一種田七提取物及其應用的製作方法

2023-09-21 18:21:00

專利名稱：一種田七提取物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及植物中的活性提取物，具體涉及一種田七提取物及其應用。
背景技術：
人類巨細胞病毒(Human Cytomeglovirus，HCMV)在人群中具有較高的隱性感染率，文獻報導的人血清HCMV-IgG陽性率在40% 90%之間。正常人感染HCMV後一般不產生臨床症狀，但當處於免疫力被抑制的病理或生理狀態時，如愛滋病患者、器官移植患者及婦女妊娠期等，則可能會激活病毒，引起發燒，視網膜炎、胸膜炎、動脈硬化、結腸憩室炎等， 而婦女妊娠早期的HCMV感染則與死胎及新生兒先天性致畸等密切相關。目前被FDA批准用於治療HCMV感染的藥物有更昔洛韋、纈更昔洛韋、西多福韋、膦甲酸鈉、福米韋生等，這些藥物由於具有極大的毒副作用，被禁止使用於孕婦與嬰幼兒，使用這些藥物常見的不良反應有骨髓抑制，用藥後約40%的患者中性粒細胞數減低至1000/mm3以下，約20%的患者血小板計數減低至50000/mm3以下，此外還有貧血；中樞神經系統症狀如精神異常、緊張、震顫等，發生率約5%，偶有昏迷、抽搐等；可出現皮疹、瘙癢、藥物熱、頭痛、頭昏、呼吸困難、噁心、嘔吐、腹痛、食慾減退、肝功能異常、消化道出血、心律失常、血壓升高或降低、血尿、血尿素氮增加、脫髮、血糖降低、水腫、周身不適、肌酐增加、嗜酸性細胞增多症、注射局部疼痛、 靜脈炎等；有巨細胞病毒感染性視網膜炎的愛滋病患者可出現視網膜剝離。鑑於以上藥物的毒副作用和服用後的不良反應，所以開發新型高效無毒抗HCMV藥物顯得意義重大，特別是在傳統的中草藥中尋找抗病毒藥物成了目前該領域研究的一個熱點和亮點。近年來已有採用具有抗病毒活性的中成藥用於抗巨細胞病毒研究，如公開號為 CN1302637的中國發明專利，公開了一種以蒲公英、大青葉、金銀花和魚腥草以等重量比列混合，證實此提取物有一定的抗巨細胞病毒效果，臨床療效表明該藥治療圍產期人巨細胞病毒活動性感染有效率達78. 05% ；陳素華等(Chen S，Xiong J，Xing W，et al. A study on the traditional Chinese medicine Jinyebaidu for prevention and treatment of intrauterine infection with guinea pigs cytomegalovirus. J Huazhong Univ Sci Technolog Med Sci. 2005，25 (6) :721-723.)以豚鼠為模型，與未添加藥物的對照組相比，發現中藥金葉敗毒可以降低妊娠期感染(從100%降為50%)、宮內感染率(從100% 降為75 % )、致畸率(從64. 4%降為25. O % )；還有用單一植物粗提物的初步研究，如 Edziri Hayet 等(Edziri Hayet, Mastouri Maha, Ammar Samia, et al. Anti-microbial, antioxidant, and antiviralactivities of Retama raetam(Forssk. )ffebb flowers growing inTunisia. World J Microbiol Biotechnol. 2008，24 :2933-2940.)在研究豆科(Fabaceae)植物羅騰樹(Retama raetam Forss k. Webb)抗菌、抗病毒、抗氧化活性時，發現該植物花朵的甲醇提取物具有中等抗巨細胞病毒活性(IC5Q = 250yg/ml).有些研究已經深入到單組份，而且對抗病毒的機理做了初步闡明，如Hong ^ien等(Zhen H， Fang F, Ye DY, et al. Experimental study on the action of allitridin against human cytomegalovirus in vitro-Inhibitory effects on immediate-early genes. Antiviral Res. 2006,72(1) :68-74.)從大蒜中提取的大蒜新素可以有效抑制IEl與IE2基因的轉錄，影響病毒的DNA複製，最終實現抑制病毒的複製。中藥田七，又稱三七、金不換、盤龍七等，作為一種名貴藥村，是具有獨特功能的人參屬中的優異品種。據藥物成份分析，田七主要含六種皂苷和谷留醇、胡蘿蔔甙、黃酮類化合物，皂苷是田七的主要成分，對增強體力，改善心肌氧代謝，提高動物缺氧的耐受力很有作用；谷留醇和胡蘿蔔甙能降血脂；而黃酮類化合物是擴張冠狀動脈、改善心肌供血、增加血管彈性的有效成分，因而常食田七，不僅對冠心病、心絞痛有顯著療效，而且對冠心病、心絞痛有預防功能，同時還具有滋補強壯作用。近年來有研究表明，田七中的三萜類皂苷具有抗腫瘤抗氧化的功效，但迄今為止尚未發現田七提取物具有抗人巨細胞病毒的功效。

發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種製備方法簡單、細胞毒性小的田七提取物及其在製藥中的應用。本發明所述的田七提取物，該提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質的質量比為 2 5 1。優選的，提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質的質量比為3 4 1。所述田七提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質可按常規方法製備，具體可採用以下方法製備取田七粉碎，95%的乙醇回流提取，收集濾液，濃縮至浸膏，浸膏用甲醇溶解，經大孔樹脂吸附，以30 50%乙醇洗脫，收集洗脫液得洗脫液A，再用55 70%乙醇洗脫，收集洗脫液得洗脫液B ；將洗脫液A濃縮至幹，得到總皂苷類物質，將洗脫液B濃縮至幹，得到總黃酮類物質。本發明還包括上述田七提取物在製備抗人巨細胞病毒藥物中的應用。本發明還包括上述田七提取物在製備治療孕期人巨細胞病毒感染的藥物中的應用。為了更好的理解本發明，下面通過實驗來進一步說明本發明所述田七提取物在製藥中的應用。一、細胞毒性實驗(MTT)根據衛生部頒布的《新藥臨床前研究指導原則彙編(藥學、藥理學、毒理學)》關於抗病毒進行實驗設計，採用細胞病變法進行體外抗病毒實驗。實驗步驟(1)在250ml細胞培養瓶中接種人包皮成纖維細胞(HFF)；(2)待細胞鋪滿後，倒掉上清，用IXGKNP清洗兩次，加入配製好的0.05%胰酶，待細胞消化後，加入含10% FBS的培養基終止反應；(3)將細胞吹勻，計數，轉入96孔板(104/孔)，其中第1列與第12列，加入不含細胞的培養基，放入(X)2培養箱，於37°C，5% CO2條件下培養；(4)培養Mh，觀察細胞，狀態良好，按以下表1中的數據加入不同濃度的田七提取物，其中第11列不加藥物，作為對照；⑶了濁後，每孔分別加入含肌!^!!^/!^)的培養基20μ 1，孵育4h ；(6)吸乾上清，加入DMSO (150 μ 1/孔)，在振蕩器上混勻IOmin ；
(7)用酶標儀讀板，記錄OD57tlnm值。按上述步驟重複以上實驗3次，結果如表1所示(以均數士S. D.表示)。表1 本發明所述田七提取物對HFF細胞毒性(三次實驗均值)
權利要求
1.一種田七提取物，其特徵在於該提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質的質量比為2 5 1。
2.根據權利要求1所述的田七提取物，其特徵在於所述總黃酮類物質和總皂苷類物質的質量比為3 4 1。
3.根據權利要求1或2所述的田七提取物，其特徵在於所述田七提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質的製備方法為取田七粉碎，95%的乙醇回流提取，收集濾液，濃縮至浸膏，浸膏用甲醇溶解，經大孔樹脂吸附，以30 50%乙醇洗脫，收集洗脫液得洗脫液A，再用55 70%乙醇洗脫，收集洗脫液得洗脫液B ；將洗脫液A濃縮至幹，得到總皂苷類物質， 將洗脫液B濃縮至幹，得到總黃酮類物質。
4.權利要求1 3中任一項所述田七提取物在製備抗人巨細胞病毒藥物中的應用。
5.權利要求1 3中任一項所述田七提取物在製備治療孕期人巨細胞病毒感染的藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種田七提取物及其應用。所述的田七提取物中總黃酮類物質和總皂苷類物質的質量比為2～5∶1。實驗表明，本發明所述的田七提取物細胞毒性小，能有效抑制人巨細胞病毒引起的病變，其作用與更昔洛韋相當；對於防治孕期巨細胞病毒的感染有很好的效果，可作為新的抗巨細胞病毒藥物的活性組分。
文檔編號A61P31/22GK102166238SQ201110088429
公開日2011年8月31日 申請日期2011年4月8日 優先權日2011年4月8日
發明者張旋, 沈星燦, 蔡豪斌, 黃英星 申請人:廣西師範大學, 桂林英美特生物技術有限公司