生長激素抑制素結合肽-金屬絡合物的製作方法

2023-09-14 04:36:10 1

專利名稱：生長激素抑制素結合肽-金屬絡合物的製作方法
背景技術：
1.發明領域本發明涉及治療劑、放射性治療劑、放射性診斷劑、和非放射性診斷劑以及用於製備這些診斷劑和治療劑的方法。本發明也涉及環狀肽，該肽特異性地與在哺乳動物細胞表面，特別是患腫瘤或轉移瘤的哺乳動物細胞表面表達的生長激素抑制素受體結合。一方面，本發明涉及用於在哺乳動物體某部位成像的閃爍照相成像劑。在這方面，該成像劑包含一種特異性結合肽，它特異性地與生長激素抑制素受體表達的體內細胞結合，其中通過放射性標記物結合部分，用鎝-99m(Tc-99m)標記該肽，由此形成肽與Tc-99m的絡合物。另一方面，本發明提供放射性碘處理的成像劑。本發明也提供治療劑，它包括放射性碘處理劑、放射性金屬-試劑絡合物和非放射性金屬-試劑絡合物，所有這些治療劑都具有治療作用。本發明提供製備本發明診斷和治療劑中每一種具體的診斷和治療劑用的試劑、其放射性標記的實例和非放射性金屬絡合物、標記所述試劑的方法和試劑盒，該試劑盒包含本發明試劑的非放射性具體組分及便於製備本發明放射性標記的診斷和治療劑的其它組分。
2.現有技術的說明生長激素抑制素是十四肽，它是內源性地通過人和其它哺乳動物的下丘腦和胰腺而生產的。該肽具有式
(在G.Zubay.Biochemistry(2d ed.)，1988，(MacMillan Publishing；NewYork)，P.33中可以找到胺基酸的專用字母縮寫)。該肽在體內發生各種生理作用。已知在生理上對中植神經系統、下丘腦、胰腺、和胃腸道發生作用。
生長激素抑制素抑制胰腺釋放胰島素和胰高血糖素，抑制下丘腦釋放生長激素和減少胃分泌。因此，生長激素抑制素具有減輕人和其它哺乳動物許多疾病的臨床和治療用途，然而，由於天然存在的生長激素抑制素在體內的半表期短，迅速被肽酶降解，因此其應用受限制。由於該原因，在現有技術中已開發生長激素抑制素類似物其體內穩定性有了提高。
Freidinger在美國專利4,235,886中公開了用於治療人類很多種疾病的環六肽生長激素抑制素類似物。
Coy和Murphy在美國專利4,485,101中公開了合成的十二肽生長激素抑制素類似物。
Freidinger在美國專利4,611,054中公開了用於治療人類很多種疾病的環六肽生長激素抑制素類似物。
Nutt在美國專利4,612,366中公開了用於治療人類很多種疾病的環六肽生長激素抑制素類似物。
Coy等在美國專利4,853,371中公開了合成的八肽生長激素抑制素類似物。
Coy和Murphy在美國專利4,871,717中公開了合成的七肽生長激素抑制素類似物。
Coy等在美國專利4,904,642中公開了合成的八肽生長激素抑制素類似物。
Taylor等在美國專利5,073,541中公開了治療小細胞肺癌的方法。
Brady在歐洲專利申請83111747.8中公開了用於治療很多種人類疾病的二環肽生長激素抑制素類似物。
Bauer等在歐洲專利申請85810617.2中公開了用於治療很多種人類疾病的生長激素抑制素衍生物。
Eck和Moreau在歐洲專利申請90302760.5中公開了治療用八肽生長激素抑制素類似物。
Coy和Murphy在國際專利申請PCT/US 90/07074中公開了治療用的生長激素抑制素類似物。
Schally等在歐洲專利申請EPA 911048445.2中公開了治療用的環肽。
Bodgen和Moreau在國際專利申請PCT/US 92/01027中公開了用於治療增生性皮膚病的組合物的方法。
生長激素抑制素通過與在細胞表面表達的特異性受體結合來發揮作用，所述細胞包括中樞神經系統、下丘腦、胰腺和胃腸道的細胞。已發現，在由這些組織產生的大多數具有內分泌活性的腫瘤細胞的表面，這些具有高度親和性的生長激素抑制素結合部位被充分表達。
在臨床上，能夠使用非侵害性方法來確定病人患病部位的病理症狀，對於醫生來說是非常有利的。這些病理學症狀包括肺、心、肝、腎、骨和腦的疾病，也包括癌症，血栓形成，肺栓塞，感染，炎症和動脈粥樣硬化。
在該醫學領域中，通過檢測小量口服給藥的放射性標記示蹤化合物(稱放射性示蹤物或放射性藥物)的分布，來對某些病理學症狀及其範圍進行定位或評估。檢測這些放射性藥物的方法作為成像或放射性成像方法通常是已知的。
在放射性成像中，放射性標記物是發射γ線的放射性核素，並且利γ線檢測相機確定放射性示蹤物的位置(該方法常稱作γ閃爍照相法)。由於所選擇的放射性示蹤物或者定位在病理部位(稱作正造影劑)或者不是特異性地定位在該病理部位(稱作負造影劑)，因此可檢測到成像的部位。在很多情況下，使用一种放射性標記的特異結合化合物作為放射性藥物，特異性地定位到體內病理部位是特別有利的。
例如，對於某些腫瘤細胞來說，生長激素抑制素高度親和性結合部位的表達是明顯的，並且可以利用與生長激素抑制素的特異性結合來定位和定性體內的該種腫瘤細胞。
對於那些已被修飾而含有酪氨酸(Tyr或Y)的生長激素抑制素類似物進行放射性標記的方法，在現有技術中是已知的。
Albert等在UK專利申請8927255.3中公開了利用生長激素抑制素衍生物，如由123I經標記的奧曲肽來進行放射性成像。
Bakker等在1990，J.Nucl.Med.311501-1509中描述了放射性碘處理生長激素抑制素類似物及其在檢測體內腫瘤中的應用。
Bakker等在1991，J.Nucl.Med.321184-1189中講述了放射性標記生長激素抑制素在體內放射性成像中的應用。
Bomarji等在1992，J.Nucl.Med.331121-1124中描述了利用碘處理的(Tyr-3)奧曲肽來成像轉移性類癌瘤。
或者，在現有技術中也公開了通過共價結合方法修飾肽使其含放射性核素螯合基團來對生長激素抑制素進行放射性標記的方法。
Albert等在UK專利申請8927255.3中公開了利用生長激素抑制素衍生物，如由111In通過結合到端氨基的螯合基團標記的奧曲肽來進行放射性成像。
Albert等在國際專利申請Wo 91/01144中公開了利用放射性標記的肽來進行放射性成像，這些肽與生長因子、激素、幹擾素和細胞因子(Cytokines)有關，並且包含以共價鍵連接到放射性核素螯合基上的特異性識別肽。
Albert等在歐洲專利申請92810381.1中公開了具有連接螯合劑的端氨基的生長激素抑制素肽。
Faglia等在1991，J.Clin.Enclocrinol，Metab，73850-856中描述了病人中生長激素抑制素受體的檢測方法。
Kwekkeboom等在1991，J.Nucl.Med.32981 Abstrct#305中提到用111In放射性標記生長激素抑制素類似物。
Albert等在1991，Abstract LM10，12th American Peptids，Symposium1991中描述了111In標記的二亞乙基-三氨基五乙酸衍生物的生長激素抑制素類似物的應用。
Krenning等在1992，J.Nucl.Med.33652-658中描述了用[111In][DTPA]奧曲肽在臨床上進行閃爍照相。
已知各种放射性核素都可用於放射性成像，包括67Ga、99mTc(Tc-99m)、111In、123I、125I、169Yb或186Re。為了獲得人體中最佳放射性成像，必須考慮很多因素。為了最大限度地增加檢測功效，優選使用能發射γ射線能量為100-200KeV的放射性核素。為了最大限度地減小病人所吸收的射線量，放射性核素的物理半衰期應該儘可能地短，只要滿足成像過程的需要即可。為了能夠在任意天並且在該天的任意時間進行檢查，最好具有一個在臨床上可隨時獲得的放射性核素源。Tc-99m是優選的放射性核素，因為發射140KeV的γ線，其物理半衰期為6小時，並且可利用鉬-99/鎝-99m發生器很容易就地獲得。在現有技術中所使用的其它放射性核素都比Tc-99m差。這可能是因為這些放射性核素的物理半衰期長，結果病人吸收大量射線(例如銦-111)。而且很多效果較差的放射性核素也不能利用就地發生器生產。
Tc-99m是一種過渡金屬，它可通過金屬絡合部分很好進行螯合。能夠結合Tc-99m的放射性標記的絡合部分，它們能共價連接到各種特異性結合的化合物上，從而提供了對這些特異性結合化合物進行放射標記的方法。這是因為，通常大多數容易獲得的Tc-99m的化學物種如高鎝酸鹽(TcO4-)不能直接結合到大多數特異性結合化合物上，其結合強度足以用作放射性藥物。Tc-99m與這些放射性標記的絡合部分進行絡合一般需要用還原劑如氯化亞錫將高鎝酸鹽還原。
在現有技術中已知用螯合劑來絡合Tc-99m。
Byrne等在美國專利4,434,151中描述了含Tc-99m螯合劑的高半胱氨酸。
Fritsberg在美國專利4,444,690中描述了一系列基於N，N』-二(巰基乙醯基)-2，3-二氨基丙酸酯的鎝螯合劑。
Byrne等在美國專利4,571,430中描述了含Tc-99m螯合劑的高半胱氨酸。
Btyrne等在美國專利4,575,556中描述了含Tc-99m螯合劑的高半胱氨酸。
Nosco等在美國專利4,925,650中描述了Tc-99m螯合的絡合物。
Konclo等在歐洲專利申請公開號483700 A1中描述了製備Tc-99m與巰基-Gly-Gly-Gly部分絡合物的方法。
歐洲專利申請號84109831.2中描述了用作腎功能監測劑的二氨基，二巰基Tc-99m配位體及其鹽。
Davison等在1981，Inory.Chem 201629-1632中公開了氧鎝螯合的絡合物。
Fritzberg等在1982，J.Nucl.Med.23592-598中公開了基於N，N′-二(巰乙醯基)-2，3-二氨基丙酸酯的Tc-99m螯合劑。
Byrne等在1983，J.Nucl.Med.24P126中描述了含Tc-99m螯合劑的高半胱氨酸。
Byrne等在1988，Inorg.Chem.272154-2161中描述了對過量配位體不穩定的鎝-99中性絡合物。
Misra等在1989.Tet.Lett.301885-1888中描述了用於放射性標記的二胺二巰基化合物。
在本領域中已知利用螯合劑來放射性標記特異性結合的化合物。
Gansow等在美國專利4,472,509中講述了生產和純化Tc-99m螯合物軛合的單克隆抗體的方法。
Stavrianopoulos在美國專利4,943,523中講述了含金屬螯合部分的可檢測分子。
Fritberg等在歐洲專利申請86100360.6中描述了二巰基、二氨基或二氨基羧酸或胺絡合物，用於製備鎝標記的造影劑。
Albert等在UK專利申請8927255.3中公開了利用生長激素抑制素衍生物如用111In通過結合到端氨基的螯合基標記的奧曲肽進行放射性成像。
Albert等在國際專利申請Wo 91/01144中描述了利用放射性標記的肽來進行放射性成像，這些肽與生長因子、激素、幹擾素和細胞因子有關，並且包含以共價鍵結合到放射性核素螯合基上的特異性識別肽。
Fischman等在國際專利申請公開號Wo 93/13317中公開了結合到螯合基部分上的趨化(chemotactic)肽。
Kwekkeboom等在1991，J.Nucl.Med.32981 Abstract#305提到用111In放射性標記生長激素抑制素類似物。
Albert等在1991，Abstract LM10，12th American Peptide Symposium1991中描述了關於111In標記的二亞乙基-三氨基五乙酸衍生的生長激素抑制素類似物的應用。
Cox等在1991，Abstract.7th International Symposium onRadiopharmacology，P.16中公開了在通過閃爍照相對體內內分泌腫瘤進行放射定位時，Tc-99m-，131I-和111In標記的生長激素抑制素的應用。
在現有技術中，已知用Tc-99m標記某種特異性結合的化合物的方法。
Hnatowich在美國專利4,668,503中描述了Tc-99m蛋白質放射性標記。
Tolman在美國專利4,732,684中描述了靶分子與金屬硫蛋白(metallothionein片段的軛合。
Nicoloni等在美國專利4,861,869中描述了用於與生物分子如抗體形成軛合物的雙官能偶聯劑。
Frizberg等在美國專利4,965,392中描述了用於標記蛋白質的各種以S-保護的巰基乙醯基甘氨醯甘氨酸為基礎的螯合劑。
Schochat等在美國專利5,061,641中描述了直接標記至少含一個「側」巰基的蛋白質。
Fritzberg等在美國專利5,091,514中描述了用於標記蛋白質的以各種與保護的巰基乙醯基甘氨醯基甘氨酸為基礎的螯合劑。
Gustavson等在美國專利5,112,953中公開了用於放射性標記的Tc-99m螯合劑。
Kasina等在美國專利5,175,257中描述了各種靶分子與Tc-99m螯合基的混合物。
Dean等在美國專利5,180,816中公開了用Tc-99m通過雙官能螯合劑放射性標記蛋白質的方法。
Sundrehagen，在國際專利申請公開號Wo 851/03231中公開了Tc-99m標記的蛋白質。
Reno和Bottino在歐洲專利申請87300426.1中公開了用Tc-99m放射性標記抗體。
Bremer等在歐洲專利申請87118142.6中公開了Tc-99m放射性標記抗體分子。
Pak等在歐洲專利申請Wo 88/07382中公開了用Tc-99m標記抗體的方法。
Goedemans等在PCT申請WO 89/07456中公開了用環狀巰基化合物，尤其是2-iminothiolane及其衍生物放射性標記蛋白質。
Dean等在國際專利申請公開號WO 89/12625中講述了用於Tc-99m標記蛋白質的雙官能偶聯劑。
Schoemaker等在國際專利申請公開號Wo 90/06323中公開了含金屬結合區的嵌合蛋白質。
Thomback等在EPC申請號90402206.8中公開了利用含硫基的化合物，尤其是用2-iminothiolane及衍生物來製備和使用放射性標記的蛋白質或肽。
Gustavson等在國際專利申請公開號Wo 91/09876中公開了用於放射性標記蛋白質的Tc-99m螯合劑。
Rhodes，在1974，Sem.Nucl.Med.4281-293中講述了用鎝-99m標記人血清白蛋白。
Khaw等在1982，J.Nucl.Med.231011-1019中公開了用Tc-99m標記具有生物活性的大分子的方法。
Schwartz等在1991，Bioconjugate Chem.2333中描述了通過使用肼基煙醯胺基，用Tc-99m標記蛋白質的方法。
在現有技術中已報導了在放射性標記肽方面的嘗試。
Ege等在美國專利號4,832,940中講述了在成像定位的T淋巴細胞中所使用的放射性標記的肽。
Morgan等在美國專利號4,986,979中公開了用於炎症部位成像的方法。
Flanagan等在美國專利號5,248,764中描述了放射性標記螯合部分和心鈉素衍生的肽之間的軛合物。
Ranby等在1988，PCT/US 88/02276中公開了用於檢測動物體中血纖蛋白沉積物的方法，它包括通過共價鍵將放射性標記的化合物結合到血纖蛋白上。
Lees等在1989，PCT/US 89/01854中講述了用於動脈顯像的放射性標記的肽。
Morgan等在國際專利申請公開號Wo 90/10463中公開了用於炎症部位顯像的方法。
Flanagan等在歐洲專利申請號90306428.5中公開了Tc-99m通過一組有機螯合劑分子對合成的肽片段進行放射性標記。
Stecttle在PCT申請公開號WO90/15818中描述了Tc-99m標記含RGD的低聚肽。
Rodwell等在1991，PCT/US 91/03116中公開了「分子識別單位」與「效應區」的軛合物。
Cox在國際專利申請號PCT/US 92/04559中公開了放射性標記的含兩個半胱氨酸基的生長激素抑制素衍生物。
Rhocles等在國際專利申請公開號Wo 93/12819中講述了含金屬離子結合區的肽。
Lyle等在國際專利申請公開號Wo 93/15770中公開了Tc-99m螯合劑和用Tc-99m標記的肽。
Coughlin等在國際專利申請公開號Wo 93/21151中公開了用於放射性標記靶分子的含硫脲基的雙官能螯合劑。
Knight等在1990，37th Annual Meeting of the Society of Nuclear Medicine，Abstraet#209中闡明了用Tc-99m標記的肽進行血栓顯像。
Babich等在1993，J.Nucl.Med.341964-1974中公開了Tc-99m標記的含肼基煙醯胺基的衍生物的肽。
在1993年7月6日頒分的美國專利號5,225,180中公開了直接標記生長激素抑制素，生長激素衍生物，生長激素的類似物或肽的方法，所述肽與生長激素受體結合併且至少含2個形成二硫化物或者其中的二硫化物被還原為巰基形式的半胱氨酸，該專利在參考文獻中引用。
螯合劑在對肽進行放射性標記中的應用和用Tc-99m標記肽的方法是現有技術中已知的並且公開於美國專利申請序號07/653,012，07/807,062，07/871,282，07/893,981，07/955,466，08/092,355和08/095,760中。
目前仍需要合成(設計適宜的生產程序並順利通過管理驗收)體內穩定性增加的生長激素抑制素的類似物。它們在治療上，當用Tc-99m或其它可檢測的放射性同位素進行放射性標記後用於體內腫瘤的成像時，可作為閃爍成像劑；並且當用具有細胞毒性的放射同位素，如錸-188進行射性標記時，可作為放射性治療劑。本發明提供少量合成的生長激素抑制素的類似物是專用來滿足該需要的。
發明概要本發明提供生長激素抑制素類似物，它包括治療和診斷用的環肽。治療上的應用包括放射性治療用；診斷上應用包括放射性診斷用。該類似物尤其是指閃爍成像用的環肽。與天然生長激素抑制素不同，本發明環肽不包含二硫鍵。本發明也提供包含環肽生長激素抑制素類似物的環肽試劑，其中該肽包含共價連接的金屬離子的結合部分。本發明提供這些環肽、環肽試劑和放射性標記的環肽試劑，它們都是閃爍照像成像劑、放射性診斷劑和放射性治療劑。本發明閃爍照相成像劑包括用放射性同位素(尤其是鎝-99m)進行放射性標記的環肽試劑。本發明的放射性治療劑包括用細胞毒性放射性同位素(尤其是錸-186或錸-188)進行放射性標記的環肽試劑。也提供製備和使用這些環肽、環肽試劑及其放射性標記的實例的方法。
本發明提供物質的組合物，它包含特異性結合肽，該肽特異性地結合到哺乳物體內的生長激素抑制素受體上，並共價連接到金屬離子絡合部分。本發明物質的組合物具有下式環(N-CH3)-Phe-Tvr-(D-Trp)-Lys-Val-Hcy.(CH2COX)其中X為(胺基酸)n-B-(胺基酸)m-Z。其中B為含硫基的部分，該部分是半胱氨酸、高半胱氨酸、異半胱氨酸、或青黴胺；(胺基酸)n和(胺基酸)m各自為初級α-或β-胺基酸，它不包含巰基；Z為-OH或-NH2；n和m各自分別為2-5和0-5的整數。
在描述本發明物質組合物的通式中，應該知道，術語「環」和下面劃線的胺基酸序列連接起來是指下面劃線的序列通過肽鍵將該序列中的第一個胺基酸的端氨基與該序列中最後一個胺基酸的端羧基連接起來而使該序列環化。如果接著是小括號內的一項如「(CH2COX)」，則這一項應當將其理解為是指通過共價鍵將小括號內的這個序列連接到下面劃線的胺基酸序列中含硫羥的胺基酸側鏈的硫原子上與其形成硫鍵。因此，在上述化學結構中，應該知道，-CH2COX基是共價連接到高半胱氨酸的側鏈硫原子上的。實施例2中顯示該化學結構的實例。
本發明物質組合物的優選實例具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy(CH2CO.GGCK.醯胺)本發明物質的組合物具有許多診斷和治療用途。
因此，本發明一方面提供用於製備放射性標記的閃爍照相成像劑的試劑，其中所述成像劑用於富含抑生長素受體的哺乳動物體各部位的成像。在該實施方案中，金屬離子絡合部分包含放射性標記的結合部分，並且該試劑通過與所述部分形成絡合物來形成放射性標記的絡合物。在本發明該方面的一個實施方案中，將該試劑在還原條件下與Tc-99m絡合，形成閃爍照相成像劑。
因此，本發明也包括閃爍照相成像劑，它們是本發明試劑與Tc-99m的絡合物，還包括放射性標記該試劑的方法。本發明提供的Tc-99m放射標記的絡合物是在還原劑存在下將本發明試劑與Tc-99m反應而形成的。優選的還原劑包括(但不限制於)連二亞硫酸離子、亞錫離子和亞鐵離子。也可以通過將預先還原的本發明Tc-99m絡合物進行配位體交換，用Tc-99m標記本發明試劑來形成本發明絡合物。
本發明用於製備閃爍照相成像劑的試劑其優選實例是具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的成像劑包括這種試劑的Tc-99m絡合物。
本發明也提供製備閃爍照相成像劑用的試劑盒，其中所述成像劑是用Tc-99m放射性標記的本發明試劑。用Tc-99m標記本發明試劑的試劑盒包含一個密封的管形瓶，其中包含預先測定量的本發明一種試劑和其量足以用Tc-99m標記該試劑的還原劑。
本發明的第二方面是提供成像劑，其中用碘的放射性同樣素，優選I-123、I-125、或I-131來放射性標記本發明物質的組合物。本發明提供放射性碘處理的成像劑，它們是具有放射性標記碘的本發明試劑的絡合物。
製備放射性碘處理的成像劑用的試劑其優選實例是具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的成像劑包括經放射性碘處理的這種具體試劑。
本發明第三方面是提供非放射性標記的成像劑，它包括這樣的試劑，該試劑是與順磁金屬離子或顆粒絡合的本發明物質組合物。在本發明該方面的實例中，順磁金屬離子是用絡合金屬離子的部分來絡合的。在使用顆粒，特別是使用超順磁金屬顆粒的實例中，通過共價鍵或使用Weissleder等所述的方法(1992.Radiology.182381-385)，將本發明物質的組合物連接到超順磁顆粒上。本發明提供了用於磁共振成像的該成像劑。也提供了製備這些非放射性標記的成像劑的方法。
本發明用於製備非放射性標記的成像劑的試劑優選實例是具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的非放射性標記的成像劑包括該試劑的高鐵離子絡合物。
本發明也提供治療劑。本發明的第四方面是提供未與金屬離子絡合的本發明物質的組合物本身作為治療劑。本發明提供的該治療劑的優選實例是具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)在第五方面，本發明提供放射性標記的治療劑，它包括製備該治療劑的試劑，其中所述治療劑是本發明提供的物質的組合物。在這些實施方案中，提供本發明物質的組合物，其中，金屬離子絡合部分與發射β-粒子或發射轉化電子的放射性同位素絡合。發射β-粒子的放射性同位素的優選實例為錸-186和錸-188。優選發射轉化電子的放射性同位素為錫-117m。本發明提供本發明物質組合物的這些放射性同位素絡合物，用於放射性治療生長激素抑制素受體表達的病理細胞和組織，特別是腫瘤和轉移瘤細胞。也提供製備這些治療用本發明物質組合物的放射性同位素絡合物的方法。
本發明提供的製備這些放射性治療劑的優選試劑的實例為具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的放射性治療劑包括發射β-粒子或轉化電子的金屬離子與該試劑的絡合物。
另一方面，所提供的本發明放射性治療劑是這樣的一些放射性治療劑，其中用碘的放射性同位素(優選I-125或I-131，或用砹-211)放射性標記本發明物質的組合物。本發明也提供其放射性治療劑本身以及放射性標記該試劑的方法。
本發明提供的製備這些放射性碘處理或放射性砹處理的治療劑用的試劑，其優選實例是具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的放射性治療劑包括該試劑的放射性碘處理或放射性砹處理的一些具體治療劑。
所提供的治療劑是非放射性標記的金屬原子絡合劑，它包含的試劑是與非放射性金屬原子如銅、鋅或錸絡合的本發明物質的組合物。在本發明該方面的實例中，非放射金屬離子與金屬離子絡合部分絡合。本發明提供的這些治療劑所治療的疾病是其相關組織的細胞中過渡表達了生長激素抑制素受體。該治療劑是治療過渡表達生長激素抑制素受體的腫瘤細胞。也提供製備這些與非放射性標記的金屬原子絡合的治療劑的方法。
本發明提供的製備非放射性標記的治療劑的優選試劑實例為具有下式的化合物環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK醯胺)優選的非放射性標記治療劑包括該試劑的錸絡合物。
本發明提供通過體外化學合成製備含肽的本發明具體試劑的方法。在優選實例中，通過固相肽合成法合成肽。
本發明提供了本發明的診斷劑和放射性診斷劑、以及治療劑和放射性治療劑的使用方法。就放射性標記的本發明這些具體試劑，例如Tc-99m標記的閃爍照相成像劑而言，按診斷或治療有效量的本發明診斷或放射性診斷劑，或者治療或放射性治療劑來給藥。在放射性診斷實施方案中，用常規方法，如γ閃爍照法來檢測放射性標記的定位。在非放射性診斷的實施方案中，用磁共振成像技術來定位本發明順磁金屬標記的診斷劑的積累部位。本發明提供的成像劑用於腫瘤成像，尤其是用於初期或轉移期腫瘤部位的成像，其中所述的腫瘤細胞表達生長激素抑制素受體(SSTR)，尤其是那些在臨床上用常規方法難以檢測的初期或轉移期腫瘤細胞。另外，本發明成像劑還用於檢測那些與疑難病或病理有關的T細胞蓄積的部位，例如患有肺結核的病人可產生T細胞蓄積。
本發明提供使用本發明生長激素抑制素類似物來減輕動物，尤其是人的某些疾病的方法。這些疾病包括但不限制於糖尿病或與糖尿病有關的視網膜病、肝硬化和傳染性肝炎、出血性潰瘍和其它胃腸道出血、胰腺炎、中樞神經系統疾病、內分泌疾病、阿耳茨海默氏病、肢端肥大症和其它疾病以及與體內產生不適宜量的生長激素有關的疾病，和癌症，特別是那些生長依賴於或受產生的生長激素影響的癌症。非放射性標記的具體治療劑也用於治療與過渡表達SSTR相關的疾病，如由過渡表達SSTR的促胃液素瘤引起的腹瀉。本發明所提供的生長激素抑制素的劑量可以與通常在治療上述疾病或其它疾病時所使用的天然生長激素抑制素的劑量相同，或者，由於本發明化合物在體內半衰期長，也可以用較小劑量。
治療應用也包括放射性治療腫瘤和轉移性惡性腫瘤細胞摘除的腫瘤患者，其中所述腫瘤的細胞表達生長激素抑制素受體。本發明放射性治療劑的應用包括主要治療那些用常規治療方法難以治療的腫瘤和不宜手術的腫瘤，以及作為外科手術，放射性治療或常規化療的輔助性治療。
本發明放射性標記的具體應用還有在外科手術期間，用作外科導子來確定表達生長激素抑制素受體的腫瘤組織。對於放射性同位素引導外科手術的這種應用，可以在常規外科手術期間識別並切除那些外科醫生本來看不見的惡性腫瘤組織。
從下列對某些優選實例的更詳細說明和權利要求中，可以更清楚地理解本發明特定的優選實施方案。
附圖的簡要說明

圖1顯示患有腫瘤的鼠中，由99mTc標記的P587的圖像，由箭頭指示，表明在該後腿腫瘤部位攝入量較高。
詳細說明優選實施方案本發明提供環狀肽，它們是生長激素類似物並且不包含二硫鍵。因此，與天然生長激素抑制素相比，這種生長激素類似物的體內穩定性增加。這些環狀肽本身是使動物(包括人)的疾病緩解的治療劑。
本發明也提供放射性碘處理或放射性砹處理並因此可用於放射性治療和放射性診斷的環狀肽。
本發明提供的這些環狀的另一實施方案是環狀肽試劑，其中本發明環狀肽通過共價鍵連接到金屬離子絡合部分。可以將這些環狀肽試劑進行放射性標記來做成放射性診斷或放射性治療劑。利用本發明放射性標記的試劑進行放射性診斷的一個實例是用來進行閃爍照相成像，其中可測定攜帶生長激素抑制素受體的腫瘤部位和範圍。也可以用具有細胞毒性的放射性同位素如放射性治療用的錸-186或錸-188對本發明環狀肽試劑進行有效的放射性標記。本發明環狀肽試劑也用於製備其與非放射性金屬的絡合物，所述絡合物在治療學上是有用的。
用Tc-99m標記是本發明的一個優點，因為該同位素的原子核和放射活性使得它成為理想的閃爍照相成像劑。該同位素的單個光子能量為140KeV，放射性半衰期大約為6小時，並且容易從99Mo-99mTc發生器中獲得。本發明公開了其它放射性核素也可用於實施本發明。
本文中所使用的術語閃爍照相成像劑是指可以用放射性檢測方法(包括但不限制於γ-照相，Geiger-Muller計數器和閃爍檢測器探查)檢測的放射性標記試劑。
另一方面，可以用具有細胞毒性的放射性同位素，包括但不限制於銅-67，碘-125，碘-131，錸-186，錸-188和砹-211，最優選186Re或188Re，有效地放射性標記本發明具體的放射性治療劑。這些具體治療劑用於治療與生長激素抑制素有關的動物(優選人)的疾病，所述疾病包括但不限制於癌症和其它以惡性或良性腫瘤的生長為特徵的疾病，其中所述腫瘤能通過對在這些腫瘤細胞的細胞表面上生長激素抑制素受體的表達，結合生長激素抑制素或生長激素抑制素類似物。
本發明提供用於製備診斷和放射性診斷劑、治療和放射性治療劑的試劑。本發明提供的該試劑包含通過共價鍵連接到特異性結合肽上的金屬離子絡合部分，其中所述特異性結合肽結合到哺乳動物體內的生長激素抑制素受體部位。
小的化合物，優選分子量少於10,000道爾頓的化合物具有獨特的商業優勢。該種小化合物可以很容易生產。而且，它們很可能不具有致免疫性並且可迅速從血管系統中清除，因此可更好和更快地成像。相反，大分子，如抗體或其片段，或者通過生物學方法衍生的大於10,000道爾頓的肽，生產費用高，並且很可能是致免疫性的和從血流中清除慢，因此幹擾體內快速診斷。
在對共價鍵連接的放射性標記物結合部分進行放射性標記的條件下，本發明提供的生長激素抑制素類似物中所包含的非二硫環鍵是穩定的，這是本發明提供的生長激素抑制素類似物的一個優點。相反，例如Tc-99m與通過共價鍵連接到天然生長激素抑制素上或具有二硫鍵的生長激素類似物上的Tc-99m結合部分的軛合可引起二硫鍵的還原，同時伴發生物活性的喪失。當使用天然生長激素抑制素，或任何具有二硫鍵的生長激素抑制素類似物時，也可在體內產生這種生物活性的喪失。本發明不存在類似的體內生物活性喪失，因為在本發明每種生長激素抑制素類似物中的非二硫環鍵都包含穩定的共價鍵。
就本發明目的而言，術語「特異性結合肽」是指特異性地結合到由大量生長激素抑制素受體(SSTR)分子所限定的哺乳動物體靶部位的任何肽化合物。本領域技術人員將知道，「特異性結合」是指將肽定位在靶部位到周圍組織的較大範圍內。在包含該特異性結合肽的診斷用成像劑中，這種特異結合是有利的，因為該診斷用成像劑在給藥後分布到哺乳動物全身並且這種結合放射性的試劑的特異性定位使視覺限定在體內靶的部位。
本發明每種特異性結合肽的實例均含一個胺基酸序列。本發明中所述的胺基酸包括所有L-和D-、初級α-和β-胺基酸，可以是天然存在的、修飾的、取代的、改變的等等。本發明試劑的特異性結合肽的實例包括分子量小於大約5,000道爾頓的特異性結合肽。特別優選的本發明特異性結合肽的實例包括這樣一些肽，它們特異性地並且具有高度親和性地結合到在SSTR表達細胞，特別是腫瘤細胞和激活性的T-淋巴細胞上的生長激素抑制素受體(SSTR)。本發明提供的包含特異結合肽的試劑包括但不限制於包含具有下列胺基酸序列的肽的試劑(除另外說明，下列肽中的胺基酸是L-胺基酸)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGC.醯胺)
環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCR.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCRD.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCRK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCRR醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCKK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCKKK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGC.Om.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGCKDK胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGC.Orn.D.Orn醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GGC.Orn.D.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.KKC.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.KRC.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.RRC.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv(CH2CO.KKCK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GRCK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcv.(CH2CO.GKCR.醯胺)(在Zubay，ibid.，P.33中可見胺基酸的單字母縮寫；其它縮寫見Legend表I)，該表中所列的試劑是說明本發明並不是限定本發明，並且本領域技術人員將知道，包含本發明所公開的肽或其它等同物的試劑可通過共價鍵連接到本發明的任何螯合劑部分並且在本發明範圍內。
在優選實例中，本發明試劑具有式
包含本發明試劑的特異性結合肽可以在體外通過化學方法合成。通常，可以在肽合成器(Synthesizer)上有效地製備這些肽。利用本文所描述的技術(例如，見實施例2，小組O)，在體外化學合成過程中，通過共價鍵將金屬離子絡合部分連接到肽上，由此可合成本發明肽。
在本發明閃爍照相成像劑實例中，形成鎝-99m與本發明試劑的絡合物。為了實現這一點，在還原劑存在下，將Tc-99m，優選Tc-99m的高鎝酸鹽與本發明試劑反應。優選的還原劑為連二亞硫酸鹽、亞錫和亞鐵離子；最優選的還原劑為亞錫鹽如氯化亞錫。在另一優選實例中，還原劑是固態還原劑。為了方便，絡合物和製備該絡合物用的試劑是在一個試劑盒中，所述試劑盒中包含一個密封的小瓶，該小瓶中含預先測定量的待標記的本發明試劑和用Tc-99m標記試劑時足夠量的還原劑。或者，可以通過將本發明試劑與預先形成的不穩定的鎝絡合物和已知作為轉移配位體的另一化合物(例如酒石酸鹽、構櫞酸鹽、糖酸鹽或甘露糖醇)反應來製備該絡合物。已知該過程為配位體交換並且是本領域技術人員已知的。本發明使用的Tc-99m高鎝酸鹽包括鹼金屬鹽如鈉鹽、或銨鹽或低級烷基銨鹽。
通過將適宜量的Tc-99m或Tc-99m絡合物加到小瓶中並在下文實施例3中所描述的條件下反應，可以製備鎝-99m標記的本發明閃爍照相成像劑。通常，試劑盒中也可以包含藥用佐劑物質，如調節滲透壓的可藥用鹽、緩衝劑、防腐劑等。試劑盒中的組分可以是液體、冷凍或乾燥形式。在優選實例中，所提供的試劑盒的組分是凍幹形式的。可通過在下文實施例3所描述的條件下反應來製備放射性標記的本發明閃爍照相成像劑。
本發明提供的放射性標記試劑具有適宜量的放射活性。例如，在形成Tc-99m放射性絡合物時，通常優選在含放射性濃度大約為每毫升0.01毫居裡(mCi)到100mCi的溶液中製備放射性絡合物。
本發明所提供的成像劑可用於顯影器官如腎臟來診斷這些器官的疾病、和腫瘤，尤其是胃腸道腫瘤、骨髓瘤、小細胞肺癌和其它APUD癌、內分泌腫瘤如髓質甲狀腺癌和垂體刖瘤、腦腫瘤如腦脊膜瘤和星形細胞瘤，也可以成像前列腺、乳腺、結腸和卵巢的腫瘤。按照本發明，Tc-99m標記的肽試劑以單一的單位注射劑量給藥。可以在任何常規靜脈注射介質如鹽水介質，或在血漿介質中，通過靜脈給予本發明所提供的Tc-99m標記的肽試劑。通常，給藥的單位劑量具有的放射性為約0.01mCi-約100mCi，優選1mCi-20mCi，其以單位劑量注射的溶液為約0.01mL-約10mL。靜脈給藥後，在幾分鐘後進行體內顯影。然而，如果需要，可在將放射性標記的肽注入人體後幾小時，甚至更長的時間後顯影。在大多數情況下，足夠量的給藥劑量在大約0.1小時內，在待顯影的區域蓄積，使得可以拍攝閃爍照片。按照本發明，可以使用任何常規診斷用閃爍照相成像的方法。
在臨床上，可以使用與生長激素抑制素受體結合的環狀肽和本發明環狀肽試劑的非放射性金屬絡合物，作為治療劑來促進某種類型腫瘤的消除，特別是那些表達生長激素抑制素受體的腫瘤的消除。本發明生長激素類似物環狀肽也可用於減少激素的過渡分泌，這種激素的過度分泌常常伴發某些癌症，如APUD癌。本發明用作治療劑的肽可以通過任何適宜的途徑，包括靜脈、肌肉或口服，並且在任何適宜的藥用載體中，以大約0.01-49mg/kg體重/天的劑量範圍來給藥。
本發明也提供用具有細胞毒性的放射性同位素如錸-186或錸-188來進行放射性標記的肽，該肽可用於放射性治療上述某些腫瘤。就該目的而言，可通過任何臨床給藥途徑，優選通過靜脈注射來給予大約10mCi-200mCi量的放射性同位素。
在下列實施例中更詳細地說明製備和標記這些化合物的方法。這些實施例說明上述方法和有效結果的某些方面，並且對本發明只是說明而並非限制。
實施例1固相肽的合成固相肽的合成是在0.25毫摩爾(mmol)標度下，使用Appleid BiosystemsModel 431A型的肽合成器，使用9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)端氨基保護，與二環己基-碳化二亞胺/羥基苯並三唑或2-(1H-苯並-三唑-1基)-1，13，3-四甲基尿鎓六氟磷酸鹽/羥基苯並三唑(HBTU/HOBT)偶聯，並且對於羧基端為酸的，使用對-羥甲基-苯氧基甲基聚苯乙烯(HMP)或SasrinTM樹脂，或者對於羧基端為醯胺的，使用Rink醯胺樹脂。由此進行固相肽合成(SPPS)。
通過用三苯甲醇在三氟乙酸中進行三苯甲基化作用，然後按照Atherton等的方法(1989，固相肽合成，IRL PressOxoford)和進一步在下文實施例2小組J中所描述的方法進行Fmoc衍化作用，由適宜的胺基酸製備Fmoc.Hcy(S-三苯甲遊基)和Fmoc.Pen(S-三苯甲遊基)。Fmoc-S-(3-Boc-氨基丙基)半胱氨酸是從甲醇鈉中的L-半胱氨酸和Boc-氨基丙基溴化物製備。然後，在pH10下，用O-9-芴基甲基O′-N-琥珀醯亞胺基碳酸酯(FmocO Su)處理。
通過用適宜的2-滷代乙酸作為在SPPS過程中被偶聯的最後基團，或通過用在NMP中的2-滷代乙酸/二異丙基碳化二醯亞胺/N-羥基琥珀醯亞胺或在NMP中的2-滷代乙酸酐/二異丙基乙胺來處理結合到樹脂上的N-端游離氨基的肽，由此引入L-滷代乙醯基。
在室溫，pH10下，將含巰基的肽與含氯乙醯基的巰基保護的Tc-99m絡合部分反應0.5-24小時，然後視情況可用乙酸酸化並蒸發溶液，得到相應的肽-硫化物加合物，如下文實施例2小組O中更詳細的描述。按照常規方法脫保護並純化，得到螯合劑-肽共軛物。
用在二氯甲烷中的1％TFA溶液，將與SasrinTM樹脂結合的肽裂解，得到被保護的肽。
如果需要，通過用二苯基磷醯基疊氮化物讓側鏈受保護的氨基端游離的胺與羧基端游離的酸反應，在氨基和羧基端之間，將被保護的肽的前體環化，如下文實施例2小組M中更詳細的描述。
按照常規方法，將與HMP或Rink醯胺樹脂結合的產物裂解並在室溫下用含二氟乙酸(TFA)，或TFA和二氯甲烷以及視情況可含比例為100∶5∶5∶2.5∶2的水、苯硫基甲烷、乙烷二硫醇、和三異丙基矽烷的溶液，將被保護的環狀肽脫保護0.5-3小時。如果需要，將產物在三酚甲醇/TFA中重新S-三苯甲基化，並且用(Boc)2O將N-Boc基重新引入肽中。
通過製備性高效液相色譜法(HPLC)，使用Waters Delta-Pak C18柱並且經乙腈改性的0.1％TFA水溶液梯度洗脫來純化粗品肽。柱子洗脫後，將乙腈從洗脫的餾分中蒸發掉，然後冷凍乾燥。通過快速原子轟擊質譜(FABMS)或電子噴射質譜(ESMS)來確定如此製備並純化的每種產物的特性。
實施例2合成環(N-CH3)苯丙氨醯基-酪氨醯基-D-色氨醯基-賴氨醯基-纈氨醯基-高半胱氨酸，S-2-乙醯基-甘氨醯基-甘氨醯基-半胱氨醯基-賴氨醯胺(P587)A.合成N-α-苄酯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨酸，N-羥基-琥珀醯亞胺酯向在冰水浴中冷卻的，在180ml無水四氫呋喃(THF)中的N-α-苄酯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨酸123g，60.5mmol)和N-羥基琥珀醯亞胺(7.1g 61.7mmol)的混合物中，加入二異丙基碳化二亞胺(9.66ml，61.7mmol)。將該反應混合物攪拌過夜然後過濾並將濾液蒸發。然後將濾液的殘渣溶解在少量乙酸乙酯，200ml乙醚和200ml己烷中。標題化合物從該混合物中沉澱出來並通過過濾回收，用冷己烷洗滌並乾燥，得到28.1g(58.9mmol，97％產率)。
B.合成N-α-苄酯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨酸醯基-纈氨酸，甲酯向在150ml THF中的纈氨酸甲酯(8.38g，50mmol)和二異丙基乙胺(12.7ml，50mmol)的溶液中加入N-α-苄酯基-N-ε-叔丁氧基羰基賴氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯(23.9g，50mmol)，再加入50ml THF。2小時後，蒸發除掉溶劑並向殘渣中加入50ml乙酸乙酯。將該溶液先後用200ml 5％的枸櫞酸、200ml飽和碳酸氫鈉和200ml飽和鹽水洗滌，經無水硫酸鎂乾燥，過濾並蒸發。將得到的油溶解在少量乙酸乙酯、200ml乙醚和200ml己烷中。通過過濾分離標題化合物並乾燥，得到20g(40.5mmol，81％產率)。
C.合成N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯向在100ml乙酸乙酯的N-α-苄酯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(19g，38.5mmol)和乙酸(1ml)的溶液中，加入10％含鈀碳催化劑(0.19g)並在氫氣壓下攪拌過夜。將反應混合物在Celite上過濾，將濾液蒸發並將殘渣溶解在100ml含1ml乙酸的甲醇中。向該溶液中加入10％含鈀碳(0.19g)並在45磅/英寸2的壓力下，用Parr氫化器，將混合物氫化2小時。將反應混合物再次經Celite過濾並將濾液蒸發，得到13.56g標題化合物(37.7mmol，98％產率)。
D.合成芴基甲氧基羰基-D-色氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯向在冷水浴中冷卻的，在250ml無水THF中的N-α-芴基甲氧基羰基-D-色氨酸半水合物(25g，82.1mmol)和N-羥基正琥珀醯亞胺(9.78g，85mmol)的溶液中，加入二異丙基碳二亞胺(13.3mL，85mmol)。將反應混合物攪拌過夜，過濾並將濾液蒸發。將殘渣溶解在甲苯和己烷中。通過過濾分離標題化合物並乾燥，得到34g(66.5mmol，81％產率)。
E.合成芴基甲氧基羰基-D-色氨醯基-N-α-叔丁氧基-羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯向在200ml THF中的N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(13g，36.1mmol)的混合物中，加入芴基甲氧基羰基-D-色氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯(18.9g，36.1mmol)。加入二異丙基乙胺來調節反應混合物的pH至pH8，並將反應物攪拌2天。蒸發除掉溶劑並將殘渣溶解在乙酸乙酯中，用5％的枸櫞酸，飽和碳酸氫鹽，和飽和的鹽水洗滌，然後經硫酸鈉乾燥。將溶液過濾並蒸發，將殘渣溶解在乙酸乙酯中。將該溶液幾次結晶後回收標題化合物，得到17.3g產物(22.5mmol，62％產率)。
F.合成N-芴基甲氧基羰基-O-叔丁基酪氨酸，N-羥基-琥珀醯亞胺酯向在冷水浴中冷卻的，在250ml無水THF中的N-α-芴基甲氧基羰基-O-叔丁基酪氨酸(25g，54.3mmol)和N-羥基琥珀醯亞胺(6.62g，57.5mmol)的溶液中，加入二異丙基碳化二亞胺(9.0ml，57.5mmol)，將反應混合物攪拌過夜，過濾並將濾液蒸發。將殘渣溶解在甲苯和己烷中，通過過濾將標題化合物分離出來並乾燥，得到27.7g(49.7mmol，92％產率)。
G.合成N-芴基甲氧基羰基-O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯在室溫下，將芴基甲氧基羰基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(17g，22.1mmol)用40ml二乙胺和40ml THF處理1.5小時。將反應混合物蒸發，重新懸浮在100ml THF中並再蒸發三次。將殘渣溶解在120ml無水THF中，並加入N-芴基甲氧羰基-O-叔丁基酪氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯(12.3g，22.1mmol)，再加入20ml無水THF和4ml二異丙基乙胺，產生的溶液pH為9。攪拌過夜後，將反應物蒸發並將殘渣溶解在乙酸乙酯中。用5％的枸櫞酸，飽和碳酸氫鈉和飽和鹽水洗滌該乙酸乙酯溶液，經硫酸鎂乾燥並蒸發。將殘渣溶解在乙酸乙酯、乙醚和己烷中，標題化合物沉澱出來。通過過濾分離沉澱的化合物並乾燥，得到14.6g標題化合物(14.8mmol，67％產率)。
H.合成N-芴基甲氧基羰基-N-甲基苯丙氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯向在冷水浴中冷卻的，在180ml無水THF中的N-α-芴基甲氧基羰基-N-甲基苯丙氨酸(25g，62.3mmol)和N-羥基正琥珀醯亞胺(7.5g，65mmol)的溶液中，加入二異丙基碳二亞胺(10mL，64.2mmol)。將反應混合物攪拌過夜，過濾並將濾液蒸發。將殘渣溶解在甲苯和己烷中。通過過濾分離標題化合物並乾燥，得到28.3g(57mmol，91％產率)。
I.合成N-芴基甲氧基羰基-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯在室溫下，用35ml二乙胺和35ml THF將芴基甲氧基羰基-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(14g，14.2mmol)處理1小時。然後將反應混合物蒸發，重新懸浮在100ml THF中並再蒸發二次。將殘渣溶解在乙酸乙酯和己烷中。產物O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯沉澱，通過過濾分離並乾燥，得到9.7g(12.7mmol，90％產率)。將O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯溶解在35ml無水THF中，並加入N-芴基甲氧基羰基-N-甲基苯丙氨酸，N-羥基琥珀醯亞胺酯(6.35g，14.2mmol)，再加入3ml二異丙基乙胺，得到pH為9的溶液。攪拌過夜後，將反應物蒸發並將殘渣溶解在乙酸乙酯中，用5％的枸櫞酸、飽和碳酸氫鈉和飽和鹽水洗滌該乙酸乙酯溶液，經硫酸鎂乾燥並蒸發。將殘渣溶解在乙酯乙酯、乙醚和己烷中，標題化合物沉澱出來。通過過濾分離沉澱的化合物並乾燥，得到12.4g標題化合物(11.5mmol，81％產率)。
J.合成N-芴基甲氧羰基-S-三苯甲基高半胱氨酸a.向在乾冰/乙醇浴中冷卻至-78℃下的大約400ml液氨中，加入少量元素鈉，再加入足夠量的高半胱氨酸驟熄得到的藍色鈉/氨溶液直到消耗5.7g(248mmol)鈉和9.75g(36.3mmol)高半胱氨酸並將此藍色的鈉/氨溶液持續大約15分鐘。加入氯化銨驟熄最終的藍色，然後將反應物從冷卻浴中撤出並在氬氣流下氨蒸發。將燒瓶微熱以便蒸餾掉全部殘餘的氨。
向殘渣中加入三苯基甲醇(23.6g，91mmol)並將反應燒瓶在冰/水浴中冷卻。加入250ml三氟酸(TFA)，並在30分鐘後，將混合物蒸發，將殘渣溶解並用氯仿再蒸發三次。然後將殘渣溶解300ml水中並用5％的枸櫞酸和1MKOH調節pH至4。產物以膠質形式沉澱並通過過濾收集。將殘渣與乙醚一起研製，得到S-三苯甲游離-高半胱氨酸(7g，186mmol，26％產率)。通過從二甲基甲醯胺(DMF)/水中結晶，過濾分離出第二批產物，總產量為24.2g(64mmol，89％)。
b.向在150ml丙酮/100ml水中的S-三苯甲遊基-高半胱氨酸(20g，53mmol)的溶液中加入碳酸鈉(11.5g，109mmol)，然後加入溶解在200ml丙酮中的O-芴基甲基-O′-(N-琥珀醯亞胺基)碳酸酯(17.5g，52mmol)，所有這些加入過程大約在1小時完成。將反應混合物攪拌大約2天，然後將有機溶劑蒸發掉。向水性殘渣中加入300ml乙酸乙酯並用1M HCl將混合物酸化。分離有機相併相繼用1M HCl、0.5M HCl和0.25M HCl洗滌，然後經硫酸鎂乾燥，過濾並蒸發。將粗品在矽膠上層析(100％氯仿→3％甲醇/氯仿)得到標題化合物(19.4g，32mmol，62％產率)。
K.合成N-芴基甲氧基羰基-S-三苯甲遊基-高半胱氨酸-N-甲基苯丙氨酸-O-叔-丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯在室溫下，用28ml二乙胺和30ml THF，將芴基甲氧基羰基-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(9.8g，8.5mol)處理1小時。然後將反應混合物蒸發，再懸浮在100ml THF中並再蒸發三次。將殘渣溶解在乙酸乙酯和己烷中。產物N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯沉澱，通過過濾分離並乾燥，得到4.9g(8.1mmol，95％產率)。
向在-15℃冷卻浴中冷卻的，在50ml無水THF中的N-芴基甲氧基羰基-S-三苯甲遊基-高半胱氨酸中加入N，N′-雙(2-氧-3-唑烷基)膦醯氯(Bop-Cl；2.47g，9.7mmol)和1.7ml二異丙基乙胺(9.7mmol)並將反應混合物攪拌30分鐘，加入在50ml無水THF中的N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(7.48g)，再加入1.7ml二異丙基乙胺。通過蒸發，將反應物體積減少50％，然後在室溫下攪拌2天。通過蒸發除掉溶劑，並將殘渣溶解乙酸乙酯中，用5％的枸櫞酸，飽和碳酸氫鈉和飽和鹽水洗滌，並經硫酸鎂乾燥。將殘渣溶解在乙酸乙酯、乙醚和己烷中，標題化合物沉澱，通過過濾分離沉澱的化合物，得到10.2g(6.77mmol，84％產率)。
L.合成S-三苯甲遊基-高半胱氨酸-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸將N-芴基甲氧基羰基-S-三苯甲基-高半胱氨酸-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸，甲酯(10g，6.6mmol)和LiOH·2H2O在50ml TFH和4ml水中的溶液攪拌3天。再加入25mol％的LiOH·2H2O，並在2小時後，將溶劑蒸發，將殘渣溶解在乙酸乙酯中。然後用5％枸櫞酸，飽和碳酸氫鈉和飽和鹽水洗滌該溶液，經硫酸鎂乾燥，過濾並蒸發。將殘渣溶解在乙酸乙酯、乙醚和己烷中，標題化合物沉澱，通過過濾分離並乾燥。將得到的粗品在矽膠上層析，用氯仿/10％甲醇氯仿洗脫，得到3.46g純標題化合物(47mmol，41％產率)。
M.合成環-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨醯基-S-三苯甲遊基-高半胱氨酸將溶解在1740ml DMF中的S-三苯甲遊基-高半胱氨酸-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸(3.42g，2.69mmol)溶液在冰水浴中冷卻，並加入1.16ml二異丙基乙胺和二苯基磷醯基疊氮化物(DPPA；5.4g，1.16mmol)。在-20℃下，將反應物培育5天並再加入25mol％的DPPA，然後加入100mol％二異丙基乙胺。通過蒸發除掉DMF溶劑並將標題化合物粗品在乙酸乙酯、乙醚和己烷中結晶，得到2.43g(1.9mmol，69％)。
N.合成環-N-甲基苯丙氨酸-酪氨醯基-D-色氨醯基-賴氨醯基-纈氨醯基-S-三苯甲基-高半胱氨酸在室溫下，用18.7ml TFA，2ml二氯甲烷，0.94ml水，0.47ml乙二硫醇和0.37ml三異丙基矽烷將環-S-三苯甲基-高半胱氨酸-N-甲基苯丙氨酸-O-叔丁基-酪氨醯基-D-色氨醯基-N-ε-叔丁氧基羰基-賴氨醯基-纈氨酸(2.43g，1.9mmol)處理1小時。通過蒸發除掉TFA，將殘渣溶解在10ml氯仿中並傾入400ml冷乙醚中。通過過濾收集粗品的沉澱並通過C18製備性反相HPLC純化(用30％乙腈→60％乙腈/水梯度洗脫，所有溶劑都含0.1％TFA)，得到標題化合物(1g，1.2mmol，62％產率)。與理論上(平均)預測的值855，09相比，快速原子轟擊質譜(FABMS)分析表明MH+為855。
O.合成環-N-甲基苯丙氨酸-酪氨醯基-色氨醯基-賴氨醯基-纈氨醯基-S-三苯甲遊基-高半胱氨酸，S-2-乙醯基-甘氨醯基-甘氨醯基-半胱氨醯基-賴氨醯胺(P587)將環-N-甲基苯丙氨醯基-酪氨醯基-D-色氨醯基-賴氨醯基-纈氨醯基-高半胱氨酸(250mg，0.29mmol)和2-氯乙醯基-甘氨醯基-甘氨醯基-S-三苯甲遊基-半胱氨醯基-賴氨醯胺(如實施例1所述，由SPPS製備，238mg，0.35mmol)溶解在7ml乙腈和7ml 100mM碳酸鈉/0.5mMEDTA，pH10的溶液中並攪拌過夜。然後將反應混合物蒸發至幹並如實施例1所述，在含三異丙基矽烷的TFA中脫保護。通過反相HLPC將標題化合物純化，得到92.4％的理論上預計的產率。與理論上(平均)預測的值1257.70比，快速原子轟擊質譜分析表明MH+為1258。由下式表示該產物，稱P587的結構
實施例3放射性標記的一般方法將0.1mg如實施例1中製備的肽試劑溶解在0.1ml水，或0.9％氯化鈉，或10％羥丙基環糊精(HPCD)，或50∶50乙醇∶水，或磷酸鹽緩衝的鹽水(PBS)，或50mM磷酸鉀緩中劑(pH＝5，6或7.4)中。通過用1.0ml含量不超過200mCi的Tc-99m高鎝酸鈉重新配製-個Glucosacan小瓶(E.I.Dupont de Nemours，Inc.，Wilmington，DE)來製備Tc-99m葡庚糖酸鹽。並在室溫下放置15分鐘。將25μlTc-99m葡庚糖酸鹽加到試劑中並在室溫或在100℃下反應5-30分鐘，然後通過0.2μm濾器過濾。
通過HPLC，用下列條件測定Tc-99m標記的肽試劑純品WartersDelta-Pak RP-18分析柱，大小5μm×4.6mm×220mm，裝入每种放射性標記的肽，在1ml/min的溶劑流速下洗脫。經10-20分鐘，用開始為100％溶劑A(0.1％TFA/水)並且最後為100％溶劑B(0.1％TFA/90％乙腈/水)的線性梯度進行梯度洗脫。通過一臺連接到積分記錄儀上的連機放射性檢測器，檢測放射性組分。在這些條件下，在1-4分鐘之間洗脫Tc-99m葡庚糖酸鹽和Tc-99m高鎝酸鈉，同時在經過較長的時間後洗脫Tc-99m標記的肽。
下表說明使用本文所描述的方法，成功地用Tc-99m標記實施例1所製備的肽。
表I肽 FABMS 放射化學產率 HPLCMH+(％)* RT(min)環(N-甲基)FYWDKV.-Hcy.(CH2CO.GGC.醯胺) 1129 9825.1，17.2環(N-甲基)FYWDKV.-Hcy.(CH2CO.GGCK.醯胺) 1258 99215.0環(N-甲基)FYWDKV.-Hcy.(CH2CO.GGCR.醯胺) 1285 99115.1環(N-甲基)FYWDKV.-Hcy.(CH2CO.GGCKK.醯胺) 1386 N.DN.D環(N-甲基)FYWDKV.-Hcy.(CH2CO.GGC.Om醯胺) 1244 9837.0*表1中上標指下列標記條件1＝在室溫下，在10％HPCD中2＝在室溫下，在50/50乙醇/水中3＝在100℃下，在0.9％NaCl中HPLC方法(由RT時間後的上標表示)Waters-1柱，在10分鐘內，100％溶液A→100％溶液B。
在Zubay，ibid.P33中可找到胺基酸的單字母縮寫。劃線部分表示在所連接的胺基酸衍生物基團之間形成醯胺鍵或硫羥鍵。Acm是乙醯氨基甲基；Om是鳥氨酸；FD是D-苯丙氨酸；YD是D-酪氨酸；WD是D-色氨酸；Apc-L-[S-(3-氨基丙基)半胱氨酸；並且Hcy是高半胱氨酸。
如Seevers等(1982，Chem.Rev.82575-590)所述進行放射性碘處理和放射性砹處理。
通過在二甲基甲醯胺或乙腈/水中，將每種本發明肽試劑與大約1摩爾當量的如Cotton等(1966，Inorg.Chem.5；9-16)所述方法製備的氧代四溴錸酸(+5)四丁基銨鹽共溶並攪拌0.5-5天來製備非放射性錸絡合物。如上關於Tc-99m標記的肽所述，通過反相HPLC分離錸絡合物並通過FABMS或ESMS來確定其特性。
使用Tc-99m標記時相同的實驗條件，由適宜的高錸酸鹽來製備放射性錸絡合物，例如Re-186或Re-188絡合物，或者通過將還原劑加到肽和高錸酸鹽的溶液中，或者視情況可使用配位體轉化劑如枸櫞酸鹽並且將反應物在室溫-100℃的溫度下培育5-60分鐘。
實施例4結合到AR42J鼠胰腺瘤細胞膜上的[125I-Tyr11]生長激素抑制素-14的抑制作用在肽試劑介導的抑制放射性標記的生長激素抑制素類似物與包含生長激素抑制素受體的細胞膜結合的分析中證明了本發明各種生長激素抑制素受體結合劑在體外與生長激素抑制素受體結合的能力。
在含有10％胎牛血清(FCS)和8mM穀氨醯胺的杜皮克氏改良愛哥爾氏培養基(DMEM)中，在溼潤的5％CO2環境中和溫度為37℃下，培養表達生長激素抑制素受體的鼠胰腺瘤細胞系AR42J。在冷的緩衝劑(50mMTris-HCl，pH7.4)中，將收集的細胞攪勻，並在4℃下，以39,000g的轉速，將勻漿離心10分鐘。用緩衝劑將離心片洗滌兩次並再次懸浮在冰冷卻的10mM Tris-HCl緩衝劑(pH7.4)中。然後，在30℃下，將等分試樣的該細胞膜製劑與[125I-Tyr11]生長激素抑制素-14(Amersham，Arlington Heights，IL)(最終濃度為0.5nM，同位素脈衝為750,000cpm/ml，特異活性為2000Ci/mmol)和肽或本發明肽-錸絡合物(最終濃度為10-11M-10-6M)一起，在50mM，pH7.4，含1％牛血清白蛋白，5mM MgCl2，0.02mg/ml肝菌肽，0.02mg/ml苯基甲基-磺醯氟和200,00IU抑肽酶的HEPES緩衝劑中培育25分鐘。
培育後，將膜混合物通過聚乙烯亞胺洗滌的GC/F濾器(Whatman Ltd.，Maidstone，England)過濾，並用5ml冷的HEPES緩衝劑將保留在濾器上的殘渣洗滌3次。將濾器和濾器上洗滌下來的樣品在計數器上計數。為了評定非特異性結合，按所述方法，在200mn未標記生長激素抑制素-14存在下進行分析。如Bylmd和Yamamura(1990，Methods in Neuro-transmitter ReceptorAnalysis，Yamamura et al.，eds.，Raven PressN.Y.)所述，數據分析包括數據的Hill圖，由此得抑制常數，利用該分析和本發明試劑得到結果如下表II肽 K(nM)環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCKK.醯胺) 0.26環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCK.醯胺) 2.5環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGC.醯胺)2.6這些結果表明，本發明肽試劑與生長激素抑制素受體的體外結合具有高度親和性。
實施例5生長激素抑制素受體(SSTR)表達鼠腫瘤的定位作用和體內成像如Bakker等(1991，Life Sciences 491593-1601)所述，進行由鼠腫瘤細胞表達的生長激素抑制素受體的體內成像。
按照每隻動物0.05-0.1ml懸浮液的量，將從冷凍的腫瘤漿解凍得到CA20948鼠胰腺瘤細胞經肌肉注射植入6周大的Lewis鼠的右側後腿中。讓腫瘤生長到大約0.5-2g時，取出，其腫瘤漿用於植入第二隻首次用來作實驗的lewis鼠中。重複這種方式的腫瘤培育以便成功地獲得攜帶腫瘤的動物。用於體內研究的攜帶腫瘤的動物通常是第三至第五代動物並且攜帶0.2～2g的腫瘤。
為了研究腫瘤中放射性示蹤物定位的特徵，在注射放射性示蹤物前30分鐘，皮下給予所選擇的動物SSTR-阻滯劑量(4mg/kg)的奧曲肽。(Bakker等顯示了該實驗記錄，其結果表明，腫瘤攝入111In-[DTPA]奧曲肽的量降低40％。
將第三至第五代攜帶CA 20948腫瘤的Lewis鼠管理起來並通過背側尾靜脈注射劑量為0.15-0.2mCi的99mTc-標記的肽，該劑量與每0.2-0.4ml含3-8μg肽相當。
在所選擇的時間，通過頸脫位將動物處死並選擇性屍檢。將獲得的組織樣品稱重並在γ#式計數管中與等分試樣的注射劑量一起計數。
表I顯示所選擇的放射性標記肽90分鐘的分布結果。顯然，99mTc-P587、99mTc-P617、99mTc-P726和99mTc-P736顯示腫瘤攝入和腫瘤/血比很高，這表明它們在靶(腫瘤)組織高度特異性地被攝入。
圖1顯示在攜帶腫瘤的鼠中，99mTc-P587的圖像。顯而易見，在大腿根的腫瘤中(箭頭)攝入量高。
將經或未經預先注射奧曲肽治療的鼠的腫瘤中99mTc-P587的攝入進行比較，已知生長激素類似物結合到體內生長激素抑制素受體上。在這些實驗中，通過在給予99mTc-P587前給予奧曲肽引起的受體阻滯使得腫瘤特異性攝入放射性標記肽的量減少76％。這些結果證明了99mTc-P587的體內結合是SSTR特異性的。
表III％1D/gNo. 肽腫瘤 血 腫瘤/血P736環(N-甲基)FYWDKV.
Hcy.(CH2CO.GGCRK.醯胺) 2.10.249P587環(N-甲基)FYWDKV.
Hcy.(CH2CO.GGCK.醯胺) 3.40.616P617環(N-甲基)FYWDKV.
Hcy.(CH2CO.GGCR.醯胺) 6.70.739P726環(N-甲基)FYWDKV.
Hcy.(CH2CO.KKC.醯胺)2.50.308實施例6用Tc-99m標記的P587表達人體生長激素抑制素受體(SSTR)的腫瘤進行體內成像在臨床試驗中，用Tc-99m標記的P587試劑獲得患SSTR表達型腫瘤的病人的閃爍照相成像。
總計10名患者，女性4人，男性6人，年齡27-69歲，預先診斷患生長激素分泌型垂體腺瘤(4人)，黑素瘤(1人)，髓質甲狀腺癌(1人)，小細胞肺癌(SCLC；1人)，非何杰金淋巴瘤(1人)或胃類癌瘤(1人)。每個病人都以每0.2-0.5mg 10-22mCi的劑量，通過靜脈注射給予Tc-99m標記的P587。每個病人在注射後4小時都如本文所述進行閃爍照相成像。
在注射的同時開始γ照相機成像。在最初10分鐘時，獲得作為動力學研究對象的前期圖像(10秒鐘即可獲得)，然後在注射後1，2，3和4小時獲得靜態圖像。在注射後大約10-20分鐘和在注射後大約1，2，3和4小時獲得500,000計數或20分鐘(以較短的為準)的前期圖像。
發現，在注射後30分鐘內，由於在循環系統中保留注射劑量的不到10％，結果閃爍照相成像劑迅速從血流中顯現出來。這樣使得在注射閃爍照相成像劑後15-30分鐘，就獲得腫瘤部位的圖像。在該研究中檢測到所有已知的腫瘤，以及從前未檢測到的轉移性損害，所述轉移性損害後來通過使用計算機輔助型X線斷層照相術(CAT掃描)確定。
這些結果證明，本發明閃爍照相成像劑在檢測人體內SSTR表達型初期或轉移期腫瘤中是非常有效的。
應該知道，上述公開的發明強調了本發明的某些特定實例並且所有相應的修飾或改變都在如權利要求中所闡述的本發明的構思和範圍內。
權利要求
1.一種含有共價連接到金屬離子絡合部分上的特異結合肽的物質組合物，其中該肽特異性地結合到生長激素抑制素受體上，該試劑具有式環(N-CH3)-Phe-Tvr-(D-Trp)-Lys-Val-Hcy.(CH2COX)其中X是金屬離子絡合部分，它具有式-(胺基酸)n-B-(胺基酸)m-Z其中B是含巰基的部分，它是半胱氨酸，高半胱氨酸，異半胱氨酸。或青黴胺；(胺基酸)n和(胺基酸)m各自為不包含巰基的任何一種初級α-或β-胺基酸；Z為-OH或-NH2；n為2-5的整數；並且m為0-5的整數。
2.權利要求1的物質組合物，它具有式環(N-甲基)FYWDKV.Hcy(CH2CO.GGCK.醯胺)。
3.權利要濟南市1的物質組合物，它選自以下序列環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCR.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCRD.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCRK.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCRR.醯胺)環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.GGCKK.醯胺)和環(N-甲基)FYWDKV.Hcy.(CH2CO.KKC.醯胺)
4.用於製備在哺乳動物物體某部位成像的閃爍照相成像劑的試劑，它包含權利要求1的物質組合物。
5.包含權利要求4試劑的閃爍照相成像劑，其中，將放射性標記的結合部分連接到鎝-99m上。
6.一種絡合物，它是在還原劑存在下將權利要求4的試劑與鎝-99m反應而製備的。
7.權利要求6的絡合物，其中還原劑為亞錫離子。
8.一種絡合物，它是通過預先還原的鎝-99m絡合物的配位體交換，用鎝-99m放射標記權利要求4的試劑來製備的。
9.一種製備放射性藥用製劑的試劑盒，所述試劑盒中包含密封的小瓶，小瓶中包含預先測定量的權利要求4試劑和用鎝-99m標記試劑時足夠量的還原劑。
10.標記權利要求4試劑的方法，它包括在還原劑存在下，將該試劑與鎝-99m反應。
11.權利要求10的方法，其中還原劑為亞錫離子。
12.權利要求5的閃爍照相成像劑在製備哺乳動物體內某部位成像用藥物中的應用。
13.權利要求1的物質組合物，其中將金屬離子絡合部分與金屬離子結合。
14.權利要求13的物質組合物，其中金屬是錸、鋅或錫。
15.權利要求1的物質組合物，其中將金屬離子絡合部分與發射β粒子的金屬離子結合。
16.權利要求15的物質組合物，其中發射β粒子的金屬離子是錸-186、或錸-188。
17.權利要求1的物質組合物，其中將金屬離子絡合部分與發射轉化電子的金屬離子結合。
18.權利要求17的物質組合物，其中發射轉化電子的金屬離子是錫-117m。
19.權利要求1的物質組合物，用碘-125、碘-131，或砹-211對其進行放射性標記。
20.一種藥用組合物，包含權利要求1的物質組合物和藥用載體。
21.一種藥用組合物，包含權利要求13的物質組合物和藥用載體。
22.一種藥用組合物，包含權利要求14的物質組合物和可藥用載體。
23.一種藥用組合物，包含權利要求15的物質組合物和可藥用載體。
24.一種藥用組合物，包含權利要求16的物質組合物和可用藥載體。
25.一種藥用組合物，包含權利要求17的物質組合物和可藥用載體。
26.一種藥用組合物，包含權利要求18的物質組合物和可藥用載體。
27.一種藥用組合物，包含權利要求19的物質組合物和可藥用載體。
28.權利要求20-27的藥用組合物的應用，用於製備治療患有表達生長激素抑制素受體的惡性良性腫瘤、或攜帶腫瘤或轉移性瘤細胞的動物的藥物。
29.一種用於製備診斷劑來確定哺乳動物體內某部位的試劑，它包含權利要求1的物質組合物。
30.一種包含權利要求29試劑的診斷劑，其中將金屬離子絡合部分結合到順磁金屬離子上。
31.權利要求30的診斷劑，其中順磁金屬是鐵或銅。
32.一種結合到超順磁粒子上，包含權利要求29試劑的診斷劑。
33.一種用碘-123、碘-125或碘-131放射性標記的、包含權利要求1組合物的診斷劑。
34.一種藥用組合物，包含權利要求30的物質成分和可藥用載體。
35.一種藥用組合物，包含權利要求32的物質成分和可藥用載體。
36.一種藥用組合物，包含權利要求33的物質成分和可藥用載體。
37.具有下式物質成分的試劑
38.用鎝-99m放射性標記的權利要求37的物質成分。
39.權利要求4的試劑，其中，在哺乳動物體內成像的部位是初期或轉移期的生長激素受體表達型腫瘤的部位。
40.一種製品，它包括一個密封小瓶，瓶中有預先測定量的權利要求37中物質成分和用鎝-99m標記該成分時足夠量的還原劑。
41.一種在還原劑存在下將權利要求37的試劑與鎝-99m反應而製備的絡合物。
42.權利要求41中的絡合物，其中還原劑為亞錫離子。
43.一種通過將預先還原的鎝-99m的絡合物進行配位體交換而用鎝-99m標記權利要求37的試劑來製備的絡合物。
44.一種用於製備放射性藥物製劑的試劑盒，所述試劑盒包括一個密封小瓶，瓶中含有預先測定量的權利要求37的試劑和用鎝-99m標記該試劑足夠量的還原劑。
45.標記權利要求37中試劑的方法，它包括在還原劑存在下，將該試劑與鎝-99m反應。
46.權利要求45的方法，其中還原劑為亞錫離子。
47.鎝-99m標記的權利要求38物質成分的應用，用於製備使哺乳動物體某部位成像用的藥物。
48.一種藥用組合物，包含權利要求38的物質成分和可藥用載體。
49.權利要求48的藥物組合物的應用，用於製備作為放射性同位素引導外科手術的藥物，其中，給予動物有效量的權利要求48的藥物組合物並且切除含有腫瘤或轉移瘤細胞的組織，所述腫瘤或轉移瘤細胞是通過確定所給予藥用組合物的放射性部位來識別的。
全文摘要
本發明涉及包括放射性標記的閃爍照相成像劑的診斷和放射性診斷劑、治療和放射性治療劑。本發明提供這些試劑和製備這些試劑的試劑，以及製備和使用該試劑的方法。尤其是，本發明提供用於在哺乳動物體某部位成像的放射性標記的成像劑和非放射性標記的成像劑以及製備這些成像劑的試劑。本發明也提供治療劑及製備這些治療劑的試劑和方法。所提供的試劑和原料試劑包含通過共價鍵連接到金屬離子絡合部分上的特異性結合肽。還提供製備這些試劑的原料試劑、方法和試劑盒、標記這些試劑的方法、和使用這些標記過的試劑的方法。
文檔編號C07K14/00GK1155248SQ95193841
公開日1997年7月23日 申請日期1995年5月12日 優先權日1994年5月12日
發明者理察·迪安 申請人:迪亞太德公司