GLP-1-Fc融合蛋白質製劑的製作方法

2023-09-14 20:23:15

專利名稱：：GLP-1-Fc融合蛋白質製劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及胰高血糖素樣肽類似物的可商購製劑，所述的胰高血糖素樣肽類似物與免疫球蛋白的Fc部分融合。該製劑可以用於治療糖尿病和肥胖症以及多種其它病症或障礙。
背景技術：
：胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)類似物和衍生物有希望在臨床試驗中用於治療2型糖尿病。GLP-1誘導多種生物學效應，例如剌激胰島素分泌、抑制胰高血糖素分泌、抑制胃排空、抑制胃運動或腸運動，並且誘導重量減輕。GLP-1的顯著特徵是其剌激胰島素分泌而不伴有低血糖相關危險的能力，所述低血糖相關危險見於應用胰島素治療或通過增加胰島素表達起作用的某些類型的口服治療時。GLP-1(1-37)活性很低，並且GLP-1(7-37)0H和GLP-1(7-36)NH2這兩種天然存在的截短的肽在體內被迅速清除，並且具有極短的體內半壽期這一事實限制了涉及GLP-1肽的治療的有效性。已知內源性產生的二肽基肽酶IV(DPP-IV)通過除去N端組氨酸和丙氨酸殘基而使循環GLP-1肽失活，並且這是體內短半壽期的主要原因。已經採取多種途徑以在保持生物學活性的同時延長GLP-1肽的清除半壽期或降低該肽從機體的清除。一條途徑涉及將GLP-1肽與免疫球蛋白Fc部分融合。免疫球蛋白典型地具有長體內循環半壽期。例如，IgG分子在人體內具有至多23天的半壽期。免疫球蛋白Fc部分是這種體內穩定性的部分原因。在保留GLP-1分子生物學活性的同時，GLP-l-Fc融合蛋白質具有由免疫球蛋白Fc部分提供的穩定性的優點。儘管此途徑對於GLP-1療法(參見WO02/46227)是可行的，但是對多種融合蛋白質長時期反覆施用時的抗原性存在普遍的顧慮。對於GLP-l-Fc融合體療法，這尤其是一個顧慮，因為糖尿病患者一旦經診斷患有該疾病，就必須一生接受治療。此外，如果Fc部分保留不需要的效應子功能，Fc融合蛋白質療法可能是一個顧慮。該方法是PCT/US04/15595(W02005/000892)的焦點，其中通過鑑定特別GLP+Fc融合蛋白質克服了與施用GLP-l-Fc融合蛋白質相關的關於潛在免疫原性和效應子活性的問題，所述特別GLP-l-Fc融合蛋白質反覆和長期施用後，誘導免疫響應風險降低並且不再具有效應子功能。對於在細菌細胞中合成產生或重組產生具有這種性質的融合蛋白質，在技術上過於龐大和複雜。這些融合蛋白質典型地在哺乳動物細胞、例如CH0、293或NS0中產生。觀察到在哺乳動物細胞中產生的融合蛋白質比在細菌細胞中產生的非融合蛋白質更易於被內源蛋白酶降解以及化學改變。該問題試圖在PCT/US2005/045376(W02006/068910)中克服，其中發現了包含GLP-l-Fc融合蛋白質，緩衝在約pH6至約pH8.5之間的製劑提供了增加的化學穩定性。另外，當在檢查中存在由宿主細胞蛋白酶引起的不穩定性時，如果其在物理上不穩定，該製劑可能不適合。本發明人還觀察到另外一個問題是溶液製劑在長期貯存後形成可溶聚集物和不可溶顆粒。該問題試圖通過賦形劑的特別組合和GLP-l-Fc融合蛋白質的特別濃度來克服。發明概述為了克服GLP-l-Fc融合蛋白質的溶液製劑在長期貯存後形成可溶聚集物和不可溶顆粒的問題，本發明人已經開發了物理和化學上穩定的溶液製劑，該溶液製劑包含約0.5至約10mg/mLGLP-l-Fc融合蛋白質、5至20mM檸檬酸鹽緩衝液、0.Ol至O.05%(w/v)聚山梨酯-80和4.0至5.3%(w/v)甘露醇，並且pH為6_7。該製劑意外地並且相當大地提供了在長期貯存後形成較少的可溶聚集物和不可溶顆粒。另外，本發明人發現該溶液製劑經長期貯存後在注射器中比在小瓶中更穩定。本發明還包括治療患有糖尿病和肥胖症以及多種其它病症或障礙的患者的方法，該方法包括施用GLP-l-Fc融合蛋白質製劑。發明詳述本發明的GLP-l-Fc融合蛋白質包含GLP-1化合物，其在C_端通過肽連接體與免疫球蛋白的Fc部分的類似物的N-端融合。融合蛋白質在生物學上用作單體或者用作同型二聚體並且比天然GLP-1具有增加的半壽期。優選的GLP-l-Fc融合蛋白質包含(SEQIDN0:1)中給出的胺基酸序列。更優選的GLP-l-Fc融合蛋白質基本由(SEQIDNO:1)中給出的胺基酸序列組成。最優選的GLP-l-Fc融合蛋白質由(SEQIDNO:1)中給出的胺基酸序列組成。His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Gly-Gly-Gly-Gly-Ser-Ala-Glu-Ser-Lys-Tyr-Gly-Pro-Pro-Cys55-Pro-Pro-Cys58-Pro-Ala-Pro-Glu-Ala-Ala-Gly-Gly-Pro-Ser-Val-Phe-Leu-Phe-Pro-Pro-Lys_Pro_Lys_Asp_Thr_Leu_Met_Ile_Ser_Arg_Thr_Pro_Glu_Val_Thr_Cys90_Val_Val_Val_Asp-Val-Ser-Gln-Glu-Asp-Pro-Glu-Val-Gln-Phe-Asn-Trp-Tyr-Val-Asp-Gly-Val-Glu-Val_His_Asn_Ala_Lys_Thr_Lys_Pro_Arg_Glu_Glu_Gln_Phe_Asn_Ser_Thr_Tyr_Arg_Val_Val_Ser_Val_Leu_Thr_Val_Leu_His_Gln_Asp_Trp_Leu_Asn_Gly_Lys_Glu_Tyr_Lys_Cys150_Lys一Val-Ser-Asn-Lys-Gly-Leu-Pro-Ser-Ser-Ile-Glu-Lys-Thr-Ile-Ser-Lys-Ala-Lys-Gly-Gln_Pro_Arg_Glu_Pro_Gln_Val_Tyr_Thr_Leu_Pro_Pro_Ser_Gln_Glu_Glu_Met_Thr_Lys_Asn_Gln_Val_Ser_Leu_Thr_Cys196_Leu_Val_Lys_Gly_Phe_Tyr_Pro_Ser_Asp_Ile_Ala_Val_Glu_Trp_Glu_Ser_Asn_Gly_Gln_Pro_Glu_Asn_Asn_Tyr_Lys_Thr_Thr_Pro_Pro_Val_Leu_Asp_Ser_Asp_Gly_Ser_Phe_Phe_Leu_Tyr_Ser_Arg_Leu_Thr_Val_Asp_Lys_Ser_Arg_Trp_Gln_Glu_Gly_Asn_Val_Phe_Ser_Cys254_Ser_Val_Met_His_Glu_Ala_Leu_His_Asn_His_Tyr_Thr—Gin—Lys—Ser—Leu—Ser—Leu—Ser—Leu—Gly(SEQIDNO:1)二硫鍵可以存在於鏈內(在A鏈或B鏈上)和/或鏈間(在A鏈和B鏈之間)。鏈內二硫鍵的實例是Cys90A-Cysl50A、Cysl96A-Cys254A、Cys90B-Cysl50B、Cysl96B-Cys254B。鏈間二硫鍵的實例是Cys55A-Cys55B、Cys58A-Cys58B。生物學活性指的是融合蛋白質在體內與GLP-1受體結合和活化GLP-1受體並且引發響應的能力。響應包括但不限於分泌胰島素、抑制胰高血糖素、抑制食慾、減輕重量、誘導飽腹感、抑制凋亡、誘導胰P細胞增殖以及分化胰P細胞。GLP-l-Fc融合蛋白質製劑包含約0.25至約10mg/mLGLP-l-Fc融合蛋白質。優選融合蛋白質的濃度(mg/mL)範圍為約0.5至10、0.5至5、0.5至2.5、0.5至2、0.5至1.67、0.5至1.5、0.5至1.25、0.5至1、0.5至0.9、0.5至0.8、0.5至0.75、0.6至2、0.7至2、0.8至2、0.9至2、0.5至3、0.6至3、0.7至3、0.8至3、0.9至3、0.5至4、0.6至4、0.7至4、0.8至4、0.9至4、1至2、1.1至2、1.2至2、1.3至2、1.4至2、1.5至2、1.6至2、0.7至1.67、0.9至1.1、1至4、1.0至4.0、0.5至5、0.25至7、0.25至5、0.25至4、0.25至3、0.25至2、0.25至1.5、0.25至1、0.25至0.5。優選GLP+Fc融合蛋白質的濃度(mg/mL)為約0.25、約0.42、約0.5、約0.6、約0.67、約0.7、約0.75、約0.8、約0.83、約0.9、約1、約1.1、約1.2、約1.25、約1.3、約1.4、約1.5、約1.6、約1.67、約1.7、約1.8、約1.9、約2、約2.5、約3、約3.33、約4、約5、約6.67或約10。GLP-l-Fc融合蛋白質製劑的緩衝範圍為約5至20mM檸檬酸鹽。優選檸檬酸鹽濃度(mM)範圍為約5至15、5至12.5、5至10、7.5至20、7.5至15、7.5至12.5、7.5至10、8至20、8至15、8至12.5、8至11、8至10、9至20、9至15、9至12.5、10至20、10至17.5、10至15、10至12.5、6至14、7至13、8至12、9至11、12至20、14至20、16至20和18至20。特別優選的檸檬酸鹽的濃度範圍為約9至約11和約8至約12mM。特別優選的檸檬酸鹽的濃度為約10或約10.0。pH調節的範圍為約6至7以提供可接受的穩定性，以保持GLP-l-Fc融合蛋白質的溶解度和促胰島素活性並且是非腸道施用可以接受的。可以通過加入酸、例如HC1，或加入鹼例如NaOH將pH調節至預期的pH或者可以加入檸檬酸鹽緩衝液和檸檬酸的組合以獲得預期的緩衝濃度和預期的pH。優選pH值的範圍為約6.3至6.7、6.25至6.75、6.2至6.8、6.15至6.85、6.1至6.9。優選pH值為約6.5。GLP-l-Fc融合蛋白質製劑進一步包含甘露醇作為等張劑。甘露醇的濃度範圍為4.0至5.3%(w/v)。單位"(w/v)"指的是組分的質量/最終製劑的體積。因此，甘露醇濃度為4.6%(w/v)的製劑中每mL製劑具有46mg甘露醇，或者以另一種方式表達，其具有4.6克甘露醇溶於總體積為100mL的製劑中。優選的甘露醇濃度(％(w/v))範圍為約4.0至約4.1、約4.1至約4.2、約4.2至約4.3、約4.3至約4.4、約4.4至約4.5、約4.5至約4.6、約4.6至約4.7、約4.55至約4.75、約4.5至約4.8、約4.4至約4.9、約4.3至約5.0、約4.2至約5.1、約4.1至約5.2、約4.7至約4.8、約4.8至約4.9、約4.9至約5.0、約5.0至約5.1、約5.1至約5.2、約5.2至約5.3。優選的甘露醇濃度(％(w/v))為約4.3、約4.5、約4.55、約4.6、約4.65、約4.64、約4.7、約4.75、約4.8、約4.9、約5.0、約5.1、約5.2或約5.3。GLP-l-Fc融合蛋白質製劑進一步包含聚山梨酯-80作為增溶劑和/或穩定劑。聚山梨酯-80的濃度範圍為約0.Ol至O.05%(w/v)(或者以術語mg/mL表示，約0.l至O.5mg/mL)。聚山梨酯-80的該濃度是與GLP-Fc融合蛋白質和甘露醇組合確定的，以使可溶聚集物和不可溶顆粒的形成最小化。聚山梨酯-80優選的濃度(％(w/v))範圍為約0.01至0.04、0.01至0.03、0.015至0.025。聚山梨酯_80優選的濃度範圍為約0.018至約0.022%(w/v)。聚山梨酯-80另一個優選的濃度範圍為約O.015至約0.025%(w/v)。聚山梨酯-80特別優選的濃度為約0.02%(w/v)。特別優選的製劑包含具有SEQIDN0:1胺基酸序列的GLP-Fc融合蛋白質、濃度範圍為約O.25至約10mg/mL，擰檬酸鹽緩衝液、濃度為約lOmM，聚山梨酯-80、濃度為約0.02%(w/v)，山梨醇、濃度為約4.6X(w/v)，並且pH為約6.5。另一個特別優選的製劑包含具有SEQIDN0:1胺基酸序列的GLP-Fc融合蛋白質、濃度範圍為約0.25至約5mg/mL，檸檬酸鹽緩衝液、濃度為約10mM，聚山梨酯-80、濃度為約0.02X(w/v)，山梨醇、濃度為約4.6%(w/v)，並且pH為約6.5。另一個特別的製劑包含具有SEQIDN0:1胺基酸序列的GLP-Fc融合蛋白質、濃度範圍為約0.25至約10mg/mL，檸檬酸鹽緩衝液、濃度範圍為約5至約20mM，聚山梨酯-80、濃度為約0.02%(w/v)，山梨醇、濃度範圍為約4.5至約4.8%(w/v)，並且pH範圍為約6.3至約6.7。另一個特別的製劑包含具有SEQIDNO:1胺基酸序列的GLP-Fc融合蛋白質、濃度範圍為約0.25至約5mg/mL，檸檬酸鹽緩衝液、濃度範圍為約5至約20mM，聚山梨酯-80、濃度為約0.02%(w/v)，山梨醇、濃度範圍為約4.5至約4.8%(w/v)，並且pH範圍為約6.3至約6.7。製劑的施用可以通過普通技術人員已知的任何有效途徑。外周非腸道施用是其中一種方法。非腸道施用在醫學文獻中通常被理解為通過滅菌注射器或某些其它機械設備例如輸注泵將劑型注射至體內。外周非腸道途徑可以包括靜脈內、肌內、皮下和腹膜內途徑施用。皮下施用是優選的途徑。本發明製劑可以用於治療患有非胰島素依賴性糖尿病或者處於發展成非胰島素依賴性糖尿病危險中的個體、胰島素依賴性糖尿病或肥胖症的個體。在上下文描述的製劑中GLP-l-Fc融合蛋白質的有效量是當施用於需要GLP-1受體剌激的個體時引起預期的治療和/或預防效果而不引起不希望的副作用的量。優選融合蛋白質每兩周施用一次或者每周施用一次。取決於待治療的疾病，其可能需要更頻繁施用融合蛋白質，例如每周施用二至三次。本發明將通過參考以下實施例以非限制性實施例的方式進行描述。實施例體外GLP-1受體活化分析應用CRE-螢光素酶系統將穩定表達人類GLP-1受體的HEK-293細胞以30，000個細胞/孔/80iiL低血清的DMEMF12培養基接種於96孔板中。接種後一天，將溶於0.5%BSA的試驗蛋白質的20iiL等分試樣與細胞混合併且培養5小時。對於每種試驗蛋白質，通常以5X濃度製備含有3pM至3nM的12個稀釋物後加入細胞，從而產生劑量響應曲線，從中確定EC5。值。培養後，將100iiL螢光素酶試劑直接加入至各板，並且輕輕混合2分鐘。將板置入Tri-lux發光計中並且計算螢光素酶表達引起的光輸出。GLP-Fc融合體製劑分析試驗GLP-Fc融合體製劑的穩定性是應用以下方法評價的紫外_可見光譜(UV)、反相(RP)色譜、尺寸排阻色譜、陰離子交換色譜，具有RP色譜的限制消化，在550nm處吸收，動態光散射，instron，HIAC和差示掃描量熱法(microDSC)。反相(RP)色譜用於監控片段形式的GLP-Fc的形成、Fc區域的氧化以及相應的完整主峰損失。尺寸排阻(SE)HPLC用於監控聚合物(可溶聚集物)的形成和相應的單體損失。陰離子交換(AEX)HPLC用於監控電荷不均勻性，特別是酸性變體(AV)的形成，所述的酸性變體通常相應於脫醯胺作用，以及相應的主峰損失。限制消化用於監控對GLP-Fc分子的肽(GLP-1)部分具有特異性的降解產物，例如HI(在SEQIDNO:1的1位的His)和/或G2(在SEQIDNO:1的2位的Gly)的N-端剪除、在F22(在SEQIDNO:1的22位的Phe)和/或W25(在SEQIDNO:1的25位的Trp)處的蛋白酶修剪、在N-端的丙酮酸化、在W25(在SEQIDNO:1的25位的Trp)處的氧化以及在S46(在SEQIDNO:1的46位的Ser)處的磷酸化。在550nm處的吸收監控由於不可溶顆粒的形成引起的溶液濁度。動態光散射用於測量大的可溶聚集物。Instron用於測量過濾阻力，其是半定量方法，最初發展用於測量胰高血糖素溶液中凝膠樣結構的形成。該技術已經廣泛用於評價GLP-1肽溶液的物理不穩定性。由於GLP-Fc融合體是GLP-1類似物與IgG4Fc鏈的組合，試驗過濾阻力可以給物理不穩定性的性質提供進一步的參考。進行該試驗以測量將溶液通過具有0.2iim孔徑的13mm直徑的PVDF膜過濾器推入注射器的反壓。如果沒有阻力或聚集，壓力反饋圖就沒有斜度。歷經一段時間斜度增加表明聚集作用和/或凝膠作用的增加。為了將運行比較簡單化，僅記錄最大阻力值。HIAC是廣泛用於非腸道製劑的光阻礙技術，其用於監控不可溶顆粒物質的形成。差示掃描量熱法用於監控解摺疊特徵，當蛋白質開始進行結構轉化時，其通過熱轉化溫度表明。根據下表製備GLP-Fc融合體製劑tableseeoriginaldocumentpage7GLP-Fc融合體製劑是通過0.22iim聚偏1，1_二氟乙烯(PVDF)膜滅菌過濾的。將溶液在5、15、25、37和45t:下貯存在5mL玻璃小瓶中直至分析或至多20周。pH對GLP-Fc穩定性的作用下表顯示在37t:下修剪形式的GLP-Fc融合蛋白質的形成速率常數，其是通過RP色譜確定的。tableseeoriginaldocumentpage837°CTGLP-Fc融合蛋白質的酸性變體的酸性的。tableseeoriginaldocumentpage8tableseeoriginaldocumentpage9下表顯示在37t:下貯存20周後GLP-Fc融合蛋白質的可溶聚集物(聚合物％)的形成，其是通過SEHPLC確定的。tableseeoriginaldocumentpage9下表顯示在37t:下N-端修剪(desH1/H1G2)的速率常數，其是通過限制消化確定的。tableseeoriginaldocumentpage9tableseeoriginaldocumentpage10溶解度和粘度下表顯示pH對GLP-Fc融合體製劑的溶解度和粘度的作用。首先在適合的緩衝液中製備溶液，調節pH，然後通過應用Centricon濃縮機將溶液離心濃縮。通過視覺檢查溶液達到溶液的溶解限的徵象。通過UV吸收確定濃度。以Poise(P)測定粘度，其中1P=lgcm—、—、2(TC的水的粘度為約0.01gcm18-、其與l釐泊(cP)相同。tableseeoriginaldocumentpage10溶液製劑穩定性比較進行試驗設計(DoE)研究以解釋關鍵製劑參數和分子的化學/物理穩定性性質之間的關係。基於數據，開發了定量模型以(i)定義在化學和物理穩定性方面的最佳靶製劑；(ii)探尋製劑設計空間以定義具有可接受表現的產物的參數範圍以及(iii)實現在研究中探尋的設計空間內的製劑表現的足夠穩定性。在DoE研究中試驗的所有製劑在下表中概述。製備多種製劑並且通過0.22iim聚偏1，1-二氟乙烯(PVDF)膜滅菌過濾。將製劑在5、25和4(TC下貯存在3mL玻璃小瓶中直至分析或至多3個月。tableseeoriginaldocumentpage11tableseeoriginaldocumentpage12製劑的穩定性通過監控主峰的降低％來評價，其是通過反相(RP)色譜測定的。所有製劑的速率常數如下表所示。tableseeoriginaldocumentpage12tableseeoriginaldocumentpage13tableseeoriginaldocumentpage13有兩種類型的修剪形式可以通過RP色譜監控。第一種是通過殘留蛋白酶在GLP區域的F22和/或W25處的修剪形式。第二種類型是通過化學機制在連接區域的修剪。所有製劑的速率常數如下表所示，其是通過RP色譜確定的。tableseeoriginaldocumentpage13如下表所示'tableseeoriginaldocumentpage14l體的形成是通過尺寸排阻HPLC監控的。在4(TC下單《tableseeoriginaldocumentpage14tableseeoriginaldocumentpage15通過在GLP區域的限制消化的N-端修剪是通過限制消化分析確定的。DesHI,H1G2的速率常數如下表所示。tableseeoriginaldocumentpage15tableseeoriginaldocumentpage16通過在400RPM下進行軌道振蕩24小時的攪拌後可溶聚集物的形成是通過SEHPLC監控的。單體％結果如下表所示。tableseeoriginaldocumentpage16tableseeoriginaldocumentpage17對於攪拌穩定性，主要關注的是不可溶顆粒物質的形成，其可以通過HIAC測量監控。通過在400RPM下進行軌道振蕩24小時的攪拌後的HIAC結果如下表所示。tableseeoriginaldocumentpage17tableseeoriginaldocumentpage18在注射器和小瓶中的NaCl與甘露醇製劑的比較tableseeoriginaldocumentpage18tableseeoriginaldocumentpage19以上兩種製劑在5t:下的穩定性比較，比較甘露醇和NaCl以及注射器和小瓶貯存。tableseeoriginaldocumentpage19ND=未測定以上兩種製劑在25t:下的穩定性比較，比較甘露醇和NaCl以及注射器和小瓶貯存。tableseeoriginaldocumentpage20ND=未測定以上兩種製劑在4(TC下的穩定性比較，比較甘露醇和NaCl以及注射器和小瓶貯存。tableseeoriginaldocumentpage21ND=未測定甘露醇濃度確定獲得GLP-Fc融合蛋白質溶液製劑的靶張力為290毫重量克分子滲透濃度/Kg所需的甘露醇濃度是通過滴定試驗確定的。下表概述了產生的重量克分子滲透濃度，其是甘露醇濃度的函數。基於重量克分子滲透濃度結果與甘露醇濃度的線性回歸分析，統計學P值<0.Ol，確定甘露醇濃度為46.4mg/mL或4.64%。tableseeoriginaldocumentpage22權利要求穩定的溶液製劑，該製劑包含治療有效量的在檸檬酸鹽緩衝液中的GLP-1-Fc融合蛋白質，所述的檸檬酸鹽緩衝液含有範圍為約0.01％至0.05％(w/v)的聚山梨酯-80、範圍為約4.3至5.0％(w/v)的甘露醇，並且其中溶液的pH範圍為約pH6至7。2.權利要求l的穩定的溶液製劑，其中治療有效量的GLP-l-Fc融合蛋白質的範圍為約0.25至約10mg/mL。3.權利要求2的穩定的溶液製劑，其中治療有效量的GLP-1-Fc融合蛋白質的範圍為約0.25至約5mg/mL。4.權利要求1至3中任意一項的穩定的溶液製劑，其中檸檬酸鹽緩衝液的濃度範圍為約5至20mM。5.權利要求4的穩定的溶液製劑，其中檸檬酸鹽緩衝液的濃度為約10mM。6.權利要求1至5中任意一項的穩定的溶液製劑，其中聚山梨酯-80的濃度為約0.02%(w/v)。7.權利要求1至6中任意一項的穩定的溶液製劑，其中甘露醇的濃度範圍為約4.5至4.8%(w/v)。8.權利要求1至7中任意一項的穩定的溶液製劑，其中甘露醇的濃度為約4.6%(w/v)。9.權利要求1至8中任意一項的穩定的溶液製劑，其中GLP-l-Fc融合蛋白質的胺基酸序列是通過SEQIDN0:1給出的。10.權利要求1至9中任意一項的穩定的溶液製劑，其中GLP-l-Fc融合蛋白質的濃度範圍為約0.25至5mg/mL，擰檬酸鹽的濃度為約lOmM，聚山梨酯-80的濃度為約0.02%(w/v)，甘露醇的濃度為約4.6X(w/v)並且pH範圍為約6.3至6.7。11.權利要求1至10中任意一項的穩定的溶液製劑，其中GLP-l-Fc融合蛋白質的濃度為約lmg/mL。12.權利要求1至11中任意一項的穩定的溶液製劑，其中pH為約6.5。13.權利要求1至12中任意一項的穩定的溶液製劑，其中製劑貯存在滅菌注射器中。全文摘要本發明提供了穩定的溶液製劑，其包含治療有效量的GLP-1-Fc融合蛋白質，其在含有聚山梨酯-80和甘露醇的檸檬酸鹽緩衝液中的pH約為6.5。該製劑用於治療糖尿病和肥胖症以及多種其它病症或障礙。文檔編號A61K38/26GK101730523SQ200880023539公開日2010年6月9日申請日期2008年7月9日優先權日2007年7月10日發明者K·額申請人:伊萊利利公司