬；降低皮膚的敏感性；和減少疣。
化妝品、皮膚病學產品和藥用品通常含有一種或多種產生皮膚刺激的活性劑。作為副作用產生皮膚刺激的活性劑的例子包括，但不限於，羥基化的酸及其衍生物、α-羥酸(例如，乳酸、乙醇酸、檸檬酸、蘋果酸、酒石酸、杏仁酸、葡糖酸、甲基乳酸、苯基乳酸、阿卓乳酸、甘油酸、二苯乙醇酸、z-羥基庚酸、z-羥基辛酸及它們的任意組合物)、β-羥酸(例如，水楊酸、5-正辛醯基水楊酸及水楊酸的其他衍生物)、類視黃醇(視黃酸及其衍生物；視黃醇及其酯)；蒽林(例如，二氧蒽酚)、類蒽酚(anthranoids)、過氧化物(例如，過氧化二苯)、米諾地爾、鋰鹽、抗代謝物、維生素D及其衍生物、毛髮染料或著色劑(例如，對苯二胺及其衍生物；氨基苯酚)、帶有香味的醇溶液(例如，香水；花露水；須後用水；除臭劑)、止汗劑(例如，一些鋁鹽)、脫毛劑或毛髮持久活性劑(例如，硫醇)、脫色劑(例如，氫醌)及一些殺蟲活性劑。如果局部用產品具有抗刺激保護作用，則可提高產品中正常刺激活性劑(例如，AHA(α-羥酸)或BHA(叔丁基對羥基苯甲醚))的量而不會產生不舒適的皮膚刺激或刺激副作用。與化妝品、皮膚病學活性劑或藥學活性劑的常規使用濃度或用量相比，施用本發明所述組合物可通過提高所述活性劑的濃度或用量來改善化妝品、皮膚病學產品或藥用品的功效。
在本發明的一個優選實施例中，改善毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的外觀，並且尤其是亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的組合物含有有效量的至少一種下列活性提取物紫鉚、補血草、烏蕨或它們的任意組合。有效量是指一種或多種活性提取物的含量佔組合物總重量的大約0.001重量％至大約20重量％(wt％)。一種或多種活性提取物的含量優選佔組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％，更優選大約0.5重量％至大約5重量％。最優選一種或多種活性提取物的含量佔組合物總重量的大約1重量％或小於大約1重量％。
如上所述，在本發明另一個優選的實施例中，亮澤毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的組合物含有有效量的至少一種活性提取物以及一種或多種下述其他或額外提取物印楝、洋甘草、海巴戟、番茄糖脂或它們的任意組合，以協同促進組合物的增白活性。
一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。優選地，一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。最優選一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的l重量％或小於大約1重量％。
當與一種或多種額外提取物合用時，活性提取物在本發明組合物中的含量佔組合物總重量的大約0.001重量％至大約10重量％，並且一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。優選地，活性提取物的含量佔組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％，並且一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。最優選一種或多種活性提取物的含量佔組合物總重量的大約1重量％或小於大約1重量％，並且一種或多種額外提取物的含量佔組合物總重量的1重量％或小於大約1重量％。
本發明所述組合物可與載體或賦形劑共同使用。載體可進行改變，以在不改變由使用上述的一種或多種活性提取物所獲得的有益的亮澤效果的同時適合於組合物的特殊用途。可用於本發明所述組合物的載體包括，但不限於，水；植物油；酯例如棕櫚酸辛酯、豆蔻酸異丙酯和棕櫚酸異丙酯；醚例如二辛醚(dicapryl ether)或二甲基異山梨醇；醇例如乙醇和異丙醇；脂肪醇例如十六烷醇、十八烷醇和二十二烷醇；異鏈烷烴例如異辛烷、異十二烷和異十六烷；矽油例如二甲聚矽氧烷和聚矽氧烷；烴油例如礦物油、凡士林、異二十烷和聚異丁烯；多元醇例如丙二醇、甘油、丁二醇、戊二醇和己二醇；或它們的任意組合。
優選地，載體的含量佔組合物總重量的大約50重量％至大約99.8重量％。更優選，載體的含量佔組合物總重量的大約80重量％至大約99.5重量％。
本發明所述的組合物還可以包括一種或多種下述成分麻醉劑、抗過敏劑、抗真菌劑、抗菌劑、抗炎劑、抗氧化劑、殺菌劑、螯合劑、著色劑、脫色劑、潤膚劑、乳化劑、脫落劑(exfollient)、成膜劑、香味劑、保溼劑、驅蟲劑、潤滑劑、補水劑、藥劑、耐光劑、防腐劑、皮膚保護劑、皮膚滲透增強劑、遮光劑、穩定劑、表面活性劑、增稠劑、粘度調節劑、維生素、或它們的任意組合。優選地，這些成分的含量佔組合物總重量的大約0.001重量％至大約10重量％。
本發明所述的組合物還可以包括皮膚增白劑。一些合適的皮膚增白劑的例子包括，但不限於，一種或多種下述物質抗壞血酸葡糖苷、維生素C、視黃醇和/或其衍生物、熊果苷、熊果提取物、皺葉酸模提取物(rumex crispus extract)、乳蛋白包括水解乳蛋白、N，N，S-三(羧甲基)半胱胺、齊墩果醇酸、紫蘇油、胎盤提取物、虎耳草(saxifragia sarmentosa)、紫蘇提取物、圓柏酸、TDPA、川芎(ligusticum chiangxiong hort.)、紫萁(asmunda japonica thunb)、繁縷(stellaria medica(L.)cyr.)、垂盆草(sedum sarmentosum bunge)、藁本(ligusticum lucidum Ait.)、冬青(ilexpurpurea hassk)、油甘子(emblica)、芹黃素、抗壞血酸基棕櫚醇、carruba多酚、橙皮素、氫醌、inabata多酚、異甘草素、堪非醇-7-新橙皮糖、L-含羞草鹼、毛地黃黃酮、油溶性甘草提取物P-T(40)、oxa acid、異硫氰酸苯酯、可可素(cococin)、水飛薊素、T4CA、四氫薑黃素、unitrienol、熊果酸-齊墩果醇酸、UVA/URSI、或它們的任意組合。
本發明所述組合物可制為任何適合的產品形式。這些產品形式包括，但不限於，氣霧噴霧劑、霜劑、分散體、乳劑、泡沫、凝膠、液體、洗劑、摩絲、軟膏、敷料、香膏劑、粉劑、手按泵型噴霧劑、固體、溶液、條狀物和小毛巾。
本發明的組合物用於特別是改善皮膚、指甲、嘴唇和/或毛髮亮澤的化妝品。同樣，可製造本發明所述的組合物以傳遞穩定量的活性成分或成分的混合物來達到預期的化妝效果。
以下是本發明的實施例。
實施例1黑素體攝取試驗(烏蕨和補血草)以下述方式進行。鋪滿培養的B16黑色素細胞產生適量的黑素體。但是，為在該細胞系中誘導提高黑素體的生成，用含有10mM氯化銨(終濃度)的正常生長培養基處理半鋪滿(60％)培養的B16細胞大約36小時。然後將培養基吸出並以蒸餾水洗滌黑色素過度的細胞(2×2ml)以給細胞提供一個低滲壓力。向每板加入等分量(2ml)的低滲裂解液(溶於水的0.02％NP-40)並於室溫下溫育大約5分鐘。然後用光學顯微鏡檢查細胞裂解液，將來自3個培養板的細胞物質合併入一個15ml的錐形管中並離心(200×g)5分鐘以除去細胞碎片。將所得的含有黑素體的上清液轉入潔淨的15ml的錐形管中並離心(850×g)20分鐘。將所得的含有分離的黑素體的沉澱重懸於1ml磷酸鹽緩衝液(PBS)中並儲存於4℃直至使用。
用黑素體對角質化細胞的處理以下述方式進行測定。正常的人表皮角質化細胞(NHEKs)(可由Clonetics，Inc.獲得)以200,000細胞/孔的密度鋪於24孔板的孔中。約24小時後，以1ml含有黑素體製劑(經過或未經過額外處理條件處理)的適當生長培養基(即DMEM/KGM-2)代替原來的生長培養基。以不同濃度的紫蘇葉提取物(粉末形式或水溶液形式)處理細胞。然後將細胞送回恆溫箱溫育約1小時和1.5小時。在這些研究中，每個孔的角質化細胞都以一定量的從單個B16細胞培養板上分離的黑素體進行處理。
在一些試驗中，將已處理的角質化細胞的24孔板在1000rpm離心15分鐘以促進黑素體沉澱到角質化細胞的細胞膜表面。然後將培養板送回恆溫箱溫育1.25小時。
在黑素體攝取分析中，角質化細胞的每個孔內的細胞都以PBS進行衝洗(3×1ml)，用胰蛋白酶/EDTA將細胞從培養板上處理下來，並用PBS進行洗滌。為分析角質化細胞對黑素體的攝取，採用Bessou-Touya，S.等人(Chimeric human epidermal reconstructs to study the role ofmelanocytes and keratinocytes in pigmentation and photoprotection(以嵌合的人表皮重建體對黑色素細胞和角質化細胞在色素沉著和光保護中的作用進行研究)J.Invest.Dermatol.，1111103～1108，1998)的一種改良方法從細胞中提取內化的黑色素並通過測定在405nm處黑色素特異性的吸光度來進行分光光度的測量。
黑色素細胞合成黑色素並將其儲存於黑素體。顯示可見的皮膚顏色是由於在角質化細胞中存在黑色素/黑素體。黑素體被角質化細胞吸收，吸收速度、黑素體在角質化細胞中的滯留和處理是皮膚顏色的重要的決定因素。內化黑色素值反映了角質化細胞對黑色素/黑素體的吸收和滯留量。因此，較低的內化黑色素值，尤其是內化黑色素值低於黑色素對照，表明角質化細胞對黑色素的吸收已被抑制。
結果如下。在0.5體積％，烏蕨顯示與陽性對照相比黑素體的吸收降低了44％。在0.5體積％，補血草顯示與陽性對照相比黑素體的吸收降低了39％。
實施例2在B16試驗(補血草)中，在單層細胞培養的B16鼠黑色素瘤細胞中檢驗活性成分。這些細胞組成性地產生黑色素，是檢測黑色素合成抑制的模式系統。將細胞以5×103細胞/孔接入96孔板並貼壁培養24小時。然後以含有植物提取物的新鮮培養基代替原培養基。將每種活性成分加入96孔板上的6個B16細胞孔以進行統計學分析。將僅用培養基作為陰性對照的細胞，或待測物質處理7天。在540nM處讀取培養板以檢測黑色素的形成。540nM處吸光度的增加反映了孔中更高的黑色素含量。
在0.05％(重量/體積)，補血草顯示與陽性對照相比色素沉著下降了61％。
實施例3在14C-多巴摻入實驗中(紫鉚)，通過當14C-多巴在B16F10黑色素瘤細胞中被轉化成酸不溶的黑色素生物高聚物時測量所形成的放射性黑色素來測定黑色素生成活性。細胞以2×104細胞/孔的密度接入24孔板並貼壁培養48小時。然後以含有植物提取物和0.2μCi的14C-多巴的新鮮培養基代替原培養基。將細胞進一步溫育24小時。溫育後，棄去培養基並以PBS衝洗細胞，通過加入0.125ml 1N的NaOH並在37℃下溫育30分鐘進行裂解，然後以0.025ml 5N的HCl進行中和。將所得細胞裂解物轉入液閃瓶並與閃爍混合劑混合，通過閃爍計數器對放射性進行測量。保存一部分細胞裂解物並用Lowry的方法測量蛋白質含量。將結果標準化為每次試驗所測定的蛋白質的量。
在0.005％(重量/體積)，紫鉚顯示與陽性對照相比14C-多巴的轉化下降了22％。
實施例4在下述體外研究中，評價本發明所述的多種天然植物提取物對TNF-α(腫瘤壞死因子-α)蛋白的抑制。
TNF-α抑制方案使用可由R D Systems商購的酶聯免疫試驗(ELISA)試劑檢測烏蕨、補血草、紫鉚對TNF-α的抑制效力。
該試驗使用定量的夾心酶免疫測定技術，其中將特異性針對TNF-α的單克隆抗體預先包被微量滴定板上。將以活性物質處理的細胞的培養上清液吸入單個孔中。上清液中的TNF-α通過所固定的抗體結合於板上。進行多次洗滌以除去未反應的抗體，然後在各孔中加入與酶偶聯的特異性針對TNF-α的多克隆抗體。接著進行洗滌以除去未結合的抗體-酶試劑，並在孔中加入底物溶液。顯示的顏色與起始步驟中TNF-α的結合量成比例。檢測結果在表I中給出。
表I 體外試驗的結果
圖注+、++、+++、++++顯著的抑制(抑制的程度以加號的數量進行量化表示)(0)沒有變化這些體外研究表明含有烏蕨、補血草、紫鉚的提取物的本發明所述組合物通過抑制TNF-α蛋白的產生給皮膚帶來益處，藉此將減少由化妝品、藥用品或皮膚病學產品引起的主觀不適和/或刺激的症狀，因此增強皮膚的美觀。
實施例5在多種活組織檢查研究中評價烏蕨和紫鉚，在該活組織檢查研究中將下述天然植物提取物與合適的化妝品載體組合併以2mg/cm2的劑量施用於受試者的掌側前臂。然後將施用提取物製劑的前臂區域以半閉合的罩覆蓋。這一方案重複3周，每周5天。處理結束後，以利多卡因麻痺處理部位並由處理部位和一個未處理的對照部位鑽取2mm深的活組織檢查樣品。將活組織檢查樣品在福馬林中固定、石蠟中包埋、切片，並在相關的端點染色。
對於烏蕨，9個受試者中的6個顯示其角質化細胞的增殖提高(通過KI67的抗體呈現)，9個受試者中的5個顯示活表皮厚度的增加。
對於所提供的紫鉚，8個受試者中的5個顯示其角質化細胞的增殖提高(通過KI67的抗體呈現)，8個受試者中的5個顯示活表皮厚度的增加。
前述說明書應理解為只是對本發明的例證。本領域技術人員可在不背離本發明的條件下作出各種替換和修改。因此，本發明旨在包括所有這些落入所附權利要求書的保護範圍中的替換、修改和變化。
權利要求
1.一種增強毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的美觀的組合物，該組合物含有有效量的選自以下的至少一種活性提取物紫鉚(Butea frondosa)、補血草(Naringi crenulata)、烏蕨(Stenoloma chusana)或它們的任意組合。
2.如權利要求1所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.001重量％至大約20重量％。
3.如權利要求1所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。
4.如權利要求1所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。
5.如權利要求1所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約1重量％或小於大約1重量％。
6.如權利要求1所述的組合物，其中所述組合物是適合施用於毛髮、皮膚、嘴唇和/或指甲的局部用組合物。
7.如權利要求6所述的組合物，該組合物還含有化妝品用載體。
8.如權利要求1所述的組合物，其中當該組合物被施用於皮膚或嘴唇時，減輕和/或防止皮膚或嘴唇的刺激。
9.如權利要求1所述的組合物，其中該組合物是口服組合物。
10.如權利要求1所述的組合物，該組合物還含有有效量的選自以下的至少一種額外提取物印楝(Azadirachta indica)、洋甘草(Glycyrrhizaglabra linn.)、海巴戟(Morinda citrifolia)、番茄糖脂或它們的任意組合。
11.如權利要求10所述的組合物，其中所述至少一種額外提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。
12.如權利要求11所述的組合物，其中所述至少一種額外提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。
13.如權利要求10所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物被局部施用於皮膚或嘴唇以達到減輕或預防刺激或炎症的目的。
14.如權利要求1所述的組合物，其中所述至少一種活性提取物被局部施用於皮膚或嘴唇以達到減輕或預防刺激或炎症的目的。
15.一種使毛髮、皮膚、嘴唇、和/或指甲亮澤的方法，該方法包括將有效量的權利要求1所述的組合物局部施用於皮膚、毛髮、嘴唇、和/或指甲。
16.如權利要求15所述的方法，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.001重量％至大約20重量％。
17.如權利要求15所述的方法，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。
18.權利要求15所述的方法，其中所述至少一種活性提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。
19.一種使毛髮、皮膚、嘴唇、和/或指甲亮澤的方法，該方法包括口服有效量的權利要求1所述的組合物。
20.一種使毛髮、皮膚、嘴唇、和/或指甲亮澤的方法，該方法包括將有效量的權利要求10所述的組合物局部施用於皮膚、毛髮和/或指甲。
21.如權利要求20所述的方法，其中所述至少一種額外提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.05重量％至大約10重量％。
22.如權利要求20所述的方法，其中所述至少一種額外提取物的含量佔所述組合物總重量的大約0.5重量％至大約5重量％。
23.一種使毛髮、皮膚、嘴唇、和/或指甲亮澤的方法，該方法包括口服有效量的權利要求10所述的組合物。
24.一種增強皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的美觀的方法，該方法包括將有效量的選自紫鉚、補血草、烏蕨或它們的任意組合的至少一種活性提取物局部施用於皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲。
25.如權利要求24所述的方法，其中所述有效量是為皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲有效提供抗衰老益處的量。
26.如權利要求24所述的方法，其中所述有效量為組合物總重量的大約0.001重量％至大約20重量％，並且對處理下列一種或多種情況是有效的a)減少或防止紋路和皺紋；b)增加皮膚厚度；和c)減少皮膚變色。
27.如權利要求24所述的方法，其中所述有效量為組合物總重量的大約0.001重量％至大約20重量％，並且對處理下列一種或多種情況是有效的a)減少或防止膠原的喪失；b)改善皮膚的結實度/飽滿度；c)改善皮膚肌理；d)減少或防止紋路和皺紋；e)改善皮膚色澤；f)增加皮膚厚度；g)減小毛孔大小；h)減少皮膚變色；i)減少粉刺；j)減少牛皮癬；k)降低皮膚的敏感性；和l)減少疣。
全文摘要
本發明提供了一種組合物，其含有至少一種下述活性提取物紫鉚(Butea frondosa)、補血草(Naringi crenulata)、烏蕨(Stenoloma chusana)、或它們的任意組合。本發明還提供了一種組合物，其含有至少一種下述額外提取物以及一種或多種活性提取物的組合，所述額外提取物為印楝(Azadirachta indica)、洋甘草(Glycyrrhiza glabra linn.)、海巴戟(Morinda citrifolia)、番茄糖脂或它們的任意組合。本發明所述的組合物和方法特別通過亮澤皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲來有效增強皮膚、嘴唇、毛髮和/或指甲的美觀。
文檔編號A61K36/11GK1694716SQ200380100751
公開日2005年11月9日 申請日期2003年12月16日 優先權日2002年12月17日
發明者哈裡斯·馬哈林格姆, 布萊恩·瓊斯, 妮科爾·麥克凱恩 申請人:雅芳產品公司