款冬花葯材指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜的製作方法
2023-09-21 18:35:00 2
專利名稱：款冬花葯材指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥材指紋圖譜的建立方法，尤其是款冬花葯材高效液相色譜(HPLC) 指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的款冬花葯材標準指紋圖譜，屬於藥物分析技術領域。
背景技術：
中藥指紋圖譜特指中藥樣本經光譜或色譜等現代分析技術得到的中藥各組分群體特徵的圖譜或圖象。目前指紋圖譜已成為國內外公認的鑑別中藥品種或評價中藥質量的最有效手段之一。美國食品藥品管理局在1996年制定的《FDA關於植物製品的指南》中，要求對植物原料、植物藥中間品和植物藥產品提供相應的指紋圖譜。英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學會、德國藥用植物學會也接受色譜指紋圖譜。中國國家藥品監督管理部門於2000年發布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》，明確要求對新申報的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標準。中藥指紋圖譜經過數十年的研究，使用了包括紫外、紅外、氣相、高效液相、薄層、 核磁共振、掃描電子顯微鏡、計算機圖像分析、電泳技術、同工酶分析法、分子生物學技術、 聚類分析技術等許多現代分析測試手段，為中藥的物質鑑定和成分分析積累了大量的數據。但從中藥全面質量控制的角度看，還遠未達到有效地反映和控制中藥的整體質量的目的。高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜在國際上容易獲得認可，包括美國、英國、法國、加拿大、 德國、日本和印度在內的許多國家更願意接受HPLC指紋圖譜。因此，為中藥材建立相應的 HPLC指紋圖譜，是現階段控制中藥內在質量的有效手段。款冬花為菊科款冬屬植物款冬的花蕾，具有潤肺下氣，止咳化痰之功效。臨床上主要用於新久咳嗽，咳喘痰多，勞嗽咳血。本品已報導的化學成分包括萜類，黃酮類，生物鹼， 揮髮油等。由於受產地、氣候和生態環境等的影響，不同款冬花葯材所含的成分也存在一定差異。《中國藥典》對款冬花葯材的質量控制僅限於款冬酮的含量測定，不能系統、完整地反映款冬花的內在質量。
發明內容
本發明的目的是提供一種款冬花葯材指紋圖譜的建立方法，以及由此方法所得到的款冬花葯材標準指紋圖譜。為實現此目的，本發明通過對款冬花葯材高效液相色譜指紋圖譜的研究，提出了一種更好的款冬花葯材質量控制方法，彌補了現有質量控制技術的不足，使款冬花葯材的質量控制更加完善和科學。本發明的款冬花葯材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，包括如下步驟
(1)供試品溶液的製備取款冬花葯材粉末1.0 g，精密稱定，置具塞容器中，精密加入 KTlOOmL乙醇，超聲處理1小時，冷卻後上清液用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。(2)高效液相色譜分析色譜分離柱填料5 μ m Diamonsil- C18，250X4. 6mm ；流動相0. 1%磷酸-乙腈；採用梯度洗脫方式0min — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；檢測波長 240nm ；柱溫:20^40 °C。
在此條件下分析供試品溶液，得到款冬花葯材的指紋圖譜。按照本發明提供的方法，對10批款冬花葯材建立了 HPLC指紋圖譜，通過分析， 確定了 13 個共有峰，保留時間分別為3. 9min、10. Omin,21. Omin,22. 3min、25. Omin、 26. lmin、28. 8min、37. lmin、38. 6min、45. 6min、48. 7min、51. lmin、54. 5min,這些共有特徵峰構成了款冬花葯材的指紋特徵，可作為款冬花葯材的標準指紋圖譜。本發明具有如下顯著的優點和用途
(1)將款冬花葯材作為一個整體對待，通過比較其共有峰可以找出不同藥材之間的細微差異；
(2)供試品製作簡便，色譜條件容易實現；
(3)方法的穩定性和重現性都比較好；
(4)適用於對款冬花葯材真偽、產地和品質的鑑別和控制。
圖1是本發明提供的款冬花葯材的標準指紋圖譜。圖中從左到右分別標出了其共有特徵峰1至13號。
具體實施例方式
本發明的優選實施例如下 (1)儀器和藥品使用Waters高效液相色譜儀；款冬花葯材共10批，購於藥店或藥材市場；其它試劑為色譜純或分析純。(2)供試品溶液的製備取款冬花葯材粉末1.0 g，精密稱定，置具塞容器中，精密加入50 mL乙醇，超聲處理1小時，冷卻後上清液用0. 45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液。(3)高效液相色譜分析色譜分離柱填料5 μ m Diamonsil- C18，250X4. 6mm ；流動相0. 1%磷酸-乙腈；採用梯度洗脫方式Omin — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；檢測波長 240nm ；柱溫:20^40 °C。 在此條件下分析供試品溶液，得到款冬花葯材的指紋圖譜。(4)按照本發明提供的方法，對10批款冬花葯材建立了 HPLC指紋圖譜，通過分析，確定了 13 個共有峰，保留時間分別為3. 9min、10. Omin,21. Omin,22. 3min、25. Omin、 26. lmin、28. 8min、37. lmin、38. 6min、45. 6min、48. 7min、51. lmin、54. 5min,這些共有特徵峰構成了款冬花葯材的指紋特徵，可作為款冬花葯材的標準指紋圖譜。
權利要求
1. 一種款冬花葯材高效液相色譜指紋圖譜的建立方法，包括以下步驟(1)供試品溶液的製備取款冬花葯材粉末1g，精密稱定，置具塞容器中，精密加入 10^100 mL乙醇，超聲處理1小時，冷卻後上清液用0.45 μ m微孔濾膜濾過，濾液作為供試品溶液；(2)指紋圖譜的製作色譜分離柱填料5μπιDiamonsil- Cw柱，250 X 4. 6mm ；流動相0. 1%磷酸-乙腈；採用梯度洗脫方式0min — 30min — 40min — 50min — 60min,乙腈 10% — 25% — 75% — 100% — 100% ；流速 0. 5 1. 5mL/min ；檢測波長 240nm ；柱溫:20^40°C, 在此條件下分析供試品溶液，得到款冬花葯材的指紋圖譜；(3)標準指紋圖譜的確定確定了13個共有特徵峰，保留時間分別為3. 9min、10. Omin, 21. 0min>22. 3min>25. 0min>26. lmin>28. 8min>37. lmin>38. 6min、45. 6min、48.7min、 51. lmin、54. 5min，這些共有特徵峰構成了款冬花葯材的指紋特徵，作為款冬花葯材的標準指紋圖譜。
全文摘要
本發明提供了一種款冬花葯材HPLC指紋圖譜的建立方法及其標準指紋圖譜。首先，取款冬花葯材粉末，加入乙醇，超聲提取，將上清液用微孔濾膜過濾，濾液作為供試品溶液。然後，進行高效液相色譜分析，色譜柱為Diamonsil-C18柱(5μm，250×4.6mm)；流動相為0.1%磷酸-乙腈，採用梯度洗脫方式；檢測波長240nm；柱溫30℃。吸取供試品溶液進樣，得到款冬花葯材的HPLC指紋圖譜。通過對10批次款冬花葯材HPLC指紋圖譜的比對，確定其共有指紋特徵，得到標準指紋圖譜。利用標準指紋圖譜可以有效監控款冬花葯材的質量，保持其穩定、均一、可控。
文檔編號G01N30/88GK102520102SQ201110422348
公開日2012年6月27日 申請日期2011年12月16日 優先權日2011年12月16日
發明者曹娟, 王福剛 申請人:泰山醫學院