一種水溶性絲素多肽食品防腐劑及其製備方法
2023-08-13 22:28:06 2
專利名稱：一種水溶性絲素多肽食品防腐劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及了蠶絲絲素水解最佳方法及其水解後的抑菌作用，特別涉及一種水溶性絲素多肽食品防腐劑。
背景技術：
食品防腐劑是為了防止因微生物繁殖引起的變質而使用的食品添加劑，目前，國際上允許使用的食品防腐劑已有四五十種，多為人工合成的化學品。由於其毒性(疊加效應)，近幾年來，國內外食品行業有逐漸減少其使用的趨勢。包括抗菌肽(antimicrobialpeptides，如乳鏈菌肽、絲素肽等)在內的天然防腐劑會是今後防腐劑市場的主要方向，它們基本不對真核細胞起作用。但除了絲素多肽外，目前天然類食品防腐劑價格昂貴，大多數食品生產企業難以承受。我國是產蠶絲大國，用於製取絲素多肽的資源豐富。與其它多肽相比，絲素多肽還具有下列保健功能(I)降低血液中膽固醇，防止高血壓和腦血栓。(2)預防「老年性中風」和痴呆症。(3)促進胰島素的分泌。(4)解酒保肝。絲素多肽是一種用於實現食品保健功能的理想營養藥品(nutraceuticals)。此外,還可研髮絲素肽製成的食品保鮮包裝材料。
發明內容
本發明的目的是提供了一種水溶性絲素多肽食品防腐劑及其製備方法，本發明的水溶性絲素多肽食品防腐劑製備方法包括以下步驟一種水溶性絲素多肽食品防腐劑的製備方法，稱取蠶繭，用清水浸泡清洗數次，晾乾後投入到質量濃度為O. 5%的碳酸鈉水溶液中，浴比為I : 50(w/w)，煮沸O. 5小時，用自來水衝洗，完成第一次脫膠，把經過第一次脫膠的蠶繭投入到質量濃度為O. 5%碳酸鈉中，浴比為I : 50 (w/w),反應溫度為80°C,時間為O. 5小時,然後用去離子水清洗,最後放入烘箱80°C烘乾，得到脫膠絲，即絲素；稱取絲素，用85%的磷酸溶液溶解，浴比為I : 4(w/w)，溫度為130°C，反應時間4個小時，反應結束後，用氧化鈣進行中和反應，控制pH值在7左右，攪拌並放置3個小時，然後用布氏漏鬥抽濾，得到絲素肽溶液；向濾液中加入濾液重量1%的活性炭，80°C攪拌I. 5個小時，然後用抽濾器趁熱過濾，將濾渣衝洗3-4次，合併濾液除去活性炭；將濾液倒入圓底燒瓶，在電熱套中煮沸至不糊時，放入恆溫烘箱中80 V烘乾。從絲素多肽的抑菌試驗中觀察到加入絲素多肽的細菌(金黃色葡萄球菌或者乳酸菌)培養基中的菌落直徑小於未加絲素肽的菌落直徑，隨著絲素肽溶液濃度的增加，其菌落直徑愈小。
圖I :未加絲素多肽的金黃色葡萄球菌培養基；圖2 :加入O. 3% (重暈比例，下同)絲素多肽的金黃色葡萄球菌培養基；圖3 :加入O. 6%絲素多肽的金黃色葡萄球菌培養基；
圖4 :加入O. 9%絲素多肽的金黃色葡萄球菌培養基圖5 :未加入絲素多肽的乳酸菌培養基；圖6 :加入O. 3%絲素多肽的乳酸菌培養基；圖7 :加入O. 6%絲素多肽的乳酸菌培養基；圖8 :加入O. 9%絲素多肽的乳酸菌培養基。
具體實施例方式以下結合具體實施例，對本發明進行詳細說明。實施例I
稱取一定量的蠶繭，用清水浸泡清洗數次，晾乾後投入到質量濃度為O. 5%碳酸鈉中，浴比為I : 50(w/w)，煮沸O. 5小時，用自來水衝洗，完成第一次脫膠，把經過第一次脫膠的蠶繭投入到質量濃度為O. 5%碳酸鈉中，浴比為I : 50( / )，反應溫度為801，時間為O. 5小時，然後用去離子水清洗，最後放入烘箱80°C烘乾，得到脫膠絲，即絲素。稱取絲素2. 20g,用85%的磷酸溶液溶解,浴比為I : 4 (w/w),溫度為130°C,反應時間4個小時。反應結束後，用氧化鈣進行中和反應，控制PH值在7左右，反應生成磷酸鈣沉澱，使殘留的磷酸根離子的量降到最低。攪拌並放置3個小時，讓充分反應，然後用布氏漏鬥抽濾，得到絲素肽溶液。向濾液中加入濾液重量I %的活性炭，80°C攪拌I. 5個小時，然後用抽濾器趁熱過濾，將濾渣衝洗3-4次，合併濾液除去活性炭。將濾液倒入圓底燒瓶,在電熱套中煮沸至不糊時，放入恆溫烘箱中烘乾(溫度為80°C)。經稱量得到I. 06g乾燥的絲素肽固體，經計算，產率約為48. 2%。實施例2稱取絲素2. 20g,用85%的磷酸溶液溶解,浴比為I : 4 (w/w),溫度為130°C,反應時間8個小時。反應結束後，用氧化鈣進行中和反應，控制PH值在7左右，反應生成磷酸鈣沉澱，使殘留的磷酸根離子的量降到最低。攪拌並放置3個小時，讓其充分反應，然後用布氏漏鬥抽濾，得到絲素肽溶液。向濾液中加入濾液重量I %的活性炭，80°C攪拌I. 5個小時，然後用抽濾器趁熱過濾，將濾渣衝洗3-4次，合併濾液除去活性炭。將濾液倒入圓底燒瓶，在電熱套中煮沸濃縮至不糊時，放入恆溫烘箱中烘乾(溫度為80°C)。經稱量得到1.67g乾燥的絲素肽固體，經計算，產率約為75. 9%。實施例3絲素多肽的抑菌試驗(I)培養基的選擇與配製牛肉膏蛋白腖培養基是一種應用最廣泛和最普通的細菌基礎培養基，按培養基配方比例稱取並溶化，調eiil 4-7. 6，然後分裝，滅菌，最後進行無菌培養檢查，無菌生長即可使用。(2)稀釋塗布平板法I)首先倒平板，將已經滅菌的牛肉膏蛋白腖固體培養基冷卻至60°C，倒平板，使培養基均勻分布在培養皿底部，然後平置於桌面，待冷凝。2)製備菌種稀釋液，用灼燒過的接種環取一環菌種接種到IOmL的牛肉膏蛋白腖液體培養基中，在恆溫培養箱中37°C培養10-12個小時，然後從中用移液器移取ImL放入盛有99mL的無菌水並帶有玻璃珠的三角瓶中，振搖，使菌種與水充分混合，將細胞擴散，從中移取100 μ L到裝有900 μ L的無菌水離心管中，充分混勻，然後再從中移取100 μ L到另一隻裝有900 μ L的無菌水離心管中，混合均,以此類推製成10—1，IO-2, IO-3, IO-4, IO-5,10_6不同稀釋度的菌液，選出10_6為最佳稀釋濃度。3)塗布，用移液器移取100 μ L小心滴在平板培養基表面中央，再拿無菌塗布器把菌液均勻塗布在培養基上。(3)培養將已塗布的平板培養基倒置,放於恆溫培養箱中37°C培養24-48個小時，觀察菌落直徑的大小。具體圖片見圖I-圖8，從試驗中觀察到加入絲素多肽的細菌(金黃色葡萄球菌或者乳酸菌)培養基中的菌落直徑小於未加絲素多肽的菌落直徑，隨著絲素肽溶液濃度的增加，其菌落直徑愈小。應當理解的是，對本領域普通技術人員來說，可以根據上述說明加以改進或變換，而所有這些改進和變換都應屬於本發明所附權利要求的保護範圍。·
權利要求
1.一種水溶性絲素多肽食品防腐劑的製備方法，其特徵在於，蠶絲脫膠稱取蠶繭，用清水浸泡清洗數次，晾乾後投入到質量濃度為0. 5%的碳酸鈉水溶液中，浴比為I : 50 (w/w)，煮沸0. 5小時，用自來水衝洗，完成第一次脫膠，把經過第一次脫膠的蠶繭投入到質量濃度為0. 5%碳酸鈉中，浴比為I : 50(w/w),反應溫度為80°C,時間為0. 5小時,然後用去離子水清洗，最後放入烘箱80°C烘乾，得到脫膠絲，即絲素；稱取絲素，用85 %的磷酸溶液溶解，浴比為I : 4(w/w),溫度為130°C,反應時間4個小時,反應結束後,用氧化I丐進行中和反應，控制PH值在7左右，攪拌並放置3個小時，然後用布氏漏鬥抽濾，得到絲素肽溶液；向濾液中加入濾液重量1%的活性炭，80°C攪拌I. 5個小時，然後用抽濾器趁熱過濾，將濾渣衝洗3-4次，合併濾液除去活性炭；將濾液倒入圓底燒瓶，在電熱套中煮沸至不糊時，放入恆溫烘箱中80°C烘乾。
2.根據權利要求I所述的方法製備得到的水溶性絲素多肽食品防腐劑。
全文摘要
本發明公開了一種水溶性絲素多肽食品防腐劑及其製備方法，蠶絲脫膠稱取蠶繭，用清水浸泡清洗數次，晾乾後投入到質量濃度為0.5％的碳酸鈉水溶液中，浴比為1∶50(w/w)，煮沸0.5小時，用自來水衝洗，完成第一次脫膠，把經過第一次脫膠的蠶繭投入到質量濃度為0.5％碳酸鈉中，浴比為1∶50(w/w)，反應溫度為80℃，時間為0.5小時，然後用去離子水清洗，最後放入烘箱80℃烘乾，得到脫膠絲，即絲素；絲素經降解即為絲素多肽。從絲素多肽的抑菌試驗中觀察到加入絲素多肽的細菌(金黃色葡萄球菌或者乳酸菌)培養基中的菌落直徑小於未加絲素肽的菌落直徑，隨著絲素肽溶液濃度的增加，其菌落直徑愈小。
文檔編號C07K1/14GK102796188SQ20121028627
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月6日 優先權日2012年8月6日
發明者詹豪強, 張亞麗, 李林輝 申請人:西華師範大學