一種試劑盒及其使用方法與流程
2023-09-10 12:34:10 2
本發明涉及str檢測領域，具體而言，涉及一種試劑盒及其使用方法。
背景技術：
短串聯重複序列(shorttandemrepeat，str)也稱微衛星dna(microsatellitedna)或簡單重複序列(simplesequencerepeat，ssr)，是廣泛存在於人類基因組的一類以幾個鹼基為核心單位串聯重複形成的dna序列。str基因座分布廣泛，人基因組中平均每100～200kb中出現一個，其核心重複單位一般為2～6個鹼基，重複次數在10～60次之間。由於不同個體間的重複單位次數的差異而具有很高的多態性，同時這種多態性在遺傳過程中遵照孟德爾遺傳規律，因此str遺傳分析被廣泛應用於法醫個體識別、親緣鑑定、群體遺傳學等諸多領域。
複合擴增技術(多重pcr)是目前檢測str最主要的技術手段，這是由於str基因座片段小、易擴增且各基因座之間的擴增條件接近，因此能夠將兩個及兩個以上基因座放在同一反應管中進行複合擴增，其優點在於高效率和高產率，有效節約時間和所需試劑。通過將不同螢光分子標記於各基因座引物末端即可利用毛細管電泳技術將擴增出的多種不同片段分離開，並通過與dna分子量標準對比精確計算出str等位基因片段大小，進而實現str分型。
目前，str遺傳分析技術已成為法庭科學鑑定中最常用、發展最成熟的技術而被用於各類案件檢驗。str數據也已經成為各國法庭科學資料庫的重要組成部分，以實現對犯罪嫌疑人dna數據的比對和排查。美國fbi選用以下13個核心str基因座用於構建dna分型資料庫(combineddnaindexsystem，codis)，包括：d3s1358，d5s818，d7s820，d8s1179，13s317，d16s539，d18s51，d21s11，csf1po，fga，th01，tpox，vwa。90年代中後期，美國abi公司和promega公司分別推出ampfistridentifiler試劑盒與16試劑盒，均包括以上13個str基因座。國內也相似產品，如基點認知技術有限公司推出的goldeneye20a等。目前所採用的試劑盒大多數是以上述codis標準中13個核心基因座為基礎，增加其他位點的基因座。
但現有的str遺傳分析技術存在引物設計和str分組不合理、需要通過複雜方法處理dna模板、擴增體系以及反應條件不佳等缺陷，導致擴增效率低、檢測時間長和分型效果差。
有鑑於此，特提出本發明。
技術實現要素：
本發明的第一目的在於提供一種試劑盒，所述試劑盒能夠快速、準確地對所述16個str位點進行擴增和分型。
本發明的第二目的在於提供一種使用上述試劑盒進行pcr的方法，通過所述方法能夠快速、準確地對上述16個str位點進行分型。
為了實現本發明的上述目的，特採用以下技術方案：
一種試劑盒，包括用於擴增str位點d3s1358、d5s818、d7s820、d8s1179、d13s317、d16s539、d18s51、d21s11、csf1po、fga、th01、tpox、vwa、pentae、pentad和amelogenin的16對上、下遊引物對中的一對或多對，所述16對上、下遊引物對的序列如seqidno：1-32所示。
本發明還涉及一種使用上述試劑盒進行pcr的方法，所述方法包括以下步驟：(1)將上述試劑盒中的試劑與dna模板混合併進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
本發明上述試劑盒能夠快速、準確地對所述16個str位點進行擴增和分型。
具體實施方式
本發明一方面涉及一種試劑盒，包括用於擴增str位點d3s1358、d5s818、d7s820、d8s1179、d13s317、d16s539、d18s51、d21s11、csf1po、fga、th01、tpox、vwa、pentae、pentad和amelogenin的16對上、下遊引物對中的一對或多對，所述16對上、下遊引物對的序列如seqidno：1-32所示。
本發明所述試劑盒涉及16對上、下遊引物對，上述16對上、下遊引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時擴增效率高，檢測信號強，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面由於檢測信號高，可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括16對上、下遊引物對中的13對、14對、15對或16對。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括所述16對上、下遊引物對。
在一些實施方式中，試劑盒中包括的所述上、下遊引物對被不同螢光染料標記為不同的組。
在一些實施方式中，所述上下遊引物對被不同螢光染料標記為3組、4組、5組或6組。
在一些實施方式中，所述上下遊引物對被不同螢光染料標記為4組。
在一些實施方式中，每對引物中的至少一條引物被螢光染料標記。
在一些實施方式中，每對上、下遊引物中至少有一條引物的5』端或3』端被螢光染料標記。
在一些實施方式中，所述螢光染料選自fam、fitc、sybrgreenⅰ、hex、vic、joe、tamra、tet、rox、cy3、cy5、texas-red、pet、ned、alexafluor、dylight和ftm。
在一些實施方式中，所述螢光染料選自fam、hex、tamra和rox。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括所述16對上、下遊引物對，其中所述16對上、下遊引物對分別被4種不同螢光染料標記為4組。
在一些實施方式中，其序列依次如seqidno：1-10所示、分別用於擴增d5s818、th01、d8s1179、tpox和csf1po的上、下遊引物對被標記為第1組；其序列依次如seqidno：11-18所示、分別用於擴增d13s317、d7s820、d21s11和pentae的上、下遊引物對被標記為第2組；其序列依次如seqidno：19-26所示、分別用於擴增d3s1358、d16s539、vwa和d18s51的上、下遊引物對被標記為第3組；其序列依次如seqidno：27-32所示、分別用於擴增amelogenin、pentad和fga的上、下遊引物對被標記為第4組。
在一些實施方式中，標記第1組引物對的螢光染料為fam，標記第2組引物對的螢光染料為hex，標記第3組引物對的螢光染料為tamra，標記第4組引物對的螢光染料為rox。
本發明所述試劑盒對所述上、下遊引物對的對數、分組和螢光標記情況作出限定，其中，通過引物對的巧妙分組確保組內引物對擴增獲得的產物在分子量大小上不存在重疊，配合不同螢光染料標記不同組的引物對，只需要對產物進行一次分析即可同時獲得多對引物的pcr檢測結果，從而實現多位點str分型。
在一些實施方式中，所述試劑盒還包括pcr反應緩衝液、dntps、dna聚合酶、去離子水、上樣緩衝液和dna分子量內標中的一種或多種。
在一些實施方式中，所述dna聚合酶選自taq、bst、vent、phi29、pfu、tru、tth、tl1、tac、tne、tma、tih、tf1、pwo、kod、sac、sso、poc、pab、mth、pho、es4dna聚合酶、klenow片段。
在一些實施方式中，所述dna聚合酶為taqdna聚合酶。
在一些實施方式中，所述taqdna聚合酶為熱啟動taqdna聚合酶。
在一些實施方式中，所述水選自雙蒸水或去離子水。
在一些實施方式中，試劑盒中包括的所述上、下遊引物對混合在一起。
在一些實施方式中，所述上、下遊引物對還與所述pcr反應緩衝液、dntps和dna聚合酶中的一種或幾種混合在一起。
在一些實施方式中，所述上樣緩衝液選自甲醯胺、去離子甲醯胺；優選地，所述上樣緩衝液為去離子甲醯胺。
在一些實施方式中，所述分子量內標為liz500。
在一些實施方式中，所述上樣緩衝液和所述dna分子量內標混合在一起。
在一些實施方式中，所述試劑盒包括混合在一起的、序列如seqidno：1-32所示的引物，所述引物的摩爾濃度比依次為0.7～1.1：0.7～1.1：0.4～0.8：0.4～0.8：1.0～1.4：1.0～1.4：0.4～0.8：0.4～0.8：0.7～1.1：0.7～1.1：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.8～1.0：0.8～1.0：0.5～0.7：0.5～0.7：0.9～1.3：0.9～1.3：0.5～0.7：0.5～0.7：0.8～1.0：0.8～1.0：0.7～0.9：0.7～0.9：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：0.7～0.9：0.7～0.9：1.1～1.3：1.1～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.9～1.0：0.9～1.0：0.6～0.7：0.6～0.7：1.2～1.3：1.2～1.3：0.6～0.7：0.6～0.7：0.9～1.0：0.9～1.0：0.8～0.9：0.8～0.9：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：0.8～0.9：0.8～0.9：1.2～1.3：1.2～1.3：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.93：0.93：0.61：0.61：1.22：1.22：0.61：0.61：0.93：0.93：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84。
本發明所述試劑盒對上述16對上下遊引物的摩爾量進行調整，確保組內引物的擴增效率一致，從而可以簡單、快速地對分析檢測結果，進行str分型。
本發明還涉及使用上述組合物或上述試劑盒進行pcr的方法，所述方法包括以下步驟：所述方法包括以下步驟：(1)將上述試劑盒中的試劑與dna模板混合併進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
本發明所述方法涉及16對上、下遊引物對，上述16對上、下遊引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時擴增效率高，檢測信號強，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面由於檢測信號高，可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
在一些實施方式中，所述dna模板來自血液、唾液、精液、骨骼或毛髮。
在一些實施方式中，所述dna模板通過飽和苯酚-氯仿法、樹脂提取法或磁珠提取法提取。
在一些實施方式中，所述dna模板為含有dna的血濾紙片、唾液卡片或fta卡。
本發明所述方法能夠直接以血濾紙片、唾液卡片、fta卡等為dna模板進行擴增，不需要對dna進行提取，極大縮短獲得最終分型結果所需要的時間。
在一些實施方式中，所述pcr反應的退火溫度為59～62℃，循環次數為28～32次；優選地，所述pcr反應的退火溫度為60.5℃，循環次數為30次。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，92～95℃變性3～8min；第2步，92～95℃變性5～15s；第3步，59～62℃變性0.5～2min；第4步，70～73℃延伸20～40s；第5步，重複第2～4步28～32次；第6步，58～61℃延伸7～12min；第7步，2～6℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，93～95℃變性3～6min；第2步，93～95℃變性7～15s；第3步，60～62℃變性0.5～1.5min；第4步，71～73℃延伸25～35s；第5步，重複第2～4步29～31次；第6步，59～60℃延伸8～11min；第7步，3～5℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，94～95℃變性3～5min；第2步，94～95℃變性7～10s；第3步，60～61℃變性0.5～1min；第4步，71～72℃延伸25～30s；第5步，重複第2～4步29～30次；第6步，59～60℃延伸9～10min；第7步，4～5℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述pcr反應的條件為：第1步，94℃變性5min；第2步，94℃變性10s；第3步，60.5℃變性1min；第4步，72℃延伸30s；第5步，重複第2～4步30次；第6步，60℃延伸10min；第7步，4℃持續保溫。
在一些實施方式中，所述擴增產物的豐度通過以下步驟進行分析：將pcr反應產物和等位基因階梯分別與上樣緩衝液和dna分子量內標混合，經高溫變性和冰上冷卻後，進行電泳分離。
在一些實施方式中，在92～96℃變性2～5min後，立即放在冰上冷卻2～5min。
在一些實施方式中，在95℃變性3min後，立即放在冰上冷卻3min。
在一些實施方式中，所述方法還包括電泳後進行str分型的步驟。
在一些實施方式中，所述str分型包括利用數據分析軟體對樣品和等位基因階梯的電泳結果進行分析和比對，從而得到分型結果。
在一些實施方式中，所述數據分析軟體為genemapper或peakscanner。
在一些實施方式中，所述方法包括以下步驟：(1)將序列如seqidno：1-32所示的引物與dna模板混合併進行pcr反應；(2)分析擴增產物的豐度。
在一些實施方式中，序列如seqidno：1-32所示的引物的摩爾濃度比依次為0.7～1.1：0.7～1.1：0.4～0.8：0.4～0.8：1.0～1.4：1.0～1.4：0.4～0.8：0.4～0.8：0.7～1.1：0.7～1.1：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：0.6～1.0：0.6～1.0：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.0～1.4：1.4～1.8：1.4～1.8：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0：1.6～2.0。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.8～1.0：0.8～1.0：0.5～0.7：0.5～0.7：0.9～1.3：0.9～1.3：0.5～0.7：0.5～0.7：0.8～1.0：0.8～1.0：0.7～0.9：0.7～0.9：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：0.7～0.9：0.7～0.9：1.1～1.3：1.1～1.3：0.9～1.3：0.9～1.3：1.5～1.7：1.5～1.7：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9：1.7～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.9～1.0：0.9～1.0：0.6～0.7：0.6～0.7：1.2～1.3：1.2～1.3：0.6～0.7：0.6～0.7：0.9～1.0：0.9～1.0：0.8～0.9：0.8～0.9：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：0.8～0.9：0.8～0.9：1.2～1.3：1.2～1.3：1.0～1.2：1.0～1.2：1.6～1.7：1.6～1.7：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9：1.8～1.9。
在一些實施方式中，序列如seqidno:1-32所示的引物之間的摩爾濃度比依次為0.93：0.93：0.61：0.61：1.22：1.22：0.61：0.61：0.93：0.93：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：0.85：0.85：1.25：1.25：1.25：1.25：1.67：1.67：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84：1.84。
與現有技術相比，本發明的有益效果為：
1)、本發明所述試劑盒和pcr方法中及的16對上、下遊引物對，所述上、下遊引物對具有特異性好、擴增效率高的優點，在pcr擴增過程中不會形成引物二聚體、非特異擴增和交叉反應，避免非目的產物的出現對分型結果的影響，同時上述引物還具有擴增效率高，檢測信號強的優點，一方面可以縮短pcr擴增時間，另一方面可以快速、準確地實現對pcr產物的檢測和str分型。
2)、本發明所述試劑盒和pcr方法通過巧妙的分組，避免同一組str位點的擴增產物在分子量大小上出現重疊，使擴增結果簡單明確、一目了然，從而可以快速、準確地根據檢測結果進行str分型。
3)、本發明所述試劑盒和pcr方法對16對上下遊引物的摩爾濃度比進行調整，確保組內引物的擴增效率一致，從而可以簡單、快速地分析檢測結果，進行str分型。
4)、本發明所述試劑盒和pcr方法不但能夠將pcr擴增時間縮短至37～110分鐘，還能直接以血濾紙片、唾液卡片、fta卡等為dna模板進行擴增，不需要對dna進行提取，極大縮短獲得最終分型結果所需要的時間並降低實驗的複雜程度。
附圖說明
為了更清楚地說明本發明具體實施方式或現有技術中的技術方案，下面將對具體實施方式或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖是本發明的一些實施方式，對於本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他的附圖。
圖1為以利用提取的dna為樣本複合擴增16個str位點的毛細管電泳圖譜；
圖2為以血液採集卡為樣品複合擴增16個str位點的毛細管電泳圖譜。
下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用於說明本發明，而不應視為限制本發明的範圍。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。
術語定義
本發明中使用的術語「試劑盒」既可以包括多試劑，也可以只包括單試劑；所述試劑既可以是組合物也可以是化合物。
實施例1以利用dna提取試劑盒提取的dna為樣本複合擴增16個str
一、樣品處理
利用dna提取試劑盒(購自天根生化科技有限公司)處理血液樣品，稀釋提取的基因組dna濃度至0.3ng/μl。
二、引物混合
將序列如seqidno：1-32所示的引物混合在一起，配製引物混合物，其中，所述引物混合物中各引物的濃度如表1所示。
表1引物混合物中序列如seqidno：1-32所示引物的濃度
三、pcr反應體系的配製
將含dna聚合酶的pcr反應緩衝液10μl，引物混合物6μl，dna模板2μl，去離子水2μl混合均勻，配製成20μlpcr反應體系。
四、pcr反應
將配製好的pcr反應體系置於pcr儀中進行擴增，其中擴增條件如下所示：
第1步，94℃變性5分鐘；第2步，94℃變性10秒；第3步，60.5℃退火1分鐘；第4步，72℃延伸30秒；第5步，重複2-4步30次；第6步，60℃延伸10分鐘，4℃持續保溫。
五、電泳
將liz500橙色內標及去離子甲醯胺按1:9比例進行混合，配製成上樣混合物，取2μl樣品或等位基因階梯，與上樣混合液進行混勻，經95℃變性3min，立即放在冰上冷卻3min，然後上機進行毛細管電泳分離。
六、檢測結果分析
採用genemaker軟體分析處理檢測結果，見圖1，其中通道a為標記fam螢光分子的峰，通道b為標記hex螢光分子的峰，通道c為標記tmera螢光分子的峰，通道d為標記rox螢光分子的峰。
圖1所示毛細管電泳圖譜無雜峰，只出現目的產物峰且峰值較高，在1000～2000之間，同一通道內目的產物峰的峰值一致。圖1所示檢測結果表明，首先，在複合擴增體系中，所述16對上下遊引物的特異性好，pcr擴增過程不會形成引物二聚體、非特異性擴增或交叉反應，避免非目的產物的出現影響分型結果而出現誤判；其次，通過合理的分組和引物設計，避免同一組str位點的擴增產物在分子量大小上重疊，是擴增結果簡單明確、一目了然，從而可以快速、準確地根據檢測結果進行str分型；再者，通過調整各引物對的比例，使同一通道內的目的峰峰值基本一致，避免同一通道內目的產物峰的峰值高低差距過大而給分型帶來阻礙。
實施例2以血液採集卡為待測樣品複合擴增16個短串聯重複序列
一、樣品處理
帶有血樣的血液採集卡，利用打孔器取1.5mm卡片作為模板dna直接進行擴增。
二、引物混合
將序列如seqidno：1-32所示的引物混合在一起，配置引物混合物，其中，所述引物混合物中各引物的濃度如表2所示。
表2引物混合物中序列如seqidno：1-32所示引物的濃度
三、pcr反應體系的配製
配製20μlpcr反應體系，所述反應體系包括含dna聚合酶的pcr反應緩衝液10μl、引物混合物6μl，去離子水2μl和作為模板dna的1.5mm採血卡卡片。
四、pcr反應
將配製好的pcr反應體系置於pcr儀中進行擴增，其中擴增條件如下所示：
第1步，94℃變性5分鐘；第2步，94℃變性10秒；第3步，60.5℃退火1分鐘；第4步，72℃延伸30秒；第5步，重複2-4步28次；第6步，60℃延伸10分鐘，4℃持續保溫。
五、電泳
將liz500橙色內標及去離子甲醯胺按1:9比例進行混合，配製成上樣混合物，取2μl樣品或等位基因階梯，與上樣混合液進行混勻，經95℃變性3min，立即放在冰上冷卻3min，然後上機進行毛細管電泳分離。
六、檢測結果分析
採用genemaker軟體分析處理檢測結果，見圖2，其中通道a為標記fam螢光分子的峰，通道b為標記hex螢光分子的峰，通道c為標記tmera螢光分子的峰，通道d為標記rox螢光分子的峰。
圖2所示毛細管電泳圖譜中無雜峰，只出現目的產物峰且峰值較高，在500～2000之間，表明即使直接以採血卡卡片為dna模板，本發明仍可以特異性、高效率地擴增得到目的產物，從而簡單、快速地對str進行分型，縮短整個實驗過程所需時間。
最後應說明的是：以上各實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；儘管參照前述各實施例對本發明進行了詳細的說明，但本領域的普通技術人員應當理解：其依然可以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分或者全部技術特徵進行等同替換；而這些修改或者替換，並不使相應技術方案的本質脫離本發明各實施例技術方案的範圍。
sequencelisting
北京普利斯康醫藥技術有限公司
一種組合物、試劑盒及其使用方法
11111
32
patentinversion3.3
1
23
dna
擴增d5s81的上遊引物序列
1
ggtgattttcctctttggtatcc
2
26
dna
擴增d5s81的下遊引物序列
2
agccacagtttacaacatttgtatct
3
16
dna
擴增th01的上遊引物序列
3
gaggcagccccaaggc
4
20
dna
擴增th01的下遊引物序列
4
aggtcacagggaacacagac
5
29
dna
擴增d8s1179的上遊引物序列
5
gcaacttatatgtatttttgtatttcatg
6
22
dna
擴增d8s1179的下遊引物序列
6
ccgtatgtattcttgtttccag
7
19
dna
擴增tpox的上遊引物序列
7
ccctcccagctctcacaac
8
21
dna
擴增tpox的下遊引物序列
8
cttactcctgttcccttcccg
9
20
dna
擴增csf1po的上遊引物序列
9
tgttccaacctgagtctgcc
10
20
dna
擴增csf1po的下遊引物序列
10
accatagccagagacctgga
11
20
dna
擴增d13s317的上遊引物序列
11
ctctggactctgacccatct
12
25
dna
擴增d13s317的下遊引物序列
12
cccaaaaagacagacagaaagatag
13
24
dna
擴增d7s820的上遊引物序列
13
agggtatgatagaacacttgtcat
14
24
dna
擴增d7s820的下遊引物序列
14
gattccacatttatcctcattgac
15
25
dna
擴增d21s11的上遊引物序列
15
ccagcttccctgattcttcagcttg
16
26
dna
擴增d21s11的下遊引物序列
16
attactagccataaacactgagaagg
17
25
dna
擴增pentae的上遊引物序列
17
atacaaaaaattagctgggtgtggt
18
33
dna
擴增pentae的下遊引物序列
18
tgggttattaattgagaaaactccttacaattt
19
19
dna
擴增d3s1358的上遊引物序列
19
gcagtccaatctgggtgac
20
20
dna
擴增d3s1358的下遊引物序列
20
tgaaatcaacagaggcttgc
21
20
dna
擴增d16s539的上遊引物序列
21
caagtgccagatgctcgttg
22
23
dna
擴增d16s539的下遊引物序列
22
cgtttgtgtgtgcatctgtaagc
23
27
dna
擴增vwa的上遊引物序列
23
gccctagtggatgataagaataatcag
24
33
dna
擴增vwa的下遊引物序列
24
ggatagatgataaatagatacatagg
25
21
dna
擴增d18s51的上遊引物序列
25
gaggcaggaggagttcttgag
26
21
dna
擴增d18s51的下遊引物序列
26
ctaccagcaacaacacaaataaac
27
19
dna
擴增amelogenin的上遊引物序列
27
ccctgggctctgtaaagaa
28
24
dna
擴增amelogenin的下遊引物序列
28
atcagagcttaaactgggaagctg
29
20
dna
擴增pentad的上遊引物序列
29
agcaagacaccatctcaaga
30
22
dna
擴增pentad的下遊引物序列
30
tatttgcctaacctatggtcat
31
23
dna
擴增fga的上遊引物序列
31
aatgccccataggttttgaactc
32
21
dna
擴增fga的下遊引物序列
32
tcagatcctctgacactcggt