半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條的製作方法
2023-09-16 13:47:00 2
半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條的製作方法
【專利摘要】本實用新型是一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸（4-D）的試紙條，包括有樣品墊，膠體金墊，PVC板，硝酸纖維素膜和吸水墊，其中，PVC板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區和對照區，檢測區為檢測線（T線），對照區為質控線（C線），硝酸纖維素膜的兩端側層疊粘貼有吸水墊和膠體金墊，膠體金墊上還層疊粘貼有樣品墊。本實用新型的有益效果在於：操作簡單、反應快速、敏感性高、特異性強和適合現場檢測，而且還具有生產周期短、產量高、成本低等優點，在免疫檢測【技術領域】具有良好的應用前景。本試紙條，操作簡單、反應快速、敏感性高、特異性強和適合現場檢測，而且還具有生產周期短、產量高、成本低等優點。
【專利說明】半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條
【技術領域】
[0001]本實用新型屬於免疫化學檢測技術，具體來講，是一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，藉助膠體金顯色的免疫層析反應，以達到快速檢測農產品、水、土壤中的4-氯苯氧乙酸農藥殘留的目的。
【背景技術】
[0002]4-氯苯氧乙酸是在生產上廣泛使用的除草劑和植物生長調節劑，其在農產品、水和土壤中的殘留危害不容忽視，如其在土壤、水中殘留超標，易引起棉花、某些蔬菜，對人類的健康造成較大危害，據報導，4-氯苯氧乙酸具潛在的致癌性、致突變性，是一種內分泌幹擾物質，對免疫系統和生育系統具不良影響，人體攝入吸收後對眼睛、皮膚也有刺激作用，反覆接觸後對肝、心臟有損壞作用，能引起驚厥等。鑑於此，有些國家和世界組織都在環境標準中對4-氯苯氧乙酸做出了嚴格的規定，世界衛生組織2003年8月頒布《飲用水水質指南》，規定飲用水中4-氯苯氧乙酸最大檢出濃度30ug/l。我國2001年頒布的《飲用水水質衛生規範》的非常檢出項目中，將4-氯苯氧乙酸的限制規定為0.03mg/l，對其檢出量的常規檢測分析只能是利用氣象色譜(GC)和高效液相色譜(HPLC)等儀器在實驗室操作，方法繁瑣，分析速度慢，成本高，要求儀器化程度高。隨著待檢樣品、特別是要求現場快速檢測樣品量和速遞增加，傳統的農藥殘留手段難以適應要求，因此，迫切需要開封和應用高效率農藥殘留分析技術。
[0003]通過大量資料檢索，注意到:4_ 二氯苯氧乙酸完全抗原和抗體的製備，並將該人工免疫抗原免疫家兔製備多克隆抗體，在此基礎上建立了間接酶聯免疫吸附測定檢測4-氯苯氧乙酸農藥殘留的技術。該技術較GC、HPLC有較大革新，使檢測時間較短、成本大大較低，靈敏度提高，有利於在食品、土壤、水利環境中，4-氯苯氧乙酸農藥殘留的快速檢測並推廣應用，但其方法還存在操作還操作相對繁瑣、需要重複多次洗滌，需藉助酶標儀讀數等，不能實現真正意義上的一步法快速測定。還有生物遺傳器是一種以生物活性單位為敏感元件，結合化學，物理轉換元件，對被分析物具有高度選擇性的儀器，農藥殘留分析時靈敏度高，該法在即時檢驗領域可發揮很大作用，但因為該法仍需要一定的儀器設備條件，不易進一步降低檢測成本。
[0004]膠體金免疫層析技術是近些年來發展起來的一種簡單，快速免疫學檢測方法，具靈敏、簡單、快熟、無需設備和儀器、經濟適用、具高度特異性和敏感性、結果直觀可靠、試劑和樣品用量極少、不需專業人員操作，易於推廣使用，正可以滿足這種需求。
【發明內容】
[0005]本實用新型的目的在於克服現有技術中的不足，提供一種半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，改變4-氯苯氧乙酸農藥殘留多步驟繁瑣的問題，實現廉價、一步快速檢測4-氯苯氧乙酸農藥殘留。
[0006]本實用新型解決上述技術問題所採用的技術方案是:半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，其特徵在於包括有樣品墊，膠體金墊，PVC板，硝酸纖維素膜和吸水墊，其中，PVC板上粘貼有硝酸纖維素膜，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區和對照區，檢測區為檢測線(T線)，對照區為質控線(C線)，硝酸纖維素膜的兩端側層疊粘貼有吸水墊和膠體金墊，膠體金墊上還層疊粘貼有樣品墊。
[0007]按上述方案，所述的檢測線(T線)4有四條。
[0008]按上述方案，所述的檢測線(T線)從左至右依次為Tl線、T2線、T3線、T4線，檢測線(T線)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯物溶液濃度按照T4線、T3線、T2線、Tl線的次序依次遞增，且包被有不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯物包被原的總量剛好可與金標墊上的金標抗體完全中和，用以檢測不同濃度的4-氯苯氧乙酸(4-D)農藥殘留，對照區包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0009]本實用新型選擇4-氯苯氧丁酸為4-氯苯氧乙酸抗體製備的半抗原，牛血清白蛋白(BSA)為載體蛋白，然後通過改良EDC法合成人工抗原4-氯苯氧丁酸一BSA。稱取4-氯苯氧丁酸60mg，加入0.05MPBCPH11以上)，攪拌使其緩慢溶解，之後調節pH值至7.2左右，力口入60mg suIf-NHS,充分混合，再加入90mgEDC，攪勻，靜置片刻，並將此反應液I小時內緩慢滴加到事先配好60mg9mlBSA溶液中，並4°C下攪拌反應物過夜，0.15M NaCl透析三天，5_6次左右，紫外分光光度計測紫外法測定和計算偶聯物的結合比，得到適當結合比的4-氯苯氧丁酸-BSA偶聯物，-20°C下凍存。
[0010]本實用新型的有益效果在於:4_氯苯氧乙酸(4-D)檢測試劑條，操作簡單、反應快速、敏感性高、特異性強和適合現場檢測，而且還具有生產周期短、產量高、成本低等優點，在免疫檢測【技術領域】具有良好的應用前景。本試紙條，操作簡單、反應快速、敏感性高、特異性強和適合現場檢測，而且還具有生產周期短、產量高、成本低等優點。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0011]圖1本實用新型的結構圖；
[0012]圖2本實用新型的俯視圖；
[0013]圖3檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結果為陰性
[0014]圖4檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結果為低含量(20_100ng/ml)
[0015]圖5檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結果為中低含量(100-1000ng/ml)
[0016]圖6檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結果為中含量(l-10ug/ml)
[0017]圖7檢測4-氯苯氧乙酸(4-氯苯氧乙酸)，結果為高含量(> 10ug/ml)
[0018]圖中，I為樣品墊，2為膠體金墊，3為PVC板，4為測試線(T線，共4條)，5為質控線(C線)，6為硝酸纖維素膜，7為吸水墊。
【具體實施方式】
[0019]下面結合附圖與實施例對本實用新型作進一步詳細描述。
[0020]實施例1
[0021]如圖1所示，半定量檢測4-氯苯氧乙酸(4-D)的試紙條，其特徵在於包括有樣品墊I，膠體金墊2，PVC板3，硝酸纖維素膜6和吸水墊7，其中，PVC板3上粘貼有硝酸纖維素膜6，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區和對照區，檢測區有四條檢測線(T線)4，對照區為質控線(C線)5，硝酸纖維素膜6的兩端側層疊粘貼有吸水墊7和膠體金墊2，膠體金墊2上還層置粘貼有樣品塾I。
[0022]所述的檢測線(T線)從左至右依次為Tl線、T2線、T3線、T4線，檢測線(T線)中4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯物溶液濃度按照T4線、T3線、T2線、Tl線的次序依次遞增，且包被有不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯物包被原，T線檢測線上包被原的總量剛好可與金標墊上的金標抗體完全中和，用以檢測不同濃度的4-氯苯氧乙酸(4-D)農藥殘留，對照區包被有羊抗鼠IgG多克隆抗體。
[0023]根據競爭抑制免疫層析原理，在硝酸纖維素膜6上的檢測區包被不同濃度4-氯苯氧丁酸一BSA偶聯物，對照區包被羊抗鼠多克隆抗體。當樣品中不含4-氯苯氧乙酸時，玻璃纖維素膜上的膠體金抗4-氯苯氧乙酸抗體的量剛可使硝酸纖維素膜上4條檢測線顯色，質控線也顯色；當待測物中有被測的抗原物質(4-氯苯氧丁酸)時，該農藥殘留就會與標記膠體金的抗4-氯苯氧丁酸抗體形成Ag-Ab-Au複合物，該複合物中抗4-氯苯氧丁酸抗體的活性位點將因被樣品溶液中的殘留藥物佔據而無法與檢測區上的檢測線上的藥物抗原結合。
[0024]測定樣品時，將試紙條樣品吸收墊插入待測樣品中，停留10秒後取出平放，10分鐘後觀察結果。結果判斷方法是通過顯示與免疫層析膜上的條帶數量，來判定檢測樣品中4-氯苯氧乙酸的含量。所以當樣品中4-氯苯氧乙酸為低含量時(20-100ng/ml )，檢測線
1、2、3和質控線顯色，檢測線4不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為中低含量時(IOO-1OOOng/ml)，檢測線1、2和質控線顯色，第3、4檢測線不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為中含量時(Ι-lOug/ml)，檢測線I和質控線顯色，檢測線2、3、4不顯色；樣品中4-氯苯氧乙酸為高含量時(> 10ug/ml),檢測線1、2、3、4均不顯色，只質控線顯色，判定為陰性。該檢測在10分鐘內完成，操作簡單、反應快速、敏感性高、特異性強和適合現場檢測，而且還具有生產周期短、產量高、成本低等優點。在免疫檢測【技術領域】具有良好的應用前景。
[0025]總之，以上所述僅為本實用新型的較佳實施例，凡依本實用新型申請專利範圍所作的均等變化與修飾，皆應屬本實用新型專利的涵蓋範圍。
【權利要求】
1.半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條，其特徵在於包括有樣品墊(1)，膠體金墊(2)，PVC板(3 )，硝酸纖維素膜(6 )和吸水墊(7 )，其中，PVC板(3 )上粘貼有硝酸纖維素膜(6 )，所述的硝酸纖維素膜上有檢測區和對照區，檢測區為檢測線(4)，對照區為質控線(5)，硝酸纖維素膜(6)的兩端側層疊粘貼有吸水墊(7)和膠體金墊(2)，膠體金墊(2)上還層疊粘貼有樣品墊(I)。
2.按權利要求1所述的半定量檢測4-氯苯氧乙酸的試紙條，其特徵在於所述的檢測線(4)有四條。
【文檔編號】G01N33/558GK203519613SQ201320384056
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年6月28日 優先權日:2013年6月28日
【發明者】陳琰, 周俊, 冷毅斌 申請人:武漢伊萊瑞特生物科技有限公司