益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途的製作方法

2023-09-20 02:31:30 4

專利名稱：益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及益母草提取物的用途，具體涉及益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑在製藥領域中的用途。
背景技術：
益母草(Leonurus)為唇形科植物，原名茺蔚，傳統認識與主治月經不調、痛經、閉經、產後瘀血腹痛、水種、尿血、目赤腫痛、頭暈脹痛等症。茺蔚子為益母草之成熟果實，性味辛、甘，微寒，入肝經，其活血調經功能同益母草，有清肝明目，活血行氣作用，臨床多用於目赤腫痛或雲翳等眼疾。益母草提取物包括市場上現有的益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、益母草注射液，人們對上述益母草提取物治療認識主要還僅限於益母草傳統治療範圍。現代醫學研究益母草主要活性成分是生物鹼，如益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲和水蘇鹼。其中益母草鹼(C13H21O5N3)、益母草總鹼、水蘇鹼在現有文獻上記載有對多種動物在體子宮均有直接興奮作用，可使子宮收縮頻率、幅度、及張力增加，以及具有活血化瘀、止血的功效。茺蔚子即益母草子主要成分為益母草寧鹼(茺蔚寧Leonurinine，C10H14O3N2)、水蘇鹼及油酸，油酸主要成分為亞油酸(42.62％)、亞麻酸(29.93％)、油酸(20.23％)、棕櫚酸(5.40％)、硬脂酸(1.57％)等，此外還含有17種胺基酸和24種礦質元素，及維生素A樣物質，茺蔚油為茺蔚子壓榨出的提取物，其內含有益母草寧鹼、水蘇鹼和油酸，對於茺蔚油作為藥物的治療作用還未見報導。

發明內容
本發明的目的在於提供益母草提取物的新用途，具體涉及益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑在製藥領域中的用途。
實際上，本發明涉及益母草提取物益母草膏、益母草糖漿劑、益母草衝劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
本發明涉及益母草提取物中主要活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其藥物可接受的鹽作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
涉及益母草提取物中主要活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼的混合物或其藥物可接受鹽的混合物或該二者的混合物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
涉及益母草子提取物茺蔚油中主要活性成分益母草寧鹼、水蘇鹼或其藥物可接受的鹽作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
所述益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥在製備治療和預防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、肌無力、進行性肌萎縮、下肢靜脈曲張、血栓閉塞性脈管炎、臁瘡、銀屑病、白癜風、鵝掌風、高血壓、冠心病、高血脂、心腦血管病、再生障礙性貧血、紫癜、彌散性血管內凝血、月經不調病、腫瘤、白血病、B型肝炎、黃膽性肝炎、肝硬化、青光眼、白內障、耳鳴、耳聾、脫髮、腎炎、尿毒症、前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大、尿崩症、糖尿病、胃下垂、子宮脫垂、眼瞼下垂、甲亢、脾亢疾病的藥中的應用。
所述的用途在治療和預防疾病的藥的方法，包括對患者進行有效治療劑量的活性成分給藥，所述活性成分選自益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其混合物或其藥物可接受鹽的混合物或該二者的混合物。
所述用途的提取物活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其混合物或其製藥可接受鹽的混合物或該二者的混合物同輔助劑製成片劑、膠囊、針劑、口服液、糖漿劑、散劑、膏劑、油劑。
所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，有效治療劑量為所述的活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的劑量給藥。
所述益母草提取物茺蔚油作為食用油添加劑加入到食用油中，茺蔚油與食用油的比例為1/5000～1/10。
為了更好地理解本發明的實質，下面將分別單獨使用益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液的藥理試驗及其結果來說明其在製藥領域中的新用途。上述的五種物質具有同樣的藥理效果，區別僅在使用的量和顯效時間上的不同。
1、小白鼠的急性毒性試驗口服給藥健康雄性小鼠10隻，體重17～24g，灌胃給予小鼠益母草的提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液LD50(ip)＝2452.8±5.42mg/kg(按照益母草鹼計算)。注射給藥雄性小白鼠10隻，體重17～24g，按益母草鹼簡化機率單位法計算，測得LD50(iv)＝601.2±45.1mg/kg，觀察服後4～6小時突然全身無力，下肢不能活動或痙攣症狀，但神志清楚，對體溫、呼吸、心率皆無影響，四小時左右其症狀可恢復正常，觀察三天無一隻死亡。
2、生物活性實驗Ellman分析採用Ellman分析方法對適合的乙醯膽鹼酯酶抑制劑進行篩選。將緩衝液中的人乙醯膽鹼酯酶(hAchE)加入到檢測化學藥品/TCM提取物中，然後再加入Acetylthiocholine(ATCI)底物和Ellman氏試劑(5′5-二硫-雙-(2-硝基苯甲酸鹽)，DTNB)。通過釋放的thiocholine對AchE抑制性活性進行監測，該thiocholine隨後與DTNB反應形成亮黃色產物。使用分光光度計來檢測所得顯色產物的光密度。
將從益母草的水提取物溶於20mg/ml 50％DMSO，隨後稀釋成為10、20、50、80、100μg/ml以進行Ellman分析。
如下所述在96孔板上進行Ellman分析將分析緩衝液中(100mM磷酸鈉緩衝液，pH7.4)的預設定量的益母草水提取物與0.1單位hAChE(購買於Sigma)混合。在經過短暫的預孵育後(即10分鐘)，將相同量的12.5mM Acetylthiocholine(ATCl)與10mM(5′5-二硫-雙-(2-硝基苯甲酸鹽)，DTNB)相混合，再將混合物加入到小孔中。10分鐘後，在415nm對96孔板進行光密度檢測。光密度與抑制活性呈反比。
檢測結果如圖1所示，50μg/ml的益母草水提取物對hAChE活性的抑制高於80％。
同樣也對所選擇的益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液的活性成分的抗乙醯膽鹼酯酶活性進行了檢測，它們是益母草寧鹼(C10H14O3N2)、益母草鹼(C13H21O5N3，分子量311.33)、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼(C7H13NO2，分子量143.0)。上述這些都來自於中國藥監局中國藥品生物製品檢定所。
下面將選擇的活性成分溶於50％DMSO，在本分析中不推薦使用100％DMSO，因為那會降低酶活性。
對選擇的活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼進行Ellman分析，進行最高濃度達到40μM(如圖2)的10倍稀釋。
在所有被測化學藥品中，益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼均表現出強烈的AChE抑制作用，其IC50分別為約5-8μM(圖2)。
為了檢測益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼對於AChE的特異性，在Ellman分析中採用丁醯乙醯膽鹼酯酶(hBchE)來替代AchE。hBchE可在紅細胞中富集，被命名為假酯酶，與AChE具有極高的同源性。與hBchE的非特異性結合會給出嚴重的膽鹼能副作用。
除了採用hBchE(購自於sigma)外，如上所述進行Ellman分析。同時也採用AChE平行進行Ellman分析以進行比較。與BchE比較，都顯示出益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼對AchE更高的選擇性(圖3、4、5、6、7)。
MTT分析利用MTT分析對選擇的主要hAchE抑制劑的毒性進行檢測。考慮到只有具有代謝活性的細胞才可以清除四唑鹽MTT形成formazen染料，在540nm處的OD檢測值直接與活細胞數呈正比。
在神經細胞系SHSYSY和小鼠神經細胞系NIE-511中，沒有檢測到1-50μM的益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼產生的顯著的細胞毒性(圖8、圖9)。
在本發明中，術語「製藥上可接受的鹽」定義為那些諸如益母草鹼硫酸鹽、益母草鹼醋酸鹽、鹽酸水蘇鹼等無機酸或有機酸的可溶性鹽。本發明中所使用的術語「活性成分」定義為以上所述的益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液或益母草生物鹼益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其藥物可接受的鹽或該二者的混合物。本發明所涉及的益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸均為現有商品，所述普通技術領域的技術人員通過現有製作工藝即可製得。以下益母草提取物的劑型茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液，與現有對應劑型工藝相同。其內的活性成分生物鹼及其在製藥上可接受的鹽的提取已是現有技術。
本發明中的植物優選的選自益母草全草，本發明使用的益母草提取物茺蔚油選自茺蔚子(益母草子)壓榨而成。
所述益母草的提取物包括水提取物、乙醇提取物、壓榨提取物。
將益母草的提取物或上述益母草的生物鹼、鹼鹽或其混合物製作成藥物可接受載體，「藥物可接受載體」指在製藥上使用的促進該活性成分加工成製劑的賦型劑或輔助劑。該製劑可通過口服、肌肉內、腹腔內、皮下或靜脈內給藥。優選的所述製劑，特別是那些諸如片劑、膏劑、衝劑、糖漿劑、膠囊和注射劑的製劑以及適合的溶液。
本發明使用的適合的賦性劑包括諸如多糖的填料，例如乳糖或蔗糖、甘露醇或山梨醇、纖維素衍生物、硫酸鎂、諸如磷酸三鈣或磷酸氫鈣的磷酸鈣，以及諸如玉米澱粉、小麥澱粉等澱粉糊的結合劑。使用的適合的輔助劑包括流體調節劑和潤滑劑，例如滑石、矽石、硬脂酸。本發明中的提取物可以製成諸如靜脈內、皮下和肌肉內注射的注射方式，口服劑、栓劑或舌下片劑的形式。採用本領域中普遍接受的方法來製備。例如注射劑、舌下片劑、片劑、糖漿劑和膠囊的劑型的藥物製劑。在製備中根據需要可加入穩定劑和防腐劑。在本發明中，當活性成分或組合物口服給藥時，可以採用片劑或膠囊、或水溶液或懸浮液的形式。當採用片劑的時候，通常使用的載體包括乳糖、甘露醇和玉米澱粉，且通常加入諸如硬脂酸鎂的潤滑劑。如果是採用膠囊形式，活性化合物在硬明膠膠囊中以乾燥的形式給藥，或在適合的凝膠或液態載體，例如液體聚乙二醇或交叉膠中，在軟明膠膠囊中的形式給藥。
將益母草生物鹼益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物用於保健目的的應用，可將其按一定比例的上述生物鹼或將茺蔚油加入到食用油中，添加物和食用油的加入比例為1/5000～1/10，優選加入比例為1/500～1/50。茺蔚油中含有生物鹼益母草寧鹼、水蘇鹼和維生素A樣物質、24種礦質元素和多種胺基酸，將其加入到食用油中長期食用。其具有正向調節人體功能，提高免疫能力，補充營養物質及微量元素，達到保健功效。
益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼的製劑的有效劑量為通常情況下的給藥劑量約為活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的劑量給藥，優選為以每天0.01-0.3毫克/千克·天的劑量給藥，每天早晚服用，連服三天後減半服用，七天為一療程。服用稍微過量，一般不須藥物處理，不良反應經過三至四小時可以自行消失，嚴重者M樣反應重者用阿託品解救；N樣反應重者可用少量筒箭毒鹼對抗；休克者可用去甲腎上腺素解救。口服後小腸內消化吸收，靠簡單擴散進入細胞膜，又易透過血腦屏障，故中樞作用強大，排瀉過程中在腎部又得以重吸收，加之突觸傳遞的後放效應，致使藥效形成持久；注射給藥，可使藥物快速顯效。
本發明使用的術語「有效治療劑量」或「有效劑量」意指為要實現其預期目的的活性成分的有效劑量。該劑量應依據患者的症狀、性別、年齡和體重、給藥方法、給藥時間與間隔、以及藥物製劑的特性、調劑、種類、特殊有效組分等而發生變化。
臨床治療與分析藥理從上述可知益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液均屬於擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。具體為益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼均為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥，即乙醯膽鹼酯酶抑制劑(AchEI)。其可長時間地抑制乙醯膽鹼酯酶的活性，能減少神經遞質乙醯膽鹼的降解；乙醯膽鹼酯酶抑制劑是通過抑制突觸間隙內乙醯膽鹼的降解，又能進入細胞發揮作用，還能興奮膽鹼能神經末梢，釋放Ach，從而形成乙醯膽鹼的濃度升高，呈現長久的M樣和N樣作用，對人體的功能活動起著以正常的、健康向上的生理效應為主的神經調節和體液調節，此調節具有雙向性，可促進恢復人體內各項物理、化學因素的相對穩定平衡。另外，乙醯膽鹼對毒蕈鹼受體和菸鹼受體的激動具有神經保護作用。
益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液中的活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼的M樣作用(1)腺體分泌增加增強了體液調節，使體內激素間、神經遞質間成正常健康比例的分泌增加或減少，從而形成其間的對立統一平衡機制，通過體液調節又使神經調節的功能恢復加強，進而形成了體液調節和神經調節的體內良性循環。激素、神經遞質的相對增強和抑制，器官組織間的液體增多，促進了機體新陳代謝，增強了人體生長、發育和生殖功能及免疫功能。(2)泌尿道逼尿肌收縮、括約肌舒張，膀胱排空作用加強，呈現利尿消腫。臨床可用於手術後的腹氣脹和尿瀦留(3)血管系統有血管的擴張加之利尿效應，可使血壓下降，頭部舒適，血不妄行，出血症休止。(4)眼瞳孔括約肌、睫狀肌收縮，使瞳孔縮小，眼壓下降，眼力恢復，調節痙攣(近視)，局部舒適。(5)胃腸道作用收縮幅度和張力增強、胃腸分泌提高，消化能力增強。N樣作用(1)興奮神經節的NN受體；(2)興奮腎上腺髓質NM受體，腎上腺素、去甲腎上腺素釋放；此效應可興奮支氣管平滑肌的β2受體，使支氣管不致過於收縮，引起呼吸系統不良反應；(3)興奮骨骼肌NM受體表現肌肉收縮。
臨床毒理過量可致膽鹼能危象(1)胃不適，俗語抓鬧，一般不嘔吐，不疼痛(胃平滑肌過於興奮收縮引起)。(2)小腹發縱、屈腹、無力(腹內平滑肌、腹壁肌過於收縮引起)。(3)突然全身無力，下肢不能活動或痙攣(反射中樞過於興奮，形成肌束顫動，肌無力加重、傳導中樞上下神經通路興奮阻滯，形成四小時左右的可逆性的椎體束症候群)。(4)手腳發涼(M樣作用，心率減慢，心傳導阻滯，心溫不能擴布四肢末梢所致)。(5)大汗淋漓(交感神經的節後纖維過於興奮所致汗腺的大量分泌引起)。(6)胸悶、胸壓榨、腰疼、背疼，頸項強直或全身酸麻疼痛(以豎脊肌為主的背部骨骼肌過於收縮拉動激惹神經根部，形成根性疼痛)。(7)甚者呼吸麻痺(呼吸肌和導氣部平滑肌過於收縮及呼吸中樞先過於興奮而後抑制引起的)。(8)過量至孕婦流產(子宮平滑肌過於收縮引起的)。
服用治療量十日後可出現以下效應(1)頭部發箍(以枕額肌為主的頭部骨骼肌過於收縮牽拉帽狀腱膜引起頭皮緊密度增強引起)；(2)左右兩手以長勞作的，以中指中關節為先的指背部強性微痛和足趾部呈間斷性微痛；(3)頸項後仰(以豎脊肌為主的背部肌興奮收縮引起)(4)熟睡中可有一兩口唾液咽下或從口角流出(唾液腺健康分泌所致)(5)小腿微皺(腎功能增強，膀胱平滑肌收縮，括約肌舒張引起的利尿效應)(6)上、下眼瞼呈神經梢樣有一時沒一時的跳動(植物神經節興奮引起神經末梢運動引起)。
益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液或其提取物中的活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼均屬於乙醯膽鹼酯酶抑制藥，治療如下病症治療和預防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症。M樣作用，增強包括下丘腦、垂體在內的腺體分泌，使體內激素水平達到對立統一平衡，抵制神經功能紊亂。N樣作用，以枕額肌的收縮使頭上部形成緊箍效應，可物理性的控制腦部異常活動，骨骼肌的持續不斷收縮、抑制了病態的痙攣性收縮。乙醯膽鹼酯酶抑制劑對保護多巴胺能神經元和改善PD運動障礙具有良好的生理功能。通過抑制乙醯膽鹼酯酶達到阻止神經細胞凋亡的目的，從而保護了病人的多巴胺能神經元，提高了黑質紋狀體多巴胺能神經系統的功能抑制乙醯膽鹼酯酶同時也可提高內源性乙醯膽鹼濃度，從而通過菸鹼樣膽鹼能β2受體調控紋狀體多巴胺的釋放，達到對PD的標本兼治效果，特別對患有痴呆的PD患者更能提高療效。臨床用本發明藥物治療早老性痴呆10例、帕金森病6例、癔病3例、精神分裂症10例，均取得滿意療效。
治療類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、肌無力、進行性肌萎縮、下肢靜脈曲張、血栓閉塞性脈管炎、臁瘡、銀屑病、白癜風、鵝掌風。M樣作用，通過神經調節和體液調節及自身調節功能加強，肌體激素水平平衡、組織液充沛，內毒素減少，血液鮮澤，免疫力恢復加強，諸證消減。
病理中樞支配於四肢的一些在同一節上或臨近幾節上的成對神經，長期缺失興奮，導致左右兩側相對應的神經根、節、梢的激動反射減退或消失，使其對應部失去了神經的營養保護和支配控制。形成對稱性的局部功能廢用病變，加之外來風、寒、溼、熱、毒及勞傷等因素而使症狀加重。
藥理M樣作用，傳出神經的興奮，反射引起傳入神經的運動，鍛鍊強壯了反射弧，使感受器和效應器所在的同一器官，形成持續不斷的興奮，使局部功能改善和恢復，抑制了器官組織的增生和萎縮，N2受體的激動，使手指、腳趾的背部肌及脊柱背部肌呈慢長的興奮收縮，帶動了所處部位的一系生理功能的恢復和加強，從而改善了症狀，消減了畸形。由於有以豎脊肌為主的背部肌的興奮收縮，此效應又可治療頸椎病、腰間盤突出和強直性脊柱炎等脊柱疾病。臨床治療類風溼性關節炎33例，其中15例輕型患者關節症狀解除，13例中度患者關節症狀基本消失，5例重度患者的關節畸形有不同程度的改善；系統性紅斑狼瘡3例，其中1例治癒，2例緩解；治療肌無力、進行性肌萎縮5例、下肢靜脈曲張20例、血栓閉塞性脈管炎5例、臁瘡5例、銀屑病15例、白癜風15例、鵝掌風6例均取得滿意療效。
治療高血壓、冠心病、高血脂、心腦血管病。膽鹼能神興奮、M樣作用，使腺體分泌增加，激素、神經遞質相對增多或減少，包括淋巴在內的組織液體增多，形成了體內神經調節和體液調節的良性循環，肌體內有毒物質的降低可消失，血質得到了改善，瘀質得到了消融，加之體內液體的增加，使血液呈現潤澤鮮新，又有血管的擴張，血液循環的順暢，血不妄行，出血症停止，血液病得到緩解和控制，通過血質改善，血管擴張，利尿效應，可使血壓下降。M效應使冠狀動脈舒張，心率安撫在80次/min左右的水平上，減輕了心臟負荷，改善了心肌缺血、缺氧的症狀。
益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼能夠改善心肌供血，降低高血壓、降低血粘度、抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓、增強纖溶作用。心肌保護作用大量自由基的產生及其所引發的脂質過氧化反應是心肌缺血再灌注損傷的主要機制，通過結紮家兔冠狀動脈造成心肌缺血，20min後開始靜滴益母草活性成分注射液，治療10min後與對照組比較，發現益母草可顯著降低心肌組織丙二醛(MDA)含量，增強超氧化物歧化酶(SOD)和穀胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性，改善心電圖的缺血表現。表明益母草提取物活性成分可以保護抗氧自由基酶系統的活性，抑制心肌缺血再灌注時的脂質反應，減輕過多氧自由基所致的心肌細胞損害。
臨床使用益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼對高血壓治療，共治214例，其中一期高血壓病134例、二期高血壓病52例，三期高血壓28例，結果各期顯效分別為132例、40例、21例；有效分別為2例、10例、4例，無效分別為0例、2例、3例。有效率分別為100％，96％，89％。以上結果表明，該療法對各期高血壓均有較好療效。並能緩解心絞痛，降低血粘度用益母草提取物活性成分治療血液高血粘症患者105例，臨床症狀如頭暈、頭痛、失眠及肢體麻木感多數得到緩解。血液流變學指標如全血比粘度(高切及低切)、全血還原比粘度(低切)粘度指數，全血還原比粘度(高切)，紅細胞變形能力TK值，血小板聚集率，纖維蛋白原含量及紅細胞電泳時間均有明顯改善，治療前後差異顯著(P＜0.05)。
抑制血小板聚集，抗凝，抗血栓形成，在體外觀察益母草提取物活性成分對抗血小板聚集作用實驗結果表明，益母草提取物活性成分能維持燙傷大鼠血小板聚集比值於正常範圍，而對照組比值明顯減低；在冰敷應激實驗中，預注益母草生物鹼，大鼠心肌小血管血小板聚集物出現率明顯減少。預注益母草生物鹼後的大鼠再滴注二磷酸腺苷(ADP)，其血液中和肺泡壁毛細血管內血小板及其聚集物出現率明顯減少。
另外益母草提取物活性成分還有增強纖溶作用，從而抑制血栓形成。用本發明益母草提取物活性成分製劑餵飼大鼠，然後從頸總動脈放血進行血液凝固性測定，結果表明上述製劑可抑制血小板功能，降低內、外凝血功能，促進纖溶活性3個環節抑制體外血栓的形成。在用尿激酶型纖溶酶原激活劑(u-PA)、組織型纖溶酶原激活劑(t-PA)激活纖溶酶原的纖溶實驗中，觀察了20餘味常用活血化瘀中藥對纖溶的影響，結果顯示益母草提取物的纖溶活性最強。
治療再生障礙性貧血、紫癜及彌散性血管內凝血預防。本發明益母草提取物活性成分的M樣作用，具有改善血質，血液循環，提高機體免疫能力，有效控制因其所致皮膚、黏膜及內臟出血症狀。N樣作用使以豎脊肌為主的背肌興奮收縮，使脊柱、神經中樞和脊髓形成一系列的功能改善，使造血幹細胞功能恢復和加強。M樣的血質改善，減少紫癜的發生。在臨床治療應用中，用本發明藥物共治療再生障礙性貧血20例，有17例痊癒，2例明顯好轉，無效1例，有效率為95％，治癒率為85％。臨床治療紫癜60例，紫癜現象均消失。對彌散性血管內凝血(DIC)預防，通過3年內對1000餘例節育外科手術臨床應用，在手術前三天服用本發明藥物，手術間未出現一例DIC症狀。
治療月經不調病益母草提取物作為乙醯膽鹼酯酶抑制劑的應用，具有較強興奮子宮的作用，，能增強子宮收縮幅度、頻率及張力。益母草提取物的活性成分可使大鼠動情前期的大鼠離體子宮，從小振幅不規則的自發性收縮變為大振幅的規律收縮，收縮可持續數小時，但衝洗後可恢復。膽鹼能神經的興奮可增強人體最大的腺體肝臟的分泌功能加強，使其生物轉化率提高，促進體內有毒物質的毒性減弱及排洩速度，這樣一來，血液中的毒素、雜質減少，加之包括血液在內的某些部位的液體增多，使血質改善，血液呈現鮮澤無瘀，加之血管擴張、血液循環順暢，經期腹痛減輕或消失，子宮平滑肌的功能健康收縮，抑制了子宮內膜毛細血管的通透性，使離經之血呈現不多不少，形成量的適中。
治療腫瘤、白血病在臨床中有一例背部靠脊處長了十餘年有雞蛋大的瘤體，服用益母草提取物兩周後，瘤體縮小三分之一左右並變軟，服用二月後瘤體基本消失。一例老年男性右眉稜骨上長了七年多的有桌球大的瘤體，服用益母草提取物茺蔚油每日2次，每次2ml，5日後逐漸減量服用，二月後瘤體消失。臨床應用於10例白血病的治療，可有效控制出血，症狀改善。通過採用益母草提取物茺蔚油、益母膏對30例惡性腫瘤臨床治療觀察(其中胃癌10例、肺癌5例、肝癌5例、乳腺癌6例、子宮癌4例)，其結論如下(1)這種治療腫瘤的藥物製劑具有較強的抑瘤作用，本組病例多為晚期，有效率(PR+mR)達42.9％，說明了抑制了腫瘤的增長，如療程延長，療效可增加。
(2)可明顯改善患者的自覺症狀，乏力、納差症狀緩解率為73.5％對照組相比，有明顯差異。
(3)有明顯的免疫調節作用，增加患者自抗病瘤能力。
藥理分析(1)乙醯膽鹼濃度升高，同時M效應又使包括垂體、腎上腺髓質在內的所有腺體分泌的激素與Ach成正常比例的相應增加或減少，從而達到了激素、神經遞質對細胞作用的對立統一平衡，加強了神經對細胞的保護及控制權，從而使細胞的變異和突變概率降低。(2)細胞受體的配體間的相對平衡，又可抑制癌細胞的分泌物對正常細胞的浸潤，從而減弱癌的擴散速度。(3)腺體分泌活動的增強和平滑肌及骨骼肌的長期不斷興奮收縮，從物理角度也來減排了佔位物的空間，抑制了腫瘤的發展。(4)通過神經調節和體液調節及自身調節的完善，使肌體內環境的穩態鞏固和加強，使免疫力增強，體內毒素降低減少，從根本上抵制了腫瘤的發生。
治療B型肝炎、黃膽性肝炎、肝硬化。臨床上本發明藥物具有對人體機體調節的作用，通過用3H-胸腺嘧啶摻入法表明，益母草提取物活性成分對由刀豆球蛋白A(conA)活化的小鼠T淋巴細胞有較強的促進增殖作用，其作用是單獨使用conA的5～8倍，表明能夠增強肌體的細胞免疫功能。加之本發明藥物的M樣作用，使肝腺體分泌增多，肝功能得到改善和加強，促進了其排毒、代謝、生物轉化速度和強度，改善了血質、血液循環，降低了門靜脈高壓、肝胰壺腹括約肌的舒張、減少膽汁瘀阻，便於膽汁排出；肝功能改善，促使B肝的e抗體較早出現，轉陰率上升，同時膽鹼物質又能抵制肝脂肪變性，利尿作用又可消除肝硬化腹水，因此具有治療和預防B型肝炎、肝硬化疾病。臨床治療B型肝炎50例、黃膽性肝炎73例、肝硬化21例，均取得較好療效。
治療青光眼、白內障、眼底出血症、耳鳴、耳聾、脫髮。對青光眼患者36例進行治療，口服本發明藥物療程15天，顯效的有33例，有效的3例，無降壓的0例，有效率達100％。白內障30例，11例痊癒，16例症狀改善，3例無效。對13例眼底出血患者的治療觀察，均能在20天左右基本消除症狀。本發明藥物的神經調節作用可對功能性耳鳴、耳聾具有顯著治療作用，在臨床中治療53例，其自覺症狀均基本消失。對脂溶性脫髮、神經性脫髮、營養性脫髮有明顯的抑制作用，其機理為以枕額肌為主的頭部骨骼肌收縮牽拉帽狀腱膜引起頭皮緊密度增強，增強局部營養物質利用，以及脾的功能改善加強，與所處脾內的生發中心的功能發揮增強有關。通過對眼的M樣作用及維生素A類物質的作用可使眼壓降低，加快眼的新陳代謝，促進眼底瘀血吸收，達到視力恢復和加強。
治療腎炎、尿毒症。M樣作用，血管擴張使腎毛細血管暢通，腎小球濾過率加大，加之膀胱的利尿作用，而使尿液排洩順暢，水腫消退。腺體分泌致肝功能旺盛，肝血改善，促使進入腎臟的血液毒素降低，從而減少毒性物質對腎臟的刺激和破壞，同時交感神經的節後纖維興奮、激發恢復腎功能，抵制了尿毒症。益母草提取物對初發期急性腎小管壞死(ATN)有一定的防治作用；在慶大黴素所致急性腎功能衰竭發生、發展中對腎臟具有保護作用；對甘油生理鹽水引起的家兔急性腎功能衰竭有明顯增加腎皮質血流量作用，改善腎臟功能，減輕或恢復腎小管細胞的變性、渾濁腫脹等病理改變，以肌酐(cr)、尿素氮(BCIN)、濾過鈉排洩分數(EFNC)腎血流量(RBF)及動物存活情況作為觀察指標，證明益母草提取物活性成分治療腎炎、尿毒症及腎功能衰竭具有顯著效果。臨床用本發明藥物共治療72例，其中男性39例，女性33例，年齡為6-81歲，年齡在50歲以上者47例，效果如下慢性腎炎43例，其中男25例，女18例，有效及顯效42例，無效1例；急性腎炎23例，其中男15例，女8例，一個療程(15天)治癒8例，二個療程治癒11例，三個療程治癒4例；尿毒症7例，其中男5例，女2例，治癒3例，好轉2例，效果不明2例。以上數據說明本發明益母草提取物治療急慢性腎炎和尿毒症的總有效率為95.83％。
治療前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大。本發明藥物的M樣作用，可使前列腺功能分泌加強，腺體平滑肌的興奮收縮，抑制了前列腺增生，肥大，改善和消除因此而引起的一系列排尿異常等症狀。
用上述藥物對前列腺炎和前列腺增生進行一個療程治療後，56例中近期痊癒19例，顯效29例，有效7例，無效2例，總有效率96.43％。期間所有病例在治療前後均進行了B超檢查，以確定前列腺大小(cm3)、殘餘尿量(ml)的變化情況。結果顯示，前列腺體積的縮小與殘餘尿量的減少與治療前對比有明顯差異(P＜0.01)。具體結果見下表

從臨床治療表明益母草提取物對前列腺炎和前列腺增生、肥大均具有顯著的療效，可以減輕炎症反應，抑制纖維組織增生，增加局部血液流量，明顯改善患者的臨床症狀，並具有縮小前列腺體積，改善排尿一系列症狀。
治療尿崩症、糖尿病。病例尿崩症藥理M樣作用，以唾液腺為主的上部腺體分泌增多、口不渴。胃腸平滑肌的持續不斷興奮收縮，致胃腸空間縮小，物理性抑制進食量，腎髓質分泌功能恢復和加強，可使腎小管濃縮功能恢復和改善，加之垂體的激素分泌的平衡調節，均可使尿崩症及糖尿病的尿量減少；植物神經節興奮，恢復提高胰島素所作用的靶細胞的效應功能，副交感神經的節後纖維興奮、促進胰島素的分泌，提高糖吸收利用率；N2受體興奮，糖尿病所致的肌肉麻痺消退，肢體感覺恢復；M樣作用可使糖尿病所致的眼力恢復。
典型病例一中年女性在下樓時，不慎踩空並翻轉懸掛在樓梯護欄的外面，幾分鐘後自行解救，一周後出現大渴大飲，白天喝四、五茶瓶水，夜間喝三、四茶瓶水，精神萎靡不振，舌苔逐漸變黑變厚，每頓吃流質飯一小碗，幾個月不吃鹹飯，但每天需吃大量水果，經多種檢查無結果，跑多家醫院治療無效，延至半年多，服此藥十餘日，病情基本痊癒。臨床中用本發明藥治療尿崩症7例，治癒3例，顯效3例，效果不確切1例。
服用本發明藥物在臨床上治療糖尿病的中試驗結果

試驗統計表明用本發明的藥劑對100名糖尿病患者作治療試驗，取得顯著療效的佔74％，基本有效的佔23％，無效的佔3％，總有效率97％。
治療胃下垂、子宮脫垂、眼瞼下垂下垂病症多因韌帶鬆弛或肌肉張力降低造成的，中醫認為，系中氣不足，氣虛下陷所致。本發明的藥物的M樣作用，可使胃平滑肌收縮，子宮平滑肌收縮及眶上、下神經興奮、神經調節功能恢復正常，器官組織恢復原位。臨床治療33例胃下垂、27例子宮脫垂、9例眼瞼下垂。均使下垂器官和組織完全或基本完全復位。
治療甲亢、脾亢疾病本發明藥物通過神經調節和體液調節，對甲狀腺與甲狀旁腺所分泌的激素和功能形成相互制約平衡，、抑制亢進，扶持低下，正向調節，作用雙重，達到降低由甲狀腺素引起的高代謝率及突眼症狀，M樣作用又使脾平滑肌興奮收縮，抑制了脾臟腫大，通過體液調節，淋巴液生成增多，改善和恢復了脾的正常功能，提高脾的免疫應答能力，解除脾內血小板聚積及因此發生的自身免疫性的出血反應。臨床治療70例甲亢，11例脾亢，均取得顯著效果。從上述結果，可以得出本發明的優點在於1、本發明對所述的益母草提取物茺蔚油、益母草膏、益母草糖漿、益母草衝劑、益母草口服液、益母草膠囊發掘出了新的醫療用途，開拓了一個新的應用領域。
2、益母草提取物的活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼均屬於乙醯膽鹼酯酶抑制藥，安全無毒，藥理作用強，預示著很好的藥用前景。
3、本發明物質原料來源豐富、價廉，製備工藝簡單，並可製成口服劑型、糖漿劑、針劑型、片劑、膠囊型、油劑等，使用方便。
4、本發明物質配製成的藥物具有顯著的擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，可以治療和預防早老性痴呆、癔病、精神分裂症、類風溼性關節炎銀屑病、白癜風、鵝掌風、系統性紅斑狼瘡、、高血壓、心腦血管病等多種病症。
5、本發明物質作為食用油添加劑，能補充人體所需的多種微量元素和維生素類物質，與各種油脂能完全相溶，油內所含有效活性成分不易被高溫破壞，具有味香、口感好，適於藥食兩用。具有明目、榮發、抑制耳鳴、縮小眼袋、逆轉生理性駝背、抑制胃腸、子宮等器官的鬆弛，能正向調節人體功能，提高食物消化利用率、提高人的認知記憶能力，增強人體免疫能力，改善亞健康狀態，延緩衰老，健美強壯，提高人類健康水平。


圖1為益母草水提取物對hAChE表現出的抑制百分率圖2為益母草活性成分對hAChE抑制作用的百分率圖3為益母草寧鹼對hAChE和hBChE的抑制百分率圖4為益母草鹼對AChE和BChE的抑制百分率圖5為益母草總鹼對AChE和BChE的抑制百分率圖6為益母草鹼甲對AChE和BChE的抑制百分率圖7為水蘇鹼對AChE和BChE的抑制百分率圖8益母草提取物活性成分對NIE-115的MTT細胞毒性檢測圖9益母草提取物活性成分對SHSY5Y的MTT細胞毒性檢測
具體實施例方式實施例1益母草水提取物的製備從市場藥店中購得益母草1000克，將益母草全草在3000ml蒸餾水中回流下煮45分鐘，過濾煮好的提取物，隨後將濾液進行冷凍乾燥，將粉末形式的冷凍乾燥物稱重50克。
實施例2益母草水提取物的製備市場中藥店中有銷售的益母草膏，將益母草膏溶解在蒸餾水中，攪拌，過濾，將濾液進行冷凍乾燥，即成益母草水提取物。
實施例3製備片劑使用益母草寧鹼0.5g，玉米澱粉95.5g，硬脂酸鎂4g，將所有組分混合均勻並製成100片。每片含有益母草寧鹼成分5mg。
實施例4製備片劑使用益母草鹼0.5g，玉米澱粉95.5g，硬脂酸鎂4g，將所有組分混合均勻並製成100片。每片含有益母草鹼成分5mg。
實施例5含有茺蔚油的膠囊的製備含有茺蔚油的膠囊製備，將益母草子(茺蔚子)壓榨出油，經過濾得茺蔚油，每個軟明膠膠囊內裝入1ml茺蔚油，製成茺蔚油膠囊。
實施例6益母草鹼硫酸鹽口服液(劑量同片劑)各原輔料配比以5mg/片為例益母草鹼硫酸鹽(按益母草鹼計算)5g，蔗糖100g，檸檬酸20g，香精適量，蒸餾水5000ml，製成1000支，取蒸餾水適量，將處方量的原輔料加入水中攪拌溶解，過濾，續濾液加蒸餾水到5000ml，加入香精，攪拌均勻，分裝，每支5ml，壓蓋，100℃，消毒1小時，檢查合格即得。
實施例7注射液(0.5、1、1.5、2.5、5、10、20mg/支)以下是以規格5mg/支為例益母草硫酸鹽(按益母草鹼計算)5g，注射用水5000ml，製成1000支。將處方量的益母草鹼硫酸鹽溶於注射用水中，加0.3％的針用活性炭，攪拌30分鐘，脫炭，除菌過濾(0.22μm微孔濾膜)，在無菌條件下分裝，熔封，每支5ml，100℃滅菌1小時，檢查，即得。
實施例8乾粉針(規格同注射液)各原輔料配比以5mg/支為例。益母草鹼硫酸鹽(按益母草鹼計算)5g，甘露醇95g，凍幹製成1000支。取處方量的益母草鹼硫酸鹽和甘露醇，加注射水適量溶解，控制pH值在4.0～6.5之間，加注射用水至1000ml，混勻，加0.3％的針用活性炭攪拌30分鐘，脫炭，除菌過濾(0.22μm微孔濾膜)，在無菌條件下分裝，每支1ml，冷凍乾燥成白色塊狀或粉末，即得。
實施例9作為食用油添加劑製作各原輔料配比茺蔚油10ml，食用油5000ml，將茺蔚油加入到食用油中進行攪拌，即成保健型食用油。
實施例10作為食用油添加劑製作各原輔料配比茺蔚油10ml，食用油300ml，將茺蔚油加入到食用油中進行攪拌，即成保健型食用油。
實施例11作為食用油添加劑製作各原輔料配比茺蔚油10ml，食用油500ml，將茺蔚油加入到食用油中進行攪拌，即成保健型食用油。
權利要求
1.益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於益母草提取物益母草衝劑、益母草膏、益母草糖漿劑、益母草口服液、益母草膠囊、茺蔚丸、茺蔚油、茺蔚散、茺蔚衝劑、茺蔚膏、茺蔚糖漿劑、茺蔚口服液、茺蔚膠囊、益母草注射液作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
2.根據權利要求1所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於所述益母草提取物中主要活性成分為益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其製藥可接受的鹽作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
3.根據權利要求1所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於益母草提取物中主要活性成分益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼的混合物或其製藥可接受鹽的混合物或該二者的混合物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
4.根據權利要求1所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於茺蔚子提取物茺蔚油中主要活性成分益母草寧鹼、水蘇鹼或其製藥可接受的鹽作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥。
5.根據權利要求1-4任意一項權利要求所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於所述益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制藥在製備治療和預防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、肌無力、進行性肌萎縮、下肢靜脈曲張、血栓閉塞性脈管炎、臁瘡、銀屑病、白癜風、鵝掌風、高血壓、冠心病、高血脂、心腦血管病、再生障礙性貧血、紫癜、彌散性血管內凝血、月經不調病、腫瘤、白血病、B型肝炎、黃膽性肝炎、肝硬化、青光眼、白內障、眼底出血症、耳鳴、耳聾、脫髮、腎炎、尿毒症、前列腺炎、前列腺增生、前列腺肥大、尿崩症、糖尿病、胃下垂、子宮脫垂、眼瞼下垂、甲亢、脾亢疾病的藥中的應用。
6.根據權利要求5所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於治療和預防疾病的藥的方法，包括對患者進行有效治療劑量的活性成分給藥，所述活性成分選自益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其混合物或其製藥可接受鹽的混合物或該二者的混合物。
7.根據權利要求6所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於所述活性成分為益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其混合物或其製藥可接受鹽的混合物或該二者的混合物同輔助劑製成片劑、膠囊、針劑、口服液、糖漿劑、散劑、膏劑、油劑。
8.根據權利要求6所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於有效治療劑量為所述的活性成分以每天0.005-0.4毫克/千克·天的劑量給藥。
9.根據權利要求6所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於益母草提取物茺蔚油或益母草提取物活性成分作為食用油添加劑加入到食用油中的應用。
10.根據權利要求9所述的益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的用途，其特徵在於所述添加劑與食用油的比例為1/5000～1/10。
全文摘要
本發明公開了益母草提取物作為擬膽鹼藥之乙醯膽鹼酯酶抑制劑藥物的新用途，該提取物的活性成分為益母草寧鹼、益母草鹼、益母草總鹼、益母草鹼甲、水蘇鹼或其混合物或其製藥可接受鹽的混合物或該二者的混合物，具有對乙醯膽鹼酯酶的抑制作用，用於治療和預防早老性痴呆、帕金森病、癔病、精神分裂症、類風溼性關節炎、系統性紅斑狼瘡、肌無力、進行性肌萎縮、下肢靜脈曲張、血栓閉塞性脈管炎、臁瘡、銀屑病、白癜風、鵝掌風、高血壓、冠心病、高血脂、心腦血管病、再生障礙性貧血、紫癜、彌散性血管內凝血、月經不調病等疾病的藥中的應用。
文檔編號A61P25/18GK1915292SQ20061010704
公開日2007年2月21日 申請日期2006年9月10日 優先權日2006年9月10日
發明者郝書平, 郝輝, 肖書雨 申請人:郝書平