含人參皂苷Rg1的三七有效組分及製備方法與用途的製作方法

2023-09-14 07:37:30 2

專利名稱：含人參皂苷Rg1的三七有效組分及製備方法與用途的製作方法
技術領域：
本發明屬中藥領域，涉及一種含人參皂苷Rgl的三七有效組分及其製備方法，該 有效組分通過提取，反相柱中壓分離，製備液相分離而獲得，可用於製備治療心血管疾病的 藥物。
背景技術：
心血管疾病是危害人類健康的第一殺手，近年來，隨著我國人口老年化以及人們 工作、生活、飲食結構及環境等的變化，冠心病等心腦血管疾病的發生率也逐年增多，嚴重 威脅著人民的身心健康。天然產物中許多活性物質具有抗心肌缺血、缺氧作用，其中一些已 開發成治療冠心病和心絞痛的新藥。因而從天然產物中尋找具有抗心肌缺血、缺氧生理活 性的有效物質，是發現、開發新藥的有效途徑之一。我國藥用生物資源十分豐富，其生理活 性物質是研究和發現新藥先導化學物，開發新藥的天然寶庫。目前，我國從天然產物中提取 活性物質，用於開發成治療冠心病、安全性好、毒性低的新藥還很少，從天然產物中提取活 性物質，開發成具有抗心肌缺血，用於治療冠心病和心絞痛的新藥，具有重要應用價值和廣 闊發展前景。三七為五加科植物三七Panax notoginseng (Burk. ) F. H. Chen的乾燥根。中 醫認為，其味甘、微苦，性溫，歸肝、胃經。具有散瘀止血，消腫定痛之功效，適用於治療咯 血，吐血，衄血，便血，崩漏，外傷出血，胸腹剌痛，跌扑腫痛等。現代研究表明，三七中主要 含人參皂甙(Ginsenosides) Rbl、RcU Re、Rgl、Rg2、Rh，20-0-葡萄糖人參皂甙 Rf，三七 皂甙(Notoginsenoside) Rl、R2、R3、R4，七葉膽皂甙(Gypeno-side) XVL 尚含人參皂甙 Rb2。還含揮髮油，有α及β-愈創 『太希(α _，β -guaiene),另夕卜有α _古巴『太希(α -copaene)、δ _愈倉1J；!；希、花豐白煉(cuparene)、 α -, P -, Y-攬香火希(α _， β-, -elemene)、α _ 依蘭油；！；希(α -muurolene)、α _ 古 芸烯(α - gurjimene)、十六酸甲酯、十六酸乙酯、十七碳二烯酸甲酯、十八碳二烯酸乙酯、 鄰苯二 甲酸二叔丁酯(benzene-diformic acid ditert-butylate)、十八碳二烯酸、異丙 苯、環十二碳酮(Cy-Cl0d0de-Can0ne)、l-甲基-4-過氧甲硫基[2，2，2]辛烷、十四烷、十六 烷、十七烷、十八烷、十九烷、廿烷、廿一烷、廿二烷。水提取液中含一種具止血活性的三七素 (N-oxalo-L- α , β -diaminopro-pionic acid)。另含槲皮素、三七黃酮 B、β -谷甾醇 t -谷留醇-D-葡萄糖甙、蔗糖。

發明內容
本發明的目的在於提供一種主要含人參皂苷Rgl的三七有效組分，通過以下製備 方法獲得將三七藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將 提取液濃縮成浸膏，用反相矽膠柱對其進行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液 I，棄之，然後改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用 製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，本發明所述的三七有效組分主要含有人參皂苷Rg1, Yesanchinoside H 等幾種化合物。具體通過以下方法製備獲得取三七藥材，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸 乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液I，藥渣加入70%乙醇溶液，加 熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液 溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然後 改用60%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離 得到的樣品製備色譜的分離條件色譜柱為Agilent製備柱(Zortax SB-C18; 21. 2mm χ 250mm)，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序如下0min時，流動相A為90%的水，流動相 B為10%的乙腈溶液；15min時，流動相A為7 的水，流動相B為28%的乙腈溶液；20min 時，流動相A為7 的水，流動相B為28%的乙腈溶液；流速為lOml/min，柱溫為室溫；樣 品經製備液相色譜分離，在13. Π7. Smin時間段收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組 分。本發明的另一目的在於提供該三七有效組分在製備治療和預防心血管疾病藥物 中的應用。經藥理實驗證明，本發明提供的三七有效組分對心肌細胞有保護作用。本發明提供的三七有效組分作為活性成分，加入藥劑學上接受的輔料，按照藥劑 學上記載的製劑的製備方法製成製劑。藥物的製劑形式為液體製劑火固體製劑，包括注射液、滴注液、粉針劑、顆粒劑、片 劑、衝劑、散劑、口服液、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、 口含劑、顆粒劑、丸劑、膏劑、丹劑、噴霧劑、滴丸劑、崩解劑、口崩片、微丸等。本發明提供的三七有效組分可在製備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發 明提供的製備方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易於藥物的質量控 制。
具體實施例方式下面將結合實施例進一步詳細說明本發明的實質內容和有益效果，該實施例僅用 於說明本發明而非對本發明的限制。實施例一三七有效組分的製備
將三七藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液 濃縮成浸膏，用反相矽膠柱對其進行分離，首先用低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，棄 之，然後改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II，將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用製備 液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條件色譜柱為製備柱，流動相為水和乙 腈，梯度洗脫。實施例二 三七有效組分的製備
取三七藥材，將其粉碎後加入體積比為1 1的乙酸乙酯和乙醇，加熱回流1小時，提取2 次，濾液合併得提取液I。藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小時，提取2次，濾液合併得 提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸膏，採用ODS-C18柱對其進行分 離，首先用5%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然後改用60%甲醇溶液作為流動相，得洗脫 液II，濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品製備色譜的分離條件色譜柱為Agilent製備柱(Zortax SB-C18; 21. 2mm 250mm)，流動相為水A和乙腈B，梯度洗 脫程序如下0min時，流動相A為90%的水，流動相B為10%的乙腈溶液；15min時，流動相A 為72%的水，流動相B為28%的乙腈溶液；20min時，流動相A為72%的水，流動相B為28% 的乙腈溶液；流速為lOml/min，柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在13. Π7. Smin時 間段收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。實施例三滴丸製劑的製備
取三七有效組分0. 5g與10. 5g聚乙二醇-20000混合均勻，加熱熔融，化料後移至滴丸 滴灌中，藥液滴至6、°C液體石蠟中，除油，製得滴丸400粒。實施例四 凍乾粉針劑的製備
取三七有效組分0. 5g、葡萄糖4. 5g、硫代硫酸鈉0. 9g和蒸餾水1000ml，上述組分混合 均勻後，分裝400支，冷凍乾燥，即得。實施例五三七組分的活性評價實驗
1.三七組分對H2O2損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養M h後，加入200 μ mol/mL H2O2 損傷心肌細胞30 min,再加入終濃度為50 μ g/mL的三七組分孵育M h，採用MTT法測定細 胞活力。結果表明，該組分對H2O2損傷心肌細胞的保護率為11.四％。2.三七組分對缺氧復氧損傷心肌細胞的保護作用
體外培養H9C2心肌細胞，培養液為DMEM(高糖)+10%FBS (G) +1%非必需胺基酸+0. 1%雙 抗。取對數生長期細胞置於96孔細胞培養板上，恆溫培養M h後，在缺氧小室中培養6 h。 缺氧結束後，取出細胞培養板加入經無糖Hank』 s稀釋的終濃度為50 μ g/mL的三七組分，在 正常培養條件下孵育他小時，取細胞培養上清液測定乳酸脫氫酶(LDH)含量。結果表明， 該組分對缺氧復氧損傷的心肌細胞保護率為13. 04%。
權利要求
1.一種含人參皂苷Rgl的三七有效組分，主要含有人參皂苷RgpYesanchinoside H化 合物，其特徵在於，通過以下步驟製備獲得將三七藥材粉碎後加入乙酸乙酯和乙醇，加熱 提取，藥渣加乙醇水溶液提取，將提取液濃縮成浸膏，用反相矽膠柱對其進行分離，首先用 低濃度甲醇作為流動相，得洗脫液I，棄之，然後改用高濃度甲醇作為流動相，得洗脫液II， 將洗脫液II濃縮乾燥後得樣品；用製備液相色譜繼續分離得到的樣品；製備色譜的分離條 件色譜柱為製備柱，流動相為水和乙腈，梯度洗脫，收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效 組分。
2.根據權利要求1所述的一種含人參皂苷Rgl的三七有效組分，其特徵在於，通過 以下步驟製備獲得取三七藥材，將其粉碎後加入體積比為1:1的乙酸乙酯和乙醇，加 熱回流1小時，提取2次，濾液合併得提取液I ；藥渣加入70%乙醇溶液，加熱回流1小 時，提取2次，濾液合併得提取液II，將提取液II濃縮成浸膏，用50%甲醇溶液溶解浸 膏，採用ODS-Cw柱對其進行分離，首先用5%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液I，然後改 用60%甲醇溶液作為流動相，得洗脫液II，濃縮乾燥後得樣品，用製備液相色譜繼續分離 得到的樣品，製備色譜的分離條件色譜柱為Agilent製備柱，Zorbax SB-C18; 21.2mm χ 250mm，流動相為水A和乙腈B，梯度洗脫程序為=Omin, 10%B ； 15min,28%B ；20min,28%B ； 流速為lOml/min，柱溫為室溫；樣品經製備液相色譜分離，在13. Π7. Smin時間段收集溶 液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。
3.根據權利要求1或2所述的一種三七有效組分在製備治療心血管疾病的藥物中的 應用。
4.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述藥物由三七有效組分加入藥劑學上 可接受的輔料，按照藥劑學上記載的製劑製備方法製成。
5.根據權利要求3所述的應用，其特徵在於，所述藥物的製劑形式為液體製劑或固體 製劑。
全文摘要
本發明提供一種含有人參皂苷Rg1的三七有效組分，該有效組分主要含有人參皂苷Rg1，Yesanchinoside H等幾種化合物。藥材通過加熱提取，濃縮，反相矽膠柱分離，洗脫，洗脫液濃縮乾燥，再用製備液相色譜繼續分離，收集溶液，溶液經濃縮乾燥後得到有效組分。本發明提供的三七有效組分可在製備治療、預防心血管疾病藥物中的應用。本發明方法設計合理，能快速準確地得到有效成分，在生產中更易於藥物的質量控制。
文檔編號A61P9/00GK102125590SQ20111005897
公開日2011年7月20日 申請日期2011年3月11日 優先權日2011年3月11日
發明者李雲飛, 王毅, 程翼宇, 葛志偉 申請人:浙江大學