小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法

2023-09-09 17:57:00

專利名稱：小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法
技術領域：
本發明為一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，屬於生物工程技術領域。
背景技術：
小鵝瘟是由鵝細小病毒引起的一種主要侵害雛鵝和雛番鴨的烈性傳染病，發病率和死亡率都很高，發病雛鵝的死亡率最高可達90% 100%。長期以來，小鵝瘟疫苗是預防小鵝瘟疫病的主要措施。雖然我國目前已具有預防小鵝瘟的活疫苗凍乾產品如小鵝瘟活疫苗(SYG株)和小鵝瘟活疫苗(GD株)等，但仍存在一些不足之處，如疫苗必須通過注射途徑使用，不但費時費力，而且無法避免因人工圍捕和注射疫苗等引起的各種嚴重應激反應， 如減食、減蛋，生長受抑等，這也是目前種鵝養殖者不願意加強免疫，特別是在種鵝產蛋期間不願意加強免疫的主要原因。另外，因現行的小鵝瘟凍幹活疫苗不具有緩釋功能，免疫期短，保護率低；加上目前培育的種鵝新品種產蛋期都比較長，如果種鵝在產蛋期間不加強免疫就無法避免雛鵝發生小鵝瘟。由此可見這些問題的存在不但制約了小鵝瘟疫苗預防效力的充分發揮，而且影響到種鵝的生產性能、生長速度和經濟效益。

發明內容
本發明的目的是針對現有小鵝瘟凍幹活疫苗所存在的缺點，提供一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，原理是利用多孔澱粉對小鵝瘟病毒進行高效吸附，再使用腸溶性高分子材料進行微膠囊化包埋，最後通過流化床進行乾燥脫水。本發明充分利用微膠囊的優異特性，解決現行小鵝瘟凍幹活疫苗存在的免疫期短，使用不便，影響種鵝生產性能等不足之處，可以在種鵝產蛋期進行口服免疫，而不會產生應激反應。從而延長了免疫期， 彌補了常規活疫苗的缺陷。本發明的目的是通過以下技術途徑實現的，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，包括如下步驟(1)將小鵝瘟SYG毒株(購自中國獸醫藥品監察所)通過鵝胚增殖培養後製成疫苗半成品；(2)半成品經無菌檢合格後，加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻後再加入 20% -40%的多孔澱粉，37°C控溫攪拌20-40分鐘；(3)將步驟( 製得的液體與等體積-2. 5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌後經流化床脫水乾燥，製成小鵝瘟微膠囊化疫苗乾粉。所述的製成小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗乾粉粒徑範圍在5-15 μ m，每克所含病毒效價為0. 7X IO7-L 5X IO7ELD5tl，該疫苗可以通過口服途徑免疫。小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗半成品的製造是採用鵝胚增殖的培養方法。本發明方法科學，簡單，生產穩定可靠，疫苗效價損耗較少。通過使用多孔澱粉作為微膠囊骨架，使製成的微膠囊粒徑均勻，易乾燥脫水，分散性較好。製成的疫苗不僅具有抗原含量高、緩釋時間長、毒副作用小、成本低廉，使用方便、保存期長、無任何有害殘留等優點，還可以通過口服途徑免疫，減少了應激反應，可以使種鵝在產蛋期進行加強免疫。用本方法生產的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗乾粉每克效價為0. 7X IO7-L SXlO7ELD500產品不加任何防腐劑，在2-8°C密封條件下可保存2年效價不降低。疫苗經口服途徑(飲水或拌料)一次免疫接種後，可產生2個月左右的免疫保護期。


圖1是本發明的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗低倍掃描電鏡圖片；圖2是本發明的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗高倍掃描電鏡圖片；
具體實施例方式實施例一將購自中國獸醫藥品監察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養後製成疫苗半成品，無菌檢驗合格後加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，混勻後再加入20%的多孔澱粉，37°C控溫攪拌40分鐘。將上述液體與等體積1 %的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌後經流化床脫水乾燥，製成小鵝瘟微膠囊化疫苗乾粉，疫苗乾粉粒徑範圍在5-15 μ m。將製成的疫苗接種非免疫鵝胚，經測定每克疫苗所含毒價為1.5X IO7ELD5tlt5將疫苗加入含增稠劑的稀釋液中充分混勻，經飲水途徑對50隻健康成年鵝進行免疫接種，另設30隻健康成年鵝作為非免疫對照組，兩組健康成年鵝分開飼養。在免疫後的7、14、28、42、56、70天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(中和指數=試驗組ELD5tl/對照組 ELD50) 0結果表明，免疫7、14、28、42、56、70天後的血清中和指數分別為IOl4UO2 0UO21, IO2 2UO2 0UOl50根據《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數應彡IO18)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗在免疫後的第14天即可產生堅強保護力，免疫保護期達 56天以上。實施例二將購自中國獸醫藥品監察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養後製成疫苗半成品，無菌檢驗合格後加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，混勻後再加入40%的多孔澱粉，37°C控溫攪拌20分鐘。將上述液體與等體積2. 5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌後經流化床脫水乾燥，製成小鵝瘟微膠囊化疫苗乾粉，疫苗乾粉粒徑範圍在5-15 μ m。將製成的疫苗接種非免疫鵝胚，經測定每克疫苗所含毒價為0. 7 X IO7ELD500將疫苗加入飼料中混和均勻，經拌料途徑對45隻健康成年鵝進行免疫接種，另設30隻健康成年鵝作為非免疫對照組，兩組健康成年鵝分開飼養。在免疫後的7、14、28、42、56、70天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10 份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(中和指數=試驗組ELD5tl/對照組ELD5tl)。結果表明，免疫7、14、28、42、56、70天後的血清中和指數分別為10L2U0L8U02 0U02 °U0L8U0L2o 根據《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數應> 1018)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗在免疫後的第14天即可產生堅強保護力，免疫保護期達56天。實施例三按實施例一所述製備方法製成的疫苗經飲水途徑免疫開產種鵝40隻，另設30隻健康成年鵝作為非免疫對照組。取免疫組和對照組在免疫後不同時間段O0-30天，31-40 天，41-50天，51-60天)所產蛋孵出的雛鵝各10隻，於5日齡時攻擊致死量的小鵝瘟病毒液，觀察10天。結果試驗組不同時間段的免疫保護率分別為90 %、100 %、100 %、80 %，而對照組不同時間段的死亡率分別為ΙΟΟ^ΑΟ^ΑΟ^ΑΟ^。由此可見，該疫苗對雛鵝具有較好的保護效果。實施例四按實施例一所述製備方法製成的疫苗經飲水途徑免疫80隻健康成年番鴨，另設 40隻健康成年番鴨作為非免疫對照組，兩組番鴨分開飼養。在免疫後的7、14、28、42、56、70 天，從免疫組與對照組中隨機抽檢10份血清，測定相應的ELD5tl，求得中和指數(中和指數= 試驗組ELD5tl/對照組ELD5tl)。結果表明，免疫7、14、28、42、56、70天後的血清中和指數分別為10L1、10L8、102 °、10L9、10L7、10L2。根據《中國獸藥典》附錄27頁中的要求(血清中和指數應彡1018)，可以判斷，小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗對番鴨的保護期達42天以上。同時， 取免疫組與對照組番鴨在免疫後20-25天所產蛋孵出的雛番鴨各10隻，於5日齡時攻擊致死量的小鵝瘟病毒液。結果免疫組番鴨全部保護，而對照組番鴨有70%發病死亡。由此可見，該疫苗對番鴨也具有較好的保護效果。
權利要求
1.小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，其特徵包括如下步驟(1)將購自中國獸醫藥品監察所的小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養後製成疫苗半成品 ；(2)半成品經無菌檢合格後，加入5%的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻後再加入 20% -40%的多孔澱粉，37°C控溫攪拌20-40分鐘；(3)將步驟( 製得的液體與等體積-2.5%的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌後經流化床脫水乾燥，製成小鵝瘟微膠囊化疫苗乾粉。
2.根據權利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，其特徵是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗乾粉粒徑範圍在5-15 μ m。
3.根據權利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，其特徵是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗每克所含病毒效價為0. 7X IO7-L 5X 107ELD5Q。
4.根據權利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，其特徵是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗通過口服途徑免疫。
5.根據權利要求1所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法，其特徵是所述的小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗一次免疫接種後，產生至少56天的免疫保護期。
全文摘要
本發明公開了一種小鵝瘟微膠囊化口服活疫苗的製備方法。該疫苗的製造方法是將小鵝瘟SYG毒株通過鵝胚增殖培養後製成疫苗半成品，無菌檢驗合格後加入5％的蔗糖脫脂乳溶液，攪拌混勻；在上述半成品溶液中加入20％-40％的多孔澱粉，37℃控溫攪拌20-40分鐘；將上述液體與等體積1％-2.5％的海藻酸鈉溶液混合，充分攪拌後經流化床脫水乾燥，製成小鵝瘟微膠囊化疫苗乾粉。本發明方法科學，簡單，生產穩定可靠，疫苗效價損耗較少。採用疫苗微膠囊化技術，不僅使小鵝瘟活疫苗可以通過口服途徑免疫，減小了應激反應，而且賦予該活疫苗以緩釋功能，產蛋期間的種鵝可照常使用。
文檔編號A61K39/23GK102397541SQ201010286400
公開日2012年4月4日 申請日期2010年9月17日 優先權日2010年9月17日
發明者劉學賢, 呂曉娟, 徐步, 戴有理, 李新華, 龔建森 申請人:江蘇省家禽科學研究所