一種純化藤黃酮e的方法
2023-09-16 03:22:35
專利名稱：一種純化藤黃酮e的方法
技術領域：
本發明屬於天然產物分離領域，涉及一種純化藤黃酮E的方法。
背景技術：
藤黃酮E (Guttiferone E ),分子式C38H5tlO6,分子量602. 81,是從藤黃科(Guttiferae)植物卵葉藤黃ovalifolia Oliv.的葉提取分離的一種氧雜蒽酮衍生物類活成分。藤黃酮E具有免疫調節、抗突變和抗癌等藥理學作用，對多種癌細胞株均具有強烈的細胞毒性，與一些常用癌症化學治療藥物比較，藤黃酮E對癌細胞的毒性僅次於紫杉醇。藤黃酮E還具有抗HIV活性，能抑制人淋巴細胞受HIV感染，其ED50為1_10 u g/ml o
經文獻檢索，國內尚未發現採用藤黃酮E的工業方法的相關報導。
發明內容
本發明的目的是為了克服現有技術的不足，提供一種純化藤黃酮E的方法，工藝操作簡單，所得產品含量高。本發明技術解決方案如下
一種純化藤黃酮E的方法，其特徵在於包括以下步驟
1)取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，加6-10倍量70-80%乙醇溶液微波提取2-3次，微波功率為800-1000W，提取液減壓濃縮，濃縮液加入有機溶劑萃取，收集有機相濃縮，得濃縮液；
2)濃縮液加聚醯胺樹脂拌樣，加入聚醯胺柱吸附，乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集流分減壓濃縮，得到粗品；
3)以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統，上述粗品採用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標流分，濃縮，放置結晶，乾燥即得藤黃酮E。所述步驟I)中的有機溶劑為乙酸乙酯。所述步驟2)中的乙醇溶液濃度為60-70%。所述步驟3)中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水體積比為(3-4) : (5-6) : (5-7):(2-3)。本發明的技術優勢在於採用高速逆流色譜法，可以減少純化步驟，縮短生產周期，工藝易重現，產品收率高；聚醯胺分離和混合溶液結晶替代矽膠柱層析，使工藝易於重現和放大，實現了高含量藤黃酮E產品的工業化，為開展藤黃酮E更廣泛用途奠定了基礎。
具體實施例方式 下面將結合具體實施方式
進一步說明本發明，但本發明要求保護的範圍並不局限於下列實施方式。實施例I :
取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，稱量10kg，加6倍量80%乙醇微波提取20min，提取2次，微波功率為800W，合併濾液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，用等體積乙酸乙酯萃取，離心，收集有機相濃縮，濃縮液幹法上樣，加入2L聚醯胺柱吸附，用6L70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，得到粗品。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按4:6:5:3比例混合，靜置分層，取上相泵入色譜管，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為850rpm，同時把下相以3ml/min流速泵入，取上相溶液溶解粗品，進樣，紫外檢測器監測，監測波長為280nm，收集流分，減壓濃縮後，放置結晶，濾出結晶物乾燥，得藤黃酮E29. 5g，經高效液相檢測，藤黃酮E含量為 98. 4%o實施例2:
取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，稱量10kg，加8倍量80%乙醇微波提取20min，提取2次，微波功率為1000W，合併濾液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，用等體積乙酸乙酯萃取，離心，收集有機相濃縮，濃縮液幹法上樣，加入2L聚醯胺柱吸附，用8L65%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，得到粗品。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按3:5:7:3比例混合，靜置分層，取上相泵入色譜管，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為850rpm，同時把下相以3ml/min流速泵入，取上相溶液溶解粗品，進樣，紫外檢測器監測，監測波長為280nm，收集 流分，減壓濃縮後，放置結晶，濾出結晶物乾燥，得藤黃酮E32. 2g，經高效液相檢測，藤黃酮E含量為98. 3%o實施例3:
取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，稱量10kg，加10倍量80%乙醇微波提取30min，提取3次，微波功率為900W，合併濾液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，用等體積乙酸乙酯萃取，離心，收集有機相濃縮，濃縮液幹法上樣，加入2L聚醯胺柱吸附，用8L60%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，得到粗品。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按3:5:6:2比例混合，靜置分層，取上相泵入色譜管，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為850rpm，同時把下相以2ml/min流速泵入，取上相溶液溶解粗品，進樣，紫外檢測器監測，監測波長為280nm，收集流分，減壓濃縮後，放置結晶，濾出結晶物乾燥，得藤黃酮E 31. Sg，經高效液相檢測，藤黃酮E含量為99. 1%。實施例4:
取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，稱量50kg，加6倍量80%乙醇微波提取25min，提取2次，微波功率為800W，合併濾液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，用等體積乙酸乙酯萃取，離心，收集有機相濃縮，濃縮液幹法上樣，加入9L聚醯胺柱吸附，用27L70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，得到粗品。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按4:6:5:3比例混合，靜置分層，取上相泵入色譜管，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為900rpm，同時把下相以3ml/min流速泵入，取上相溶液溶解粗品，進樣，紫外檢測器監測，監測波長為280nm，收集流分，減壓濃縮後，放置結晶，濾出結晶物乾燥，得藤黃酮E 155. 3g，經高效液相檢測，藤黃酮E含量為99. 4%。實施例5:
取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，稱量50kg，加6倍量80%乙醇微波提取20min，提取3次，微波功率為800W，合併濾液減壓濃縮至無醇，得濃縮液，用等體積乙酸乙酯萃取，離心，收集有機相濃縮，濃縮液幹法上樣，加入12L聚醯胺柱吸附，用30L70%乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分，減壓濃縮，得到粗品。取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按4:6:6:3比例混合，靜置分層，取上相泵入色譜管，開啟高速逆流色譜儀，調整轉速為850rpm，同時把下相以3.5ml/min流速泵入，取上相溶液溶解粗品，進樣，紫外檢測器監測，監測波長為280nm，收集流分，減壓濃縮後，放置結晶，濾出結晶物乾燥，得藤黃酮E 155. 3g，經高 效液相檢測，藤黃酮E含量為99. 4%。
權利要求
1.一種純化藤黃酮E的方法，其特徵在於包括以下步驟 1)取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，加6-10倍量70-80%こ醇溶液微波提取2-3次，微波功率為800-1000W，提取液減壓濃縮，濃縮液加入有機溶劑萃取，收集有機相濃縮，得濃縮液； 2)濃縮液加聚醯胺樹脂拌樣，加入聚醯胺柱吸附，こ醇溶液洗脫，薄層檢測，收集流分減壓濃縮，得到粗品； 3)以石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水為溶劑系統，上述粗品採用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集目標流分，濃縮，放置結晶，乾燥即得藤黃酮E。
2.根據權利要求I所述純化藤黃酮E的方法，其特徵在於所述步驟I)中的有機溶劑為こ酸こ酷。
3.根據權利要求I所述純化藤黃酮E的方法，其特徵在於所述步驟2)中的こ醇溶液濃度為 60-70%。
4.根據權利要求I所述純化藤黃酮E的方法，其特徵在於所述步驟3)中石油醚-こ酸こ酷-甲醇-水體積比為(3-4) : (5-6) : (5-7) : (2-3)。
全文摘要
本發明屬於天然產物分離領域，涉及一種純化藤黃酮E的方法。方法步驟是1)取卵葉藤黃的乾燥葉粉碎，加6-10倍量70-80%乙醇溶液微波提取2-3次，提取液減壓濃縮，濃縮液加入有機溶劑萃取，收集有機相濃縮，得濃縮液；2)濃縮液幹法上樣加入聚醯胺柱吸附，乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集流分減壓濃縮，得到粗品；3)以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水為溶劑系統，粗品採用高速逆流色譜分離，紫外檢測器檢測，收集流分，乾燥即得藤黃酮E。採用本發明純化藤黃酮E，工藝簡單易操作，所得產品含量高，易於放大生產。
文檔編號C07C49/747GK102826984SQ20121036858
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月28日 優先權日2012年9月28日
發明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫藥科技有限公司