豆腐果苷修飾物及其製備方法與應用的製作方法

2023-12-05 18:29:21

專利名稱：豆腐果苷修飾物及其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及新穎的豆腐果苷修飾物，其製備方法，以該類豆腐果苷修飾物為活性成分的藥物組合物，以及它們在製備鎮靜催眠藥物中和在製備抗炎鎮痛藥物中的應用。
背景技術：
豆腐果苷(Helicid)是從山龍眼科山龍眼屬(HeliciaLour.)幾種植物的果實中提取的有效成分單體糖苷(4-甲醯苯基-β-阿洛糖)，具有鎮靜安眠和抗炎鎮痛的作用。現有技術中未有豆腐果甘修飾物的任何報導。

發明內容
本發明的目的在於提供一類新的具有藥用價值的豆腐果苷修飾物及其製備方法，進一步的目的是提供本發明化合物豆腐果苷修飾物在製備鎮靜催眠藥物和抗炎鎮痛藥物中的應用。
本發明基於下述的原理，豆腐果苷的甲醛基活潑，如將豆腐果苷所連的阿洛糖羥基合成脂溶性衍生物，則容易通過血腦屏障，具有更好的鎮靜催眠和抗炎鎮痛作用，為此本發明設計合成了豆腐果苷新修飾物(結構見式I)，由豆腐果苷合成豆腐果苷新修飾物，該新修飾物具有鎮靜催眠和抗炎鎮痛等多種有價值的藥用活性。並開發出了該新修飾物在製備鎮靜催眠藥物和抗炎鎮痛藥物中的應用。
本發明豆腐果苷新修飾物用下述結構式(I)表示
式(I)豆腐果苷新修飾物根據羥基所連基團不同主要有以下三種類型1.豆腐果苷烷醯化物即豆腐果苷阿洛糖上羥基經醯基化合成，包括四乙醯化豆腐果苷、四丙醯化豆腐果苷、四丁醯化豆腐果苷和四琥珀酸半酯豆腐果苷。
2.豆腐果苷醚化物即豆腐果苷阿洛糖上羥基連接烷基，包括四甲醚豆腐果苷、四乙醚豆腐果苷。
3.豆腐果苷芳醯化物即豆腐果苷阿洛糖上羥基經芳醯基化合成，包括四苯甲醯豆腐果苷、四苄甲醯豆腐果苷。
本發明化合物豆腐果苷新修飾物是由以下方法合成而得取豆腐果苷溶於吡啶中，加入一定酸酐ROR(R與式I中一致)或琥珀酸酐(採用DMAP作催化劑)，於60℃水浴加熱3小時，反應產物經弱酸弱鹼水溶液洗滌後結晶等純化手段得到豆腐果苷新修飾物。
本發明的化合物豆腐果苷新修飾物可用於製備鎮靜催眠藥物和抗炎鎮痛藥物。
本發明化合物用作藥物時，可以加賦形劑以適當製劑直接使用，或與其他藥物組成複方製劑使用。其餘為藥物學上可接受的對人和動物無毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。藥用載體或賦形劑是藥物學上可接受的對人和動物無毒和惰性的固體、半固體和液體稀釋劑、填料以及藥物製品輔劑。將本發明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發明的藥物可經注射(靜注、肌注)和口服兩種形式給藥。使用量可根據用藥途徑、患者的年齡、體重、所治療的疾病的類型和嚴重程度等變化進行一次或多次使用。對成人來說，給藥量每天1～100mg比較合適。
具體實施例方式下面的實施例可以使本專業人員更全面地理解本發明，但不以任何方式限制本發明。
實施例1四乙醯化豆腐果苷的製備。
取200g豆腐果苷溶於200mL吡啶中，加入400mL乙酸酐，於60℃水浴加熱3小時，反應物直接加入適量水析出固體，將析出固體搗碎，先後採用1000ml稀鹽酸(2％)和1000ml碳酸鈉(5％)水溶液於布氏漏鬥抽濾各3次，再用水衝洗，將洗後固體加熱溶於500ml 95％酒精溶液，經結晶和反覆重結晶得到283g四乙醯化豆腐果苷，得率為88.9％。
四乙醯化豆腐果苷的結構鑑定數據紫外光譜(UV)用UV-210A儀測定。紅外光譜(IR)用Bio-RadFTS-135型分光光度計測定，KBr壓片。旋光用JASCO-20型旋光儀。熔點用X-4數字顯示顯微熔點測試儀。質譜(MS)用Auto SPEC 3000型質譜儀測定。核磁共振譜(1H NMR和13C NMR)用Bruker
DRX-400超導核磁共振儀測定，TMS作內標，CDCl3作溶劑。
結構式如式(II)所示 式(II)分子式C21H24O11分子量452性狀白色結晶熔點122-124℃旋光[α]D21-28.7°(c 0.61，CHCl3)UV(CHCl3)λmax＝231，235，266。
IR(KBr)νmax＝2977，1748，1693，1606，1583，1513，1431，1370，1220，1172，1066，945，905，848，671，616cm-1。
FAB-MS(+)m/z＝453([M+H]+，3)，331(100)，393(17)，271(2)，169(23)，145(2)，109(103)，81(3)。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)δH9.88(1H，s，CHO)，7.83(2H，d，J＝8.6Hz，H-3，5)，7.11(2H，d，J＝8.6Hz，H-2，6)，5.72(1H，m，H-3′)，5.46(1H，d，J＝8.0Hz，H-1′)，5.17(1H，dd，J＝8.0，2.9Hz，H-2′)，5.04(1H，dd，J＝9.6，2.6Hz，H-4′)，4.28-4.21(3H，m，H-5′，6′)，2.14，2.04，2.01，1.99(12H，s，4COCH3)。
13C-NMR(CDCl3，100MHz)δc190.8(s，CHO)，170.6，169.7，169.0，169.0(s，4COCH3)，161.4(C-1)，131.7(d，C-2，6)，131.6(s，C-4)，116.7(d，C-3，5)，96.2(d，C-1′)，70.6(d，C-5′)，68.5(d，C-2′)，68.2(d，C-3′)，65.9(d，C-4′)，62.1(t，C-6′)，20.7，20.6，20.5，20.5(q，4COCH3)。
實施例2四琥珀酸半酯豆腐果苷的製備。
取0.7g豆腐果苷溶於5mL吡啶中，加入1g丁二酸酐及1.14g4-N，N-二甲基吡啶(DMAP)，於60℃水浴加熱3小時，反應物加入適量水，用氯仿萃取三次，將氯仿部分經過凝膠(Sephadex LH-20)層析(流動相為氯仿∶甲醇＝1∶1)，得到1.42g四琥珀酸半酯豆腐果苷，得率為84.2％。
四琥珀酸半酯豆腐果苷的結構鑑定數據旋光用JASCO-20型旋光儀。質譜(MS)用Auto SPEC 3000型質譜儀測定。核磁共振譜(1H NMR和13C NMR)用Bruker DRX-400超導核磁共振儀測定，TMS作內標，CD3OD作溶劑。
結構式如式(III)所示 式(III)分子式C29H32O19分子量684性狀透明蠟狀旋光[α]D21-6.2°(c 0.91，CH3OH)FAB-MS(+)m/z＝123(苷元碎片峰，[C7H6O2+H]+，100)，115(7)，，109(14)，101(36)，98(8)，81(13)，69(4)。
1H-NMR(CD3OD，400MHz)δH9.66(1H，s，CHO)，7.66(2H，d，J＝8.0 Hz，H-3，5)，6.98(2H，d，J＝8.0Hz，H-2，6)，5.57(1H，m，H-3′)，5.37(1H，d，J＝7.9Hz，H-1′)，4.93(1H，dd，J＝7.6，2.6Hz，H-2′)，4.85(1H，m，H-4′)，4.15-4.07(3H，m，H-5′，6′)，2.53-2.37(16H，m，4COCH2CH2COOH)。
13C-NMR(CD3OD，100MHz)δc192.2(s，CHO)，175.1，172.9，172.2，171.6(s，4COCH3)，162.1(C-1)，132.4(d，C-2，6)，132.0(s，C-4)，117.3(d，C-3，5)，96.6(d，C-1′)，71.1(d，C-5′)，69.5(d，C-2′)，68.5(d，C-3′)，66.8(d，C-4′)，63.1(t，C-6′)，29.6-28.8(t，4COCH2CH2CH3)。
下述的製劑實施例是按實施例1的方法先製得豆腐果苷新修飾物，按常規製成注射液、粉針劑、口服液以及加入賦形劑的粉劑、制粒壓片、膠囊。
片劑按照本領域已知的方法製備片劑，每片含有下述成分式(I)化合物 50mg乳糖 70mg硬脂酸鎂 3mg聚乙烯吡咯烷酮7mg合計 130mg如果需要，片劑可用羥丙基甲基纖維素、滑石和著色劑進行膜包覆。
膠囊按照本領域已知的方法製備膠囊劑，每個膠囊中含有下述成分式(I)化合物 50mg乳糖 70mg玉米澱粉 25mg硬脂酸鎂 1mg聚乙烯吡咯烷酮4mg合計 150mg[製劑實施例3]注射劑按實施例1的方法先製得本發明式(I)化合物，按本領域已知的方法製備注射劑，加注射用水，精濾，灌封滅菌製成注射液。
下述的試驗例可進一步說明本發明所述豆腐果苷修飾物及其藥物組合物的有益效果，這些試驗例包括了本發明的藥效學試驗和急性毒性試驗等。
試驗例1本發明化合物豆腐果苷新修飾物中四乙醯化豆腐果苷的藥理作用。
四乙醯化豆腐果苷鎮靜催眠作用的實驗(1)實驗方法採用中藥藥理實驗方法學中的小鼠自發活動次數測定、閾下劑量戊巴比妥鈉協同催眠試驗、閾劑量戊巴比妥鈉睡眠時間測定試驗的方法(這些方法見[1]李儀奎等.中藥藥理實驗方法學.上海科學技術出版社，1991330；[2]李儀奎等.中藥藥理實驗方法學.上海科學技術出版社，1991334和[3]陳奇等.中藥藥理研究方法學.1993113～114中的描述)進行試驗，均採用多次灌胃和單次腹腔注射兩種給藥方式。實驗設置溶媒對照，以安定片為陽性對照。
實驗動物採用SPF級ICR小鼠，3～4周齡，雌雄各半，體重18～22g，由昆明醫學院實驗動物中心提供。受試物(四乙醯化豆腐果苷DA55)由本發明提供。
(2)實驗結果實驗結果見表1-6(與對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01)。
表1 多次灌胃給藥對小鼠自發活動的影響

表2 單次腹腔注射給藥對小鼠自發活動的影響

表3 多次灌胃給藥對閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠率的影響

表4 單次腹腔注射對閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠率的影響

表5 多次灌胃給藥對閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響

表6 單次腹腔注射對閾劑量戊巴比妥鈉小鼠睡眠時間的影響

DA55以400mg/kg的劑量連續灌胃給藥3天或腹腔注射給藥一次，能明顯抑制小鼠的自發活動；DA55以400、200、100mg/kg的劑量連續灌胃3天或腹腔注射給藥一次，能不同程度提高閾下劑量戊巴比妥鈉小鼠的入睡率，以高劑量組作用為顯著；DA55以400mg/kg的劑量連續灌胃給藥3天或DA55以400、200、100mg/kg腹腔注射給藥一次，均能明顯延長閾劑量戊巴比妥鈉小鼠的睡眠持續時間，DA55三劑量組腹腔注射給藥還能明顯縮短小鼠的睡眠潛伏期。以上結果顯示DA55有明顯的鎮靜催眠作用。
試驗例2四乙醯化豆腐果苷抗炎鎮痛作用的實驗(1)實驗方法採用中藥藥理實驗方法學中的醋酸致小鼠扭體性疼痛試驗、熱板致小鼠疼痛試驗、二甲苯致小鼠耳廓鍾脹試驗的方法(與試驗例1相同)進行試驗，均採用多次灌胃和單次腹腔注射兩種給藥方式。實驗設置溶媒對照，以阿司匹林為陽性對照。
實驗動物採用SPF級ICR小鼠，3～4周齡，雌雄各半，體重18～22g，由昆明醫學院實驗動物中心提供。受試物(四乙醯化豆腐果苷DA55)由本發明提供。
(2)實驗結果實驗結果見表7-11與對照組相比*P＜0.05，**P＜0.01)。
表7 DA55連續給藥7天對醋酸致小鼠扭體性疼痛的影響

表8 DA55連續給藥4天對醋酸所致小鼠扭體性疼痛的影響

表9 DA55單次給藥對熱板致疼小鼠的影響

表10 DA55對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響

表11 DA55連續給藥對致小鼠耳廓腫脹度的影響

DA55以200、50mg/kg的劑量連續灌胃給藥7天，以50、10mg/kg連續給藥4天，對醋酸所致小鼠扭體性疼痛有顯著抑制作用；以100mg/kg的劑量一次灌胃給藥，對熱板致疼小鼠的痛閾值有一定延長趨勢；5mg/kg的DA55連續灌胃給藥3天，對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有顯著抑制作用，以200、100、50、10mg/kg的劑量連續給藥8天，對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有顯著抑制作用。結果顯示DA55有明確的鎮痛及抗炎作用。
試驗例3.四乙醯化豆腐果苷急性毒性實驗(1)實驗方法採用小鼠一次灌胃最大給藥量測定。
實驗動物採用SPF級ICR小鼠，3～4周齡，由昆明醫學院實驗動物中心提供。試驗在IVC動物實驗室進行。受試物(四乙醯化豆腐果苷DA55)由本發明提供。稱取樣品15.0020g於乳缽中，加人少許0.5％CMC-Na研磨後移至量筒中，用少量溶媒清洗乳缽2次，調總容量至33ml，用不繡鋼刀攪拌均勻即成濃度為0.45g/ml的乳白色糊狀物為本試驗的最大濃度。
小鼠禁食不禁水5小時後，選取體重為18～21g者40隻，雌雄各半，按性別和體重隨機分為2組空白對照組；DA55組；每組20隻。給藥組小鼠按40ml/kg體重的容積一次灌胃給予四乙醯化豆腐果苷糊狀物，空白對照組給予同體積的0.5％CMC-Na。
(2)實驗結果除四乙醯化豆腐果苷組雌性3隻、雄性4隻動物於給藥後約20min活動量稍有減少外，其餘動物外觀、行為活動、精神狀態、食慾、大小便、皮毛、膚色及呼吸等均未見明顯毒性反應發生。連續觀察14天，動物全部健康存活，體重明顯增加，兩組比較無顯著差異，結果見表12觀察期滿處死解剖動物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等內臟組織，亦未見明顯異常。
表12 四乙醯化豆腐果苷經小鼠灌胃途徑急性毒性試驗體重結果

毒性預試表明小鼠口服DA55因濃度和體積原因，無法測出LD50，故以一次灌胃的最大給藥量來反映該樣品的急性毒性情況。小鼠以0.45g/ml的最大濃度、40ml/kg的最大容積一次灌胃給予DA-55，除近1/3動物活動量稍有減少外，未見其它明顯毒性反應發生；小鼠一次口服DA-55的最大給藥量為18.0g/kg，其最大耐受量必大於18.0g/kg。
權利要求
1.下述結構式(I)豆腐果苷修飾物 R＝COCH3R＝COCH2CH3R＝COCH2CH2CH3R＝COCH2CH2COOHR＝CH3R＝CH2CH3R＝COArR＝COCH2Ar(I)。
2.製備權利要求1豆腐果苷修飾物的方法，取豆腐果苷溶於吡啶中，加入一定酸酐ROR，其中R與式I中的R一致或琥珀酸酐，採用DMAP作催化劑，於60℃水浴加熱3小時，反應產物經弱酸、弱鹼水溶液洗滌後結晶純化得豆腐果苷修飾物。
3.用於鎮靜催眠的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1豆腐果苷修飾物和/或藥學上可接受的載體。
4.用於抗炎鎮痛的藥物組合物，其中含有治療有效量的權利要求1豆腐果苷修飾物和/或藥學上可接受的載體。
5.權利要求1豆腐果苷修飾物在製備鎮靜催眠藥物中的應用。
6.權利要求1豆腐果苷修飾物在製備抗炎鎮痛藥物中的應用。
全文摘要
本發明涉及下述結構式(I)的豆腐果苷新修飾物，其製備方法，以該類豆腐果苷修飾物為活性成分的藥物組合物，以及它們在製備鎮靜催眠藥物中和在製備抗炎鎮痛藥物中的應用。
文檔編號C07H13/06GK1951950SQ20061004882
公開日2007年4月25日 申請日期2006年11月17日 優先權日2006年11月17日
發明者周俊, 趙友興, 陳紀軍, 尚建華, 劉玉清, 朱兆雲, 王京昆, 趙雲麗 申請人:中國科學院昆明植物研究所, 雲南省藥物研究所