用吡哆醛-5′-磷酸-穀氨醯胺鎂防止由血管損傷引起的疾病的用途的製作方法

2023-09-17 17:20:25

專利名稱：用吡哆醛-5′-磷酸-穀氨醯胺鎂防止由血管損傷引起的疾病的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及用吡哆醛-5'-磷酸-穀氨醯胺鎂預防由LDL結合的過氧化物引起的血管損傷。
在最近四十年以來，在西部工業區發現代謝紊亂特別是脂肪代謝紊亂迅速增長。造成這種情況的主要原因是過剩的營養和/或富含脂肪的食品，以及缺乏運動。在這些條件下，血液中膽固醇值和脂值增加，這會增加心臟動脈硬化和周圍血管疾病的危險。已經知道，血液中膽固醇水平的增加會並發出現動脈血管硬化。血膽固醇過多是一種總伴隨著血脂過多的代謝系亂。在血脂蛋白過多或血脂過多的集合概念下，已總結出血脂過多(根據乳糜微粒的血清濁度)和血膽固醇過多(血漿中膽固醇含量增至多於200mg%)的致病機理不同，但臨床症狀圖像相同。
為了治療血膽固醇過多，主要採用芳氧基乙酸衍生物，特別是α-(對氯苯氧)-異丁酸-乙基酯，以及煙酸衍生物。
另外，DE-PS2461742號申請描述了採用吡哆素-5'-磷酸-穀氨醯胺脂和-天冬醯胺酯治療和預防血膽固醇過高。
對於危險的人群組，即吸菸者，糖尿病患者、老年人和那些高血壓患者或那些面臨重大壓力的人，不一定顯示血膽固醇過多或血酯過多的臨床圖像，而可能發生血管損傷。這可以追溯到血液中過氧化物濃度的增高，這種過氧化物是被LDL(低密度脂蛋白)結合的。這些LDL結合的過氧化物引起並促進脈管中動脈粥樣化和動脈硬化斑，並且可以被認為是引起糖尿病血管病的原因。J.M.C.Gutteridge等人，(Treuds in Biochemical Sciences，1990年4月，第129至135頁)和D.W.Morel等人(Journal of Lipid Research，第30卷，1989年，第1827至1834頁)曾對過氧化的產物濃度的增加和與之相應的血管損傷進行過描述。
已經知道血管中動脈硬化的變化是內皮損傷的結果，且致病過程如下內皮損傷-血小板粘連-平滑肌細胞增生-脂類沉積。
第一步，內皮損傷可能有許多原因，即由切應力引起張力過高的機械損傷，由膽固醇引起的血膽固醇過高的化學損傷，並且特別是由血液汙染引起的毒物損害。可以假定進一步的過程基本上與這三種類型的損傷相同。
內皮損傷以及隨後的在動脈內膜細胞之間和細胞內的脂肪沉積的結果是，血小板聚積增加，同時伴隨著平滑肌細胞的增生，這是由於在結締組織的鹼性物質中脂蛋白的流入進一步增加，與結締組織的葡萄糖氨-聚糖形成配合物，並造成細胞水平的代謝缺陷。然後在損傷區形成鈣形成物，所以在最後的分析中這些變化的結果導致血管阻塞。
W.Schneider於1987年在Johannes Gutenburg University of Mainz完成的論文中對血膽固醇過高的兔子和小鼠進行了試驗，試驗表明當服用相當高濃度的吡哆醛-5'-磷酸-穀氨醯胺鎂(MPPG)時，肝和主動脈的脂濃度降低。但他的工作未提供任何有關在危險的人群組中血管動脈粥樣化形成的機理，因此根據W.Schneider的結論，不能推斷通過消除血液中的起始汙染物可以預防動脈粥樣化的形成。
以前曾懷疑血液中的過氧化物可能起到了代謝系亂症引發劑的作用。U.P.Steinbrecher等人在J.Biol.Chem.，Vol.264，No.26，15216到15223頁(1989年)中描述了存在氧化的改性LDL以及它的受體。現在本申請在有目的的試驗中證實了這與LDL結合的過氧化物有關。通過體外實驗可以澄清毒物內皮損傷的機理，並且該試驗表明將這些過氧化物截斷並使它們無害是可能的。
本發明的目的是提供一種降低LDL結合的過氧化物的藥品以避免和/或延遲血管損傷，特別是在動脈血管中動脈粥樣化或動脈硬化的形成，以及由糖尿病引起的血管病。本發明的目的特別是還提供用於上述未診斷為血脂過多或血膽固醇過多的病症的藥物。
通過用吡哆醛-5'-磷酸-穀氨醯胺鎂製備適於預防由血管損傷導致的疾病的藥品，達到本發明的上述目的。特別是根據本發明，對危險的人群組，包括糖尿病患者、吸菸者、老年人高血壓患者和那些處於緊張中的人，可以預防動脈粥樣化疾病以及血管病。
吡哆醛-5'-磷酸-穀氨醯胺鎂是一種以前用來降低血液脂肪增加的物質。該物質(MPPG)是已知的，其商品名為SedalipidR，由Steigerwald Arzneimittelwerk(Darmstadt)商行銷售。
直到現在，吡哆醛-5'-磷酸-穀氨醯胺鎂可以用作血液中基本的截斷劑，並且因此能夠預防由脂過氧化物引起的鏈反應，還不為人所知。根據這種作為基本截斷劑的作用，適於用MPPG預防血管損傷，尤其是非血脂過多和/或血膽固醇過多的血管損傷。
MPPG是具有下式的吡哆素衍生物，
在本發明的意義上說，危險的人群組特別是吸菸者、糖尿病患者、那些高血壓患者以及如優秀運動員等所有處於緊張中的人和老年人。
根據本發明，上述化合物MPPG可以給那些具有高濃度LDL結合的過氧化物，但沒有血脂過多和/或血膽固醇過多症狀的危險的人服用。這些症狀通常是根據膽固醇水平以及膽固醇和甘油三酯的水平來確定。關於這些，參見美國國家膽固醇教育計劃(US National Cholesterol Education Programme)(NCEP)的推薦和歐洲動脈粥樣化研究學會(The European Atherosclerosis Socicty Study Group)提供的指標。下述表1和表2的值，歸納了那些被認為是正常的膽固醇和甘油三脂的水平和開始治療時的水平。
表1美國國家膽固醇教育計劃(NCEP)推薦
表2歐洲動脈粥樣化研究學會提供的指標類型A膽固醇200-250mg/dl(5.2-6.5mmol/l)甘油三酯＜200mg/dl(＜2.3mmol/l)估價總體CHD危險。注意考慮CHD家族史、高血壓、糖尿病、男性、年輕人、吸菸、低HDL膽固醇，例如＜35mg/dl。
如果超重，控制食物的能量;提供營養建議，並且如果存在的話，矯正其主危險因素。
類型B膽固醇250-300mg/dl(6.5-7.8mmol/l)
甘油三酯＜200mg/dl(＜2.3mmol/l)如類型A，估價總體CHD危險。
如果超重，控制食物能量，規定低脂飲食並監視其反應和服從情況。如果膽固醇仍然高，考慮使用降脂藥物類型C膽固醇＜200mg/dl(＜5.2mmol/l)甘油三酯200-500mg/dl(2.3-5.6mmol/l)查找引起血甘油三脂過多的潛在原因，例如肥胖，攝入過量的乙酸、利尿藥、β-阻滯劑、外源雌激素，糖尿病。
如果超重，控制飲食能量，處理可能存在的潛在原因，規定並監視食用低脂飲食。監測膽固醇和甘油三酯的水平。
類型D膽固醇200-300mg/dl(5.2-7.8mmol/l)甘油三酯200-500mg/dl(2.3-5.6mmol/l)如類型A，估價總體CHD的危險。如類型C，查找血甘油三酯過多的潛在原因。
如果超重，控制飲食能量，根據類型A或B處理可能存在的血甘油三酯過多的潛在起因，規定並監視食用低脂飲食，如果血清脂反應不足，而總體CHD危險高，考慮使用降脂藥。
類型E膽固醇＞300mg/dl(7.8mmol/l)和/或甘油三酯＞500mg/dl(5.6mmol/l)。
考慮安排臨床脂治療或者進行特定的內科檢查，並且飲食治療以及如果需要進行藥物治療。
在British Cardiac Society Working Group on Coronary Prevention、British Hyperlipidaemia Association和Canadian Consensus Conference on Cholesterol的推薦中公開了相似的指標。
由上表所示的數據可知，當膽固醇含量被認為有害時，其值的差別明顯很小。然而認識到這一點是非常有用的，即甚至在低於這些分界線時，或者特別是處於仍然正常與仍然增加的水平之間的灰色區域時，對於那些屬於具有高LDL結合的過氧化物的危險人群組，服用MPPG是有益的。
雖然對於將所診斷的膽固醇水平看作血酯過高時，不能給出明確的界限，但是假設通常的一個指標可以假定為膽固醇的量大約為240mg/dl(根據US推薦)或250mg/dl(根據EG推薦)時，可以被看作血脂過多的開始。因此，在低於上述給出的膽固醇水平時，特別考慮服用本發明的MPPG。
本發明人進行了許多試驗以清楚地表明在危險的人群組中存在高水平的LDL結合的過氧化物。試驗還能表明加入MPPG後，指示LDL結合的過氧化物的檢測信號消失。因此可以斷定，對屬於危險組的患者，使用MPPG是正確的和有益的。
對動脈粥樣化形成開始增加，特別是對上述定義的人群組，假定了下述機理，該機理將通過下述體外試驗得以證明。
通過存在於血液中的活性氧，(過氧化物基O-2，羥基OH-)，特別是過氧化物，將LDL氧化，以形成LDL過氧化物。這些LDL過氧化物基本上不被巨噬細胞吸收，但結合在位於內皮細胞上的淨化劑受體上(參見上述Steinbrecher等人署名的文獻)。以這種方式，在內皮細胞上形成LDL沉積，然後進一步吸引脂沉積。
通過用過氧化物和/或LDL結合的過氧化物使穀胱甘肽氧化引起了血管內皮細胞的進一步損傷。因為細胞不能較長期地保持其氧化還原的能力(K.Kuzuya等人，Biochem.Biophys.Res.Comm.，163卷，第3號，1989，第1466-1472頁)，這些氧化作用可以導致細胞的死亡。
下面的陳述對於MPPG對LDL結合的過氧化物影響的機理提供了更詳細的解釋。隨後以脂肪酸結合的過氧化物為基礎的實驗表明的MPPG的存在下脂肪酸結合的過氧化物被分解，並且可以因此無害。


圖1，表示亞麻酸(0.88mM)譜，主峰在211nm，而在大約232nm處發現一個較小的峰，這表明存在小部分氧化的亞麻酸。
圖2，反映了MPPG(濃度為0.125mm)譜，它表示在222，327和387nm處有峰。
圖3，表示了亞麻酸和MPPG溶液的圖譜。該圖譜在211，243和289nm處有峰。在圖1中232nm處明顯獲得的峰，在圖3中不再存在。而取代它的是，圖3在243和289nm處出現了兩個新峰。
下面的略圖反映出了如J.M.C Gutteridge等人在Trends in Biochemical Sciences(1990年4月)第130頁中所述的脂肪酸氧化過程中的假設反應機理
一開始通過H°基在橋鍵-CH2上起化學反應。由此引起了移位，以致於由分離的雙鍵形成了共軛雙鍵。結果在氧過氧化物基存在下形成了脂肪酸基。在脂肪酸分子進一步存在下，形成了脂肪酸氫過氧化物以及脂肪酸基，由此開始了鏈反應。
上面所示的反應略圖可以被下述234nm處的二烯反應證明。
從圖1到3可以推斷，通過加入濃度為0.125mM的MPPG(圖3)，在232nm處(圖1)氧化亞麻酸的峰消失了，由此上述引發的鏈反應被阻斷，並且因此治癒了疾病的發展。
在根據本發明所採用的物質MPPG存在下，對於氫過氧化物的分解，假設了下述的錳催化機理。
建議的MPPG-Mn催化的一氫過氧化物分解機理
依靠指示劑物質-氨基環丙烷羧酸(ACC)，現在可以證明該分解反應。ACC是在乙烯形成中自然產生的基本物質。可以定量測定釋放乙烯的量。
可以隨著例如氫過氧化枯烯的加入開始氫過氧化物的分解。ACC的功能是作為指示劑。假設反應的過程藉助於磷酸吡哆醛中的胺，它引起基的形成。該基開始ACC分解，形成為CH2H4、CO2和氰化物。
下述試驗表明了在氫過氧化枯烯存在下，根據氫過氧化枯烯(CumOOH)的濃度，用MPPG對ACC離解的刺激作用。同時，用相應摩爾量的磷酸吡哆醛(PP)進行對比試驗。
試驗實施例製備在(0.1M)pH7.4磷酸緩衝液中的不同濃度的氫過氧化枯烯溶液。
一次操作所需原料量磷酸緩衝液0.1M，pH7.4ACC 1.0mMMPPG 0.5mMMn2+ 0.1mMLA 0.88mMCumOOH 0.006-1.2mM蒸餾水 加至2ml表1根據CumOOH的濃度，利用MPPG/PP，通過CumOOH，對ACC離解的刺激作用(LA＝亞麻酸;CumOOH＝氫過氧化枯烯;ACC＝氨基環丙烷羧酸)
乙烯(PMOl)CumOOH－濃度(mM)0.006 0.12 0.06 0.12 0.6 1.22)MPPG只有CumOOH－ － 74 122271 1192±40 ±60 ±147% ±500隻有LA 4028402840284028 40284028 ±933 ±933 ±933 ±933 ±933 ±933理論值Σ 40284028 4102 4150 42995219LA+CumooH 10146926 9655 16059 79079 57894±407 ±471 ±565 ±5672 ±6768刺激作用(％) － 72.0 139.8 298.7 1863.3 1337.4b)pp只有CumOOH － － － － － －LA297229722972297229722972(＝理論值Σ)±439 ±439±439 ±439±439 ±439LA＋CumOOH 43194394 5247 5635 11972 17695±173 ±250±540 ±533±425 ±1827刺激作用(％)45.3 47.8 76.5 89.6 302.8 495.3圖4a和b，表明了根據CumOOH的濃度用MPPG或PP對ACC離解的刺激作用。
與MPPG形成對照，在用磷酸吡哆醛進行的ACC離解中，在使用低濃度範圍的氫過氧化枯烯(0.006mM)時觀察到可測量的乙烯的釋放。在0.12mM CumOOH濃度下，在MPPG的存在下，發現70%ACC離解的刺激作用。與PP形成對照，用0.6mM和1.2mM濃度的CumOOH，在MPPG的存在下，可測量到明顯更高的刺激效果。
權利要求
1.用吡哆醛-5′-磷酸穀氨醯胺鎂製備適用於降低LDL結合的過氧化物以及預防非血膽固醇過多或非血脂過多造成的血管損傷的藥物的用途。
2.根據權利要求1的用途，其中的血管損傷特別發生在包括糖尿病患者、吸菸者、老年人和那些高血壓患者以及那些處於緊張中的危險人群組中。
3.根據權利要求1和2的用途，預防動脈粥樣化病。
4.根據權利要求1和2的用途，預防血管病。
5.根據權利要求1至4的用途，其中的藥物另外含有錳鹽。
全文摘要
本發明涉及用吡哆醛-5′-磷酸-穀氨醯胺鎂製備適用於降低LDL結合的過氧化物以及預防非血膽固醇過多或非血脂過多造成的血管損傷的藥物的用途。
文檔編號A61P9/00GK1057391SQ9110436
公開日1992年1月1日 申請日期1991年5月25日 優先權日1990年5月25日
發明者沃納·施內德, 布裡塔·邁耶, 埃裡希·F·埃爾斯特納 申請人:施泰格瓦爾德藥品工廠有限公司