一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法

2023-09-21 11:25:45 2

專利名稱：一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法
技術領域：
本發明涉及一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，屬於應用微生物領域。
背景技術：
豆腐在中國具有悠久的歷史，早在二千年前的西漢，豆腐加工工藝已經成熟。一般豆腐生產的主要原料是大豆。曬乾後的大豆經篩選去除雜質後，用水浸泡、淘洗去除灰份， 漂洗至潔淨，使其充分吸水膨脹，然後用打漿機磨碎，用水調成豆漿。豆漿蒸煮後，根據不同的產品，加人不同量的滷水，攪拌均勻，壓濾脫水後，可製成各種豆腐製品。在豆腐生產的過程中，產生大量的廢水，豆腐廢水主要來源於水洗、浸泡和壓濾過程，另有部分衝洗水。這些廢水屬於高濃度有機廢水，在環境中發酵，發出刺鼻的惡臭。另外，長期以來我國的豆腐加工方式一直以作坊式的加工為主，其生產能力低下，設備簡陋、工藝原始、廠址分散。一般在城鎮四周，生產廢水進人地面水環境，引起附近水體的嚴重惡化。對於制豆腐廢水的處理一般採用以下幾種方法。1)採用物理化學為主的方法，例如加藥絮凝，然後進行沉澱，或者進行氣浮，或者進行過濾。這些方法對濃度很高、生化性很好、溶解性汙染物比例很高的有機廢水，處理效率低，運行費用高，汙泥產生量大。2)採用厭氧發酵進行處理。雖然處理效果很好，但是厭氧發酵的水力停留時間長， 需要4天(施玉書，徐健，馬建萍厭氧-好氧和生物淨化工藝處理豆製品廢水技術研究。中國沼氣，17(1): 34-36)。3)採用好氧發酵進行處理，此法的特點是水力停留時間短，處理周期短。但需要快速利用豆腐廢水微生物，高效利用豆腐廢水微生物能提高豆腐廢水的處理效果，加快處理進程縮短水力停留時間。因此，對好氧發酵處理豆腐廢水而言，尋求快速分離獲得豆腐廢水淨化處理微生物的快速分離方法具有重要意義。但目前對豆腐廢水的處理基本採用厭氧發酵(秦亞平等.豆腐生產廢不泊治理 (I).汙染防治技術，1999，12(2): 93-94;張春楊等.豆腐廢水UASB反應器中的原核生物多樣性及主要功能菌群.微生物學報，2004,44 ): 141-147)。豆腐廢水的好氧處理必須具有高效降解豆腐廢水的微生物。因此，獲得高效降解豆腐廢水微生物成為豆腐廢水快速好氧處理的前提。

發明內容
本發明涉及一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，為豆腐廢水的好氧發酵處理提供菌種保障。本發明方法通過如下步驟進行 1)選擇性培養基的製備
在400-600 g豆渣總添加700-900 ml豆腐廢水，攪拌，然後採用紗布過濾，收集濾液並加入2-4 g大豆面，並定溶至1000ml，採用鹽酸和氫氧化鈉調節pH值至中性，用於固體和液體培養基的製作；製備液體培養基時，直接在121°C條件下滅菌20 min，備用；製備固體培養基時，在液體培養基中添加17-18 g/L瓊脂，溶解後在121°C條件下滅菌20 min，將滅菌後的培養基分裝製作平板培養基，備用；
(2)初篩
將堆肥肥料或土壤用10倍稀釋法製備稀釋液，稀釋至IO5-IO7稀釋度，將IO5-IO7稀釋液分別塗布於平板培養基上，在20-35°C溫度下培養M-48 h，隨著培養時間的延長，會有不同的菌產生，在所有菌落中，隨機挑選菌落相對較大的菌株進行分離純化；
(3)復篩
將步驟(2)中分離純化的菌株分別接種於液體培養基中，在20-35°C、100 -160 rpm下搖床發酵1-3天，以每毫升發酵液中微生物數量大於IO5個為選擇條件，篩選出快速生長繁殖的菌株，即單位體積發酵液中微生物數量最多的菌株，即得淨化處理豆腐廢水的微生物。本發明中所述土壤來源於富含有機物、潮溼的土壤或豆腐廢水排放口周圍的土壤。本發明中所述豆腐廢水為在製作豆腐製品過程中產生的廢水，包括水洗、浸泡、壓濾和衝洗過程中產生的廢水。本發明方法用於分離能快速處理豆腐廢水的微生物，為採用生物法處理豆腐廢水奠定基礎，本發明方法具有工藝簡單、操作方便、高效、選擇性好、成本低的優點。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明，但本發明保護範圍不局限於所述內容。實施例1 本淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，具體操作如下
(1)選擇性培養基的製備
稱取400 g豆渣添加700 ml豆腐廢水，攪拌5min，然後用2層紗布過濾，收集濾液並加入2g大豆面，定容到1000ml，採用鹽酸和氫氧化鈉調節PH值至中性，在121°C條件下滅菌20 min，作為液體培養基，備用，製備固體培養基時，在液體培養基中添加18g/L瓊脂，溶解121°C條件下滅菌20 min後製作平板培養基，備用；
(2)初篩
將堆肥肥料用10倍稀釋法製備稀釋液，稀釋至稀釋度為105，分別取0. 5 ml稀釋液塗布於6個平板培養基上，在30°C溫度下培養40 h，6個平板上一共出現46個菌落，在所有菌落中，挑選8個直徑在2 mm以上的菌落進行分離純化；
(3)復篩
將步驟(2)中分離純化的菌株分別接種於液體培養基中在30°C、120 rpm下搖床發酵 2天，8株菌在液體培養基中的濃度都達到大於105/ml，其中3株的濃度達到107ml，最後選擇濃度最高的3株菌作為目的菌株，作為淨化處理豆腐廢水微生物用於好氧發酵處理豆腐廢水。實施例2 本淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，具體操作如下 (1)選擇性培養基的製備稱取500 g豆渣添加800 ml豆腐廢水，攪拌5min，然後用2層紗布過濾，收集濾液並加入3g大豆面，定容到1000ml，採用鹽酸和氫氧化鈉調節PH值至中性，在121°C條件下滅菌20 min，作為液體培養基備用，製備固體培養基時，在液體培養基中添加17g/L瓊脂，溶解121°C條件下滅菌20 min後製作平板培養基，備用； (2)初篩
將來源於距地表約6 cm富含有機物、潮溼土壤中的土壤用10倍稀釋法製備稀釋液，稀釋至稀釋度為107，分別取0. 5 ml稀釋液塗布於6個平板培養基上，在20°C溫度下培養48 h，6個平板上一共出現22個菌落，在所有菌落中，挑選6個直徑在1. 5 mm以上的菌落進行分離純化。(3)復篩
將步驟(2)中分離純化的菌株分別接種於液體培養基中在20°C、100 rpm下搖床發酵 3天，6株菌在液體培養基中的濃度都達到大於105/ml，其中1株的濃度達到107ml，最後選擇此株菌作為目的菌株，作為淨化處理豆腐廢水微生物用於好氧發酵處理豆腐廢水。實施例3 本淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，具體操作如下
(1)選擇性培養基的製備
稱取600g豆渣添加900 ml豆腐廢水，攪拌5min，然後用2層紗布過濾，收集濾液並加入4g大豆面，定容到1000 ml，採用鹽酸和氫氧化鈉調節PH值至中性，在121°C條件下滅菌 20 min，作為液體培養基，備用；製備固體培養基時，在液體培養基中添加17.5g/L瓊脂，溶解121°C條件下滅菌20 min後製作平板培養基，備用；
(2)初篩
將來源於豆腐廢水排放口周圍的潮溼土壤中的土壤用10倍稀釋法製備稀釋液，稀釋至IO7稀釋度，分別取0.5 ml稀釋液塗布於6個平板培養基上，在35°C溫度下培養M h，6 個平板上一共出現71個菌落，在所有菌落中，挑選12個直徑在2-3mm以上的菌落進行分離純化。(3)復篩
將步驟(2)中分離純化的菌株分別接種於液體培養基中在35°C、160 rpm下發酵1天， 12株菌在液體培養基中的濃度都大於105/ml，其中2株的濃度達到108/ml，最後選擇濃度最高的2株菌作為目的菌株，作為淨化處理豆腐廢水微生物用於好氧發酵處理豆腐廢水。
權利要求
1.一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，其特徵在於按照如下步驟進行(1)選擇性培養基的製備在400-600 g豆渣中添加700-900 ml豆腐廢水，攪拌，然後用紗布過濾，收集濾液並加入2-4 g大豆面，定容到1000ml，調節PH值至中性，在121°C條件下滅菌20 min，作為液體培養基備用，製備固體培養基時，在液體培養基中添加17-18 g/L瓊脂，溶解滅菌後製作平板培養基，備用；(2)初篩將堆肥肥料或土壤用10倍稀釋法製備稀釋液，稀釋至IO5-IO7稀釋度，將IO5-IO7稀釋液分別塗布於平板培養基上，在20-35°C溫度下培養M-48 h，挑選在平板培養基上菌落相對較大的菌株進行分離純化；(3)復篩將步驟(2)中分離純化的菌株分別接種於液體培養基中，在溫度20-35°C和100 -160 rpm搖床下發酵1-3天，篩選出快速生長繁殖的菌株，即發酵後每毫升發酵液中微生物數量大於IO5個的菌株，即得淨化處理豆腐廢水的微生物。
2.根據權利要求1所述淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，其特徵在於土壤來源於富含有機物、潮溼的土壤或豆腐廢水排放口周圍的土壤。
全文摘要
本發明公開了一種淨化處理豆腐廢水微生物的分離方法，本方法採用豆渣、豆腐廢水和大豆面等配製選擇性培養基，分離能高效淨化處理豆腐廢水的微生物的方法，該方法具有工藝簡單、操作方便、高效、選擇性好、成本低的優點，為採用生物法快速處理豆腐廢水奠定基礎。
文檔編號C12N1/02GK102399695SQ20111044694
公開日2012年4月4日 申請日期2011年12月28日 優先權日2011年12月28日
發明者周成, 寧平, 馬豔華, 黃兆林 申請人:昆明理工大學