肉桂醯胺衍生物及其作為腦神經保護劑的應用的製作方法

2023-11-02 07:56:17

專利名稱：肉桂醯胺衍生物及其作為腦神經保護劑的應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及的通式(I)取代的肉桂酸衍生物與二苯甲基哌嗪類化合物縮合成取代的肉桂醯胺衍生物的製備方法可由合成示意

圖1～3表示 a.取代的苯甲醛與丙二酸縮合得到取代的肉桂酸衍生物(見合成示意圖1)； b.取代的二苯甲酮經還原、滷代、取代得到取代的二苯甲基哌嗪(見合成示意圖2)； c.將取代的肉桂酸衍生物與氯化亞碸反應製備相應的醯氯，與取代的二苯甲基哌嗪縮合(見合成示意圖3)； d.將縮合所得產物用無水乙醇重結晶，得目標化合物。
合成示意圖1
合成示意圖2
合成示意圖3
本發明的有益效果 目前，腦神經保護活性的篩選動物實驗按常規方法是採用頸內動脈線栓法製備大鼠大腦中動脈阻塞(MCAO)局灶性腦缺血模型評價抗腦缺血藥物的藥效。實驗數據(詳見實施例21)表明預防性給予本發明部分化合物，大鼠腦指數明顯降低，梗死面積明顯減少，神經功能評分值降低，病理檢查表明腦水腫及壞死症狀明顯改善，說明這些化合物對MCAO局灶性腦缺血具有較好的保護作用。

具體實施例方式 下面的實施例可使本專業技術人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1 (E)-3-(3，4-二乙醯氧基苯基)丙烯酸 向裝有回流冷凝管的250ml的圓底燒瓶中加入3，4-二羥基苯甲醛(13.8g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應3小時。冷卻，減壓蒸除溶劑，殘餘物倒入濃鹽酸(68ml)和冰(150ml)的混合液中，攪拌，析出類白色固體。過濾，無水乙醇重結晶，得類白色粉末咖啡酸6.4g，收率35.2％，mp205.9-209.5℃。
咖啡酸(5.2g，0.029mol)，乙酸酐(24ml)，吡啶(20ml)加到反應瓶中，室溫攪拌過夜。減壓蒸除溶劑，殘餘物倒入冰水中，得淡黃色固體，無水乙醇重結晶，得白色固體6.5g，收率85.9％，mp197.1-199.7℃。
實施例2 (E)-3-(3-甲氧基-4-乙醯氧基苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，香蘭素(15.2g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得阿魏酸9.2g，收率47.4％，mp170.7-172.4℃。
阿魏酸(5.6g，0.029mol)，乙酸酐(12ml)，吡啶(20ml)室溫反應，得白色固體6.1g，收率89.1％，mp168.5-169.9℃。
實施例3 (E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-氟苯甲醛(12.4g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體13g，收率78.3％，mp209.1-210.8℃。
實施例4 (E)-3-(4-甲基苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-甲基苯甲醛(12.0g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體12.3g，收率75.9％，mp195.1-196℃。
實施例5 (E)-3-(4-乙醯氧基苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-羥基苯甲醛(12.2g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得(E)-3-(4-羥基苯基)丙烯酸6.4g，收率39％，mp210-213℃。
(E)-3-(4-羥基苯基)丙烯酸(4.74g，0.029mol)，乙酸酐(12ml)，吡啶(20ml)室溫反應，得白色固體5.4g，收率90.7％，mp157.3-158.5℃。
實施例6 (E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-甲氧基苯甲醛(13.6g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體12.6g，收率70.8％，mp173.2-174.4℃。
實施例7 (E)-3-(苯並[d][1，3]二氧雜環戊烯-5-基)丙烯酸 製備方法同實施例1，胡椒醛(15.0g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體13.1g，收率68.2％，mp241.5-244.4℃。
實施例8 (E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-氯苯甲醛(14.5g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體13.2g，收率72.3％，mp238.3-240.5℃。
實施例9 (E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸 製備方法同實施例1，4-溴苯甲醛(18.4g，0.1mol)，丙二酸(15.6g，0.15mol)，吡啶(68ml)，六氫吡啶(1.8ml)，加熱至95℃反應，得白色固體15.9g，收率70％，mp246.3-248.3℃。
實施例10 1-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪 向裝有回流冷凝管的500ml的圓底燒瓶中加入氫氧化鉀(52.5g)，二-(4-甲氧基苯基)甲酮(84g，0.347mol)，鋅粉(70g)，95％乙醇(350ml)，回流攪拌反應3小時。趁熱過濾，濾液冷卻，得白色固體。用無水乙醇重結晶，得白色針狀晶體二-(4-甲氧基苯基)甲醇66.8g，收率78.9％，mp68.9-69.8℃。
將二-(4-甲氧基苯基)甲醇(10g，0.041mol)，二氯甲烷(120ml)，氯化亞碸(4ml)加入反應瓶中，室溫攪拌3小時。減壓濃縮，得淡紅色油狀物二-(4-甲氧基苯基)氯甲烷。
向上述油狀液中加入環己烷(160ml)，無水哌嗪(10.8g，0.125mol)，攪拌回流16h。減壓濃縮得淡黃色固體，加入二氯甲烷(120ml)攪拌溶解，濾去不溶物。濾液中加入1MNaOH溶液(100ml)，攪拌，分液，濃縮有機層，得白色蠟狀固體，用乙腈重結晶，得白色針狀晶體8.6g，收率67.3％，mp130-132℃。
實施例11 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(3，4-二乙醯氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-501) 向裝有直型乾燥管的50ml圓底燒瓶中加入(E)-3-(3，4-二乙醯氧基苯基)丙烯酸(1.056g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，室溫攪拌3.5小時。減壓蒸除溶劑，殘餘物加無水丙酮(15ml)溶解，將所得溶液緩慢滴入裝有1-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪(1.87g，6mmol)，丙酮(15ml)，三乙胺(5ml)的50ml圓底燒瓶中，攪拌過夜。過濾，所得濾液減壓濃縮，殘餘物用無水乙醇重結晶，得淡黃色固體1.0g，收率44.8％，mp193.2-195.1℃。ESI-MS(m/z)559.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；2.81(s，6H，CH3COO*2)；3.63-3.71(m，4H，CON(CH2)2)；3.77(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.64-6.69(d，1H，＝CHCO)；6.78-7.31(m，11H，Ph)；7.56-7.61(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例12 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-[(3-甲氧基-4-乙醯氧基)苯基]-丙-2-烯-1-酮(WB-502) (E)-3-(3-甲氧基-4-乙醯氧基苯基)丙烯酸(0.944g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.3g，收率61.3％，mp185.0-186.2℃。ESI-MS(m/z)531.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.30(s，3H，CH3COO)；2.40-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.72(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；3.84(s，3H，CH3O)；4.19(s，1H，CH(Ph)2)；6.74-6.77(d，1H，＝CHCO)；6.81-7.31(m，11H，Ph)；7.57-7.60(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例13 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-氟苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-503) (E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸(0.664g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.2g，收率65.2％，mp148.1-150.4℃。ESI-MS(m/z)461.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.43-2.45(m，4H，N(CH2)2)；3.65-3.76(m，4H，CON(CH2)2)；3.79(s，6H，CH3O*2)；4.22(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.79(d，1H，＝CHCO)；6.84-7.51(m，12H，Ph)；7.62-7.65(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例14 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-甲基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-504) (E)-3-(4-甲基苯基)丙烯酸(0.648g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.3g，收率71.3％，mp105.6-107.1℃。ESI-MS(m/z)457.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.35(s，3H，CH3)；2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.64-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.80(d，1H，＝CHCO)；6.81-7.39(m，12H，Ph)；7.59-7.64(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例15 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-乙醯氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-505) (E)-3-(4-乙醯氧基苯基)丙烯酸(0.824g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體0.9g，收率45.0％，mp171.2-173.1℃。ESI-MS(m/z)501.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.31(s，3H，CH3COO)；2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.64-3.74(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.76-6.79(d，1H，＝CHCO)；6.87-7.41(m，12H，Ph)；7.61-7.64(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例16 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-甲氧基苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-506) (E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸(0.712g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體0.9g，收率47.7％，mp146.1-148.3℃。ESI-MS(m/z)473.2(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.65-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；3.84(s，3H，CH3O)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.67-6.72(d，1H，＝CHCO)；6.75-7.46(m，12H，Ph)；7.58-7.63(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例17 (E)-3-(苯並[d][1，3]二氧雜環戊烯-5-基)-1-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-丙-2-烯-1-酮(WB-507) (E)-3-(苯並[d][1，3]二氧雜環戊烯-5-基)丙烯酸(0.768g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.1g，收率56.6％，mp145.1-146.0℃。ESI-MS(m/z)487.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.38-2.42(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.74(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；5.97(s，2H，OCH2O)；6.63-6.68(d，1H，＝CHCO)；6.77-7.32(m，11H，Ph)；7.53-7.59(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例18 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-氯苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-508) (E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸(0.73g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.3g，收率68.2％，mp114.2-116.0℃。ESI-MS(m/z)477.3(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.43(m，4H，N(CH2)2)；3.52-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.18(s，1H，CH(Ph)2)；6.77-6.82(d，1H，＝CHCO)；6.78-7.43(m，12H，Ph)；7.56-7.61(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例19 (E)-[4-[二-(4-甲氧基苯基)甲基]哌嗪-1-基]-3-(4-溴苯基)-丙-2-烯-1-酮(WB-509) (E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸(0.908g，4mmol)，二氯甲烷(15ml)，氯化亞碸(1.5ml)，吡啶(1滴)，其他操作同實施例12。得淡黃色固體1.0g，收率48.0％，mp122.4-124.0℃。ESI-MS(m/z)521.1(M+H)+；1HNMR(δ，ppm，CDCl3)2.39-2.43(m，4H，N(CH2)2)；3.62-3.73(m，4H，CON(CH2)2)；3.76(s，6H，CH3O*2)；4.19(s，1H，CH(Ph)2)；6.79-6.84(d，1H，＝CHCO)；6.80-7.54(m，12H，Ph)；7.54-7.59(d，1H，Ph-CH＝)。
實施例20 實施例中目標化合物對急性腦缺血小鼠生存時間的影響。
目標化合物及陽性對照藥尼莫地平臨用前用0.5％羧甲基纖維素鈉配成所需濃度的混懸液；試驗動物為ICR小鼠，體重19-25g，雌雄各半。將小鼠按性別隨機分組，每組10隻，雌雄各半。分別灌胃給予受試藥物0.2ml/10g，空白對照組給予等容量NS，陽性對照組給予等容量尼莫地平80mg/Kg，給藥後1小時乙醚麻醉，固定後頸部正中切開，分離兩側頸總動脈及迷走神經並結紮，記錄小鼠存活時間(每分鐘呼吸次數小於或等於5次，即認為小鼠死亡)。

與NS組比較，*P＜0.05 上述試驗結果表明，化合物WB-502、WB-503、WB-508、WB-509可明顯延長急性腦缺血小鼠的的生存時間，可能具有一定的抗腦缺血作用，其中化合物WB-502、WB-503作用較強。
實施例21 實施例中目標化合物對大腦中動脈阻斷腦缺血(MCAO)大鼠的影響。
取SD大鼠60隻，按性別體重隨機分為6組，每組10隻，雌雄各半。試驗前3天及試驗後1天分別灌胃給予目標化合物36、12、4mg/Kg及尼莫地平6mg/Kg，給藥容積均為2ml/Kg。
按上述方法進行分組給藥，末次給藥後1小時，10％水合氯醛0.5g/Kg ip(即0.5ml/100g)麻醉，仰臥位固定，分離右側頸總動脈、頸外動脈及頸內動脈，結紮頸總動脈近心端，在頸總動脈與頸外動脈的分支處作一切口，用4-0號尼龍線(頭端燒成圓形，外端約為0.2mm)由頸外動脈插入沿頸內動脈進入大腦中動脈，線栓總長約2cm。腦缺血2小時後，去除線栓，結紮動脈，縫合切口。假手術組大鼠只進行手術而不進行線栓。
造模後4、8、24觀察大鼠行為改變，進行神經症狀評分，評分標準如下(1)提鼠尾觀察前肢屈曲情況，如雙前肢對稱伸向地面，計為0分，如手術對側前肢出現腕曲、肘屈曲、肩內旋、既有肘屈曲又有肩內旋者，分別計為1、2、3、4分。(2)將動物置於平地面上，分別推雙肩向對側移動，檢查阻力，如雙側阻力對等且有力者計為0分，如向手術的對側推動時阻力下降者，根據下降程度不同分為輕、中、重度，分別計為1、2、3分。(3)將動物雙前肢置於一金屬網上，觀察雙前肢的肌張力。雙前肢肌張力對等且有力者計為0分，同樣根據手術對側肌張力下降程度不同分別計為1、2、3分。(4)動物有不停向一側轉圈者，計為1分。根據評分標準，滿分為11分，分數越高，動物行為障礙越嚴重。
造模後24小時後再給藥1次，給藥後1小時將大鼠以10％水合氯醛0.5g/Kg ip(即0.5ml/100g)麻醉後斷頭處死取出腦組織，去掉嗅球、小腦和低位腦幹後稱重，計算腦指數(腦指數＝g腦重量/100g體重)。將大腦放入冰冷鹽水中20min，切成5片冠狀腦片，第一刀在腦前極與視交叉連線中點處，第二刀在視交叉部位，第三刀在漏鬥柄部位，第四刀在漏鬥柄與葉尾極之間，置於2％TTC溶液中，37℃光孵育30min。梗塞區呈現白色，非梗塞區呈紅色。拍攝數碼照片後用圖像分析軟體計算梗塞面積及腦片面積，計算梗塞面積百分率(梗塞面積百分率＝梗塞面積/腦片面積×100％)。取第三腦片用4％多聚甲醛固定後，用石蠟包埋，HE染色，在光學顯微鏡下觀察神經細胞的病理改變。
腦指數及梗塞面積以均數±標準差表示，用SPSS統計學軟體進行統計學分析，各組數據使用ANOVA分析，用SNK檢驗進行組間均數的比較，以P≤0.05為差異有顯著性統計學意義。神經症狀分級組間整體平均秩和檢驗用Kruskal-Wallis法檢驗，組間兩兩比較採用重複測量資料的廣義估計方程完成，以P≤0.05為差異有顯著性統計學意義。

*P＜0.05與MACO組比較，##P＜0.01與假手術組比較 線栓法複製大鼠大腦中動脈阻斷腦缺血(MCAO)模型被廣泛用於評價抗腦缺血藥物的藥效，預防性給予WB-502、WB-503大鼠腦指數明顯降低，梗死面積明顯減少，神經功能評分值降低，病理檢查表明腦水腫及壞死症狀明顯改善，說明化合物WB-502、WB-503對MCAO局灶性腦缺血具有較好的保護作用。
權利要求
1.一類取代的肉桂醯胺衍生物，其特徵在於，該衍生物為具有下述通式(I)化合物的游離鹼或鹽
所說的鹽為鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、三氟乙酸鹽或甲磺酸鹽中的一種。
其中，R1、R2、R3、R4和R5相同或不同，各自獨立地代表H、滷素、硝基、氨基、腈基、羥基、烷氧基、烴基、芳烴基、雜環基、芳基、取代烴基、取代芳烴基、取代雜環、取代芳基；
R6和R7相同或不同，各自獨立地代表H、滷素、烴基、滷素取代的烴基、硝基、氨基、腈基、羥基、烷氧基、芳烷氧基、雜環烷氧基。
2.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的芳基、芳烴基或芳烷氧基中的芳基，為苯、聯苯或萘，或者為F、Cl、Br、I、C1～10烷基、C1～10烷氧基、硝基或氨基取代的苯、聯苯或萘。
3.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的烴基、芳烴基中的烴基，指具有1-10個碳原子的直鏈或支鏈的烷基，或2-10個碳原子的直鏈或支鏈的烯基，或3-10個碳原子的直鏈或支鏈的環烷基；烷氧基或芳烷氧基或雜環烷氧基中的烷基指具有1-10個碳原子的直鏈或支鏈的烷基。
4.根據權利要求3所述通式(I)化合物，其特徵在於其中烷基是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、叔丁基、仲丁基、戊基、新戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基；烯基是乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基、異丁烯基、戊烯基、己烯基、庚烯基、辛烯基、壬烯基、癸烯基；環烷基是環丙基、環丁基、環己基、環庚基、環辛基、環壬基、環癸基。
5.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的雜環基、取代雜環或雜環烷氧基中的雜環基指含有從氧、氮、硫原子中任選的一個或一個以上的雜原子的飽和雜環或芳香雜環。
6.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7代表的滷素為F、Cl、Br或I。
7.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於R1、R2、R3、R4、R5、R6或R7中取代的烴基、芳烴基、雜環基、芳基，其取代基是滷素、硝基、氨基、羥基、醚基、羧基、酯基和醯胺基。
8.根據權利要求1所述通式(I)化合物，其特徵在於氨基為NH2、R8NH、R9R10N；其中R8、R9或R10為權利要求3所述的烴基，或者R9R10N為含氮原子的三元～八元雜環。
9.權利要求1～8項中任一所述的衍生物在製備治療缺血性腦卒中的腦神經元保護劑中的應用。
10.用於治療缺血性腦卒中的藥物組合物，其特徵在於，該組合物中含有治療有效量的權利要求1～8任一所述的衍生物和醫學上可以接受的載體。
全文摘要
本發明公開了一類取代的肉桂醯胺衍生物及其作為腦神經保護劑在製藥中的應用。本發明涉及的取代的肉桂醯胺衍生物是具有的結構為通式(I)化合物的游離鹼和鹽。本發明的化合物在動物實驗中顯示出對動物腦缺血模型具有治療作用。本發明的化合物對缺血性腦卒中後的腦神經有保護作用，可用於製備缺血性腦卒中後的腦神經保護劑，用於治療缺血性腦卒中。
文檔編號A61P9/10GK101759668SQ20091026412
公開日2010年6月30日 申請日期2009年12月30日 優先權日2009年12月30日
發明者吳斌, 許逸, 李萍, 張曉平, 李飛, 王秀珍 申請人:南京醫科大學