用於治療呼吸系統病毒感染藥物的用途的製作方法
2023-09-10 23:07:20
專利名稱:用於治療呼吸系統病毒感染藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種用於治療呼吸系統病毒感染藥物的用途，尤其涉及一種用於治療柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染引起的呼吸系統疾病藥物的用途。
背景技術：
急性呼吸道感染是人類最常見的疾病，約80％以上是由病毒引起的，是導致世界範圍內老人和小孩發病與死亡的主要原因。引起呼吸道感染的病毒種類很多，其中較為常見的是流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒、鼻病毒和某些腸道病毒(如柯薩奇病毒)。
目前很多抗病毒藥物由於毒副作用和長期應用的耐藥性而限制了其臨床應用如臨床上常用於治療流感的金剛烷胺及其結構衍生物甲基金剛乙胺就存在神經毒性、易產生耐藥毒株和對B型流感病毒無效等缺陷；目前經FDA批准用於防治呼吸道合胞病毒感染的藥物僅有病毒唑，但其通過靜脈給藥時存在骨髓細胞毒性，通過氣霧劑經呼吸道少量給予時存在白細胞減少，劑量過大時可致頭痛、不可逆貧血等副作用；從而導致呼吸系統病毒感染的發病率持續不衰。
化學藥物在治療病毒感染中佔有極為重要的地位，因此開發研製有效防治呼吸系統病毒感染的新化合物具有極強的社會意義。鹽酸阿比朵爾是非核苷類抗病毒藥物，是前蘇聯藥物化學研究中心首先研製出的新的抗病毒藥物和免疫刺激劑，它對A、B型流感病毒的抗病毒活性最為顯著，該藥能抑制A、B型流感病毒複製的早期階段，能抑制病毒細胞漿膜的融合以及病毒與內吞囊泡之間的膜融合。同時，鹽酸阿比朵爾在體內還可誘導產生幹擾素，對巨噬細胞的吞噬功能有顯著的活化作用，具有免疫調節作用。我國在其基礎上，採用新的合成方法及原料，合成了具有我國自主智慧財產權的新化合物。
發明內容本發明的目的是提供一種用於治療呼吸系統病毒感染藥物的用途，該藥物為鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，化學名為6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羥基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羥酸乙酯鹽酸鹽-水合物，其化學結構式如下 本發明提供的一種新藥的用途，是用於治療柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒所致的呼吸系統感染。
本發明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾具有抗柯薩奇病毒B3作用，表現在其能提高心肌炎小鼠存活率、降低小鼠心肌病變檢出率以及心臟組織勻漿中病毒滴度。
本發明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾具有抗柯薩奇病毒B5作用，隨著藥物劑量的增加，小鼠死亡率降低，平均生存時間延長。同時，能降低感染柯薩奇病毒B5小鼠肺組織的病變程度、肺組織勻漿中的病毒滴度以及血清中和抗體的水平，且與藥物濃度呈正相關。
本發明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾有明顯抑制腺病毒的作用，表現在隨著藥物濃度的增加，小鼠死亡率降低，平均生存時間延長。同時能降低感染腺病毒小鼠肺組織的病變程度、肺組織勻漿中的病毒滴度以及血清中和抗體的水平，且與藥物濃度呈正相關。
本發明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾有抗呼吸道合胞病毒作用，表現為鹽酸阿比朵爾實驗組與病毒對照組比較，死亡保護率、延長生命率、平均肺指數等指標評價，均有統計意義上的有效治療效果，且治療效果與藥物濃度呈正相關。
本發明通過小鼠實驗表明，鹽酸阿比朵爾對鼻病毒所致小鼠的呼吸道感染有抑制作用，隨著藥物濃度的增加，小鼠肺組織病變程度降低，肺組織中鼻病毒檢出率降低等改變，與病毒對照組相比較有顯著性差異，且與藥物濃度呈正相關。
本發明具有下列優點和積極效果1、降低柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染後小鼠的死亡率，以及小鼠體內病毒滴度和血清中抗體水平；2、改善臨床上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎症狀及體徵的作用。
具體實施方式實施例1鹽酸阿比朵爾對感染柯薩奇病毒B3動物的保護作用BalB/C小鼠，雌雄兼用，隨機分為6組正常對照組、病毒對照組、陽性藥物對照組、受試藥物組(採用3個濃度即鹽酸阿比朵爾高劑量組、中劑量組和低劑量組)每組27隻小鼠。於感染前用藥2天，鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日2次；陽性藥物對照組以病毒唑腹腔注射；病毒對照組以等體積的消毒飲用水替代，每日2次。正常對照組不做任何處理，自然餵養。實驗當日，小鼠感染部位常規消毒後，腹腔注射CVB3，接種2h後繼續用藥。觀察存活率；連續治療至急性期時，每組隨機殺檢1/3，取心臟的右半部分勻漿，滴定病毒滴度；取心臟左半部分進行HE染色，觀察各組小鼠心肌組織病變程度及病變檢出率；應用組織病理分級法對心肌損傷進行分析。剩餘2/3小鼠繼續接受治療至10和20天時分別殺檢，重複上述檢測。
實驗結果為鹽酸阿比朵爾能提高心肌炎小鼠存活率。急性期5天內病毒對照組死亡18隻，鹽酸阿比朵爾高劑量組和中劑量組，死亡小鼠分別為8隻和12隻，差異有顯著性(P＜0.05)。鹽酸阿比朵爾各劑量組各期病變程度及範圍均明顯輕於病毒對照組。進一步將各期主要病變檢出率量化比較，鹽酸阿比朵爾高劑量組和中劑量組0度(正常)檢出率與病毒對照組比較差異有統計學意義(P＜0.05)，重度病變檢出率低於病毒對照組，鹽酸阿比朵爾高、中劑量組與病毒對照組比較差異有統計學意義(P＜0.01)。鹽酸阿比朵爾實驗組小鼠的心臟組織勻漿中病毒滴度降低，與病毒對照比較有顯著性差異(P＜0.05)。
實施例2鹽酸阿比朵爾對感染柯薩奇病毒B5動物的保護作用Balb/C鼠，雌性，5～7周齡，體重為17～20g，隨機分成5組分別為正常對照組、病毒對照組、陽性藥物對照組、治療劑量25mg/kg/d實驗組和治療劑量50mg/kg/d實驗組，每組10隻。
實驗當日，小鼠感染部位常規消毒後，腹腔注射CVB5。接種病毒24h後，鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日1次，連續給藥6天；正常對照組不做任何處理；病毒對照組用等體積的PBS灌胃替代藥物。每組6隻小鼠在接種病毒後第8天處死。將解剖所得到的肺、心臟和肝臟一部分HE染色進行病理學檢測。一部分組織被冰凍做免疫螢光檢測和病毒分離。剩下的動物每天觀察體重的改變和死亡情況。評價抗病毒效果的參數包括21天內體重的減輕，死亡率的下降和/或平均存活時間的延長。
實驗結果為每組中6隻動物在接種病毒第8天被處死，將所得的肺、腎、肝、心和脾作病理學檢查。顯微鏡下，病毒對照組動物肺組織的肺泡壁增厚，心肌細胞均質變性。除治療劑量為25mg/kg/d實驗組動物肺組織有局部出血，其他組織標本沒有顯著病理改變。在免疫螢光檢測中發現，病毒對照組在接種病毒第8天所得到的肺和心，分別在肺泡壁和心肌細胞膜表面有強特異性螢光(++++)；治療劑量25mg/kg/d實驗組的肺和心表現為++～+++；治療劑量為50mg/kg/d實驗組的肺和心表現為+；正常對照組為陰性。
表1鹽酸阿比朵爾作用後感染CVB5小鼠存活率和存活時間
表2鹽酸阿比朵爾對感染CVB5小鼠的治療作用
為鹽酸阿比朵爾治療組與病毒對照組比較有顯著性差異(P＜0.01)實施例3鹽酸阿比朵爾對感染腺病毒動物的保護作用小鼠雌雄各半，隨機分成6組，每組10隻。分別為正常對照組，病毒對照組，病毒唑組，鹽酸阿比朵爾高、中、低劑量組。將小鼠用乙醚進行麻醉，然後滴鼻感染腺病毒原液，4h後鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日2次，連續給藥8天；病毒對照組，每日灌胃消毒飲用水2次；正常對照組，不做任何處理；陽性藥物病毒唑對照組，腹腔注射藥物。給藥8天後殺剖小鼠，精密天平稱其體重；取血分離血清，用ELISA法測定抗腺病毒抗體；解剖小鼠，取鼠肺稱肺重，觀察肺病變；計算肺指數及肺病變抑制率，公式如下肺指數＝肺重(g)÷體重(g)平均指數＝每組肺指數之和÷每組動物數肺病變抑制率＝(對照組平均肺指數-實驗組平均肺指數)÷對照組平均肺指數×100％測定鹽酸阿比朵爾組肺懸液在HEp-2細胞中病毒滴度(TCID50)，與病毒對照組比較。
實驗結果為表3鹽酸阿比朵爾對腺病毒感染小鼠血清效價影響(IgM)
表4鹽酸阿比朵爾對腺病毒感染小鼠肺指數的影響
△p＜0.01與正常對照組比較；*p＜0.01，**p＞0.01與病毒對照組比較表5鹽酸阿比朵爾對小鼠體內腺病毒增殖的抑制作用
*肺病變程度以「+」評價75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病變實施例4鹽酸阿比朵爾對感染呼吸道合胞病毒動物的保護作用小鼠雌雄各半，隨機分成6組正常對照組，病毒對照組，病毒唑組，鹽酸阿比朵爾高、中、低劑量組，每組10隻。將小鼠用乙醚進行麻醉，然後滴鼻感染RSV病毒原液，4h後鹽酸阿比朵爾各組小鼠灌胃給藥，每日給藥2次，連續給藥8天；病毒對照組，每日灌胃給飲用水2次；正常對照組，不做任何處理；陽性藥物病毒唑組，腹腔注射給藥。給藥8天後殺剖小鼠，精密天平稱其體重；取血分離血清，用ELISA法測定抗RSV病毒抗體；解剖小鼠，取鼠肺稱肺重，觀察肺病變；計算肺指數及肺病變抑制率，公式如下肺指數＝肺重(g)÷體重(g)平均指數＝每組肺指數之和÷每組動物數肺病變抑制率＝(對照組平均肺指數-實驗組平均肺指數)/對照組平均肺指數×100％測定鹽酸阿比朵爾組小鼠肺懸液在Hela細胞中病毒滴度(TCID50)，與病毒對照組比較。
實驗結果為表6鹽酸阿比朵爾對RSV感染小鼠血清效價影響(IgM)
表7鹽酸阿比朵爾對RSV病毒感染小鼠肺指數的影響
△p＜0.01與正常對照組比較；*p＜0.01，**p＞0.01與病毒對照組比較表8鹽酸阿比朵爾對小鼠體內RSV病毒增殖的抑制作用
*肺病變程度以「+」評價75％＜++++＜100％、50％＜+++＜75％、25％＜++＜50％、0％＜+＜25％、-未病變實施例5鹽酸阿比朵爾對感染鼻病毒動物的保護作用Balb/C小鼠4周齡，雌性，體重17克左右，隨機分為6組A組病毒對照組、B組陽性藥物病毒唑對照組、C組鹽酸阿比朵爾高劑量治療組、D組鹽酸阿比朵爾中劑量治療組、E組鹽酸阿比朵爾低劑量治療組、F組正常對照組，每組20隻。
將A組、B組和C、D、E組小鼠分別用戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉後經鼻腔滴入RV懸液。當日鹽酸阿比朵爾治療組灌胃給藥；陽性藥物組腹腔注射，每日1次，連續給藥8天。治療第8天將小鼠頸脫臼致死，無菌取肺，將左側肺做電鏡病理學檢測，將右側肺用於RV分離。
實驗結果為A組20隻，B組12隻，病毒分離陽性；C組病毒分離陽性6隻，陰性6隻，陽性率為50％。電鏡結果顯示C、D組小鼠肺組織病變程度明顯輕於A組。
實施例6鹽酸阿比朵爾治療呼吸道病毒感染的臨床驗證總結一、臨床資料病例來源及選擇按呼吸道病毒感染診斷標準確診的門診病人共60例，其中女性26例，男性34例，年齡15～56歲，平均38歲，病程7～10天，平均8天。全身中毒症狀均以發熱、畏寒、頭痛、肌肉酸痛、疲倦以及食欲不振為主，呼吸道症狀以噴嚏、鼻塞、乾咳、咽痛以及流涕為主，且鼻腔流涕症狀比咽部症狀明顯。所有患者無嚴重的心、肝、腎疾患，無精神病、癲癇病史，病毒感染後未經其他藥物治療。將患者隨機分為兩組各30例陽性藥物對照組與鹽酸阿比朵爾治療組，兩組患者性別、年齡、臨床表現及病因分布經統計學處理均無顯著性差異(P＞0.05)。
二、治療方法及療效判斷
1、治療方法應用鹽酸阿比朵爾高劑量於呼吸道病毒感染患者，每次口服5ml，每日3次。以上治療7天為一療程。
陽性藥物對照組應用病毒唑針0.6～1.0g加入5％葡萄糖液100～250mL中靜脈滴注，40滴/min，1次/d。以上治療7天為一療程。
2、療效觀察和評定詳細記錄主要症狀(咳嗽、氣促、喘息)和體徵(發熱、肺部羅音和哮鳴音)的嚴重程度、緩解時間和消失時間。顯效治療3天後，發熱、咳嗽、氣促等症狀明顯減輕或消失，精神狀態明顯好轉無煩躁，肺部羅音明顯減少或消失。有效治療3天後，症狀和體徵有改善，但沒有消失。無效治療3天後，症狀和體徵均無改善。
三、結果與結論試驗組顯效26例(68.6％)，有效3例，總有效率96.7％，人均治療時間(6.61±2.0)天，對照組顯效19例(30％)，有效7例，總有效率86.7％，人均治療時間(8.41±2)天。經統計學處理，試驗組的療效明顯優於對照組(P＜0.01)，治療過程中兩組均未見明顯毒副反應。從以上結果可得出鹽酸阿比朵爾有治療呼吸道病毒感染作用，效果優於病毒唑，有深入研究價值。
權利要求
1.一種鹽酸阿比朵爾在製備治療呼吸系統病毒感染藥物中的應用，包括鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，其化學名為6-溴-4-(二甲氨甲基)-5-羥基-1-甲基-2-(苯硫甲基)-1H-吲哚-3-羥酸乙酯鹽酸鹽-水合物 其中HO- 表示羥基Br- 表示溴CH3- 表示甲基CH2N(CH3)2- 表示二甲氨甲基-COOC2H5表示羥酸乙酯-CH2S- 表示硫甲基HCL 表示鹽酸H2O 表示水其特徵在於在製備治療柯薩奇病毒B3(Coxsackievirus B3 Group，CVB3)、柯薩奇病毒B5(Coxsackievirus B5 Group，CVB5)、腺病毒(Adenovirus，AdV)、呼吸道合胞病毒(Respiratory syncyntial virus，RSV)、鼻病毒(Rhinovirus，RV)感染的藥物中的應用。
專利摘要
本發明公開了一種用於治療呼吸系統病毒感染藥物的用途。本發明提供的鹽酸阿比朵爾(Arbidol Hydrochloride)，其化學名為6－溴－4－(二甲氨甲基)－5－羥基－1－甲基－2－(苯硫甲基)－1H－吲哚－3－羥酸乙酯鹽酸鹽－水合物。本發明能降低柯薩奇病毒B3、柯薩奇病毒B5、腺病毒、呼吸道合胞病毒、鼻病毒感染後小鼠的死亡率，以及小鼠體內病毒滴度和血清中抗體水平；改善臨床上呼吸道感染、肺炎、支氣管炎症狀及體徵的作用。
文檔編號A61P11/00GK1994299SQ200610125494
公開日2007年7月11日 申請日期2006年12月18日
發明者楊佔秋, 羅凡, 鍾瓊, 王又又, 石麗橋, 肖紅, 季紅 申請人:武漢大學導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan