複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法
2023-08-13 10:56:16
專利名稱：複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥提取物中有效成分的含量測定方法，特別涉及複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法，該提取物為複方丹參滴丸的原料。
背景技術：
複方丹參製劑為丹參、三七和冰片製備而成的心血管藥物，目前已經上市的又複方丹參膠囊，複方丹參片和複方丹參滴丸。特別是複方丹參滴丸在臨床上廣泛用於冠心病、心絞痛的預防、治療、急救。現已成為國內心血管市場上的主導品牌之一。複方丹參提取物，為丹參和三七的提取物，是複方丹參製劑中間體，屬於現有技 術，複方丹參製劑上市十餘年中，複方丹參提取物已經建立起了一整套全面地的工藝質量控制體系，並且不斷進行完善和補充。糖類成分糖類成分可分布於植物的各個部位，常常佔植物乾重的80% 90%，是中藥材及中藥產品中的主要組成成分，所佔含量比例很高。另外，許多糖類成分對於中藥活性成分具有輔助藥效作用，同時糖類成分本身也具有為機體提供能量的作用，因此糖類成分的測定對於全面掌握中藥材及中藥產品質量非常重要。測定結果表明，複方丹參提取物中主要含有蔗糖、果糖和葡萄糖等小分子糖類物質，且含量較高，所以測定它們的含量非常必要。糖類成分的測定針對糖類成分的常用測定方法有化學分析法、氣相色譜法、離子交換色譜法、凝膠色譜法、高效液相色譜法、毛細管電泳法、衍生化氣相色譜法等。但這些方法穩定性差，靈敏度不高。為得到一種新的複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法，本發明採用高效液相色譜蒸發光散射檢測器(HPLC-EL SD)法，具有穩定性好、靈敏度高、能夠進行梯度洗脫等優點。本發明採用PrevailTM Carbohydrate ES色譜柱,對於各個小分子糖類的分離度大大提高。相對於常用的氨基柱，具有噪音低，色譜柱壽命長的特點，是本專利的最大優勢所在。本發明以最簡單的乙腈-水為流動相，梯度洗脫，能夠在30分鐘內有效的分離檢測7種糖類物質和雜質，分離度均大於3，達到高效、快速分離。本發明採用固相萃取技術，能夠有效去除酚酸、皂苷等幹擾成分。經驗證本發明的質量控制方法精密度、靈敏度、穩定性良好，能夠有效測定複方丹參提取物中的糖類物質含量。本發明是針對複方丹參提取物中含量較高的糖類成分建立的含量測定方法，目的是進一步提升產品質量控制水平，從而更加準確的把握產品質量。
發明內容
本發明的目的是提供一種專屬性強、靈敏度高、穩定準確的糖類成分測定方法，用於複方丹參提取物中糖類成分的含量測定，該方法包括以下步驟I)糖類成分對照品溶液的製備2)對複方丹參提取物進行溶解，上固相萃取小柱，水洗脫，收集洗脫液；3)採用高效液相色譜法進行樣品測定。採用PrevailTM Carbohydrate ES色譜柱，以一定比例的有機溶劑和水為流動相，進行梯度洗脫；4)以ELSD檢測器進行檢測；5)用外標兩點法對數方程分別計算果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。其中所述糖類成分為果糖，葡萄糖和蔗糖。
其中所述複方丹參提取物為一種混合物，是由丹參和三七分別或一同經過水煮得到的浸膏，如果分別得到，則兩者混合在一起。或丹參和三七分別或一同經過有機溶劑提取得到的浸膏，如果分別得到，則兩者混合在一起。所述有機溶劑為醇類有機溶劑，醇類有機溶劑，優選乙醇。本發明所述複方丹參提取物還可以是丹參和三七分別或一同經過水煮醇沉得到的，也可以是丹參和三七分別或一同經過醇提水沉得到的，還可以是在以上步驟的基礎上進一步經過選自萃取，過柱，酸化，鹼化等步驟得到的，如果分別得到，則兩者混合在一起。本發明的複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法，優選的包括以下步驟I)糖類成分對照品溶液的製備；精密稱取經五氧化二磷乾燥過的果糖對照品、葡萄糖對照品、蔗糖對照品適量，加水製得每毫升含上述物質各O. 5mg的混合對照溶液。2)複方丹參提取物供試品溶液的製備；取複方丹參提取物約O. 5g，精密稱定，力口水約20ml,超聲溶解,上至已處理好的固相萃取柱(Cleanert PS-SPE, O. 5g/6ml),流速約lml/min，再用水分次洗滌，收集上樣液和洗滌流出液約45ml，轉移至50ml量瓶中，加水至刻度，混勻，即得。3)注入高效液相色譜儀對供試品中的糖類成分進行測定；分別精密吸取各對照品溶液5 μ I、10 μ 1，供試品溶液10 μ 1，注入液相色譜儀，測定，用外標兩點法對數方程分別計算果糖、葡萄糖和蔗糖的含量，即得。本發明的測定方法,其色譜條件如下採用PrevailTM Carbohydrate ES色譜柱，以乙腈為流動相A，水為流動相B，，流速O. 8ml/min,柱溫30°C ;以WATERS 2420 ELSD檢測器進行檢測，參數設置為增益10，氣壓25psi，漂移管60°C，Neb heater :60%。理論板數按蔗糖色譜峰計算應不低於4000。
權利要求
1.一種複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法，該提取物為複方丹參滴丸的原料，其特徵在於，該方法由以下步驟組成 1)糖類成分對照品溶液的製備； 2)對複方丹參提取物進行溶解，上萃取小柱，水洗脫，收集洗脫液； 3)採用高效液相色譜法進行樣品測定，採用PrevailTMCarbohydrate ES色譜柱，以一定比例的有機溶劑和水為流動相，進行梯度洗脫； 4)以ELSD檢測器進行檢測； 5)用外標兩點法對數方程分別計算果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。
2.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟I)中糖類成分對照品溶液為一種混合物，是由果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等單糖、二糖、低聚糖單獨、任何兩種、三種、四種、五種等更多種混合配製而成。
3.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟2)中複方丹參提取物為一種混合物，是丹參和三七分別或一同經過醇提得到的，或在以上步驟的基礎上進一步經過選自水沉，萃取，過柱，酸化，鹼化等步驟得到的，如果分別得到，則兩者混合在一起。
4.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟2)中複方丹參提取物為一種混合物，是丹參和三七分別或一同經過水煮得到的，或在以上步驟的基礎上進一步經過選自醇沉，萃取，過柱，酸化，鹼化等步驟得到的，如果分別得到，則兩者混合在一起。
5.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟2)中複方丹參提取物為一種混合物，是丹參和三七分別或一同經過醇提後水煮得到的，或在以上步驟的基礎上進一步經過選自醇沉，萃取，過柱，酸化，鹼化等步驟得到的，如果分別得到，則兩者混合在一起。
6.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟2)中複方丹參提取物供試品溶液的製備方法為取複方丹參提取物O. 5g，加水適量，超聲溶解，上至已處理好的固相萃取柱(Cleanert PS-SPE或其他型號的聚苯乙烯基質型填料小柱)，流速約lml/min,再用水分次洗滌，收集上樣液和洗滌流，即得。
7.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟3)中有機溶劑為乙腈或醇類有機溶劑。
8.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟3)中醇類有機溶劑，最優為甲醇。
9.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟3)中採用高效液相色譜法進行樣品測定的方法為採用PrevailTM Carbohydrate ES色譜柱，以乙腈為流動相A,水為流動相B，進行梯度洗脫，乙腈的比例在60-75 %之間，水的比例在25-40 %之間，梯度洗脫條件如下
10.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟4)中採用ELSD檢測器為WATERS 2420 ELSD檢測器或其他品牌ELSD檢測器，採用WATERS 2420ELSD檢測器進行檢測時，參數設置為增益10，氣壓25psi，漂移管60°C，Nebheater :60%。
11.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述步驟5)中採用外標兩點法對數方程分別計算樣品中果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。
12.根據權利要求I所述的測定方法，其特徵在於，所述複方丹參提取物中糖類成分為果糖、葡萄糖和蔗糖。
全文摘要
本發明涉及一種中藥提取物中有效成分的含量測定方法，特別涉及複方丹參提取物中糖類成分的含量測定方法，該方法包括以下步驟1)糖類成分對照品溶液的製備2)對複方丹參提取物進行溶解，上固相萃取小柱，水洗脫，收集洗脫液；3)採用高效液相色譜法進行樣品測定。採用PrevailTM Carbohydrate ES色譜柱，以一定比例的有機溶劑和水為流動相，進行梯度洗脫；4)以ELSD檢測器進行檢測；5)用外標兩點法對數方程分別計算果糖、葡萄糖和蔗糖的含量。本發明檢測方法操作簡單、快捷，專屬性強、分離度高、準確度和精密度良好，適用於複方丹參提取物的質量控制。
文檔編號G01N30/02GK102928521SQ201110228488
公開日2013年2月13日 申請日期2011年8月10日 優先權日2011年8月10日
發明者劉巖, 徐波, 牛濤, 陳紅, 高陽 申請人:天津天士力現代中藥資源有限公司