廣藿香醇的新用途的製作方法
2023-09-19 02:15:20 1
專利名稱：廣藿香醇的新用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及廣藿香醇的新用途。
背景技術：
腺病毒AdV (Adneovirus),是無包膜雙鏈DNA病毒，由一個二十面體的蛋白質外殼所包裹。腺病毒主要感染多種脊椎動物，當中包括人類。其中，人腺病毒(Humanadenovirus, HAdv),屬於哺乳動物腺病毒屬。目前發現的HAdv有56個型別，分為7個種(A-G)，其中，B種腺病毒與人類致病性密切相關，尤其是B種腺病毒中的人3型腺病毒(又名人源腺病毒3型，HAdv-3)具有更高的毒性並且與嚴重的臨床症狀相關(張其威，等，人3型腺病毒GZ13株的分離鑑定及六鄰體蛋白的分子進化研究)。
目前發現，腺病毒是兒童呼吸道感染的常見病毒，可引起咽炎、結膜炎、肺炎、腦炎、角膜炎、腸炎等，還可致終年性、流行性感染，容易在幼兒園、學校和軍營新兵中暴發流行。腺病毒感染，多見於小於3歲的嬰幼兒，年齡越小越易感染。最常引起的感染性疾病是咽扁桃體炎，其次為肺炎、胃腸炎、支氣管炎及中耳炎等，嚴重者可並發肺外臟器損害，包括肝炎、腦炎、結膜炎及凝血功能異常，預後較差。其中，腺病毒肺炎是嬰幼兒肺炎的嚴重類型，曾於1958年、1963年在我國北方流行，病死率甚高。20世紀90年代以來，研究人員發現不少新的抗病毒藥物，目前在臨床上應用的抗病毒藥物已超過20餘種，但其確切療效仍有很大爭議。因為病毒是寄生在宿主細胞內，要保證抗病毒的藥物具有高度選擇性，既要能進入細胞，選擇性地有效幹擾病毒的複製過程，又要避免傷害宿主細胞，這是抗病毒尤其呼吸道病毒西藥中多存在選擇性高和毒副作用高的主要原因。如阿昔洛韋，對哺乳動物宿主細胞有一定毒性，大劑量注射可致動物睪丸萎縮和精子數減少。因此，抗病毒藥物的研究具有重要的實際意義，尋找一種高效、安全、副作用少的抗病毒藥物的研究勢在必行。廣藿香醇，為廣藿香揮髮油的主要成分，是歷版《中國藥典》規定的評價廣藿香藥材及廣藿香油質量標準的指標性成分。廣藿香醇又稱百秋李醇，是一種存在天然植物中的三環倍半萜化合物，其分子式為C15H26O,分子量為222. 37，結構如下
CH3
K中個、
HgG CH^廣藿香醇單體為無色晶體，有較淡的廣藿香香氣，其熔點為55 56°C，沸點2800C (常壓下)，相對密度為I. 0284，旋光度-97. 4° (c = 24，氯仿);不溶於水，溶於醇、醚和常用有機溶劑。現代藥理實驗表明，廣藿香醇具有抗炎、抑菌、抗雛蟲、抗氧化、拮抗鈣離子異常升高等藥理活性，有一定的新藥開發價值。目前，還未見使用廣藿香醇抗腺病毒以及治療腺病毒感染性疾病的相關報導。
發明內容
本發明的目的在於提供廣藿香醇的醫藥新用途。本發明提供了廣藿香醇在製備抗腺病毒的藥物中的用途。其中，所述腺病毒為哺乳動物腺病毒。進一步地，所述腺病毒為人腺病毒。更進一步地，所述腺病毒為人腺病毒B亞群。 進一步優選地,所述腺病毒為人源腺病毒3型Human adenovirus 3。其中，所述藥物是治療腺病毒感染性疾病的藥物。進一步地，所述藥物是治療腺病毒所致的呼吸道感染性疾病、眼部感染性疾病或胃腸道感染性疾病的藥物。進一步地，所述呼吸道感染疾病是鼻炎、咽炎、扁桃體炎、喉炎、氣管炎或/和支氣管炎。其中，所述藥物是由廣藿香醇為活性成分，加入藥學上常用的輔料製備而成的製劑。進一步地，所述製劑為口服製劑、注射製劑或外用製劑。廣藿香醇能夠有效抑制人3型腺病毒合成，具有一定的抗腺病毒作用，可用於治療腺病毒感染性疾病，尤其是人3型腺病毒感染性疾病；同時，廣藿香醇對宿主細胞毒性遠低於陽性藥物阿昔洛韋，毒副作用更低，為臨床用藥提供了一種安全有效的新選擇。
具體實施例方式廣藿香醇，可通過購買市售商品得到，也可通過現有分離純化方法製備得到。本發明具體實施方式
中所用廣藿香醇，經鑑定後，純度大於95%。實施例I抗病毒製劑的製備取廣藿香醇，加入適量可溶性澱粉、糊精，制粒，即得本發明抗病毒顆粒劑。實施例2廣藿香醇抗腺病毒的作用I、材料及儀器I. I細胞株和病毒株I. I. I 細胞株Hep-2細胞(人喉癌上皮細胞)，購自中國藥品與生物製品檢定所。I. I. 2 病毒株腺病毒選用常見的人3型腺病毒(HAdv-3)，是由甘肅省疾控中心饋贈的臨床分離株。I. 2藥物及對照藥物試驗藥物廣藿香醇。陽性藥物注射用阿昔洛韋規格為O. 25g/瓶，天津藥業焦作有限公司生產。批准文號國藥準字H20034034，生產批號10122403。
I. 3培養基、試劑及耗材DMEM培養基(Gibco 公司，批號1345538);胎牛血清(HyClone生物化學製品(北京)有限公司，批號NVM0347);胰蛋白酶(Amresco公司);青黴素G鈉、鏈黴素無菌細胞培養瓶和96孔細胞培養板(美國Corning公司)。l、5、10ml —次性吸管，200 μ I、Iml —次性槍頭(江蘇海門生物耗材公司)I. 4主要儀器隔水式恆溫CO2培養箱(型號MC0-15AC,日本三洋公司)；酶標儀(型號Varioskan Flash,美國 Thermo Scientific 公司)；OLYMPUS倒置顯微鏡(型號CKX41，日本奧林巴斯公司)；微量移液器(法國GILSON公司生產)； 隔水式電熱恆溫培養箱(型號GSV-DA-I，湖北省黃石市醫療器械廠)；水平離心機(型號LXJ-II，上海醫用分析儀器廠)；電子天平(型號JA-2603，上海天平儀器廠)2、試驗方法2. I藥物及陽性對照的前處理將廣藿香醇先與大豆油以2:1的體積比混合，然後加O. 5%吐溫-80助溶為白色液體製劑，其初始濃度為100mg/ml,過濾除菌後備用。將用於腺病毒的陽性對照藥物注射用阿昔洛韋用無菌水做1/10稀釋(S卩IOmg/ml)以備用。2. 2 50%組織細胞感染劑量的測定腺病毒用3%胎牛血清DMEM，稀釋成不同濃度的病毒液。腺病毒接種!fep-2細胞，於37°C，5%C02孵箱中培養7d後觀察感染細胞圓縮、脫落等細胞病變(cytopathiceffect，CPE)情況，以測定各病毒引起50%組織細胞病變的感染劑量(50%tissue culture infective dose, TCID50X2. 3細胞毒性測定將配製好備用的廣藿香醇預先100倍稀釋，然後與陽性對照藥阿昔洛韋用DMEM細胞培養液做連續對倍稀釋，共7個稀釋濃度，加入到Hep-2單層細胞中，不同稀釋度各藥物均重複3孔。37°C、5%C02培養5天，每天觀察細胞病變情況(CPE)。以引起半數細胞發生病變的藥物濃度判定為半數毒性濃度(TC5tl),以完全不引起細胞發生病變的藥物濃度判定為最大無毒濃度(TCtl)15實驗設連續對倍稀釋的0. 5%吐溫-80和正常細胞對照。2. 4抗病毒實驗根據病毒的複製周期，設計廣藿香醇抗病毒作用的三種途徑，每種病毒進行三組給藥途徑實驗，每一組都設正常細胞對照組、病毒對照組和陽性藥物對照組。具體操作如下2. 4. I藥物抗病毒生物合成實驗(先上毒)將100μ 1XTCID50的相應病毒液加入生長完好的對應單層細胞培養板中，37°C，5%C02孵育2h後，棄去病毒液，再加入不同濃度的廣藿香醇液100 μ I和細胞維持液繼續培養。2. 4. 2藥物抗病毒吸附實驗(先上藥)
將不同濃度的廣藿香醇培養液100μ I加入生長完好的單層細胞培養板中，37°C，5%C02孵育2h後，棄去含藥培養液，再加入100 μ I X TCID50的相應病毒液，37°C，5%C02孵育2h後，棄去病毒液，再加入細胞維持液繼續培養。2. 4. 3藥物直接作用實驗(中和)將不同濃度的100μ I廣藿香醇培養液和100μ 1XTCID50的相應病毒液混合，37°C，5%C02孵育2h後，再加入到生長完好的對應單層細胞培養板中，37°C，5%C02孵育2h後，棄去含藥與病毒培養液，再加入細胞維持液繼續培養。各培養板於37°C、5%C02繼續培養5d，每天顯微鏡下觀察CPE。應用Reed-Muench法計算各藥物的50%細胞病變抑制濃度(50%inhibiting concentration, IC50),以藥物最高稀釋度出現的IC50值作為抗病毒效果判斷的終點。以上廣藿香醇的每個濃度做3個復孔，每組實驗重複3次。
3.實驗結果及藥效學指標計算3. I各病毒的TCID5。值腺病毒Ad-3接種Hep-2細胞後約5天出現CPE。腺病毒Ad_3的TCID5tl效價均為1(Γ12。3. 2廣藿香醇的細胞毒性在受試時間內，正常對照孔的細胞形態正常。廣藿香醇對三種細胞的毒性試驗結果見表I。表I廣藿香醇和阿昔洛韋的細胞毒性測定結果
權利要求
1.廣藿香醇在製備抗腺病毒的藥物中的用途。
2.根據權利要求I所述的用途，其特徵在於所述腺病毒為哺乳動物腺病毒。
3.根據權利要求2所述的用途，其特徵在於所述腺病毒為人腺病毒。
4.根據權利要求3所述的用途，其特徵在於所述腺病毒為人腺病毒B亞群。
5.根據權利要求4所述的用途，其特徵在於所述腺病毒為人源腺病毒3型Humanadenovirus 3。
6.根據權利要求I所述的用途，其特徵在於所述藥物是治療腺病毒感染性疾病的藥物。
7.根據權利要求6所述的用途，其特徵在於所述藥物是治療腺病毒所致的呼吸道感染性疾病、眼部感染性疾病或胃腸道感染性疾病的藥物。
8.根據權利要求7所述的用途，其特徵在於所述呼吸道感染疾病是鼻炎、咽炎、扁桃體炎、喉炎、氣管炎或/和支氣管炎。
9.根據權利要求I所述的用途，其特徵在於所述藥物是由廣藿香醇為活性成分，加入藥學上常用的輔料製備而成的製劑。
10.根據權利要求9所述的用途，其特徵在於所述製劑為口服製劑、注射製劑或外用製劑。
全文摘要
本發明公開了廣藿香醇在製備抗腺病毒的藥物中的用途。廣藿香醇能夠有效抑制人3型腺病毒合成，具有一定的抗腺病毒作用，可用於治療腺病毒感染性疾病，尤其是人3型腺病毒感染性疾病；同時，廣藿香醇對宿主細胞毒性遠低於陽性藥物阿昔洛韋，毒副作用更低，為臨床用藥提供了一種安全有效的新選擇。
文檔編號A61P31/20GK102895218SQ20121042129
公開日2013年1月30日 申請日期2012年10月29日 優先權日2012年10月29日
發明者彭成, 魏曉露, 熊亮, 萬峰 申請人:成都中醫藥大學