前列腺癌標誌物lncRNAMALAT-1及其應用的製作方法
2023-09-20 02:07:30 2
前列腺癌標誌物lncRNA MALAT-1及其應用的製作方法
【專利摘要】本發明公開了長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA，lncRNA)MALAT-1及其作為前列腺癌標誌物的應用、以及在製備用於檢測前列腺癌的晶片或製劑或試劑盒中的應用。
【專利說明】前列腺癌標誌物IncRNA MALAT-1及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬於分子生物學領域，具體地，本發明涉及尿液長鏈非編碼IncRNA MALAT-I及其作為前列腺癌標誌物的應用。
【背景技術】
[0002] 前列腺癌（Prostatic Cancer，PCa)是一種嚴重威脅男性健康的惡性腫瘤，其發病 及死亡率高峰在70歲左右，佔全球腫瘤發病率第二位、死亡率第六位。我國PCa的發病率 近年來一直處於顯著的上升趨勢。在北京、上海、廣州等醫學、經濟發達城市，PCa發病率已 位於當地十大常見腫瘤之列。來自上海市疾病控制中心的資料進一步顯示，PCa的發病率 自2002年起已躍居男性泌尿生殖系惡性腫瘤的首位，從1990年2. 6/10萬上升到2009年 32. 23/10萬，躍居男性惡性腫瘤的第5位。流行病學數據還顯示，中國PCa發病率已從1993 年的1. 71/10萬男性人口增加到2005年的7. 9/10萬男性人口，年增幅13%。
[0003] PCa-旦突出包膜就失去了根治的機會，其生存時間大大下降，因此，PCa的早期 診斷就顯得尤為重要。血清PSA檢測是目前應用最為廣泛的PCa早期診斷分子標誌物，它的 應用大大降低了 PCa特異性死亡。但是，PSA是前列腺特異性而非PCa特異性分子標記物， 諸如前列腺炎、良性前列腺增生等都能引起PSA的升高。在PSA的"診斷灰區"(PSA4-10ng/ ml)，其診斷陽性率僅為25-40%，這就導致了眾多的不必要的穿刺，同時，也給穿刺患者帶 來了經濟負擔和精神負擔。所以，臨床上亟需找到更具敏感性和特異性的分子標誌物。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的為提供一種前列腺癌標誌物IncRNAMALAT-I及其應用，即尿液長鏈 非編碼IncRNA MALAT-I作為前列腺癌標誌物的應用。
[0005] 在本發明的第一方面，提供了一種分離的lncRNAMALAT-1，所述IncRNAMLAT-I序 列為MALAT-I的全長或其片段。所述IncRNA MALAT-I序列如SEQ ID NO :1所示，其基因 ID 為FR077061 ;GenBank :BK001418. 1 ;其全長序列資料庫連結為：
[0006] http： //www. ncbi. nlm. nih. gov/nuccore/BK001418g￡
[0007] http://www.ncrna.org/frnadb/detail.html? i name= FR077061&i tab = seq〇
[0008] 本發明中，所述IncRNA MALAT-I序列為MALAT-I的全長或其片段；所述片段包括 IncRNA的任意一個PCR片段，該任意一個PCR片段為PCR反應產物，因不同的PCR引物可獲 得不同的PCR產物。
[0009] SEQ ID NO : 1 為：
[0010] GATCAGAGTGGGCCACTGCCAGCCAACGGCCCCCGGGGCTCAGGCGGGGAGCAGCTCTGTGGTGTGGGA TTGAGGCGTTTTCCAAGAGTGGGTTTTCACGTTTCTAAGATTTCCCAAGCAGACAGCCCGTGCTGCTCCGATTTCTC GAACAAAAAAGCAAAACGTGTGGCTGTCTTGGGAGCAAGTCGCAGGACTGCAAGCAGTTGGGGGAGAAAGTCCGCCA TTTTGCCACTTCTCAACCGTCCCTGCAAGGCTGGGGCTCAGTTGCGTAATGGAAAGTAAAGCCCTGAACTATCACAC TTTAATCTTCCTTCAAAAGGTGGTAAACTATACCTACTGTCCCTCAAGAGAACACAAGAAGTGCTTTAAGAGGCGGC GGAAGGTGATCGAATTCCGGTGATGCGAGTTGTTCTCCGTCTATAAATACGCCTCGCCCGAGCTGTGCGGTAGGCAT TGAGGCAGCCAGCGCAGGGGCTTCTGCTGAGGGGGCAGGCGGAGCTTGAGGAAACCGCAGATAAGTTTTTTTCTCTT TGAAAGATAGAGATTAATACAACTACTTAAAAAATATAGTCAATAGGTTACTAAGATATTGCTTAGCGTTAAGTTTT TAACGTAATTTTAATAGCTTAAGATTTTAAGAGAAAATATGAAGACTTAGAAGAGTAGCATGAGGAAGGAAAAGATA AAAGGTTTCTAAAACATGACGGAGGTTGAGATGAAGCTTCTTCATGGAGTAAAAAATGTATTTAAAAGAAAATTGAG AGAAAGGACTACAGAGCCCCGAATTAATACCAATAGAAGGGCAATGCTTTTAGATTAAAATGAAGGTGACTTAAACA GCTTAAAGTTTAGTTTAAAAGTTGTAGGTGATTAAAATAATTTGAAGGCGATCTTTTAAAAAGAGATTAAACCGAAG 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GATCAGTTATGGGACAATAGTATTGAATAGATTTCAGCTTTATGCTGGAGTAACTGGCATGTGAGCAAACTGTGTTG GCGTGGGGGTGGAGGGGTGAGGTGGGCGCTAAGCCTTTTTTTAAGATTTTTCAGGTACCCCTCACTAAAGGCACCGA AGGCTTAAAGTAGGACAACCATGGAGCCTTCCTGTGGCAGGAGAGACAACAAAGCGCTATTATCCTAAGGTCAAGAG AAGTGTCAGCCTCACCTGATTTTTATTAGTAATGAGGACTTGCCTCAACTCCCTCTTTCTGGAGTGAAGCATCCGAA GGAATGCTTGAAGTACCCCTGGGCTTCTCTTAACATTTAAGCAAGCTGTTTTTATAGCAGCTCTTAATAATAAAGCC CAAATCTCAAGCGGTGCTTGAAGGGGAGGGAAAGGGGGAAAGCGGGCAACCACTTTTCCCTAGCTTTTCCAGAAGCC TGTTAAAAGCAAGGTCTCCCCACAAGCAACTTCTCTGCCACATCGCCACCCCGTGCCTTTTGATCTAGCACAGACCC TTCACCCCTCACCTCGATGCAGCCAGTAGCTTGGATCCTTGTGGGCATGATCCATAATCGGTTTCAAGGTAACGATG GTGTCGAGGTCTTTGGTGGGTTGAACTATGTTAGAAAAGGCCATTAATTTGCCTGCAAATTGTTAACAGAAGGGTAT TAAAACCACAGCTAAGTAGCTCTATTATAATACTTATCCAGTGACTAAAACCAACTTAAACCAGTAAGTGGAGAAAT AACATGTTCAAGAACTGTAATGCTGGGTGGGAACATGTAACTTGTAGACTGGAGAAGATAGGCATTTGAGTGGCTGA GAGGGCTTTTGGGTGGGAAT GCAAAAATTCTCTGCTAAGACTTTTTCAGGTGAACATAACAGACTTGGCCAAGCTA GCATCTTAGCGGAAGCTGATCTCCAATGCTCTTCAGTAGGGTCATGAAGGTTTTTCTTTTCCTGAGAAAACAACACG TATTGTTTTCTCAGGTTTTGCTTTTTGGCCTTTTTCTAGCTTAAAAAAAAAAAAAGCAAAAGATGCTGGTGGTTGGC ACTCCTGGTTTCCAGGACGGGGTTCAAATCCCTGCGGTGTCTTTGCTTTGACTACTAATCTGTCTTCAGGACTCTTT CTGTATTTCTCCTTTTCTCTGCAGGTGCTAGTTCTTGGAGTTTTGGGGAGGTGGGAGGTAACAGCACAATATCTTTG AACTATATACATCCTTGATGTATAATTTGTCAGGAGCTTGACTTGATTGTATATTCATATTTACACGAGAACCTAAT ATAACTGCCTTGTCTTTTTCAGGTAATAGCCTGCAGCTGGTGTTTTGAGAAGCCCTACTGCTGAAAACTTAACAATT TTGTGTAATAAAAATGGAGAAGCTCTAAATTGTTGTGGTTCTTTTGGAATAAAAAAATCTTGATTGGGAAAAAAGAT GGGTGTTCTGTGGGCTTGTTCTGTTAAATCTGTGGTCTATAAACACAGCACCCATAATTACAGCATAATCTTCAAGT AGGGTACGGACTTTGGGGGATTGGTGCGAGGGTAGTGGGTGAGTGGCCTACTAAAAAGCCCAGTAACCCCCACAGGA AAATAGGGAACTTCTTTTTAAGTAGCCTCCTTTCCACTATTTAGTAATTGGCTGTGAGCTGGGCTGGGGGAGAAATG GGGCGGGGTGTGTGTGTCATTGGAAAGCTCTCTTTTTTGTTTTTTTGAGACAGTCTCACTTTGTCCCCCAGGCTGGA GTGTAGTGGCATGATCTCTGCAAACTGCAACCTCCACTTGTGGGGTCCAAGTGGTTGTCCTGCTTCACCCTCCCTGT AGCTGGGACTACAGGTGCACACCACCACGCCTGGCTAATTTTTGTATT
[0011] 在另一優選例中，所述IncRNA MLAT-I分離自人的尿液。
[0012] 在另一優選例中，所述尿液為前列腺按摩後尿液。所述尿液還包括非前列腺按摩 後尿液。
[0013] 在另一優選例中，所述IncRNA MALAT-I提取自尿液離心後的尿沉渣。
[0014] 在本發明的第二方面，提供了一種分離的MALAT-I前體IncRNA，所述的前體 IncRNA能在人細胞內剪切並表達成第一方面所述的IncRNA MALAT-1。
[0015] 在另一優選例中，所述的MALAT-I前體分離自人前列腺按摩後尿液，還可以分離 自非前列腺按摩後尿液。
[0016] 在本發明的第三方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述多核苷酸能被人細胞轉 錄成第一方面所述的IncRNA MALAT-I。
[0017] 在另一優選例中，所述的多核苷酸具有試（I)所示的結構：
[0018] Seq正向-X-Seq反向式（I)，
[0019] 式（I)中，
[0020] Seq1自為能在人細胞中表達成所述的MALAT-I的核苷酸序列；
[0021] Seqfi自為與Secte自基本上互補或完全互補的核苷酸序列；
[0022] X為位於Seq正向和Seq反向之間的間隔序列，並且所述間隔序列與Seq正向和Seq反向 不互補；
[0023] 並且，式⑴所示的結構在轉入人細胞後，形成式（II)所示的二級結構：
[0024]
【權利要求】
1. 一種分離的IncRNA MALAT-1，其特徵在於，其序列如SEQ ID勵：1所示；所述1此題八 MALAT-1為MALAT-1的全長或其片段。
2. 如權利要求1所述的IncRNA MALAT-1，其特徵在於，所述IncRNA MALAT-1分離自人 的尿液。
3. -種分離的多核苷酸，其特徵在於，所述多核苷酸能被人細胞轉錄成權利要求1所 述的 IncRNA MALAT-1。
4. 一種載體，其特徵在於，其含有權利要求1所述的IncRNA MALAT-1或權利要求3所 述的多核苷酸。
5. 權利要求1所述的IncRNA MALAT-1在製備前列腺癌標誌物中的應用。
6. 權利要求1所述的IncRNA MALAT-1在製備用於檢測前列腺癌的晶片、製劑或試劑盒 中的應用。
7. -種晶片、製劑或試劑盒，其特徵在於，其含有如權利要求1所述的IncRNA MALAT-1 或如權利要求3所述的多核苷酸。 8?-種IncRNA MALAT-1晶片，其特徵在於，所述IncRNA MALAT-1晶片包括： 固相載體；以及有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針特異 性地對應於權利要求1所述IncRNA MALAT-1所示的部分或全部序列。
9. 權利要求7所述的IncRNA MALAT-1晶片在製備用於檢測前列腺癌的試劑盒中的應 用。
10. 如權利要求9所述的應用中，其特徵在於，通過IncRNA MALAT-1晶片檢測待測對象 的尿液中的IncRNA MALAT-1含量；所述檢測步驟包括：先獲得分離自待測對象尿液的RNA 樣品，在所述RNA上設置標記物，將其與所述IncRNA MALAT-1晶片接觸，雜交形成寡核苷酸 探針-RNA二元複合物，檢測得到IncRNA MALAT-1含量。
11. 一種試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒中含有權利要求8所述的IncRNA MALAT-1芯 片。
【文檔編號】C12N15/63GK104498495SQ201410674678
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月21日 優先權日:2014年11月21日
【發明者】孫穎浩, 任善成, 王富博 申請人:上海長海醫院