蛋白質純化方法

2023-09-18 08:54:50

蛋白質純化方法
【專利摘要】本發明提供一種吸附蛋白質的純化方法，該方法使用了蛋白質吸附多孔膜，方法中提供一種可抑制蛋白質的吸附能力降低的被吸附蛋白質的溶出方法。該方法包含吸附工序和溶出工序，在溶出工序中，使至少1種溶出液沿著與原液的通過方向相反的方向進行通過，所述原液是吸附工序中的含有吸附對象蛋白質的原液。
【專利說明】蛋白質純化方法
【技術領域】
本發明涉及一種用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆基體材料表面而成的多孔膜進行的蛋白質純化方法。
【背景技術】
近年來，在生物技術產業中，期望確立一種可有效地大量生產及大量純化蛋白質的技術。
一般而言，由於蛋白質通過使用源自動物的細胞株或大腸桿菌等菌體的培養來生產，因此，需要將作為目標的蛋白質(以下，有時記為「目標蛋白質」。)從培養液中分離且純化。特別是為了將利用了抗體的醫藥品(抗體醫藥品)實用化，需要從細胞培養液中將細胞碎片等渾濁成分、及源自細胞的溶存的蛋白質等非渾濁成分除去，將其純化至對人類的治療用途而言充分的純度。在該純化工序中，使用蛋白質吸附多孔膜或空心顆粒(粒子狀的吸附材料)等蛋白質吸附材料。
作為這樣的蛋白質吸附材料，可以舉出如專利文獻I~5及非專利文獻I中所記載那樣的蛋白質吸附多孔膜。
最近，對抗體醫藥品的需要迅速增加，意向大量生產作為抗體醫藥品的蛋白質。而且，伴隨培養技術的迅速進步，提高純化工序的能力也成為了課題，特別是對提高可實現高流速處理的蛋白質吸附多孔膜的能力寄予期待。
現有技術文獻 專利文獻
專利文獻1:國際公開第2009/054226號 專利文獻2:日本特開2009-53191號公報 專利文獻3:日本特表2006-519273號公報 專利文獻4:美國專利第6780327號說明書 專利文獻5:美國專利第5547575號說明書 非專利文獻
非專利文獻 l:Kyoichi Saito, CHARGED POLYPER BRUSH GRAFTED ONTOPOROUS HOLLOff-FIBER MEMBRANE IMPROVES SEPARATION AND REACTION INB10TECN0L0GY，Separation Science and Technology,ENGLAND,Taylar&Francis, 2002，37(3)，535-554

【發明內容】

發明所要解決的技術問題
一般而言，使含有作為吸 附對象的蛋白質的原液(以下，有時記為「原液」)通過蛋白質吸附多孔膜通過，使蛋白質吸附後，再使吸附的蛋白質(以下，有時記為「被吸附蛋白質」)溶出，當實現純化的目的之後，則將蛋白質吸附多孔膜廢棄。但是，為了提高純化工序的能力，要求重複使用蛋白質吸附多孔膜。
通過現有技術的處理使蛋白質吸附多孔膜再生而重複使用時，則存在吸附能力逐漸降低的傾向。
另外，如上所述，近年來從大量生產、大量純化的需要考慮，則期望進一步提高蛋白質吸附多孔膜的吸附能力。作為提高吸附能力的方法，使蛋白質多層地吸附於有限的膜的細孔表面的方法很有效，但越是使更多的蛋白質多層地吸附於有限的膜的細孔表面，則越降低蛋白質吸附多孔膜再生而重複使用時的吸附能力，結果使這樣的課題變得更顯著。用於解決問題的方案
吸附能力降低的原因之一，是因為全部被吸附的蛋白質無法完全溶出。因此，如果能夠提高被吸附蛋白質的溶出效率，並使蛋白質吸附多孔膜再生，就可以抑制因重複使用而引起的吸附能力的降低。
本發明人等為了解決上述課題進行了潛心研究的結果發現，通過使至少I種溶出液沿著與吸附工序中的含有吸附對象蛋白質的原液的通過方向相反的方向通過，可以解決上述課題而完成本發明。此外，本發明人等還發現，通過多層地吸附蛋白質的蛋白質吸附多孔膜，則上述方法可以更有效地發揮作用，於是完成了本發明。
即，本發明如下所述。
[0001]一種蛋白質純化方法，其是利用多孔膜進行的蛋白質純化方法，所述多孔膜是基體材料表面被具有蛋白質吸附能力的高分子覆蓋而形成的多孔膜，
該方法包括:
吸附工序，使含有吸附對象蛋白質的原液通過所述多孔膜，使該吸附對象蛋白質吸附於所述高分子；· 溶出工序，使溶出液通過所述多孔膜，使吸附於所述高分子的所述吸附對象蛋白質溶出在該溶出液中，
在所述溶出工序中，使至少I種溶出液沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過。
[0002]如[I]所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液選自:含有鹽的水溶液、調整了PH的水溶液、水、有機溶劑及它們的混合溶液。
[0003]如[I]或[2]所述的蛋白質純化方法，其中，在所述溶出工序中，使所述溶出液沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相同的方向和相反的方向通過。
[0004]如[I]~[3]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述高分子接枝於所述基體材料表面，且所述高分子的接枝率為5%以上且200%以下。
[0005]如[4]所述的蛋白質純化方法，其中，所述高分子的接枝率為30%以上且90%以下。
[0006]如[I]~[5]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為離子交換膜，且所述溶出液包含含有鹽的水溶液或調整了 PH的水溶液。
[0007]如[I]~[6]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜的多層度為1.1以上。
[0008]如[6]或[7]所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為弱鹼性陰離子交換膜或弱酸性陽離子交換膜，且所述溶出工序包括:
使PH調整為所述吸附對象蛋白質的等電點和所述多孔膜的等電點之間以外的水溶液通過的工序、以及
使含有鹽的水溶液通過的工序，
在上述至少一個工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
[0009]如[8]所述的蛋白質純化方法，其中，在使調整了 pH的水溶液通過的所述工序及使含有鹽的水溶液通過的所述工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
[0010]如[6]或[7]所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為弱鹼性陰離子交換膜或弱酸性陽離子交換膜，並且，
所述溶出工序包含:
使含有鹽的水溶液通過的第一工序；
使PH調整為所述吸附對象蛋白質的等電點和所述多孔膜的等電點之間以外的水溶液通過的第二工序；以及
使含有鹽的水溶液通過的第三工序，
在所述第一工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相同的方向通過水溶 液，
在所述第二工序及所述第三工序中，沿著與吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
[0011]如[I]~[10]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液被調整為所述吸附對象蛋白質穩定的pH。
[0012]如[I]~[11]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液為含有0.3mol/L以上的中性鹽的水溶液。
[0013]如[I]~[12]中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，其中，所述多孔膜是在通過液體或蒸汽進行了溼潤化的狀態下進行加熱至50~110°C的處理而製造的。
發明效果
按照本發明，可提供一種被吸附蛋白質的溶出方法，用於在使用蛋白質吸附多孔膜的蛋白質純化方法中抑制蛋白質的吸附能力的降低。
【具體實施方式】
下面，對本發明的優選的實施方式詳細地進行說明。但是，本發明並不限定於以下的實施方式，可以在其主旨的範圍內進行各種變形而實施。
本實施方式的蛋白質純化方法為如下方法:含有吸附工序和溶出工序，在溶出工序中，使至少I種溶出液沿著與吸附工序中含有吸附對象蛋白質的原液的通過方向相反的方向通過。
本實施方式中所使用的多孔膜，是含有基體材料和包覆於該基體材料表面且具有蛋白質吸附能力的高分子的膜，有時記為「蛋白質吸附多孔膜」。
另外，在本實施方式中，所謂「蛋白質吸附多孔膜」作為如下概念使用:該概念包含在稱為整塊體的具有一條或多條中空部的圓筒狀多孔燒結體上包覆具有蛋白質吸附能力的高分子而形成的形態。因此，在本實施方式中，所謂「用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆基體材料表面而成的多孔膜」，也包含用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆表面而成的整塊體(中空圓筒狀的多孔燒結體)。
在本實施方式中，通過「蛋白質吸附多孔膜」這樣的記載的例示，這種用高分子包覆的整塊體(中空圓筒狀的多孔質燒結體)也包含在其主旨的範圍內。
在本實施方式中，通過使含有吸附對象蛋白質的原液通過蛋白質吸附多孔膜，使吸附對象蛋白質吸附於蛋白質吸附多孔膜。所謂含有吸附對象蛋白質的原液，是含有將要吸附於蛋白質吸附多孔膜的蛋白質的溶液，是指通過該膜之前的溶液。
在本實施方式中，通過該膜後的溶液記為「透過液」。
通常，在製造醫藥品時的實際生產線上，原液中除目標蛋白質以外，還含有沒有用的蛋白質、菌體、病毒、渾濁成分等。也有通過前處理從原液中除去渾濁成分和/或菌體的情況。在本實施方式中，也可以為如下方法:使目標蛋白質作為吸附對象吸附於蛋白質吸附多孔膜，並使其它的成分透過後，僅使目標蛋白質溶出而回收的純化方法；將其它的蛋白質(例如沒有用的蛋白質)作為吸附對象進行吸附，使目標蛋白質透過而回收的純化方法。即，所謂「吸附對象蛋白質」為吸附於蛋白質吸附多孔膜的蛋白質，並不限定於目標蛋白質。根據純化方法，可以為目標蛋白質，也可以為沒有用的蛋白質。另外，原液中所含的吸附對象蛋白質可以為I種，另外，也可以為I種以上。
在本實施方式中，所謂「吸附」是指蛋白質通過與蛋白質吸附多孔膜的細孔表面的相互作用而粘貼住，與僅接觸的「附著」相區別。
在本實施方式中，有時將使含有吸附對象蛋白質的原液通過蛋白質吸附多孔膜並吸附吸附對象蛋白質的工序記為「吸附工序」。· 接下來，有時進行衝洗「附著」於蛋白質吸附多孔膜的成分(即，不是吸附對象的蛋白質(非吸附蛋白質)或渾濁成分)的工序。將該工序記為「清洗工序」，與後述的「溶出工序」相區別。通過清洗工序，在蛋白質吸附多孔膜表面仍存在「吸附」的蛋白質。
最後，通過溶出液使吸附於蛋白質吸附多孔膜的被吸附蛋白質從蛋白質吸附多孔膜中溶出而被回收。在此所謂的溶出液是為用於使被吸附蛋白質溶出的液體，並不用作通過蛋白質吸附多孔膜而流出的溶液的含義。
在本實施方式中，有時將使溶出液通過蛋白質吸附多孔膜，使被吸附蛋白質從蛋白質吸附多孔膜溶出的工序記為「溶出工序」。
在本實施方式中，所謂溶出工序並不僅僅是從蛋白質吸附多孔膜中溶出被吸附蛋白質，也可以是使溶出液通過蛋白質吸附多孔膜從而使蛋白質吸附多孔膜再生的工序。即，溶出工序中，被吸附蛋白質在溶出液中的含量不特別地視為問題。
在溶出工序中，使至少I種溶出液沿著與吸附工序中原液的通過方向相反的方向通過，從而則可以純化蛋白質，並使蛋白質吸附多孔膜再生。
在本實施方式中，在通過用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆基體材料表面而成的多孔膜進行的蛋白質純化方法中，不僅提供抑制蛋白質吸附能力降低的被吸附蛋白質溶出方法，而且由於被吸附蛋白質的溶出為蛋白質吸附多孔膜的再生處理的一部分，因此，也可以認為可提供一種蛋白質吸附多孔膜的再生方法。本實施方式的蛋白質純化方法中的機理的詳細情況尚不明確，但可以如下考察。
通常，在溶出工序中，溶出液沿著與吸附工序中原液的通過方向相同的方向通過。
本發明不拘泥於以下的理論，但認為如本實施方式所示，通過至少I次將溶出液的流動方向變為與原液的通過方向相反的方向通過溶出液，並通過導入到蛋白質吸附多孔膜中基體材料表面的具有蛋白質吸附能力的高分子鏈振動的效果，則可以溶出被吸附蛋白質。即、蛋白質有時以進入相鄰的高分子鏈間的方式以多層堆積並吸附，潛入深處的蛋白質不易溶出。認為在吸附工序中，高分子鏈在原液的流動方向拉長。因此，認為在溶出工序中，通過使溶出液沿著與原液的流動方向相反的方向流動，則反捋高分子鏈，高效地溶出潛入深處的蛋白質，因此，可以得到重複使用時吸附能力降低得以抑制的膜，並使蛋白質吸附多孔膜再生。
作為蛋白質吸附材料，除蛋白質吸附多孔膜以外，也有時使用蛋白質吸附球進行蛋白質的純化。在使用蛋白質吸附球的情況下，在筒狀的容器(柱)中填充有蛋白質吸附球的狀態下進行蛋白質的純化。作為再生方法，有時使液體在容器中沿著與原液通過方向相反的方向流動，但這是為了除去渾濁或解開壓密化後的球而進行的。即使讓液體在容器中沿著相反方向流動，也難以控制各球粒子的表面的液體流動，並且從球表面連接至內部的細孔部內的蛋白質的移動擴散受到限制，因此，液體在容器中的流動方向不會對溶出造成影響，可以說本實施方式對於蛋白質吸附多孔膜為特別有效的再生方法。
作為蛋白質吸附多孔膜的形狀，可以舉出:平板膜、中空纖維膜等。
所謂平板膜是指片狀的膜，片材的正面和反面通過作為貫穿孔的細孔而連續的平板膜。 所謂中空纖維膜是指具有中空部分的圓筒狀或纖維狀的膜，中空纖維膜的中空側(內側)和外側通過作為貫穿孔的細孔而連通。
對蛋白質吸附多孔膜的形狀而言，只要液體或氣體可透過貫穿孔從正面向反面或從反面向正面、或從內側向外側或從外側向內側透過就沒有特別限定。
通常，蛋白質吸附多孔膜僅有膜是無法有效使用的，為了通過液體，蛋白質吸附多孔膜在收納於被稱為組件的捆包容器中的狀態下使用，從組件成型時的流路結構簡單，且沿著與吸附工序中原液通過方向相反的方向的液體流通變得容易的方面考慮，優選中空纖維膜。組件結構只要是與各個蛋白質吸附多孔膜的形狀對應的公知的結構即可，在本實施方式中沒有特別限定。
在本實施方式中，蛋白質吸附多孔膜的尺寸可根據組件設計、膜的製造方法、使用用途自由地選擇。例如若為平板膜，則只要可在組件中成型且可通過液體，則可自由地設計片材的厚度、大小。若為中空纖維膜或整塊體，則外徑及內徑只要可物理上地保持多孔膜的形狀,則可自由地設計尺寸。
在本實施方式中，作為蛋白質吸附多孔膜的基體材料，若對於蛋白質的純化中所使用並接觸的液體具有耐受性，則可以使用公知技術的原材料。
例如可以舉出:高分子材料、無機材料、及有機無機混合材料等，但從成形性的觀點考慮，優選使用了聞分子材料的聞分子基體材料。
在使用聞分子基體材料的情況下，從保持機械性質的觀點考慮，聞分子基體材料優選由聚烯烴類聚合物構成。作為聚烯烴類聚合物，例如可以舉出:乙烯、丙烯、丁烯等烯烴均聚物、2種以上該烯烴的共聚物等。
在使用鹼性溶液作為溶出液的情況下，其中，優選機械強度特別優異、具有耐鹼性的聚乙烯。
可通過熱誘導相分離法、非溶劑相分離法、電子束照射法等公知技術將高分子基體材料製成多孔膜。
熱誘導相分離法，是將聚烯烴類聚合物等高分子的溶液在高溫下溶解，之後進行冷卻的方法。在冷卻過程中，高分子溶液網狀地相分離為高分子和溶劑，因此，若在冷卻後除去溶劑，則可得到多孔膜。其特徵在於，可得到細孔徑分布較小的多孔膜。
非溶劑相分離法，是將高分子溶液浸潰在非溶劑中的方法。通過非溶劑浸潰在高分子溶液中，高分子的溶解度降低，高分子網狀地析出，從而可得到多孔膜。其特徵在於，可得到帶細孔徑傾斜的多孔膜。
電子束照射法，是對製成膜狀的高分子照射電子束，形成多個貫穿孔，從而得到多孔膜的方法。可得到均勻的細孔徑的多孔膜。
在本實施方式中，可根據製作的蛋白質吸附多孔膜的設計從這些方法中適宜選擇。
本實施方式中的基體材料的平均細孔徑只要可考慮吸附對象蛋白質的種類、混合存在的渾濁成分、溶液的粘度等實現工藝所需要的分離？純化度及通過速度就沒有特別限定。以可除去渾濁成分的方式設計平均細孔徑的上限，以可實現期望的通過速度的方式設計平均細孔徑的下限，該平均細孔徑優選為0.ΟΟΙμπι~10 μ m，更優選為0.014111~1(^111，進一步優選為0.1 μ m~I μ m。
基體材料中的細孔所佔的體積比率，即孔隙率只要在可保持蛋白質吸附多孔膜的形狀且實現通過速度的範圍就沒有特別限`定。以可保持形狀的方式設計孔隙率的上限，以可實現期望的通過速度的方式設計平均細孔徑的下限，該孔隙率優選為5%~99%，更優選為10%~95%，從實用的方面考慮，進一步優選為30~90%。
平均細孔徑及孔隙率的測定例如可以通過Marcel Mulder著「膜技術」(株式會社IPC)中所記載那樣的本領域從業人員通常採用的方法來進行。作為測定方法的具體例，可以舉出:利用電子顯微鏡的觀察、始沸點法、水銀壓入法、透過率法等。
在本實施方式中，基體材料的表面優選細孔的至少一部分用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆。
作為高分子，例如可以舉出直鏈狀高分子、交聯型的高分子等。從相反方向的溶出液的流動可有效地溶出嵌入高分子鏈間的蛋白質的方面考慮，優選直鏈狀高分子。
蛋白質吸附多孔膜根據包覆基體材料表面的高分子的官能團，可分類為離子交換膜、群特異性親和吸附膜、個別特異性親和吸附膜、疏水性相互作用吸附膜。離子交換膜細分為強酸性陽離子交換膜、弱酸性陽離子交換膜、強鹼性陰離子交換膜、及弱鹼性陰離子交換膜。
在本實施方式中，這些官能團可根據被吸附蛋白質的種類、優選目標蛋白質的種類、要求的純化度等選擇適當的官能團。
作為強酸性陽離子交換膜的官能團，例如可以舉出:磺酸基(-SO3-)等，作為弱酸性陽離子交換膜的官能團，例如可以舉出:羧酸基(-C00-)等。作為強鹼性陰離子交換膜的官能團，例如可以舉出:季銨基(Q、-N+R3)、季銨基乙基(QAE、_ (CH2)2-N+R3)等。在此，R沒有特別限定，與同一個N鍵合的R可以相同或不同，優選為烷基、芳基等經基。更具體而目，可以舉出:二甲基氣基(TMA、-N+Me3)等。
作為弱鹼性陰離子交換膜的官能團，例如可以舉出:伯氨基(-Mg、仲氨基(-NHR)、叔氨基(-NR2)等，具體而言，可以舉出:二乙基氨基乙基(DEAE、-(CH2)2-NEt2)、二乙基氨基丙基(DEAP、-(CH2)3-NEt2)等。在此，R也沒有特別限定，與同一個N鍵合的R可以相同或不同，優選表不烷基、芳基等經基。
作為群特異性親和吸附膜的官能團，例如可以舉出:Cibacron Blue F3G-A、ProteinA、伴刀豆球蛋白A、肝素、單寧、金屬螯合基團等。
作為個別特異型親和吸附膜的官能團，例如可以舉出抗原、抗體類等。
作為疏水性相互作用吸附膜的官能團，例如可以舉出:烷基或芳香族類官能團。烷基從進一步提高疏水性的相互作用、提高吸附能力的觀點考慮，優選碳原子為4個以上。
在本實施方式中，關於將包覆基體材料表面的具有蛋白質吸附能力的高分子導入基體材料表面的方法，例如可以舉出:化學反應或高分子塗布等。在本實施方式中，可以根據基體材料的材質、蛋白質吸附多孔膜的使用用途、製造方法等觀點選擇最佳的方法，也可應用於被稱為整塊體的多孔質燒結體。
作為通過化學反應，用具有蛋白質吸附能力的高分子包覆基體材料表面的方法，例如可以舉出:放射線接枝聚合法等。放射線接枝聚合法為對基體材料照射Y射線等放射線使基體材料表面活化而使單體聚合的方法。與後述的利用高分子塗布的包覆方法相比，可以期待基體材料和包覆基體材料表面的高分子的牢固的結合。進而，由於不需要聚合引發劑等試劑，因此，從可減輕在反應後清洗這些試劑的負荷的觀點考慮，可優選使用。· 放射線接枝聚合法中包含(I)將包含具有蛋白質吸附能力的官能團的單體直接接枝聚合於基體材料上接枝聚合的方法、或(2)將含有可導入具有蛋白質吸附能力的官能團的官能團的單體接枝聚合於基體材料上，接下來，導入具有蛋白質吸附能力的官能團的方法，任一方法均可以採用。
在本實施方式中，有時將通過接枝聚導入的高分子稱為「接枝鏈」。
作為上述(I)所示的方法可通過一階段的反應得到具有蛋白質吸附能力的高分子的包覆層，因此，是簡便且優選的方法。
作為(I)的方法中所使用的上述單體，沒有特別限定，例如可以舉出:甲基丙烯酸酯衍生物、乙烯基化合物、稀丙基化合物等，具體而目，可以舉出:甲基丙稀酸二乙基氣基乙酷、甲基丙烯酸磺丙酯、乙烯基苄基三甲基氯化銨、烯丙基胺等。
作為上述(2)所示的方法，從容易使各種具有蛋白質吸附能力的官能團的變化一致或容易使具有蛋白質吸附能力的官能團的導入率(以下，有時記為「配體轉化率」。)的變化一致這樣的觀點考慮，是優選的方法。
作為(2)的方法中所使用的上述單體，沒有特別限定，例如可以舉出:具有反應性較高的環氧基的甲基丙烯酸縮水甘油酯(GMA)等。
在通過放射線接枝聚合法導入具有蛋白質吸附能力的高分子的情況下，接枝鏈的量(以下，有時記為「接枝率」。)及配體轉化率有時對蛋白質吸附多孔膜的吸附能力及機械強度造成影響。在本實施方式中，接枝率(dg[%])基於放射線接枝聚合前後的相對於基體材料的增加重量而定義，可通過下述式(I)求得。
[數學式I]
【權利要求】
1.一種蛋白質純化方法，其是利用多孔膜進行的蛋白質純化方法，所述多孔膜是基體材料表面被具有蛋白質吸附能力的高分子覆蓋而形成的多孔膜， 該方法包括: 吸附工序，使含有吸附對象蛋白質的原液通過所述多孔膜，使該吸附對象蛋白質吸附於所述高分子； 溶出工序，使溶出液通過所述多孔膜，使吸附於所述高分子的所述吸附對象蛋白質溶出在該溶出液中， 在所述溶出工序中，使至少I種溶出液沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過。
2.如權利要求1所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液選自:含有鹽的水溶液、調整了 PH的水溶液、水、有機溶劑及它們的混合溶液。
3.如權利要求1或2所述的蛋白質純化方法，其中，在所述溶出工序中，使所述溶出液沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相同的方向和相反的方向通過。
4.如權利要求1~3中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述高分子接枝於所述基體材料表面，且所述高分子的接枝率為5%以上且200%以下。
5.如權利要求4所述的蛋白質純化方法，其中，所述高分子的接枝率為30%以上且90%以下。
6.如權利要求1~5中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為離子交換膜，且所述溶出液包含含有鹽的水溶液或調整了 pH的水溶液。`
7.如權利要求1~6中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜的多層度為1.1以上。
8.如權利要求6或7所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為弱鹼性陰離子交換膜或弱酸性陽離子交換膜，且 所述溶出工序包括: 使PH調整為所述吸附對象蛋白質的等電點和所述多孔膜的等電點之間以外的水溶液通過的工序、以及 使含有鹽的水溶液通過的工序， 在上述至少一個工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
9.如權利要求8所述的蛋白質純化方法，其中，在使調整了pH的水溶液通過的所述工序及使含有鹽的水溶液通過的所述工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
10.如權利要求6或7所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜為弱鹼性陰離子交換膜或弱酸性陽離子交換膜，並且， 所述溶出工序包含: 使含有鹽的水溶液通過的第一工序； 使PH調整為所述吸附對象蛋白質的等電點和所述多孔膜的等電點之間以外的水溶液通過的第二工序；以及 使含有鹽的水溶液通過的第三工序，在所述第一工序中，沿著與所述吸附工序中所述原液的通過方向相同的方向通過水溶液， 在所述第二工序及所述第三工序中，沿著與吸附工序中所述原液的通過方向相反的方向通過水溶液。
11.如權利要求1~10中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液被調整為所述吸附對象蛋白質穩定的pH。
12.如權利要求1~11中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述溶出液為含有0.3mol/L以上的中性鹽的水溶液。
13.如權利要求1~12中任一項所述的蛋白質純化方法，其中，所述多孔膜是在通過液體或蒸汽進行了溼潤化的狀態·下進行加熱至50~110°C的處理而製造的。
【文檔編號】B01J20/26GK103857692SQ201280047560
【公開日】2014年6月11日 申請日期:2012年9月28日 優先權日:2011年9月30日
【發明者】佐藤優太, 篠原直志, 白瀧浩伸 申請人:旭化成化學株式會社