膽酸派生物作為fxr配基預防或治療fxr-介導的疾病或狀況的製作方法

2023-09-20 07:44:45

專利名稱：：膽酸派生物作為fxr配基預防或治療fxr-介導的疾病或狀況的製作方法
技術領域：
：本發明涉及用於治療淤膽失調的法尼酯X受體(FXR)調節物，特別是膽酸派生物，其中C6包括乙烷基，而C24羧基轉換為硫酸基團。
背景技術：
：法尼酯X受體(FXR)是一種最初從大鼠肺cDNA文庫中鑑定的孑瓜JL^亥受體(BM.Forman,etal.，Cell81:687—693(1995)),其與昆蟲蛻皮激素受體密切相關。FXR是包括類固醇，類維生素A,和曱狀腺激素受體的配基-激活轉錄因子核受體家族的成員(DJ.Mangelsdorf,etal.,Cell83:841-850(1995))。Northern和原位分析顯示FXR在肺，腸，腎，和腎上腺中大量表達(BM.Fo畫netal.,Cell81:687-693(1995)和W。Seoletal.，Mol.Endocrinnol。9:72-85(1995))。FXR與9—順式維生素A酸受體(RXR)形成異源二聚體與DNA結合。FXR/RXR異源二聚體優先與由共有AG(G/T)TCA的雙核受體半位點組成的成分結合，其形成反向重複並被單一核苷分離(IR-l模體)(BM.Forman，etal.,Cell81:687—693(1995))。然而，這些4匕合物無法激活小鼠和人類FXR,使得內源性FXR配基的自然性還不確定。一些自然發生的月旦酸在生理濃度下結合併'激活FXR(PCTWO00/37077,2000年6月29日出版))。如此所述，作為FXR配基的膽酸包括鵝脫氧膽酸(CDCA),脫氧膽酸(DCA),石膽酸(LCA)，和這些膽酸的牛磺酸及氨基乙酸共輒物。膽酸是在肝臟中形成並分泌入十二指腸的膽固醇代謝產物，其在食物脂肪和維生素的溶解和吸收中具有重要作用。大多數膽酸(~95%)隨後在迴腸中吸收並通過腸肝循環系統回到肝臟。肝臟中膽固醇至膽酸的轉變為反4貴調控膽酸下調細胞色素P4507a(CYP7a)的轉錄，其編碼催化膽酸生物合成限速步驟的酶。數據顯示FXR與膽酸對CYP7a表達的抑制有關，雖然精確的機制仍未明確(DW.Russell，Cell97:539-542(1999))。迴腸中，膽酸"i秀導腸內膽酸結合蛋白(IBABP)的表達，其是一種以高親和力與膽酸結合，並與其細胞攝取和轉運相關的胞內蛋白。兩組已經發5U旦酸通過激活FXR調節其對於IBABP表達的效應，FXR結合人類，大鼠，和小鼠IBABP基因啟動子中^f呆守的IR-1型應答元件。這些FXR與膽酸和膽固醇平衡中的目標基因的激活(IBABP)牙口才中制(CYP7a)4目關。EP13927147>開了3a，7a—又又羥基-6oc-乙基—5P—膽烷-24-羧酸(這裡也指6-乙基-鵝脫氧膽酸，6-EDCA)，其溶劑化物和胺基酸結合物用作FXR拮抗劑，其可用於製備預防或治療FXR-介導的疾病或狀況的藥物。EP1568796公開了作為FXR拮抗劑的6-乙基-熊脫氧膽酸(6-EUDCA)派生物，及其在預防或治療FXR-介導的疾病或狀況中的應用。
發明內容根據第一方面，本發明提供了結構(I)的化合物:formulaseeoriginaldocumentpage9其中R是氫基或a-羥基，位置7的羥基在a或(3位點；及其藥學上可接受的鹽，溶劑化物或其胺基酸結合物。一個實施方案中，結構式(I)的化合物為鵝脫氧膽酸派生物的形式。另一實施方案中，結構式(I)的化合物為熊脫氧膽酸派生物的形式。而另一實施方案中，結構式(I)的化合物為膽酸派生物的形式。另一實施方案中，結構式(I)的化合物為三乙基銨鹽形式formulaseeoriginaldocumentpage9另一實施方案中，結構式(I)的化合物為鈉鹽形式:另一方面，本發明^是供了一種預防或治療FXR介導的疾病或狀況的方法。本方法包4舌施用治療有效量的結構式(I)的化合物。本發明也提供使用結構式(I)的化合物以製備預防或治療FXR介導的疾病或^1犬況的藥物。在特定實施方案中，FXR-介導的疾病或狀況是心血管疾病，動脈粥樣硬化，動脈硬化，高膽甾醇血，高血脂慢性肝炎疾病，胃腸疾病，腎病，心血管疾病，代j射疾病，癌症(例々0,結直腸癌)，或神經跡象如中風。特定實施方案中，慢性肝病是原發性硬化(PBC),腦腱性黃瘤症(CTX)，原發性硬化性膽嚢炎(PSC),藥物導致的膽汁鬱積，妊娠肝內膽汁淤積症，腸外吸收相關膽汁鬱積(PNAC),細菌過度生長或膿血症月旦汁鬱積，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD)，非酒精性脂肪性肝炎(NASH),肝移植相關移植物抗宿主病，活供體肝移植再生，先天性肝纖維化，膽總管結石，肉芽性肝病，肝內-或外惡性腫瘤，Sjogren症候群，結節病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或ocl-拍J夷蛋白酶缺乏症。特定實施方案中，胃腸疾病是炎症性腸病(IBD)(包括Crohn's疾病和潰瘍性腸炎)，腸易激症候群(IBS)，細菌過度生長，營養吸收不良，反射-後結腸炎，或微小性結腸炎。特定實施方案中，腎病是糖尿病腎病，局灶節段性腎小球硬化症(FSGS),高血壓腎病，慢性腎小球炎，慢性移植性腎小球病，慢性間質性腎炎，或多嚢腎病。特定實施方案中，心血管疾病是動脈硬化症，動脈硬10化，血脂障礙，高膽固醇血症，或高甘油三酯血症。特定實施方案中，代ii射疾病是力夷島素抗性，I型和II型糖尿病，或肥胖。另一實施方案中，本發明提供了包括結構式(I)化合物和藥學上可^妄受的載體或稀釋物的藥物組合物。另一實施方案中，本發明提供了製備結構式(I)和其藥學上可4妄受的鹽，溶劑化物或胺基酸結合物的方法。圖1是以圖表形式表示的反式激活測定結果。每個數據點是三次測定的平均值。CTRL:對照；INT-747:6-EDCDA;UPF-987。圖2顯示反式^敫活測定中INT-747和UPF-987的劑量歲文應。圖3顯示FXR目標基因體外表達。結果為兩次定量實時PCR試一驗的平均值。圖4顯示代表性FXR目標基因在來源於小鼠肝臟的細胞中的體內表達。數據為兩次定量實時PCR試驗的平均值。圖5顯示UPF-987對由TNBS誘導的重量丟失的影響。圖6顯示UPF-987對糞便形態的影響。圖7顯示UPF-987對黏膜損害程度的影響。圖8顯示UPF-987對小鼠結腸基因表達的影響。結果為兩次定量實時PCRi式-3全的平均4直。ii圖9顯示UPF-987對ANIT-i秀導的膽汁鬱積的血漿膽紅素的影響。圖10顯示UPF-987對ANIT-i秀導的膽汁鬱積的血漿AST的影響。圖11顯示UPF-987對ANIT-誘導的膽汁鬱積的血漿ALP的影響。圖12顯示UPF-987對ANIT-i秀導的膽汁鬱積的血漿gammaGT的影響。圖13顯示UPF-987對ANIT-謙導的膽汁鬱積的血漿膽固醇的影響。圖14顯示UPF-987對ANIT-誘導的膽汁鬱積的體重的影響。圖15顯示UPF-987對ANIT-i秀導的膽汁鬱積的肝臟重量的影響。圖16顯示UPF-987對ANIT-i秀導的膽汁鬱積大鼠肝臟中FXR目標基因表達的影響。結果為兩次定量實時PCR試4t的平均值。圖17顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿膽紅素的影響。圖18顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿AST的影響。圖19顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿ALT的影響。圖20顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿ALP的影響。圖21顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿gammaGT的影響。圖22顯示INT-1103對ANIT-誘導的膽汁鬱積大鼠的體重的影響。圖23顯示最終肝臟比例(肝臟重量/體重x100)。圖24顯示INT-1103對BDL-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿月旦糹工素的影響。圖25顯示INT-1103對BDL-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿AST的影響。圖26顯示INT-1103對BDL-i秀導的膽汁鬱積大鼠的血漿ALT的#》響。圖27顯示INT-1103對BDL-i秀導的膽汁鬱積大鼠的血漿ALP的#》響。圖28顯示INT-1103對BDL-誘導的膽汁鬱積大鼠的血漿gammaGT的影響。圖29顯示INT-1103對BDL-裔導的膽汁鬱積大鼠的體重的影響。13圖30顯示最終肝臟比例(肝臟重量/體重x100)。圖31顯示INT-1103和INT-747對自然大鼠膽汁流的影響。圖32顯示INT-1103和INT-747對estrogencolestatic大鼠膽汁流的影響。圖33顯示INT-1103和INT-747對estrogencolestatic大鼠肝臟比例的影響。圖34顯示INT—1103和INT—747對estrogencolestatic大鼠體重的影響。圖35顯示通過定量實時PCR確定的胰島素基因表達。圖36是水中膽鹽濃度(mM)對K相對於表面張力(dyne/cm)的示意圖。圖37是0.15MNaCl中中膽鹽濃度(mM)對數相對於表面張力(dyne/cm)的示意圖。圖38顯示牛磺酸結合的INT-747的分泌速度。悽"居以月旦汁濃度才艮告並且以膽汁體積^修正。圖39顯示甘氨酸結合的INT-747的分泌速度。數據以膽汁濃度才艮告並且以膽汁體積修正。圖40顯示INT-747的分泌速度。悽t據以膽汁濃度才艮告並且以月旦汁體積j奮正。圖41顯示INT-747異構體的分泌速度。婆t據以膽汁濃度才艮告並且以膽汁體積^f多正。圖42顯示牛磺酸結合的INT-747異構體的分泌速度。數據以膽汁濃度^艮告並且以膽汁體積修正。圖43顯示INT-1103的分泌速度。數據以膽汁濃度才艮告並且以月旦汁體積J奮正。圖44顯示INT-1103和其主要代謝物3-葡萄糖苷酸的分泌速度。相關數量以分析的信號表示。數據以膽汁濃度4艮告並且以膽汁體積修正。圖45顯示使用質譜分析的膽汁中INT-IIO主要代謝物的分泌速度。數據以膽汁濃度報告並且以膽汁體積修正。圖46顯示4吏用質i普變焦顯示分一斤的膽汁中INT-110主要代謝物的分泌速度。數據以膽汁濃度才艮告並且以膽汁體積修正。圖47顯示人類糞^f更培養物中INT-747和INT-1103的代謝穩定性。鵝去氧膽酸作為天然類似物參考品使用。圖48顯示INT-1103在模擬胰腺流中的代謝穩定性。根據USP方案使用橄欖油作為參照。化合物非常穩定並且其酯鍵(硫酸鹽)不糹皮胰酶水解，顯示在人類十二指腸和上腸部位中的高度穩定性。具體實施例方式本發明涉及具有結構式(I)的化合物其中R是氫基或a-羥基，位置7的羥基在a或P位點；和藥學上可接受的鹽，溶劑化物或其胺基酸結合物。合適的本發明的藥學上可接受的鹽可以由本領域中的技術人員容易J也確定，並可包4舌，例如，鹼式鹽如由鋁，釣，鋰，4美，鉀，鈉，和鋅製備的鹼或鹼-脂金屬鹽，或由N,N，-二千基亞乙基二胺，氯普魯卡因，膽鹼，二乙醇胺，乙二胺，葡甲胺(N-曱基葡糖胺)，和普魯卡因等製備的有機鹽。帶有如賴氨酸，精氨酸，氨基丁三醇，三乙胺和類似物等胺類的藥學上可接受的鹽也可以被使用。這些結構式(I)化合物的鹽可以使用常規技術製備，例如將結構式(I)化合物與合適的鹼基反應，由結構式(I)化合物製備。藥物應用中，結構式(I)化合物鹽應當為藥學上可4妄受的，但是非藥學上可接受的鹽也可以便利地用於製備對應的游離鹼或者其藥學上可接受的鹽。這裡使用的術語"溶劑化物"是一種包括結構式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽的晶體形態，可以為化學劑量或非-化學劑量的溶劑。溶劑，作為例子，包括水，曱醇，乙醇，或乙酸。以下，結構式(I)化合物指任何其化合物的物理形式，除非指明其特定的形式，鹽或溶劑。這裡使用的術語"胺基酸結合物"指帶有任何合適的胺基酸的結構式(I)化合物的結合物。合適地，這些結構式(I)化合物的氨-基酸結合物將具有增強在膽汁或腸流液中完整性的優勢。合適的胺基酸包括但不局限於甘氨酸和牛磺酸。這樣，本發明包括^壬4可結構式(I)4b合物的甘氨酸和牛磺酸結合物。一個實施方案中，結構式I化合物是一種鵝去氧膽酸派生物，其中7位的羥基在a位置，而R是氫。另一實施方案中，結構式I化合物是一種熊去氧膽酸派生物，其中7位的羥基在P位置，而R是氫。另一實施方案中，結構式I化合物是一種膽酸派生物，其中74立的羥基在oc位置，而R是羥基。在此之後，所有"結構式I化合物"指上述所有描述的結構式I化合物和藥學上可4妄受的鹽，溶劑化物或其胺基酸結合物。結構式I化合物可以由6-乙基-7-酮基-膽酸製備，如EP1392714和EP1568796中描述所製備，合適地，通過包括在C24羥基中轉入碟原子的反應序列，對3-羥基基團進行保護，將碘原子轉化進入羥基，減少了7-酮基基團，以獲得相應的3-a或3-P羥基，C24羥基選擇性的磺醯化和3-羥基的去保護。在每一步中使用的反應方法和試劑在下列的方法中報導，其顯示了三乙基胺鹽形式的3a，7a,23-三羥基-6a-乙基-24_去曱基—5(3-月旦烷—23—石克酸鹽(UPF—987或以下^f匕合淨勿9)的製備。相同的方法可以^皮釆用，通過合適地替換藥劑和/或17起始材料並且隨意地改變反應序列和保護基團，製備其他結構式I化合物。a)3,4-二氫-27/-吡喃,p-TsOH，二氧六環，r丄;b)I2，Pb(AcO)4，hv，CCU;c)HClconTHF;d)TBDMSiCl，咪唑，CH2C12，r.t.;e)Ag2C03，丙酮，H20，回流；f)NaBH4THF，H20r.t.;g)C1S03H，(Et)3N，THF;h)CH3COCH3,PdCl2(CH3CN)2在每一步中^f吏用的反應方法和試劑在下列的方法中才艮導，其顯示了鈉鹽形式的3a，7a,23-三羥基-6a-乙基一24-去曱基—5P-月旦》克-23-石克酸鹽(INT-1103或以下化合物10)的製備。相同的方法可以被採用，通過合適地替換藥劑和/或起始材料並且隨意地改變反應序列和保護基團，製備其他結構式I藥學上可接受的鹽的形式。10a)3，4二氫-2if-吡喃，p-TsOH,二氧六環，t.a.;b)I2，Pb(AcO)4，hv，CCU;c)HClgas，DME;d)TBDMSCl,咪唑，CH2C12，t.a.;e)Ag2C03,丙酮，1120，回流；f)NaBH4，THF，H20，r.t.;g)C1S03H，(Et)3N，THF;h)H20,丙西同；PdCl2(CH3CN)2，i)NaOH，MeOH正如在試驗階段詳細描述，化合物9在人類肝細胞系和施用alfa-nafthylsiotiocyanate(ANIT)引發膽汁阻塞的未處理小鼠和大鼠體內進行無細胞實驗和反式激活實驗。FRET方法中，化合物激活FXR的潛力比鵝去氧膽酸(CDCA)強將近1000倍。在反式激活實驗中，化合物9導致膽酸轉運物，BSEP(膽鹽轉運泵)和微小異源二聚體夥伴(SHP,—種缺失DNA-結合區域的非典型的核酸受體)，的2倍誘導。19其進一步有效地抑制Cyp7Al,SREPB-lc和脂肪酸合酶(FAS),這樣表明本發明的化合物對FXR的激活準許基因的選擇性《務飾，包4舌膽酸合成和脂，膽固醇和葡萄糖的代謝。因此，結構式(I)的化合物作為月旦酸轉運物的選擇性z修飾物和肝臟中膽酸流量的增強劑；進一步，其有效調整脂和膽固醇代謝中包括r的基因，因此其可以用於預防或治療FXR-介導的疾病或狀況，其包括慢性肝病(包括一種或多種膽汁鬱積，脂肪變性，炎症，纖維化，和硬化)，胃腸疾病，腎病，心血管疾病，和代謝疾病。使用結構式(I)化合物預防或治療的慢性肝病包括但不局限於原發性硬化(PBC)，原發性硬化性膽嚢炎(PSC),腦腱性黃瘤症(CTX)，藥物介導的膽汁鬱積，妊娠肝內膽汁淤積症，腸夕卜吸收相關膽汁鬱積(PNAC)，細菌過度生長或膿血症膽汁鬱積，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，肝移植相關移植物抗宿主病，活供體肝移植再生，先天性肝纖維化，膽總管結石，肉芽性肝病，肝內-或外惡性腫瘤，Sjogren症候群，結節病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1—4元月夷蛋白酶缺乏症。使用結構式(I)化合物預防或治療的胃腸疾病包括4旦不局限於炎症性腸病(IBD)(包括Crohn's疾病和潰瘍性腸炎)，腸易激症候群(IBS),細菌過度生長，營養吸收不良，反射-後結腸炎，或微小性結腸炎。使用結構式(I)化合物預防或治療的腎病包括但不局限於糖尿病腎病，局灶節段性腎小球硬化症(FSGS),高血壓腎病，慢性腎小球炎，慢性移植性腎小球病，慢性間質性腎炎，或多嚢腎病。使用結構式(I)化合物預防或治療的心血管疾病包括^旦不局限於動脈硬化症，動脈硬化，血脂障礙，高膽固醇血症，或高甘油三酯血症。使用結構式(I)化合物預防或治療的代i射疾病包括但不局限於胰島素抗性，I型和II型4唐尿病，或月巴胖。本發明的方法包括施用有效劑量的結構式(I)化合物的方法。這裡〗吏用的術語"治療有效劑量，，指有效獲得^見定效果的結構式(I)化合物的lt量。相應的，在預防或治療FXR介導的疾病或狀況的方法中4吏用的結構式(I)化合物的治療有效劑量將是有歲文預防或治療FXR介導的疾病或狀況的悽t量。相似的，在治療或預防淤膽肝病或增加膽汁流的方法中^f吏用的結構式(I)4匕合物的治療有效劑量將是有效增加腸內膽汁流的有效量。需要獲得期望生物學效應的結構式(I)化合物的劑量將依賴於多種因素，如使用的目的，給藥的方法，和受體，並將最終由醫生或獸醫決定。通常，治療FXR介導的疾病和一大況的典型日劑量，例如，將位於0.01mg/kg至100mg/kg範圍內。該劑量可以通過單一劑量或通過^L次單獨劑量或連續灌注糹會藥。類似的劑量將應用於其他疾病，狀況的治療，包括預防和治療膽汁淤積性肝病。這樣，進一步，本發明提供了藥物組合物，其包括作為活性成分的一種結構式(I)化合物，和與之共同的和/或混合的至少一種藥物載體或稀釋物。這些藥物組合物可以用於預防和治療前述的疾病或狀況。載體必須是藥學上可接受的，並且必須相容於組合物中的其他成分，例如，不具有有害效應。載體可以是一種固體或液體並且合適;也製備沉單位劑量形式，例如，一種包括0.05至95%重量活性成分的藥片。如有期望，其他生理學活性成分也可以包括入本發明的藥物組合物。可能的形式包括那些適用於口月艮，舌下，口腔，注射(例如，皮下，月幾肉內，或靜月永內)，直腸，局部，包4舌透皮，鼻月空內和吸入給藥。對於特定病人的許多合適的給藥方法將依賴於所治療的疾病或狀況的性質和嚴重性，或所採用的治療的性質，和活性化合物的性質，但如有可能，口服給藥適用於預防和治療FXR介導的疾病和4犬況。適用於口服給藥的形式可以以分離的單位提供，如藥片，膠嚢，藥包，錠劑，每一種包括預先確定數量的活性成分；如粉末或顆並立；如水或非水液體的卩容液或懸液；或如水包油或油包水乳劑。適用於舌下或口腔給藥的形式包括錠劑，其包括活性化合物，和調味劑，如糖和阿拉伯樹膠或黃芙膠，和藥錠，其包括位於明膠和甘油或蔗糖阿拉伯樹膠等惰性物質中的活性化合物。適用於注射給藥的形式典型地包括無菌液體溶液，其包括一種預定濃度的活性化合物；溶液與受體的血液等滲。適用於注射給藥的額外形式包括含有生理適配的複合-溶劑和/或藥物複合物，如表面活性劑或環糊精。水包油乳劑也適用於注射形式。雖然這些溶液適宜通過靜脈內給藥，其也可以通過皮下或肌肉內注射給藥。適用於直腸給藥的形式以單位-劑量栓劑形式提供，其中活性成分包埋於一種或多種形成4全劑基礎的固體中，例如，可可酯。適用於局部或鼻腔內使用的形式包括藥膏，乳膏，洗液，膏劑，凝膠劑，噴霧劑，氣霧劑和油。這些形式的合適的載體包括凡士才木，羊毛脂，聚乙二醇，乙醇，和其耳關合物。本發明的製劑可以由任何合適的方法製備，典型地通過均一地和緊密地將活性化合物與液體或良好劃分的固體載體或其兩者根據需要的比例混合，如需要，將最後的混合物製備成期望的形狀。例力o,可以通過^誇一種包^舌活性成分並分末或顆粒和一種或多種合適的成分，如結合物，潤滑劑，惰性稀釋劑，或表面活性分散劑的混合物壓縮製備藥片，或通過將粉末狀活性成分和惰性液體稀釋劑混合物進行塑形。合適的吸入給藥製劑包括顆粒粉劑或噴霧，其可以通過多種類型劑量的眼裡壓力氣溶"交，噴霧劑，或吸入器產生。對於經口的肺部糹合藥，4分末或顆粒的大小典型地在0.5-10jum之間，合適i也為1-5|um,以確保進入支氣管4對。對於鼻腔給藥，10-500jum大小的顆粒適合於確保在鼻腔中停留。定量吸入器是一種壓力氣溶膠分配器，典型地含有在液化推進物中的活性物質的懸液或溶液形式。當使用時，這些裝置通過閥釋放訴訟定量體積的藥劑，典型地為10至150jLi1,以產生含有活性成分的良好的顆粒噴霧。合適的推進物包括特定的氯氟石友化合物，例如，二氯二氟曱烷，三氯氟曱烷，二氯四氟乙烷和其混合物。藥劑可以額外含有一種或多種複合溶劑，例如，乙醇表面活性劑，如油酸或山梨聚糖，抗氧化劑和合適的調味劑。噴霧劑是一種商業提供的裝置，通過空氣或氧氣等壓力氣體的加速作用，經狹小的文氏管孔，或通過超聲振動方法，其使活性物質溶液或懸液轉變為治療性氣溶膠噴霧。噴霧劑中使用的合適的製劑包括水相載體中的活性成分，其最高佔製劑的40%w/w,合適地小於20。/。w/w。載體典型地為水或一種稀釋的水和酒津奇溶液，合適地通過添加，例如，氯化鈉製備成與體液等;參。23如果製劑是非無菌的，可選的添加物包括防腐劑，例如，甲基羥基苯曱酸，抗氧化劑，調味劑，揮髮油，緩沖劑和表面活性劑。通過噴射給藥的合適的製劑包括粉末，其可以通過一種吹藥器豐lr送或通過鼻吸進入鼻腔。在吹藥器中，4分末包^舌在膠嚢或藥丸中，典型地由凝膠或塑料製成，其可以在原位刺破或打開使得粉末通過吹藥器裝置的空氣流，或通過手動泵輸送。吹藥器中使用的4分末可以包括單一的活性成分，或包括活性成分和合適的粉末稀釋物，如乳糖，和一種可選的表面活性劑的混合併分末。活性成分在製劑中的比例典型地為0.1至100w/w。上述的特異配方之外，已經注意到不確定的製劑類型，本發明的製劑也可以包括藥物領域中的技術人員知道的其他成分。例如，適用於口力良給藥的製劑可以包括調味劑，適用於鼻內給藥的才幾制可以包4舌芳香物。因此，根據本發明的進一步的方面，提供了使用結構式(I)的4匕合物製備藥物以預防或治療FXR介導的疾病或狀況。以下實施例對本發明進行更詳細i兌明。實施例1化學。熔點通過Buchi535電熱裝置測定，並為校正。通過BrukerAC200MHz分光計獲得NMR光譜，化學位移以百萬分之一(ppm)表示。這裡l吏用的縮寫為s,單一；bs，寬單態；d,二重態；dd,乂又二重態；m,多態；q，四重態；t，三重態。使用Merck矽膠60(0.040-0.063mm)進行快速層析色i普。在帶有石圭月交60F-254(Merck)預包一皮的TLC板上進行TLC。通過磷鉬酸鹽試劑(5%的EtOH溶液)使斑點可見。在氮氣保護下進行此反應。3a-四氣p比喊基氧一7—酉同_5|3—膽火克一24—叛酸(2)二氧雜玉不乙烷(12ml)中的3,4-二氫-2H—p比喃(1.74ml,19mmol)緩慢滴入含有p-曱苯石黃酸(115mg,0.6ml)和6a-乙坑一7-酉同基膽石酉吏(5.0g，12mmol)的二氧雜玉不乙》克(55ml)溶液。反應混合物室溫攪動2小時。力。入(40ml)7jc，混合物通過真空部分濃縮並用EtOAc(4x25ml)抽提。有才幾部分用鹽水(lx50ml)洗滌，無水Na2S04乾燥，真空蒸發以獲得6g化合物2。未經加工的》派生物不經進一步純4匕可用於下一步反應。HNMR:(200MHz,CDC13)5:0.68(3H，s，C-18Me);0.8(3H,t,J=4Hz，C-26);0,98(3H,d，J=6,5，C-21Me);1,17(3H,s,C-19Me);3.4-3,7(4H,m，C-23CH2,C-6);3.8-3.9(1H，m,c-3);2,6-2,8(1H，m,C-6)。13CNMR(50,3MHz,CDC13)5:212,41,179,42，54,75，52,10,21,79，18,30,12,04。3cx—四氫p比喃基氧-7—酉同-24—去甲—5P—膽烷—23-I(3)300w鴒燈照射下，CCU(75ml)中的》典(5g,20mmol)滴力口入溶液2(5.5g，llmmol)並引導入CC"(200ml)中由々四乙酸鹽4.9g，llmmol)。反應混合物經冷卻並以硅藻土過濾。有機相以5%Na2S203溶液，5%NaOH，鹽水(15ml)洗滌，無水Na2S04乾燥，真空蒸發。殘留物以珪月交快速層析純化，使用石油醚/EtOAc95/5作為流動相以獲得4.6g化合物3(40%產量)。25H麗R:(200MHz，CDC13)5:0,54(3H,s，C-18Me);0。68(3H，t,J=7.36MHz,C-25);0,79(3H,d，J=5,2MHz,C-21);1,09(3H,s，C-19);2,55(1H,m，C-26);2,96(1H,m,c-23);3,16(1H,m,C-23);3,20(1H,m,C-6，)；3,76(1H，m，C-6，)；4,59(1H,m，C-2，)。13CNMR(50，3MHz，CDC13)5:212.50,96.56,95.99,74.90,74.60,62.63,54.63，54.08,50.78，50.58,49.84,48.91,43.38,42.70，40.11,38.90,36.92,35.81，34.34,34.10,31.07,30.06,29.61，28.26，27.85，25.97，25.42，24.54,23.49,21.75，19.76,19.59，18.88,17.84,12.05,11.98,5.26。3a-#5基—6oc-乙基—7—酮-24—去甲—5P—膽火克-23-I(4)化合物3(2.2g,3.8mmo1)在HC137%THF(50ml)溶液中室溫攪拌過夜。反應混合物以飽和NaHC03(20ml),H20(20ml),鹽水(20ml)洗滌，Na2S04乾燥，真空蒸發以獲得1.4g化合物4(80%產量)。未經加工的派生物不經進一步純化可用於下一步反應o力NMR:(200MHz，CDC13)5:0,68(3H,s，C—18Me);0.82(3H,t,J=7,36MHz,C-21);0，93(3H，t,J=5，2MHz,C-21Me);1,26(3H,s,C-19Me);3,08(1H,m，C-23);3，37(1H,m,c-23);3.61(1H,m,C-3)。l3CNMR(50,3MHz,CDC13〉&212.81,71.09,54.63,51,93,50.60,49.84,48.93,43.64,42.70，40.11,38.92，36.92，35.63,34.19,31.71,31.06,29.78,28.25,27.89,25.96,25.42，24.51,23.48，21.79，19.56,18.77,18.22,17.85，12.02,11.95,5.22.3a—^又-丁基二曱基石圭氧一6a_乙火克—7—酉同—24—去曱-5P-膽烷-23-I(5)4匕合4勿4(1.4g，2.8mmol)的CH2C12(30ml)溶液，力口入^又_丁基二甲基曱桂烷基氯(496mg，3.22mmol)和咪峻(230mg，3.36mmol)，混合物於室溫4覺4半過乂艾。，良應混合物以《包和NaHC03(30ml),鹽7jc(20ml)洗;奈，無KNa2S04幹;t喿。有才幾相經真空蒸發以獲得1.5g化合物5(87%產量)。未經加工的派生物不經進一步純4匕可用於下一步反應。NMR:(200MHz,CDC13)5:0.02(6H,s,(CH3)2Si);0,65(3H，s,C-18Me);0.85(9H,s，(CH3)3CSi);1,19(3H,s,C-19);3,16(1H,m，C-23);3.30(1H,m,C-23);3.48(1Hm,C-3)."CNMR(50,3MHz,CDC13)<5:212.56，71.93,54.63，51.89，50.62，49.81，48.90，43.34，42.72,40.11，38.89，36.92,35.62,34.37，31.97，30,34，28.26,25.83，25.61,24.57,23.48,21.77,18.81'17.84,12-02，11.92,5.27,4.70.3a-#又-丁基二甲基石圭氧—6a—乙)t克—7-酮—24-去曱-5P-膽烷-23-ole(6)4匕合物5(l,2g,1.96mmol)的丙酮(12ml)溶液中，力口入Ag2C。3(l.lg,3.9mmol)。反應混合物回流過夜並冷卻至室溫，珪藻土過濾，丙酮洗滌，聯合的有機相經濃縮獲得lg化合物6.未經加工的派生物不經進一步純化可用於下一步反應。■HNMR:(200MHz,CDClj)J:0.02(6H,s,(CH，hSi);0,65(3H,s,C-18Me);0.88(9H，s,(CH3)3CSi);3,16(1H,m,C-23);3.37(1Hm,C-3);3.69(2H,m,C-23).I3CNMR(50,3MHz,CDClj)&212.64,71.96，60.84,55.27,50.66，49.87,48.94，43.37,42.69,38.94，35.64,34.39，32.70，32.00,30-36,29.68,28.53,25.85,24.64,23.50,21.80,18.84,12.01,11.94,-4.68.273oc—*又—丁基二甲基石圭氧—7a—，至基—6a—乙》克—24—去曱-5|3-膽烷-23-油(7)化合物6(lg,1.96mmol)在THF(50ml)和H20(12.5ml)的混合5容液中，力口入NaBH4(740mg,19.6mmo1),於室溫攪拌1小時30分4中。反應溶液真空部分濃縮並以CHCl3抽^是(3x20ml)。聯合的有才幾層以鹽水(1x50ml)洗滌，無水Na2S04乾燥並真空蒸發。未經加工的殘留物4吏用CH2C12:MeOH99:1混合物作為流動相通過矽膠快速層析純化，獲得0.8g化合物7(81%產量)。formulaseeoriginaldocumentpage283a-*又—丁基二曱基石圭氧一7a—,》基—6a—乙》克-24-去曱-5P-膽烷-23-碌u酸三乙基銨鹽(8)4匕合4勿7(0.5g,0.99mmo1)的THF(7ml)溶液冷3卩至-3。C,加入E^N(0.3ml,2.1mmol),混合物4覺拌10分4中。加入C1S03H(0.1ml，1.5mmol),混合物室溫攪拌過夜。加入水(10ml)，混合物以CH2Cl2(3x15ml)抽提，無水Na2S04乾燥並真空蒸發。未經力口工的闢^酸鹽>派生物不經進一步純^:可用於下一步反應。3oc，7a,23-三夾至基-6oc-乙烷—24—去甲—5p—膽烷—23-硫酸三乙基銨鹽(9)4匕合#勿8(0.5g,0.77mmo1)6々丙酉同(8ml)溶液中，力口入PdCl2(CH3CN)2(10mg，0.05eq)，混合物於室溫攪拌3小時。反應混合物經過濾，真空濃縮，使用MeOH/H208/2混合物作為流動相通過中壓LichroprepRP-8純化，以獲得0.115g化合物9，mp118—121°C。'HNMR(200MHz,CD3OD)&0.70(3H,s,C-18Me);0.91(3H，m,C-21Me,3H,C-25);0.98(3H,d,/=6.4Hz，C-19Me);1.32(9H，t,/=7.3Hz,(CH3-CH2)3N);3.20(6H，q,/=7.31Hz,(CH3-CH2-)3N;3.31(1H,m,C-3);3.65(1H,bs，C-7);4.03(2H,m,CH2-23).I3CNMR(CD3OD)5:9.23,12.05,12.19,19.14,21.97,23.52,23.76,24.57,34.23,34.51,36.56,36.65,36.79,41.06,41.55,43.13,47.73,50.28,51.68，57.80，67.19,71.16,73.23.3a,7ot，23-三#5基-6a—乙烷—24_去曱—5(3—月旦*克-23-硫酸鈉鹽(9)〉VS合淨勿8(0.4g,0.72mmol)在丙酉同(4ml)禾口H20(0.08ml)的混合溶液中加入PdCl2(CH3CN)2(10mg，0.05eq),室溫4覺拌3小時。反應混合物經硅藻土過濾並真空濃縮。最後的產物以10%NaOH甲醇溶液處理2小時。最後的混合物以真空濃縮，使用CH3OH/H20(7:3)作為流動相以液相中壓純4匕，製備0.09g化合物10(25%產量)。實施例2生物活性首次進行實驗以—險證與鵝去氧膽酸(CDCA)相比，UPF-987是否能調節FXR-相關基因。CDCA是一種主要的膽酸，其29具有法尼酯衍生物-x-受體(FXR;NR1H4)內源性配基的作用。通過4吏用螢光共振能量轉移(FRET)細胞自由測定的體外實驗首)欠測定UPF-987對於FXR活i生的生4勿活'性，如PellicciariR,etal.，JMedChem.200215;45:3569-72描述。簡要的，反應包括了銪-標記的抗-GST抗體和抗生物生活蛋白-連接的別藻藍蛋白，FXRGST-LBD融合蛋白和生物素化的SRC1傳感器多肽。在FRET緩沖液(lOmMHepes,pH7.9,150mMNaCl，2mMMgCl2，1mMEDTA,O.lmg/mlBSA)中於室溫反應1小時。以Victor1420多標計悽t器測定FRET。FRET無細胞實驗中，Scr-1，一種FXR的共-激活因子，其產生的濃度幾乎比自然FXR-配基CDCA需要的低300倍(表1)。表1FRET中UPF-987對人類FXR的活性tableseeoriginaldocumentpage301CDCA=100%時SRC1多肽對於FXR的相對補充。所有悽史4居為平均±SE，n=4。j吏用人類肝細月包系(HepG2)進行細胞實驗評估UPF-987是否調節FXR-相關的基因。使用HepG2細胞系的細胞轉染實驗中，UPF-987提供了潛在的FXR配基。HepG2細胞暴露於UPF-987反式;敫活FXR。以帶有FXR基因的病毒載體或克隆在螢光素酶基因下遊的其他核酸受體轉染的肝細胞的其他實驗中，發現FPF-987作為小鼠，大鼠，和人類肝細胞中的選擇性FXR配基。本方法的詳細描述見一下參考FirucciS,etal.，Gastroenterology2004。簡要的，螢光素酶方法中，HepG2細胞以補充1%青黴素/鏈黴素，1。/。L-穀氨醯胺和10%胎牛血清(高葡萄糖)(CELBIO)的E-MEM中培養。細胞於37。C,50/。032生長。所有轉染1吏用鈣石粦酸共沉澱方法進《亍，以25juM氯奎作為DNA降解的抑制劑。使用500ng受體載體phsp27-TKLUC進4亍瞬時轉染，200ngPcmv-Bgal作為轉染效果的內控，各50ng受體表達質粒pSG5-FXR,pSG5-RXR。加入pGEM載體以規範每個實驗中DNA轉染的tt量(2.5jag)。以pCMV-|3-gal質粒共轉染細月包，才艮據P-gal表達評估轉染效果。轉染48小時後，H印G2細月包以1juMUPF-987刺激18小時。對照培養基只以i某介(0.1%DMSO)處理。以lOOial稀釋的受體裂解緩衝液(Promega)裂解細胞，用焚光素酶分析系統(Promega)分析0.2jul細月包裂解物中焚光素酶的活性J吏用自動光度計測定發光。通過區分p-半乳糖肝酶活性的相對光單位，對轉染效果螢光素酶活性進4於標化。HepG2細胞中UPF-987對FXR目標基因表達的調節為研究UPF-987是否為FXR的調節物並表現不同的活性，人類HepG2細胞暴露於UPF-987，CDCA(自然FXR配基)和其6-乙烷-》泉生物，6-ECDCA,其為一種潛在的FXR配基。通過定量反轉錄PCR(qRT-PCR)研究這些配基對於FXR應答基因的效應。簡要的，利用NCBI資料庫中的序列數據，使用PRIMER3-OUTPUT4欠件設計所有PCR引物。從肝臟中提取全部RNA(TRIzol試劑，Invitrogensrl，Milan,Italy)。1樣麼克純化的RNA以DNAseI室溫處理10分鐘，隨後加入2.5mmol/LEDTA於95°C孵育3分鐘。使用隨機引物在20ju1反應體積中以SuperscriptIII(Invitrogen，Carsbad,CA)7十RNA反轉錄。lOOng才莫牙反溶解於25jul反應液中，其含有0.3/nL每種引物和12.5jul2xSYBRGreenPCRMasterMix(Fynnzimes-DyNAmoSYBRRGreenqPCRmix)。所有反應進4亍三次重複，在iCycleriQi殳備(Bio-Rad,Hercules,CA)上進行，循環條件如下2分鐘95。C,隨後進4亍95。C20秒，55°C20秒和72°C30秒循環50次。計算每個樣本重複實驗的平均值，以循環限度表示(CT;每個PCR反應達到子貞定的螢光限度時的循環It,對於所有反應都i殳置一個線性範圍)。通過目標基因樣本的CT值和內源性對照(GAPDH)的平均CT值的差值(ACT)計算基因表達的數量。以測定的對照樣本和每個目標基因間ACT的差異(△ACT)計算相對表達。相對mRNA表達以2-△ACT顯示(表3)。實時PCR中使用的引物為hGAPDH:gaaggtgaaggtcggagtandcatgggtggaatcatattggaa;hCYP7Al:caccttgaggacggttcctaandcgatccaaagggcatgtagt;hSHP:gctgtetggagtccttctggandccaatgatagggcgaaagaagag;hBSEP:gggccattgtacgagatcctaaandtgcaccgtettttcactttctg;hSREBPlc:gcaaggccatcgactacattandggtcagtgtgtcctccacct.相對於表3，使用定量反轉錄PCR體外實驗的差異，顯示暴露於任《可這些配基沒有直4妄的細力包毒性，HepG2細月包暴露於CDCA和其6-ECDCA派生物，導致2-3倍的SHP,—種FXR調節基因的應答。通過比較，儘管UPF-987是一種FXR配基(見上述)，其刺激SHP的表達。所有測試的FXR配基，CDCA,6-ECDCA和UPF-987發揮相同的對於CYP7a1的效果(所有32試劑導致CYP7a1mRNA表達減少60-70%)。此夕卜，暴露於UPF-987引導了BSEP和SHPmRNA表達(大約2-3倍)。UPF-987相比其他FXR酉己基的效應更明顯。進一步，相似於其他配基，暴露於UPF-987造成潛在的抑制SREPB-lc和FASmRNA表達的結果。綜述，這些lt據顯示UPF-987是一種作為潛在的FXR配基的FXR調節物，並意外地改變FXR調節基因，導致膽酸轉運(例如BSEP)的顯著減少和脂質相關基因的抑制。此外，UPF-987抑制CYP7al的表達，其為一種由膽固醇合成膽酸過程中涉及的基因。這些FXR目標基因的調節顯示UPF-987是一種基因-選擇性FXR配基，其通過經典途徑增加肝臟中膽酸的分泌抑制膽酸的生物合成，而不影響SHP表達。該效應是所期望的，因其減小了這些FXR配基的藥物學活性，並可以預防SHP相關的代謝活性。表2顯示了對於UPF-987的體外藥物學實驗結果。表2UPF-987的體外藥物學結果細胞實驗材料劑量物種終點結果簡述無細胞^實驗UPF-987CDCA濃度範圍由lnM至100MMn/aUPF-987作為FXR配基在無細力包實驗FRET方法中的效果這些實—驗結果顯示UPF-987是一種潛在的FXR配基(EC5。~14nM)肝細胞UPF-濃度對FXR和UPF-987導致系987範圍人類FXR相關基FXR的反式激活。(HepCDCA由1因(SHP，UPF-987是一種33tableseeoriginaldocumentpage34素，Alc。碌酸酉旨酶和月s固醇)，施用UPF-987減少了ANIT引發的膽汁鬱積並調節肝臟NTCP,BSEP和CYP7A1mRNA表達實施例3UPF-987對FXR目標基因的體內調節背景化合物9也指UPF-987。FXR在膽酸代謝和脂/膽固醇和葡萄糖動態平衡中涉及的基因的轉錄調節中起關鍵作用。這些交互作用的調節是高度複雜的並包括多重反饋迴路以自身-調節轉錄循環。竟爭性和拮抗配基，以及FXR與其他包括PPARs和LXR的代i射核酸受體共享的目標基因的重疊範圍，可以作為多餘的保護才幾制以引起保護反應，從而當一種途徑折衷時，補救的途徑可以替代。假設的代謝核酸受體收斂和發散功能複雜性的關鍵是其轉錄共刺激物和共抑制物，其在多種FXR調節方式中被引發。FXR調節物可以用於治療-瞼證，淤膽，纖維性肝失調，和代謝失調，包括高甘油三酯血症和高膽固醇血症，以及，擴展的，動月永》更^:症和其併發症。綜述，FXR不僅僅由於其與調節相關的應用，也由於其配基識別和基因激活中的特定機制，可以作為特別期望的治療藥物。材灃牛和方法動物6—8周齡雌性Balb/c小鼠由CharlesRiver(CharlesRiver實l全室，Inc，Wilmington,MA)獲4孚。動物以才示準chowpelletdiet餵食，有々大水自由通道，12小時的黑暗/光亮循環。本研究中的所有方法4艮據政府動物1呆護指導由Perugia大學(義大利)動物研究委員會提供。動物5天內通過腹腔內注射6-ECDCA,5mg/Kg/天，對照動物僅以々某介處理(曱基-纖維素)。實驗末期處死小鼠，分離肝臟進行實時PCR分析FXR目標基因。35定量實時PCR如上述進行(見1.1材料和方法)。使用的引物為mGAPDH:ctgagtatgtcgtggagtctacandgttggtggtgcaggatgcattgmBSEP:aaatcggatggtttgactgeandtgacagcgagaatcaccaagmSHP:tctcttcttccgccctatcaandaagggcttgctggacagttamCYP7Al:aagccatgatgcaaaaccteandgccggaaatacttggtcaaamSREBPlc:gatcaaagaggagccagtgcandtagatggtggctgctgagtg結果完整小鼠中以5mg/kg劑量體內施用UPF-9874天後，肝臟中產生潛在的BSEP和SHP誘導。儘管通過上述體外實驗初步討^侖獲得了激發性的，然而是矛盾的目標基因表達數據，體內數據顯示Cyp7al潛在的下調(60-70%)作用。UPF-987也導致肝臟中SREBP-lc和FASmRNA表達的90%水卩制。(圖5)實施例4大腸炎TNBS小鼠模型中評估UPF-987抗-炎症活性材料和方法大腸炎模型半抗原TNBS的結腸內應用引起嚙齒類動物急性和慢性大腸炎。TNBS-大腸炎黏膜炎症具有顯著的嗜中性滲透作用，但也包4舌CCRl+和CCR5+巨噬細胞和單核細胞的滲透和顯著的IL-12和IFN-依賴的T淋巴細胞(Thl)激活。組治病理學特徵類似於人類節^殳性迴腸炎，透壁的炎症，肉芽腫病，裂隙潰瘍和"跳;夭性病變"(潰瘍範圍被正常黏膜範圍分離)。TNBS-大腸炎可作為有用的測i式建立和創達斤節,殳性迴腸炎治療方法的臨床前模型。動物動物每天監控腹瀉，體重減輕，和存活情況。實驗末期，處死存活的小鼠，心臟刺石皮採集血液樣本，切離7cm結腸片斷，稱重，i平估宏觀損傷。大腸炎誘導和研究設計在BALB/c小鼠(8周齡)中通過直腸內施用TNBS(0.5mg/小鼠)-誘導大腸炎。開始3小時之後連續以24小時為間隔，5天內，小鼠腹月空內施用UPF—987(0.3—1-3mg/kg)或J某介(曱基纖維素1%)。每組包括5至7隻小鼠。最後施用測試藥物或媒介18小時後處死小鼠。通過評估宏觀損傷對大腸炎嚴重程度分級。後者是組織中粒細月包浸潤的指標。大腸炎的宏^L分級的詳細描述見Fiomcci等，包括O盲分(正常)至4(嚴重損害)級別。體重和糞便密度在研究的開始和最後進行紀錄。收集每個小鼠末端糹*.腸糹且織才羊-本並^口前戶斤Hii4亍實一驗。大腸炎的宏觀分級結腸在解剖鏡(5x)下觀察並根據宏觀損害分級，基於反應炎症的標準，如充血，腸增厚，和潰瘍程度分為10級。定量實時PCR^口前所述通過定量實時聚合酶鏈反應(RT-PCR)評估小鼠大腸基因表達。從結腸末端組織提取全部RNA。使用NCBI資料庫發表的序列數據，以PRIMER3-OUTPUT軟體設計引物37mGAPDH:ctgagtatgtogtggagtctac油dgttggtggtgcaggatgcattgmTNFa:acggcatggatctcaaagacandgtgggtgagcacgtagtmILip:tcacagcagcacatcaacaaandtgtcctcatcctcgaaggtcmlL6:ccggagaggagacttcacagandtccacgatttcccagagaacmINPy:gctttgcagctcttcctcatandgtcaccatccttttgccagtmiNOS:acgagacggataggcagagaandcacatgcaaggaagggaactmTGFpi:ttgcttcagctccacagagaandtggttgtagagggcaaggacmFXR:tgtgagggctgcaaaggtttandacatccccatctctctgcac實施例5"i平4古UPF-987在大鼠淤膽才莫型(ANIT)中的效應背景肝臟內堆積細胞毒性膽酸造成膽汁鬱積，其引發肝臟損害最後導致膽汁纖維化和硬化。淤膽肝損害可被多種內在的肝保護機制抑制。這些防衛機制包括抑制肝膽酸的表達和新膽酸的合成。此外，I相和II相膽酸解毒被引發使得膽酸親水性增強。除了通過微管4t出系統的"直立行走"輸出，這些化合物也可以通過基底外側的"選擇性"輸出系統輸出至系統循環並通過腎排除。親水性膽酸的被動性腎小球過濾，活性腎管分泌，和管膽酸再吸收的抑制促進了膽汁鬱積時腎膽酸的排除。根本的分子機制主要為通過包括核酸受體和其他轉錄因子的複雜網絡的轉錄水平調節。法尼酯X受體FXR，孕烷X受體PXR，和維生素D受體VDR已經^皮鑑定為膽酸的核酸受體。然而，對於膽酸的糹艮本的對應應答不能完全防止膽汁鬱積肝臟損害。因此，需要額外的治療策略如核酸受體的定位激活，以增強肝臟對毒性膽酸的防禦。材料和方法動物才艮據Pemgia大學動物研究委員會批准進行wistar大鼠研究。從CharlesRiverBreeding實-g全室(Portage,MI)獲4尋名,寸生wistar大鼠(200-250g),以標準實-驗室大鼠^泉飼養，12小時光亮/黑暗循環。淤膽模型方法a-萘基-異硫氰酸鹽(ANIT)第一組大鼠(N-6)以100mg/kg,每天，通過強飼法以ANIT處理(引發淤膽)，第二組和第三組(N=6)以ANIT100mg/kg強飼法加上每天腹腔內施用5和3mg/kgUPF-987。對照大鼠(N=4)施用4某介(生理溶液I.P.)。研究末期，大鼠以戊巴比妥鈉麻醉處死(50mg/kgi.p.)並通過心臟穿刺採血；分離肝臟並稱重測^式，收集血液糹羊本。定量實時PCR如前所述通過定量實時聚合酶鏈反應(RT-PCR)評估大鼠基因表達。使用NCBI資料庫發表的序列數據，以PRIMER3-OUTPUT軟體設計引物39rGAPDH:atgactctacccacggcaagandatgactctacccacggcaagrSHPcctggagcagccctcgtctcagandaacactgtatgcaaaccgaggarBSEP:aaggcaagaactcgagataccagandtttcactttcaatgtccaccaacrCYP7Al:ctgcagcgagctttatccacandcctgggttgctaagggactorCYP8Bl:cccctatctctcagtacacatggandgaccataaggaggacaaaggtctrNTCP:gcatgatgccactcctcttatacandtacatagtgtggccttttggactrMdrl:cgttgcctacatccaggtttandgccattgcctgaaagaacatrMdr2:gttctcgctggtcttcttggandcgtctgtggcgagtcttgtarMMP2:gatggatacccgtttgatggandtgaacaggaaggggaacttg結果測定UPF-987對oc-萘基異硫氰酸鹽(ANIT)誘導的大鼠膽汁鬱積的體內保護作用。施用ANIT導致嚴重膽汁淤積，Fiomcci等先前的研究(未出版)已經顯示6-ECDCA在本模型中不能有效減少肝臟損害。通過評估三種膽汁淤積和血漿膽固醇標誌物，血清水平的AST,yGT和鹼性磷酸酯酶，施用UPF-987減弱了ANIT處理大鼠的肝臟損害。此外，UPF-987,調節NTCP，CYP7A1和BSEP表達。實施例6評估INT-1103在大鼠淤膽才莫型(ANIT)中的效應背景INT-1103是6-乙烷-鵝去氧膽酸(6E-CDCA或INT-747)的石jUt》泉生物，其描述於美國專利號7138390，通過引述在此合併於本文。材泮十和方法淤膽模型根據Perugia大學動物研究委員會批准進行a-萘基-異石危氰酸鹽(ANIT)wistar大鼠研究。從CharlesRiverBreeding實-驗室(Portage,MI)獲4尋i禽性wistar大鼠(200—250g),以才示準實馬全室大鼠4泉飼養，12小時光亮/黑暗循環。第一《且大鼠(N=8)以100mg/kg,每天，通過強飼法以ANIT處理(引發淤膽)，第二組和第三組(N=8)以ANIT100mg/kg強飼法加上每天腹腔內施用5mg/kgINT-1103。對照大鼠(N=8)施用々某介(生理溶液I.P.)。研究末期，大鼠以戊巴比妥鈉麻醉處死(50mg/kgi.p.)並通過心臟穿刺採血；分離肝臟並稱重測試，收集血液樣本。定量實時PCR如前所述通過定量實時聚合酶鏈反應(RT-PCR)評估大鼠FXR目標基因表達。使用NCBI資料庫發表的序列數據，以PRIMER3-OUTPUT軟體設計引物rGAPDH:3tgactctacccacggc幼gandatgactctacccacggcaagrSHPcctggagcagccctcgtctcagandaacactgtatgcaaaccgaggarBSEP:aaggcaagaactcgagataccagandtttcactttcaatgtccaccaacrCYP7Al:ctgcagcgagctttatccacandcctgggttgctaagggacterCYP犯l:cccctatctctcagtacacatggandgaccataaggaggacaaaggtctrNTCP:gcatgatgccactcctcttatacandtacatagtgtggccttttggactrMdrl:cgttgcctacatccaggtttandgccattgcctgaaagaacatrMdr2:gttctcgctggtcttcttggandcgtctgtggcgagtcttgtarMMP2:gatggatacccgtttgatggandtgaacaggaaggggaacttg41實施例7評估INT-1103在大鼠淤膽才莫型(BTL)中的效應才才料禾。方法(BTL)肝淤膽模型通過225-250g老年雄性Wistar大鼠膽管結紮(BDL)誘導。對Sham-operated大鼠(N=8)進行相同的腹腔鏡手術，除了所操作膽管沒有被結紮和分段。共處理24隻大鼠。手術3天後，存活的大鼠隨機通過腹腔內給予安慰劑，(fisioogic溶液)(N=6)或5mg/kgINT-1103(N=8)。動物實驗進行7天。研究末期，大鼠以戊巴比妥鈉麻醉處死(50mg/kgi.p.)並通過心臟穿刺採血；分離肝臟並稱重測試，收集血液4羊本。實施例8評估未處J裡大鼠中INT-1103和INT-747對膽汁流的作用才才料禾口方法200至250g成年^M生Wistar大鼠用於本研究。實-瞼前，動物給予標準飲食和隨意飲水，房間溫度(21-23°C)，溼度(45-50%),12小時光亮/黑暗循環。所有研究根據Perugia大學動物研究委員會批准進^亍。動物以單劑量戊巴比妥鈉麻醉(50mg/kg體重，腹腔內)並在整個實驗中維持該條件，測定膽汁流。使用PE—50聚乙丈希管(Intramedic;ClayAdams,Parsippany,NJ)頸靜脈導管插入後，腹部開中等切口，膽總管導管插入(PE-10,ntramedic;ClayAdams)。以熱燈使體溫維持在37.0至38.5°C以防止膽汁流受體溫過低影響。通過膽外瘻在195min內每15min收集膽汁樣本並且稱重以測定膽汁流量。假設l.Og/ml的膽汁濃度，通過重量測量法測定膽汁流。在9:00-11:OOAM之間收42集膽汁，使節律的影響最小。通過頸靜脈插管施用3jumoli/kg/min藥物，對照組Y又4妻受々某介(2%BSAfisilogic溶液)。實施例9評估J難激素瘀膽大鼠中INT-1103和INT-747對膽汁流的作用材料和方法300至350g成年孟,性Wistar大鼠用於本研究。實-驗前，動物給予標準々大食和隨意々大水，房間溫度(21-23°C)，溼度(45-50%),12小時光亮/黑暗循環。所有研究根據Perugia大學動物研究委員會批准進行。動物被隨機分成4個實驗組1.未處理，(N=5)2.以5mg/kg腹月空內5天施用17—乙炔基站,二酉事，(N=8)3.腹腔內5天施用5mg/kg17-乙炔基雌二醇+5mg/kgINT-747,(N=7)4.腹腔內5天施用5mg/kg17-乙炔基雌二醇+5mg/kgINT-1103,(N-7)在第6天(施用最後劑量的E217後1天)進行手術，收集膽汁。動物以單劑量戊巴比妥鈉麻醉(50mg/kg體重，腹腔內)並在整個實—驗中維持該條件，測定膽汁流。腹部開中等切口，膽總、管導管4悉入(PE—10，ntramedic;ClayAdams)。以熱燈l吏體溫維持在37.0至38.5。C以防止膽汁流受體溫過低影響。在9:00-11:OOAM之間收集膽汁，使節律的影響最小。在120min內每15min收集膽汁樣本，膽汁流通過重量測定法測定。在實驗的最後，稱量大鼠的體重和肝重。實施例10INT-747相對INT-1103對胰島素基因調節的體外研究材料和方法RT-PCR分析，在1%青黴素/鏈黴素，1%L-穀氨醯胺和10%胎牛血清(高葡萄糖)(CELBIO)的D-MEM中培養B-TC6胰細胞。細胞於37。C，5。/。C02生長並用最終濃度1nM的INT-1103和INT-747處理18小時。實驗末期收集細胞以提取RNA。實時PCR通過定量實時聚合酶鏈反應(RT-PCR)對小鼠基因表達進行定量。使用NCBI資料庫發表的序列數據，以PRIMER3-OUTPUT軟體設計所有引物。從肝臟中4是取全部RNA(TRIzol^式劑，Invitrogensrl,Milan,Italy)。1孩t克糹屯4b的RNA以DNAseI室溫處理10分鐘，隨後加入2.5mmol/LEDTA於95。C孵育3分4f。4吏用隨機引物在20ju1反應體積中以SuperscriptIII(Invitrogen,Carsbad，CA)對RNA反轉錄。100ng模板溶解於25jul反應液中，其含有0.3nL每種引物和12.5jul2xSYBRGreenPCRMasterMix(Fynnzimes-DyNAmoSYBRRGreenqPCRmix)。所有反應進4亍三次重複，在iCycleriQ設備(Bio-Rad,Hercules,CA)上進行，循環條件如下2分鐘95。C，隨後進行95。C20秒，55°C20秒和72°C30秒循環50次。計算每個才羊本重複實-險的平均值，以循環限度表示(CT;每個PCR反應達到預定的螢光限度時的循環數，對於所有反應都設置一個線性範圍)。通過目標基因樣本的CT值和內源性對照(GAPDH)的平均CT值的差值(ACT)計算基因表達的數量。以測定的對照樣本和每個目標基因間ACT的差異(AACT)計算相對表達。相對mRNA表達以2-△ACT表示。實時PCR中使用的引物為m<5APDH:gaaggtgaaggtcggagtandcatgggtggaatcatattggaa;mSHP:gctgtctggagtccttctggandccaatgatagggcgaaagaagag;mSREBPlc:gcaaggccatcgactacattandggtcagtgtgtcctccacct.mINS:tgttggtgcacttcctacccandttgttccacttgtgggtcctmSHP:aagggcttgctggacagttaandtctcttcttcctccctatcamGLUT2:ccctgggtactcttcaccaaandgccaagtaggatgtgccaat實施例11INT-747和INT-1103的物理化學特性背景兩種膽酸類似物，INT-747和INT-1103,才艮據先前發現並經我們實-瞼室優化的方法，具有完全的物理-化學特徵，並先前經R.Pellicciari實-瞼室研究應用於完全掃描大量系列的膽酸類A乂物(UDCA類似物)。選擇物理-化學特徵以精確定義緩衝溶液和生理體液的特性，並建立其對生理成分的潛在毒性，其在不同生物體液和器官中的藥^動力學和藥效學及生物分布。與自然類似物的比較數據也一皮提供並討論。水溶解性454義<又研究旁鏈羧基BAINT-747,CDCA和UDCA。固體BA懸浮於5mlO.IMHC1。孵育1周後，飽和溶液經Millipore過;慮(0.22nm),<吏用C18讒主子(150mmx2mmi.d.4jam)以HPLC-ESI-MS/MS測定BA的濃度，水流動相包括15mMpH5乙酸和乙腈。流速為150jal/分鐘。使用陰離子ESI源多重反應監控模型進ff質譜採集。緩沖溶液以inmoi/升表示表3:膽酸研究的緩沖溶液tableseeoriginaldocumentpage46*水溶性指BA作為質子化物質因此不對INT-1103評估測定pH值為1時羧酸鹽膽酸的不溶性質子化物質的水溶性。碗酸鹽化合物，UPF1103在低pH時仍是電離的並且在所有生理體液的生理環境下是始終可溶的。INT-747的水溶性是9"M，其比CDCA低，與UDCA相當。因為INT-747的CMC相對較低(見下一章節)，INT-747的低水溶性並不折衷膠束相化合物的特性；對於UDCA，高CMC相關的低水溶性折衷於使溶液中質子化酸形成膠束的pH。事實上，UDCA的CMpH是8.4,如果不在十二指腸中顯現餐後鹼化作用，其是過高的。臨界孩i團濃度(CMC)60mM的INT-747及存在0.15MNa+時形成月交束相，i兌明了該條件下發現的相關非#青確ST數據(圖1)。這些結果是不驚奇的，因為其他去汙劑自然BA,4。去氧膽酸類似;也形成該凌是"交(通常為黏彈性的)，特別是在反相離子如Na+和Ca—的作用下。該相位發展出相對低動力學的膠束相。此外該現象發生在非常高的非生理濃度下。辛醇/水劃分凌文應使用常規^罷弁瓦方法;平估1-辛醇/水劃分效應(logP)。實驗在pH8O.lmM月旦鹽溶液和0.1M磷酸緩衝液中進行以確保BA的完全電離；logP值指電離形式的BA,非質子化物質，每種BA的最初;農度在其CMC值之下。緩沖溶液預先以1-辛醇預-々包和，加入5ml水預-飽和的1-辛醇，樣本於室溫連續攪拌平衡2周。離心後分離兩相。4吏用C184主子(150mmx2mmi.d.,4jum)HPLC-ESI—MS/MS測定水相中BA濃度，流動相A:15mM乙酸水溶液pH5，B:乙腈。流速為150jul/分鐘，柱子維持在45°C。使用陰離子ESI源在多種反應監控模型中進行質鐠分析。tableseeoriginaldocumentpage49計算電離物質的1-辛醇-水分離係數以促進羧基和石危酸鹽膽酸的比4交，而後者在非常低的pH時不被質子化。INT-747相對於其他二羥基膽酸如UDCA和CDCA,具有略高的親脂性。增加的親脂性是位點6引入乙烷基團的結果。在脂質範圍中的分布趨勢因而更高。由於石危酸基團和側《連長度，UPF1103顯示lpgP為2.0，略低於INT-747和自然CDCA和UDCA類似物。此夕卜，INT-1103的親脂性類似於非結合的BA並高於牛磺酸連4妻的TCDCA，其logP為0.9。相反的，7jc相中的牛碌酸連才妄物，INT-1103類似於INT-747具有在脂質區i或聚集的趨勢。白蛋白結合通過固定BA-白蛋白比例平衡透析評估白蛋白結合。BA溶解於100juM5。/。牛血清白蛋白-鹽溶液並放置於25°C24小時。2ml該溶液置於分子量截留值為12-14000的纖維素嚢中，以25ml鹽溶液透析。系統通過機械振動在25。C平《軒72小時。用HPLC-EIS-MS/MS以前述相同的條件測定透析溶液和起始溶液的BA濃度。表6:研究的月旦酸的白蛋白結合*:文獻值tableseeoriginaldocumentpage50INT-747和UPF1103都表現了類似於自然雙羥基膽酸，如CDCA和UDCA的與白蛋白的強交互作用，顯示肝臟吸收的類似動力學。三羥基膽酸如膽酸或牛石黃酸連接的膽酸顯示較低的白蛋白交互作用，-說明了顯示的腸吸收中更低的血清濃度，造成更高的第一4侖清除結果。未結合的片斷(與許多藥物類似)調節肝臟吸收片斷增力口吸收。INT-747和INT-1103具有更低的非結合片斷因此作為相對較低的第一輪清除，其血清濃度更高，其特性相似於自然類似物。臨界膠束pH該一f直可以通過評估給定BA開始由月交束、溶液沉澱的pH{直測定。可以由CMC計算。質子4匕物質水〉容液和pKa為以下形式CMpH=pKa+logCMC/WS。表1描述了研究的化合物與自然類合乂物比4交的CMpH。表7:研究的膽酸臨界膠束pHtableseeoriginaldocumentpage51INT747的CMpH值相似於CDCA而低於UDCA。根據該值INT747沒有腸內可〉容性的問題，並且需要pH7.6的溶解生理條件。例如UDCA的CMpH值為8.4,需要十二指腸中的更高鹼性，並且只在々大食後階—敬以月交束相溶解。UP1103具有錄b酸基團，不具有該問題，其在2至9的生理pH下都為可溶，因此pKa非常^f氐，化合物並不質子化形成非可溶性分子。其性質類似於牛磺酸連接的膽酸。實施例12大鼠iv灌$#3jumol/Kg/分鐘INT-747和INT-1103—'J、時後的肝臟^i射和分泌背景大鼠膽管灌輸BA,7小時內每15分鐘收集膽汁。測定膽汁流，HPLC-ES-MS-MS分析膽汁以鑑定膽汁分泌速度並評估主要肝臟代i射。HPLC-ES-MS/MS方法通過液相色譜-串寫關質譜(HPLC-ES-MS/MS)方法使用陰離子才莫型電噴射(ESI)源測定膽酸和其代i射物。大鼠膽汁樣本置於室溫並以15mM醋酸銨緩衝液(pH5)1:100v/v-1:1000v/v稀釋。10juL注射入色讀-柱。4吏用WatersAlliance2695分離單元及自動近樣裝置進4亍液相色i普。4吏用SynergiHydro-RPC18柱子(150x2.0mmi.d.，4/am粒徑)分析膽酸，SecurityGuardODS4x2.0mmi.d。寸呆護^主寸呆護，由Phenomenex才是供。4吏用15mM醋酸銨《爰沖液(pH=5.00)作為流動相A及乙腈作為流動相B以洗脫梯度分離膽酸。流動相B在12分鐘內由30%增加至64%，隨後在8分鐘內增加至70%,最後在IO分鐘內達到100%並維持1分4f。流速為150juL/分鐘，柱子維持45。C。多重反應監控(MRM)獲得衝莫型操作，用Quattro-LC"鼓小質量)三四質譜以ESI-MS/MS分析柱子流出物。MassLynx軟體4.0版用於獲得和才喿作^:據。結果INT-747主要以牛石黃酸結合物分泌入膽汁中並且其回^li:是幾乎完全的給藥劑量時超過99%的灌輸分子分泌入膽汁中，如圖3顯示。膽汁收集的最後點在膽汁中仍分泌相當高數量的牛磺酸結合化合物。在輸送末120分鐘後達到最大分泌速度。隨後30分鐘維持穩定的濃度階段。牛磺酸結合方法開始於非常早期，並且在給藥劑量上顯示效果。痕量的化合物也與甘氨酸結合，其少於0.2%並且顯示的數量分泌入膽汁中。INT-747的特性與自然乂又羥基類似物如CDCA活UDCA類似，其^f又以牛磺-酸和甘氨酸結合物形式分泌入月旦汁中。不同的，商羥基BA如CA，也可以部分以非結合形式分泌。非修飾BA的分泌範圍依賴於其親脂性和劑量及物種。該分子的肝臟吸收和分泌特性與自然類似物如CDCA非常52顯示，並且肝臟分泌的速度與CoA活性介導的牛》黃酸結合和牛磺酸肝臟利用率相關。與牛石黃酸的結合是大鼠和其他物種(狗，小鼠，...)特有的，人類中該化合物主要與甘氨酸結合給藥。根據這些悽t據顯示INT-747可以有效的被肝臟吸收和分泌。INT-747的肝臟代謝過程主要為牛石黃酸結合形式。痕量的甘氨酸結合物在膽汁中分泌，並且分泌量非常少(圖37和38)。膽汁中存在非結合的和牛磺酸結合的小差向異構體(圖39和40)。^口圖41顯示INT-1103在月旦汁中部分以非^修飾形式分泌。膽汁中INT-1103的分泌量約為《會藥劑量的30-40%，其分泌速度相對4交{氐，收集末期相當高婆史量的分子仍分泌入膽汁中。大鼠中給藥劑量的INT-1103的主要肝臟代謝物為3-葡萄糖甘酸，如圖42所示。由於沒有純〗匕的參考標準物，沒有對該化合物定量。其他分泌入月旦汁的代i射產物描述於圖43，更詳細見圖43和圖44。奠定的主要代謝產物是3-硫酸鹽結合物，一種羥基類似物(超過一個羥基)，酮派生物和INT-1103差向異構體。由於沒有純化的參考標準物，沒有對這些化合物定量。這些悽《據顯示INT-1103可以以該方式分泌入膽汁，並且其特性與需要與牛磺酸和甘氨酸結合分泌入膽汁的自然雙羥基類似物如CDCA和INT-747不同。這是這些分子親脂性所需的主要方面。相反，可以分泌入膽汁的三羥基BA如CA或UCA也部分如此。INT1103中的硫酸基團促進分泌過程，即使該分子仍是親脂性的，並且其特性在非連接和牛磺酸連接膽酸之間。此外肝臟主要將該化合物代謝形成更具親水性的化合物，如3-葡萄糖甘酸，3-闢b酸鹽和羥基化類似物。^呆留化合物的廣泛代i射作用與動物種類和給藥劑量相關，並且根據這些數據我們可以推測該化合物的代謝相似於"酸甾體"，稍不同於通常的膽酸，但可能具有相同的特性。我們不知道人體中的代i射，但如果其特性更53類似於一種甾體，其在人類體中可能轉化為3-葡醛酸。化合物通過ivi合藥並且需要進一步的數據以評估其腸吸收的程度，例如類似牛磺酸結合物的去活性或激活性。實施例13人類糞便培養的體外代謝穩定性對於腸道細菌的穩定性；7a-脫羥基均質新鮮人類糞便(500mg)轉移至無菌小並瓦中，加入5mL無菌碎肉-葡萄4唐i咅養基(ScottLab,Fiskville,RI)。力口入BA至糹冬;農度0.05mM。小弁瓦於37。Ci咅養；加入BA0,4，8,16,20,24和72消失後，加入150L30%KOH終止反應.樣本經3500rpm離心10分鐘；以C-18固相分離上清液中的BA並用TLC和HPLC-ES-MS/MS分才斤。4吏用0.25m厚度石圭月交4反(Merck，Darmstat，德國)薄層色譜(TLC)，進行第一次篩選實驗。用於分離結合BA的溶劑系統包括丙酸/乙酸異戊酉旨/水/N-丙醇(3:4:1:2,v/v/v/v;溶劑I)，非結合BA的溶劑為乙酸/四氯化碳/異丙醚/乙酸異戊酯/水/N-丙醇/苯(1:4:6:8:2:2,v/v/v/v/v/v;;容劑II)。分離的BA以5%石粦鉬酸乙醇-容液顯色。INT-747和INT-1103經人類糞侵J備養都非常穩定，如圖45顯示甚至24小時後可以回收超過85%的非修飾化合物。相反，參考自然類似物CDCA的半衰期為1小時，孵育8小時後幾乎完全代謝(雙羥基化)形成石膽酸。結果圖46的數據顯示，第6位乙烷基團的存在通過空間位阻保護了7鞋基基團的氧化或去除。此外，兩種類似物，特別是INT-1103非常穩定。側鏈酯鍵在人類糞便培養物中非常穩定。通過HPLC-ES-MS/MS沒有發現微小代謝物。實施例14十二指腸/胰液刺激的體外穩定性(USP規範)材料和方法本研究僅針對INT1103,由於側鏈其含有酯鍵，目的是-瞼證存在胰酶時的穩定性，如在十二指腸和胰液中。以0.05M磷酸緩沖液溶解胰酶(SigmaP8096:來源於豬胰腺的胰酶，1xUSP規範的活性)製備10g/L胰液，pH-7.2±0.1.4mL胰液中加入50luMINT-1103並於37。C孵育不同時間(0，30，60，90，120,180，和240分鐘)。孵育後，2mL每種溶液加入2mL0.1MNaOH,通過SPE提取膽酸，以前述薄層色譜和質譜進行分析。權利要求1.結構式(I)的化合物其中R是氫或α-羥基位置7上的羥基基團是α或β位的和藥學上可接受的鹽，溶劑化物或其胺基酸結合物。2.一種結構式(I)的化合物，並且R為氫。3.一種結構式(I)的化合物,並且R為氫。4.一種結構式(I)的化合物，並且R為oc-羥基。其中位置7的羥基基團在ot位其中位置7的羥基基團在p位其中位置7的羥基基團在a位5.—種結構式(I)的化合物，其中藥學上可接受的鹽為:formulaseeoriginaldocumentpage36.—種結構式(I)的化合物，其中藥學上可接受的鹽為7.—種在哺乳動物中預防或治療FXR-介導的疾病或狀況的方法，包4舌對患有FXR-介導的疾病或狀況的哺乳動物施用治療有效劑量的根據權利要求1-4中任意一項所述的結構式(I)的化合物。8.4艮才居4又利要求5的方法，其中FXR-介導的疾病或狀況選自由十曼'l"生肝病，胃腸疾病，腎病，心血管疾病，和代j射疾病所-糹且成的《且中。9.根據權利要求6的方法，其中慢性肝病選自由以下疾病所組成的組中，原發性石更化(PBC),腦腱性黃瘤症(CTX),原發性硬化性膽嚢炎(PSC),藥物導致的膽汁鬱積，妊娠肝內膽汁淤積症，腸外吸收相關膽汁鬱積(PNAC)，細菌過度生長或膿血症膽汁鬱積，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，肝移植相關移植物抗宿主病，活供體肝移植再生，先天性肝纖維化，膽總管結石，肉芽性肝病，肝內-或外惡性腫瘤，Sjogren症候群，結節病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1—抗月夷蛋白酶缺乏症。10.才艮據權利要求6的方法，其中胃腸疾病是選自由以下疾病所組成的組中炎症性腸病(IBD),包括Crohn，s疾病，潰瘍性腸炎，腸易激症候群(IBS),細菌過度生長，營養吸收不良，反射-後結腸炎，和孩i小性結腸炎。11.才艮據權利要求6的方法，其中腎疾病是選自由以下疾病所組成的組中糖尿病腎病，局灶節段性腎小球硬化症(FSGS),高血壓腎病，慢性腎小球炎，慢性移植性腎小球病，慢性間質性腎炎，和多嚢腎病。12.才艮據4又利要求6的方法，其中心血管疾病是選自由以下疾病所組成的組中動脈石更化症，動脈石更化，血脂障礙，高膽固醇血症，禾口高甘油三酯血症。13.才艮據4又利要求6的方法，其中代謝疾病是選自由以下疾病所組成的組中胰島素抗性，I型和II型糖尿病，或月巴胖。14.一種藥物組合物，包^"4艮據4又利要求1-4中的任意一項所述的結構式(I)的化合物和一種藥學上可接受的載體或稀釋劑。15.根據權利要求1-4中任意一項所定義的結構式(I)化合物在製備用於預防或者治療FXR-介導的疾病或狀況的藥物中的應用。16.根據權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於子貞防或治療FXR-介導的疾病或狀況的藥物中的應用，所述FXR-介導的疾病或狀況選自由慢性肝病，胃腸疾病，腎病，心血管疾病，,n^i射疾病，心臟血管疾病，動月永》更<匕症，動月永》更化，高膽甾醇血，和高脂血所組成的組。17.才艮據權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於預防或治療淤膽肝疾病'漫性肝疾病的藥物中的應用，所述淤膽肝疾病慢性肝疾病選自由原發性硬化(PBC),腦腱性黃瘤症(CTX),原發性硬化性膽嚢炎(PSC)，藥物導致的月旦汁鬱積，妊娠肝內膽汁淤積症，腸外吸收相關膽汁鬱積(PNAC),細菌過度生長或膿血症膽汁鬱積，自身免疫肝炎，慢性病毒性肝炎，酒精性肝病，非酒精性脂肪肝疾病(NAFLD),非酒精性脂肪性肝炎(NASH),肝移植相關移植物抗宿主病，活供體肝移植再生，先天性肝纖維化，膽總管結石，肉芽性肝病，肝內-或外惡性腫瘤，Sjogren症候群，結節病，Wilson's疾病，Gaucher，s疾病，血色病，或a1-抗胰蛋白酶缺乏症所組成的組。18.才艮才居權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於預防或治療胃腸疾病的藥物中的應用，所述胃腸疾病選自炎症性腸病(IBD),Crohn's疾病，潰瘍性腸炎，腸易激症候群(IBS),細菌過度生長，營養吸收不良，反射-後結腸炎，和樣史小性結腸炎所組成的組中。19.根據權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於預防或治療腎病的藥物中的應用，所述腎病選自由糖尿病腎病，局灶節段性腎小球硬化症(FSGS),高血壓腎病，慢性腎小球炎，慢性移植性腎小球病，慢性間質性腎炎，和多嚢腎病所組成的組中。20.根據權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於"頁防或治療心血管疾病的藥物中的應用，所述心血管疾病選自由動月永石更化症，動廚"更4匕，血脂障^礙，高膽固醇血症，和高甘油三酯血症。動力永石更^f匕症，動&;M更化，高月旦固商事血症，和高血脂所組成的《且中。21.根據權利要求1-4中任意一項所定義結構式(I)化合物在製備用於預防或治療代i射疾病的藥物中的應用，所述代i射疾病選自由fl夷島素抗性，I型和II型糖尿病，或月巴胖所組成的組中。22.藥物組合物，包括混合有藥學上可接受的載體和/或稀釋劑的根據權利要求1-4中任意一項所定義的結構式(I)化合物。全文摘要本發明涉及結構(I)的化合物其中R是氫或α-羥基；位置7上的羥基基團是α或β位；和藥學上可接受的鹽，溶劑化物或其胺基酸結合物。文檔編號C07J9/00GK101522703SQ200780032111公開日2009年9月2日申請日期2007年6月27日優先權日2006年6月27日發明者M·普魯澤斯基,R·佩裡恰裡,S·菲奧魯西申請人:英特塞普特醫藥品公司