一種雷帕黴素眼用微乳注射劑及其製備方法和應用的製作方法

2023-08-13 12:51:31 1

專利名稱：一種雷帕黴素眼用微乳注射劑及其製備方法和應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於製藥領域，具體涉及一種雷帕黴素眼用微乳注射劑及其製備方法和 應用。
背景技術：
致盲性眼病是WHO評定的第三大影響人類的疾病，而其中最重要的是視網膜變 性疾病。視網膜變性是一大組以進行性感光細胞喪失為共同特徵的疾病，其中又分由明 顯遺傳缺陷引起的遺傳性視網膜變性疾病和由多因素引發的複雜視網膜變性疾病。老年 黃斑變性(Age-related Macular Degeneration，AMD)是最常見的複雜視網膜變性疾病，特 別是隨著人口老齡化，其發病率不斷提高僅在美國就有超過1000萬患者。AMD可以由 遺傳相關因素，吸菸，氧化損傷和線粒體缺陷等年齡相關因素引發，患者由於視網膜黃 斑區的感光細胞喪失而嚴重影響視力乃至失明。由於AMD發病機制多樣複雜，臨床表 型多樣複雜，並且感光細胞喪失具有不可逆性，因此目前無任何有效藥物治療。由此可 見，找到一個AMD根本的通用的發病機制，並且開發針對性的藥物來抑制感光細胞喪失 過程是治療此類疾病的最可能成功的手段。視網膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)對神經視網膜特別是感光細胞
具有一系列功能。當在RPE內表達的基因發生突變(如RPE65，LRAT等)時，會引 起各種遺傳性視網膜變性疾病。所有，RPE的正常功能對感光細胞的功能和數量具有至 關重要的意義。同樣，在絕大多數的AMD患者中，由氧化損傷和線粒體缺陷等引起的 RPE損害是疾病的原發病變，而感光細胞的丟失是繼發的。然而，在本研究之前，關於 RPE對各種損害的原發分子病理反應和病變過程世界上鮮有報導。Rapamycin又名sirolimus，中文譯名為雷帕黴素或西羅莫司，目前，其口服片
/劑雖已應用，但其臨床應用完全是以抑制器官移植後的免疫排斥和治療部分腫瘤為目 的。由於眼球自身血-眼屏障和角膜屏障等解剖特點，全身用藥達到有效血藥濃度時， 眼內藥物濃度幾近微量，無法達到有效的藥物濃度和持續時間。新近的Rapamycin眼藥 膏的基礎研究是針對角膜移植後的排斥反應，而根據眼球對藥物的吸收原理，滴眼液給 藥或眼藥膏給藥可產生眼前部組織中(角膜、結膜、鞏膜、房水、睫狀體)的藥物比眼後 部組織(晶狀體、玻璃體、視網膜)濃度高。因此，Rapamycin眼藥膏是不可能被視網 膜和RPE吸收，因此不可能治療視網膜疾病。治療眼後部組織疾病宜採用結膜下注射、 玻璃體內注射、球後注射等。目前世界上不存在Rapamycin眼用微乳注射劑，也沒有任 何關於Rapamydn治療老年黃斑變性和其它類型視網膜變性疾病的理論知識、報導抑或 嘗試ο

發明內容
本發明的目的是提供一種有效治療視網膜變性疾病的雷帕黴素眼用微乳注射 劑，並且該微乳注射劑成本低、穩定性好、毒副作用小。
本發明的另一目的是提供該雷帕黴素眼用微乳注射劑的製備方法。本發明還有一個目的是提供該雷帕黴素眼用微乳注射劑在製備治療視網膜變性 疾病的藥物中應用，特別是製備治療複雜視網膜變性疾病的藥物中應用。本發明的目的是通過以下方式實現的一種雷帕黴素眼用微乳注射劑，包括以雷帕黴素為活性成分加入藥學上可接受 的載體。該注射劑中，每IOOOrnl製劑含有0.05-20g的雷帕黴素。所述的載體包括乳化 劑、油相和助乳化劑等。上述雷帕黴素眼用微乳注射劑，每IOOOrnl製劑優選原料配方為雷帕黴素0.05 20g，油相1.2 48.0ml，乳化劑55.0 200.0ml，助乳化劑 51.0 150.0ml,注射用水至IOOOmL上述雷帕黴素眼用微乳注射劑，每IOOOrnl製劑進一步優選原料配方為雷帕黴素0.5 4g，油相4.0 25.0ml，乳化劑60.0 98.0ml，助乳化劑55.0 90.0ml,注射用水至1000ml。每IOOOml製劑最優選的原料配方為雷帕黴素0.85 1.15g，油相8.0 12.0ml，乳化劑70.0 90.0ml，助乳化劑 58.0 70.0ml,注射用水至IOOOmL所述的乳化劑優選吐溫-80，助乳化劑優選聚乙二醇-400，油相優選為大豆油。上述眼用微乳注射劑的PH範圍為4 9，優選6.5 7.5。滲透壓為0.7 1.5% 氯化鈉溶液的滲透壓，優選0.8 1.0%氯化鈉溶液的滲透壓。該微乳注射劑粒徑範圍 100 μ m,優選為<10μιη。PH值範圍可通過鹽酸、氫氧化鈉、醋酸等常規PH調節劑調 節，滲透壓可通過甘油、氯化鈉等常規等滲調節劑調節。上述雷帕黴素眼用微乳注射劑的製備方法包括以下步驟a)根據配方取雷帕黴素，加入油相、乳化劑，充分研磨至粉末溶解，混合均 勻；b)取助乳化劑，加入助乳化劑5 15倍重量的滅菌注射用水，煮沸使溶解，攪 拌混勻；C)將攪勻的「b)」步驟溶液倒入「a)」步驟所述混合液中，快速攪拌、定容， 混勻後經微孔濾膜過濾，分裝，即得。所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑在製備治療視網膜變性疾病的藥物中應用。所 述的視網膜變性疾病可為遺傳性視網膜變性疾病或複雜視網膜變性疾病。所述的複雜視 網膜變性疾病為老年黃斑變性(AMD)疾病。本發明建立了兩個AMD動物模型來進行相應的研究1.通過遺傳基因修飾方法，建立原發RPE線粒體缺陷的小鼠模型(MT-KO)，這 一模型可以模擬由於RPE內線粒體功能缺陷引發的AMD病變。這一模型的設計方案是將 控制線粒體DNA複製和轉錄的重要基因Tfam基因w從小鼠RPE細胞的基因組中敲除， 使得RPE細胞具有原發的線粒體缺陷。具體實驗動物製作方法應用了 「loxp」和「ere」 系統模式。「loxp」是一個23個鹼基的序列，可以被ere蛋白重組酶識別後切斷。本研 究中的MT-KO小鼠是通過將tfam靶基因修飾鼠(tfam1。——)和BESTl-Cre轉基因鼠雜交而來。tfam靶基因修飾鼠以前已被廣泛應用[2]，其中tfam基因的6和7號外顯子被兩 個Ioxp序列包夾⑴。BESTl-Cre轉基因鼠的製作方法是首先製作出人類BESTl基因 的驅動子(BEST1基因的-538至+38核苷酸序列)和ere重組蛋白基因共同組成的DNA 構建。其次，將BESTl-creDNA構建顯微注射到B6小鼠的受精卵細胞中。最後，將此 受精卵細胞植入代孕鼠子宮孕育而來。經過雜交tfam靶基因修飾鼠和BESTl-Cre轉基因 鼠後，最終的MT-KO小鼠具有+/BESTl-cre ； tfamloxp/loxp基因型。由於BESTl基因的 驅動子可以誘導ere蛋白重組酶特異性的表達在RPE中，ere蛋白重組酶識別了 RPE細胞 中tfam基因的Ioxp序列，從而將tfam基因的6和7號外顯子切除，進而使得tfam基因喪 失表達。由於tfam基因是控制線粒體DNA複製和轉錄的重要基因，這樣小鼠的RPE細 胞呈現嚴重的線粒體功能缺陷。我們通過定量PCR的方法證明MT-KO小鼠RPE細胞中 一系列線粒體編碼的基因表達嚴重降低，包括MT-ATP6，MT-ND4和MT-ND6基因。 同時，我們通過酶學染色方法證明線粒體中重要功能複合體(complex IV)的酶學活性消 失。電鏡進一步顯示MT-KO小鼠RPE細胞中線粒體腫脹、形態嚴重改變。這些結果證 明成功的建立了 RPE線粒體缺陷的小鼠模型(MT-KO)。2.建立了 RPE的氧化損傷小鼠模型(RPE-OD)，這一模型是針對由於RPE氧化 損傷的原因引發的AMD病變。NaIO3是一種氧化劑，將NaIO3注射到血液循環中可以 特異性的損傷RPE細胞[3]。由於大劑量的NaIO3(30-50mg/kg)可以引起RPE細胞的快 速丟失，我們因此對B6小鼠注射了少量的NaIO3從而模擬AMD患者中RPE細胞的緩 慢病程。具體製作方法是通過尾部靜脈1次性注射NaIO3, 15mg/kg稀釋於IX的磷酸 鹽緩衝液中(PBS)，通過免疫螢光染色方法檢測小鼠RPE細胞中DNA氧化損害標記物 8-OHDG。結果顯示RPE-OD小鼠模型呈現RPE的特異性氧化損傷改變。進而對MT-KO和RPE-OD進行了深入的病變觀察和發表機制研究。具體試驗 方法為顯微光鏡和電鏡的組織學檢查；免疫蛋白電泳和免疫螢光染色的生化檢查；視網 膜電流圖(ERG)的電生理功能檢查。在MT-KO模型中我們發現，RPE細胞在線粒體 功能缺陷的情況下早期呈現去分化改變。主要表現為喪失細胞正常形態，異常肥厚，和 失去RPE細胞特有功能蛋白表達(見圖1)。而晚期呈現出細胞萎縮，色素異常分布和 玻璃體小疣等典型AMD改變(見圖1) m。而感光細胞從RPE早期的去分化改變時就開 始喪失形態和正常電生理功能，而晚期呈現大量的感光細胞丟失(見圖2)。這些結果說 明，早期的RPE去分化過程是影響感光細胞的原發機制。在此基礎上，我進一步探索了 引發RPE去分化過程的細胞分子信號的機制。免疫蛋白電泳結果顯示AKT/mTOR細胞 通路的異常激活以及它下遊的P70S6K/S6通路相應活化是RPE去分化的根本機制(見圖 3)。mTOR細胞通路活化雖然保持了 RPE細胞在嚴重損害情況下(如線粒體功能嚴重缺 陷)的活性，但卻引發了 RPE細胞異常增長(蛋白和磷脂合成增加，見圖3)及相應的類 似AMD的眼底改變(見圖3)，從而喪失了正常的形態和功能，並進一步導致了感光細胞 喪失。在RPE-OD小鼠模型的研究中我們發現，AKT/mTOR細胞通路的異常激活同樣 是引發氧化損傷RPE細胞的去分化和感光細胞丟失的重要機制(見圖4)。因此，我們的 研究揭示了一個RPE細胞對不同類型損害的原發分子病理反應，從而從根本上發現了一 個通用的基本的AMD發病機制。本發明應用雷帕黴素治療AMD動物模型的研究成果
我們在原發RPE線粒體缺陷的小鼠模型MT-KO和RPE的氧化損傷小鼠模型 RPE-OD兩個動物模型中都應用了腹腔注射rapamycin (注射劑量為3mg/kg，製備方法同 實施例1，每天1次)以評價其療效。MT-KO小鼠在注射Rapamycin兩個月之後，RPE 的去分化過程得到根本的改善，其中包括RPE65，Keratinl8, LRAT, RLBPl等RPE重 要功能蛋白表達取得了顯著提高(RPE65和Keratinl8接近正常水平)，RPE細胞形態接近 正常，光感受器細胞數目顯著提高並且視網膜電生理功能也得到了顯著提高，見圖5。同 樣，在RPE-OD小鼠中，Rapamycin注射了 5-17天之後，得到與MT-KO小鼠同樣的治 療效果。mTOR通路的異常活化是AMD發病的一個重要機制，本發明顯著抑制了 mTOR 基因的活性。基於這些結果，開發Rapamycin眼用注射劑來治療AMD患者是具有堅實的 理論基礎的並且可取得巨大成功的。同時由於Rapamycin還提高了 RPE65 ( 2.2倍)， LRAT ( 2.1倍)，RLBPl( 2倍)等RPE重要功能蛋白表達(見圖4B和圖5A。這 兩個柱形圖具體顯示了雷帕黴素在兩個模型中提高的一系列蛋白的具體數值。)，而這些 蛋白變異又是一大批遺傳性視網膜變性的根本原因，因此本發明Rapamydn眼用注射劑 還可以用於治療改善遺傳性視網膜變性疾病的症狀。安全性評估Rapamycin不溶於水，是由吸水鏈黴菌(Streptomyceshygroscopicus)產生的大環 內酯類(macrocyclic lactone)抗免疫藥。Rapamycin 口服片和口服液用來抑制器官移植後
的免疫排斥(特別是腎臟移植)已獲美國FDA許可(1999)。 口服lmg/m2/天(起始計 量3mg/m2/天)被證明是安全的。Rapamycin 口服片在我國臨床也已開始應用，被認為 是一種低毒性的免疫抑制藥物。本研究中，我們對30對正常小鼠(注射組和對照組)進 行了長達4個月的腹腔皮下注射(每天一次，注射劑量為3mg/kg，按實施例1方法製備得 到)，未發現任何具備組織和黏膜的不良影響或病理改變。對注射組小鼠的視網膜的生化 表達檢查結果顯示，一系列重要生化表達產物均未發現改變，詳見圖6。進一步的視網膜 電流圖的檢查也顯示，注射組小鼠具有正常的視網膜電生理功能，詳見圖6。此外，我們 還將上述同樣的眼用Rapamycin微乳注射劑(按實施例1方法製備得到)注射於兔眼眶內 (0.5ml眼球後注射)，並在兔眼中進行了安全性評估。在每周3次，共一個月的測試後， 結果發現本發明雷帕黴素球後注射微乳注射劑未引起任何眼部的病理改變。上述研究結 果說明，本發明雷帕黴素球後注射微乳注射劑無明顯刺激及毒副作用，是安全有效的。Rapamycin水溶性較差，但是通過本發明配方及方法得到微乳注射劑在納米尺度 上的帶藥粒子表面積激增，粒子的官能團密度和吸附性能力加大，達到吸附平衡的時間 縮短，粒子膠體穩定性提高，使之具有較高的靶向和緩釋給藥能力，並減少毒副作用。 並且，本發明製備方法簡單、質量可控，適於工業化生產。與現有技術比較本發明開發Rapamycin眼用微乳注射劑的有益效果本發明是在一系列科學實驗數據基礎上提出的Rapamycin眼用微乳注射劑，該 注射劑可採用結膜下注射、玻璃體內注射、球後注射等注射方式治療視網膜變性疾病， 特別是用於治療老年黃斑變性疾病具有顯著的效果，本發明的療效是在致病機制的突破 發現基礎上提出的，對此大類的疾病治療具有重要深遠的意義。並且該注射劑包裹率較 高、成本低、穩定性好(按照2005版《中國藥典》，在溼度為60士 10%的環境中，溫度 為25°C左右放置6個月後，檢測其熱原、澄明度、PH值、無菌檢查均未發生明顯改變，證明其質量是穩定的。)，對眼部無明顯刺激性及毒副作用。


圖1為MT-KO (RPE特異性線粒體缺陷小鼠模型)的RPE細胞改變以及與AMD
病變的相似性實驗結果圖。圖中，(A，B)，對照組小鼠(A)和MT-KO小鼠(B)的RPE進行Phalloidin染色
(標記細胞邊界和骨架)顯示，MT-KO小鼠的RPE細胞(B)失去了正常的多邊形形狀。 (C-F)，組織學光鏡檢查，MT-KO小鼠的RPE細胞從3個月起開始增厚(D)，並且隨年 齡增長愈加肥厚從而喪失了上皮形態(E，F)。 (G)，蛋白免疫電泳分析結果顯示，一系 列 REP 細胞的重要功能蛋白(RPR65，Keratinl8, LRAT, RLBPl 和 MERTK)在 MT-KO 小鼠的 RPE 細胞中嚴重降低。*，P < 0.05;"，P < 0.01 ； ***, P <0.001。 (H-J)， MT-KO小鼠的RPE在晚期(11個月)出現了色素異常分布(H)、萎縮(H)和玻璃體小疣 沉積(J，箭頭)。這一系列改變與AMD患者的臨床改變一致。圖2為MT-KO小鼠模型的光感受細胞的變性過程。圖中，(A，B)，對照組小鼠(A)和MT-KO小鼠(B)的眼冰凍切片進行PNA(標 記光感受器視錐細胞)和RPE65(標記RPE)的免疫螢光染色顯示，MT-KO小鼠的視錐 細胞從4個月就失去了正常的形態(B)。 (C)ERG檢查顯示5個月的MT-KO小鼠已經 嚴重喪失了暗視野(scotopic a和b波)和明視野(photopic b波)的ERG反應(黑色菱形 線)，喪失了正常的光感受器功能。(D)組織切片顯示MT-KO小鼠隨年齡逐步喪失了光 感受器細胞(黑框內)，在晚期數目減少尤為明顯。這些結果說明RPE的去分化改變首 先在前期引起了光感受器功能和形態的改變，而在晚期才引起了光感受器細胞數目的減 少。因此，發現早期RPE的去分化的細胞信號機制是找到治療AMD病方法的根本。圖3為MT-KO小鼠RPE細胞中AKT/mTOP通路的異常激活引起類似AMD的 改變實驗結果圖。圖中，(A，B)，3個月的 MT-KO 小鼠的 P-AKTseri73, p-mTORser2448 (A),和 p-P70SK6Thr389, p-S6Ser235/236 (B)的磷酸化水平顯著提高。這證明 AKT/mTOR和 P70S6K/ S6通路被異常激活。(B)，MT-KO小鼠PRE細胞中的蛋白含量隨年齡顯著增加。(C) Red Oil染色顯示MT-KO小鼠PRE細胞中的有大量的紫紅色中性磷脂沉積。(D)，上述 的生化改變造成了 MT-KO小鼠眼底大量白色物質沉積，與AMD患者眼底一致。圖4為RPE-OD小鼠PRE細胞中mTOR通路的異常激活引起的視網膜變性，以 及Rapamycin治療的效果圖。圖中，(A)，RPE-OD小鼠(NalO3 注射後 5 天)RPE 中的 p-mTOiT2448， p-P70SK6Thr389,和p-S6Se—的磷酸化水平顯著提高，證明了 mTR/P70S6K/S6通路被 異常激活。(B)，同樣時間內，一系列RPE細胞的重要功能蛋白(RPE65，Keratinl8, LRAT, RLBPl和MERTK)在RPE-OD小鼠的RPE細胞中嚴重降低(淺灰色)，然而
Rapamycin治療使得這些蛋白增加了 2倍，趨近於正常水平(黑色)。(C),組織切片 顯示PRE-OD小鼠(NalO3注射後17天)只殘存少量正常視網膜(雙箭頭區)，而其餘 視網膜有明顯的RPE變性和感官細胞喪失(放大圖)。Rapamycin治療使得正常視網膜 區顯著增加(雙箭頭區)，RPE和感官細胞趨近正常(放大圖)。(D)，定量分析證明Rapamycin治療使得RPE-OD小鼠總光感受器數增加1倍，視錐細胞數增加2倍。(E)， 相應的，ERG檢查顯示Rapamycin治療顯著增加了 RPE-OD小鼠暗視野(scotopic a和b 波)和明視野(photopicb波)的反應(深灰色方塊線)。圖5為Rapamycin治療MT-K0小鼠效果圖。圖中，(A)，Rapamycin治療使得4個月的MT-KO小鼠RPE中一系列重要功 能蛋白(RPE65，Keratinl8, LRAT和RLBP1)趨近於正常水平(灰色柱)。與未治療的 MT-KO小鼠相比(黑色柱)增加了 2倍；(B)，同時，正常的RPE區域顯著增加； (C)，組織切片顯示Rapamycin治療的MT-KO小數的RPE (右)與安慰劑處理的MT-KO 小鼠的RPE(左)形態上顯著好轉。(D)，定量分析證明Rapamycin治療使得MT-KO小鼠 視錐細胞數顯著增加。(E)，相應的，ERG檢驗顯示Rapamycin治療顯著增加了 MT-KO 小鼠暗視野(scotopic a和b波)的反應(灰色方塊曲線)。圖6為Rapamycin在正常小鼠中的安全評估圖。圖中，(A)，Rapamycin注射4個月後的小鼠的視網膜組織結構(右)與未注射 小鼠(左)相比無任何異常改變。(B)，免疫蛋白電泳證明Rapamycin注射4個月不影響 RPE中重要功能蛋白表達。(C)，ERG檢查也證明Rapamycin治療本身對視網膜電生理 無影響。
具體實施例方式以下通過實施例對本發明做進一步的闡述實施例1由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素)l.OOg ；大豆油10.0ml ；吐溫-8080.0ml ；聚乙二醇-40064.0ml ；無菌注射用水適量；製備總量1000ml，測得PH值為7，滲透壓0.9%氯化鈉溶液的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至800ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，滅菌注射用水定容至1000ml，混勻後經0.45μιη微 孔濾膜過濾，無菌分裝，即得。實施例2由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素) 1.15g ；大豆油8.0ml ；吐溫-8090.0ml ；聚乙二醇-40070.0ml ；無菌注射用水適量；
製備總量1000ml,測得PH值為6.5，滲透壓0.8%氯化鈉溶液的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至700ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，滅菌注射用水定容至1000ml，混勻後經0.45μιη微 孔濾膜過濾，無菌分裝，即得。實施例3由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素) 0.85g ；大豆油12.0ml ；吐溫-8070.0ml ；聚乙二醇-400 58.0ml ；無菌注射用水適量；製備量1000ml，測得PH值為7.5，滲透壓1.0%氯化鈉溶液的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至800ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，滅菌注射用水定容至1000ml，混勻後經0.45μιη微 孔濾膜過濾，無菌分裝，即得。

的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至300ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，滅菌注射用水定容至1000ml，混勻後經0.45μιη微 孔濾膜過濾，無菌分裝，即得。實施例5由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素)IOg ；大豆油20.0ml ；吐溫-80180.0ml ；聚乙二醇-400 130.0ml ；
實施例4
由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥 處方Rapamycin (雷帕黴素)0.05g ； 大豆油1.2ml ；
吐溫-8055.0ml ；
聚乙二醇-400 51.0ml ； 無菌注射用水 適量； 製備量1000ml，氫氧化鈉調節PH值為9，甘油調節滲透壓1.5%氯化鈉溶液
無菌注射用水 適量；製備量1000ml，鹽酸調節PH值為4，氯化鈉調節滲透壓0.7%氯化鈉溶液的 滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至650ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，定容至1000ml，混勻後經0.45 μ m微孔濾膜過濾， 無菌分裝，即得。實施例6由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素)20.00g ；大豆油48.0ml ；吐溫-80130.0ml ；聚乙二醇-400 100.0ml ；無菌注射用水 適量；製備量1000ml，鹽酸調節PH值為7，甘油調節滲透壓0.9%氯化鈉溶液的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；另量取PEG-400加至650ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻 後，倒入上述混合液中，快速攪拌，滅菌注射用水定容至1000ml，混勻後經0.45μιη微 孔濾膜過濾，無菌分裝，即得。實施例7由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素)4g ；大豆油25ml;吐溫-8098.0ml ；聚乙二醇-400 90.0ml ；無菌注射用水 適量；製備量1000ml，氫氧化鈉調節PH值為7，甘油調節滲透壓0.9%氯化鈉溶液 的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；量取PEG-400加至500ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻後， 倒入上述混合液中，快速攪拌，定容至1000ml，混勻後經0.45 μ m微孔濾膜過濾，無菌 分裝，即得。實施例8由天津新美科技公司提供Rapamycin原藥處方Rapamycin(雷帕黴素)0.5g ；
10
大豆油6ml;吐溫-8060.0ml ；聚乙二醇-400 55.0ml ；無菌注射用水 適量；製備量1000ml，氫氧化鈉調節PH值為7，甘油調節滲透壓0.9%氯化鈉溶液 的滲透壓。工藝精密稱取Rapamycin，置於乳缽中，加入大豆油，吐溫_80，充分研磨至粉末溶 解，混合均勻；量取PEG-400加至820ml滅菌注射用水中，煮沸使溶解，攪拌混勻後， 倒入上述混合液中，快速攪拌，定容至1000ml，混勻後經0.45 μ m微孔濾膜過濾，無菌 分裝，即得。參考文獻1.Larsson NG, Wang J, Wilhelmsson H, et al.Mitochondrial transcription factor A is necessaryfor mtDNA maintenance and embryogenesis in mice .Nat Genet 1998 ； 18 231—236.2.Wang J, Wilhelmsson H, Graff C，et al.Dilated cardiomyopathy and atrioventricularconduction blocks induced by heart-specific inactivation of mitochondrial DNA gene expression.Nat Genet 1999 ； 21: 133-137.3.Enzmann V，Row BW, Yamauchi Y, et al.Behavioral and anatomical abnormalities in asodium iodate-induced model of retinal pigment epithelium degeneration.Exp Eye Res2006 ； 82: 441-448.4.Coleman HR, Chan CC, Ferris FL, 3rd, Chew EY.Age—related macular degeneration.Lancet2008 ； 372 1835-1845.
權利要求
1.一種雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於該眼用微乳注射劑包括以雷帕黴素為 活性成分加入藥學上可接受的載體。
2.根據權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於該注射劑中，每 IOOOml製劑含有0.05-20g的雷帕黴素。
3.根據權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於所述的載體包括乳化 劑、助乳化劑和油相。
4.根據權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於所述的每IOOOrnl制 劑的原料配方為雷帕黴素0.05 20g，油相1.2 48.0ml，乳化劑55.0 200.0ml，助乳化劑51.0 150.0ml,注射用水至1000ml。
5.根據權利要求4所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於所述的每IOOOrnl制 劑的原料配方為雷帕黴素0.5 4g，油相4.0 25.0ml，乳化劑60.0 98.0ml，助乳化劑55.0 90.0ml,注射用水至1000ml。
6.根據權利要求5所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於所述的每IOOOrnl制 劑的原料配方為雷帕黴素0.85 1.15g，油相8.0 12.0ml，乳化劑70.0 90.0ml，助乳化劑58.0 70.0ml,注射用水至1000ml。
7.根據權利要求3 6任意一項所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於所述的 乳化劑為吐溫-80，助乳化劑為聚乙二醇-400，所述的油相為大豆油。
8.根據權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於該注射劑的PH範圍 4 9，優選PH範圍6.5 7.5 ；滲透壓為0.7 1.5%氯化鈉溶液的滲透壓，優選為0.8 1.0%氯化鈉溶液的滲透壓。
9.根據權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑，其特徵在於該微乳注射劑粒徑範 圍<100μιη，優選為<10μιη。
10.一種權利要求4所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑的製備方法，其特徵在於該方法 包括以下步驟a)根據配方取雷帕黴素，加入油相、乳化劑，充分研磨至粉末溶解，混合均勻；b)取助乳化劑，加入助乳化劑5 15倍量的注射用水，煮沸使溶解，攪拌混勻；c)將攪勻的「b)」步驟溶液倒入「a)」步驟所述混合液中，快速攪拌、定容，混勻 後經微孔濾膜過濾，分裝，即得。
11.一種權利要求1所述的雷帕黴素眼用微乳注射劑在製備治療視網膜變性疾病的藥 物中的應用。
12.根據權利要求11所述的應用，其特徵在於所述的視網膜變性疾病為遺傳性視網膜 變性疾病或複雜視網膜變性疾病。
13.根據權利要求12所述的應用，其特徵在於所述的複雜視網膜變性疾病為老年黃斑 變性疾病。
全文摘要
本發明公開了一種雷帕黴素眼用微乳注射劑及其製備方法和應用，該注射劑以雷帕黴素為活性成分加入藥學上可接受的載體，每1000ml製劑中含有0.05-20g的雷帕黴素。該眼用微乳注射劑成本低、穩定性好，對眼部無明顯刺激性及毒副作用，可用於治療視網膜變性疾病，特別是用於治療老年黃斑變性疾病具有顯著的效果，本發明的療效是在致病機制的突破發現基礎上提出的，對此類別的疾病治療具有深遠的意義。
文檔編號A61P9/10GK102008437SQ20101055566
公開日2011年4月13日 申請日期2010年11月23日 優先權日2010年11月23日
發明者劉美欣, 趙堪興, 趙晨 申請人:趙晨