一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法
2023-09-20 06:01:40
一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法，其製備樣品處理液：取肉樣2-4克於燒杯中，剪碎後加入重量為肉樣重量的20~40倍日蒸餾水，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置後取濾液作為樣品處理液；再取樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0.1-0.2ml，反應3min後放入儀器內檢測其吸光度；接著取樣品處理液2ml加入0.2-1%3，3』，5，5』-四甲基聯苯胺0.05-0.20ml，0.02%H2O20.05-0.15ml後，放入儀器內測其5min內吸光度的變化的情況，即記錄反應動力學曲線，並記錄最大值參數2max；通過參數2，及參數2max和參數1的比值。本發明把單一考察過氧化物酶活性與豬肉品質的相關性換成考察過氧化物酶活性、血紅蛋白含量及過氧化物酶活性兩者之間的關係與豬肉品質的相關性，進而實現快速、簡便的檢測肉類的品質。
【專利說明】一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法
【技術領域】
[0001] 本發明專利涉及可見分光儀器領域和食品安全快速檢測領域，具體涉及一種用於 病死豬肉監測的新型檢測方法。
【背景技術】
[0002] 目前現有檢測病死豬肉的技術主要有：一是感官檢測，主要通過對豬肉外觀包括 色澤、彈性、氣味等感官指標人為判斷其新鮮程度，方法雖然簡便易操作且成本較低，但受 人為主觀影響較大，缺乏充分科學依據，更因其對操作人員有較高要求，難以普及；二是PH 測定法，病死豬在後熟過程中，因生前能量的過度消耗，肌肉蓄積的乳酸和磷酸含量與健康 豬相比較低，pH較健康豬肉高，可以通過pH試紙或pH計測肉浸出液的pH值來判斷豬肉 的健康狀況，健康豬肉的PH值在5. 5-6. 5之間，但本法受外界幹擾較大(唐愛明，王輝，病、 死豬肉的檢驗與分析，畜產品與安全，2011年8月下刊，40-42)三是過氧化物酶反應法，過 氧化物酶活性水平是檢測肉類品質的重要指標，病、死豬體內過氧化物酶較少甚至沒有，但 本法受血紅蛋白幹擾較大，血紅蛋白由於其空間結構辣根過氧化物酶相似，可作為過氧化 物酶模擬酶，[CTAB對血紅蛋白仿過氧化物酶催化活性的影響，中國科技論文在線，2008年 9月第3卷第9期666-671]在一定條件下會產生相同的酶反應效果；四是硫酸銅沉澱法， 健康豬肉肉浸液中含有的離子正負電荷婁相同總電荷為0,肉浸液的pH值即為蛋白質等電 點。而病、死豬肉生前組織蛋白發生了一定程度分解，其分解產物如蛋白、多肽等以負電荷 形式存在，若向其中加入硫酸銅，其中的負電荷可以Cu 2+反應生成沉澱，但本方法需要前處 理較複雜且需要同時做對照實驗，結果不易判斷，無法達到快速普及的效果(孔憲琴、梁航、 黃素珍，病死豬肉的快速檢驗與處理，肉類研究，2008年第1期，59-62);五是細菌內毒素檢 驗法，通過對肉品中細菌產生的毒素的檢測來判定是否為病死肉，此法操作較複雜，其中的 微生物呈色反應更要求豬肉新鮮不能隔夜較難普及，另外此法只能簡單定性無法達到定量 的效果。
[0003] 病、死豬肉是指生豬在病死後沒有經過宰殺放血或放血不全，沒有經過獸醫檢疫 的豬肉產品。（唐愛明，王輝，病、死豬肉的檢驗與分析，畜產品與安全，2011年8月下刊， 40-42)病豬、死豬肉由於放血不完全會留存一些致病菌及毒素，人若食用後會對身體健康 產生不利影響。目前檢測豬肉品質中被廣泛接受的方法是過氧化物酶活性法，病豬、死豬肉 中過氧化物酶活性很低甚至沒有，而健康豬肉中過氧化物酶活性較高，此方法主要基於此 通過對肉品過氧化物酶活性間接對肉品進行判斷。這種方法雖然可以定量，但由於放血不 完全的豬肉內血紅蛋白含量較高，且血紅蛋白也有同樣的響應，在某些條件下血紅蛋白的 響應甚至更伏，會對本法產生嚴重幹擾，使檢測結果偏差較大，對色澤較深的肉影響更大。 冷凍後解凍的肉品因為組織中水分結冰後會破壞細胞結構，更易使血紅蛋白溶出，對反應 的幹擾較大。
[0004] 因此，找到一種可以避免或排除血紅蛋白幹擾的方法對檢測病死豬肉有重要意 義。
【發明內容】
[0005] 本發明的目的是提供一種可以避免或排除血紅蛋白幹擾的用於病死豬肉監測的 新型檢測方法。
[0006] 為實現上述目的，本發明的解決方案是： 一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法，其具體步驟為： 步驟1、製備樣品處理液：取肉樣2-4克於燒杯中,剪碎後加入蒸饋水,蒸饋水重量為肉 樣重量的2(Γ40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置後過濾，取濾液作為樣品處 理液； 步驟2、檢測參數1 :取步驟1的樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應3min 後放入儀器內檢測其吸光度； 步驟3、檢測參數2 :取步驟1的樣品處理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基聯 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml後，放入儀器內測其5min內吸光度的變化的情 況，即記錄反應動力學曲線，並記錄最大值參數2_ ; 步驟4、通過參數2 (吸光度的變化情況，即酶反應動力學曲線)，及參數2max和參數1 的比值，利用儀器自動判斷肉的品質。
[0007] 採用上述方案後，本發明把原來獨立的兩個指標結合起來一起考慮，即把單一考 察過氧化物酶活性與豬肉品質的相關性換成考察過氧化物酶活性、血紅蛋白含量及過氧化 物酶活性兩者之間的關係與豬肉品質的相關性，進而實現一種快速、簡便的檢測肉類品質 的方法，並且可以有效避免或排除血紅蛋白幹擾，利用本算法，操作簡便，可較快速對肉的 品質進行判斷。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0008] 圖1為本發明方法監測豬肉過氧化物酶活力的曲線圖。
【具體實施方式】
[0009] 以下結合附圖及實施例對本發明進行詳述： 實驗材料 病害豬肉樣品：某養豬廠取得的病死小豬，按正常豬肉屠宰方式屠宰切割，取豬前腿肉 部分作為樣品，若未用完室於冰箱冷凍層保存備用，取35份不同樣品，其中25份作為樣本 集，10份作為校正集； 健康豬肉樣品：經檢疫合格的豬肉，取豬前腿肉部分作為樣品，若未用完室於冰箱冷凍 層保存備用，取35份不同樣品，其中25份作為樣本集，10份作為校正集； 樣品前處理：取檢測肉樣，表層與深層各取一塊約25-35g，去除脂肪及筋腱部分，用樣 品剪剪碎後充分混勻，加入150-250g純淨水後放入超聲波提取儀中5-15min，靜置後過濾 取濾液作為樣品處理液備用。
[0010] 本法主要包括以下步驟： (1)製備樣品處理液：取2-4克肉樣於燒杯中，剪碎後加入蒸饋水，蒸饋水重量為肉樣 重量的2(Γ40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置後過濾，取濾液作為樣品處理 液； (2)檢測參數I :取樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應3min後放入儀器 內檢測其吸光度。
[0011] (3)檢測參數2:取樣品處理液2ml，加入0.2-1% 3,3'，5,5'-四甲基聯苯胺 0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml後，放入儀器內測其5min內吸光度的變化的情況，即 記錄反應動力學曲線，並記錄最大值參數2_。
[0012] (4)通過參數2 (吸光度的變化情況，即酶反應動力學曲線)，及參數2_和參數1 的比值，利用儀器自動判斷肉的品質。
[0013] 圖1中所示為豬肉過氧化物酶活力曲線，其中細實線曲線為色澤較深的病死豬肉 的酶活力曲線，粗實線為正常豬肉的酶活力曲線，虛線為色澤正常病死豬肉酶活力曲線， 可以看出病死豬肉酶活動力曲線有兩種情形：1是加入試劑後迅速達到活力峰值並迅速減 弱，2是一直較平穩且活力較低。而正常豬肉的酶活力則是慢慢增加且能達到較高水平。原 因是血紅蛋白也會有過氧化物酶的活性幹擾測定結果。
[0014] 表1樣本集數據結果
【權利要求】
1. 一種用於病死豬肉監測的新型檢測方法，其具體步驟為： 步驟1、製備樣品處理液：取肉樣2-4克於燒杯中,剪碎後加入蒸饋水,蒸饋水重量為肉 樣重量的20~40倍，放入超聲波提取儀中超聲15-20分鐘，靜置後過濾，取濾液作為樣品處 理液； 步驟2、檢測參數1 :取步驟1的樣品處理液2ml加入2-5%乙酸0. 1-0. 2ml，反應3min 後放入儀器內檢測其吸光度； 步驟3、檢測參數2 :取步驟1的樣品處理液2ml加入0. 2-1% 3, 3'，5, 5' -四甲基聯 苯胺0. 05-0. 20ml，0. 02% H2O2 0. 05-0. 15ml後，放入儀器內測其5min內吸光度的變化的情 況，即記錄反應動力學曲線，並記錄最大值參數2_ ; 步驟4、通過參數2,及參數2max和參數1的比值，利用儀器自動判斷肉的品質。
【文檔編號】G01N21/31GK104316477SQ201410538045
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年10月13日 優先權日:2014年10月13日
【發明者】柯慧賢, 李娟 , 周曉芳, 林建鵬 申請人:廈門斯坦道科學儀器股份有限公司