水產動物抗菌藥及其製備方法和餵藥方法
2023-12-05 11:03:46
專利名稱：水產動物抗菌藥及其製備方法和餵藥方法
技術領域：
本發明涉及一種水產動物抗菌藥及其製備方法和餵藥方法。
背景技術：
目前，水產養殖中各類新病不斷出現，使得在水產養殖過程中，需大量使用藥物對養殖水環境消毒、改良及水產養殖動物進行預防和治療，而在治療過程中，大劑量的藥物濃度，很容易造成水產養殖動物及養殖水環境中藥物殘留甚至嚴重超標，藥物的大量投放，還容易引起水體理化指標的改變，破壞水產養殖動物的生長環境。如當前，在水產養殖生產中，對細菌病的防治大多採用抗菌素為主的藥物治療方法，抗菌素對水產動物病害的防治的確起到相當大的作用。但近年來，在水產養殖中抗菌素使用種類、劑量及頻度都有大幅度提高，如環丙沙星、諾氟沙星等醫用喹諾酮(qunolones)類等抗菌素已成為各種漁藥製劑中的主要成分，此外一些醫用的新型喹諾酮類藥物如氧氟沙星等也在養殖生產中大量使用。但在許多細菌中，一些與抗菌素抗性相關的移動基因可以轉移到其它細菌中，從而有可能導致與人類疾病相關的細菌也有可能對此類抗菌素產生耐藥性。同時使用不當也會造成藥物在水產品中的殘留，降低水產品質量，對人類產生潛在威脅。
發明內容
本發明目的是提供一種使用安全、對水產動物的細菌性疾病具有治療和預防作用的水產動物抗菌藥及其製備方法和餵藥方法。
本發明的技術方案是一種水產動物抗菌藥，它含有噁喹酸、維生素C、澱粉。
一種水產動物抗菌藥的製備方法，它包括如下步驟(1)、將澱粉於105℃～110℃的溫度條件下烘乾2小時，冷卻後過40目篩；(2)、按比例稱取噁喹酸和維生素C；(3)、取與噁喹酸和維生素C的總重量相等的澱粉，使得澱粉與噁喹酸、維生素C充分混合製成母粉；(4)、將母粉與剩餘的澱粉再進行充分混合。
一種水產動物抗菌藥的餵藥方法，它包括如下步驟
(1)、在餌料中添加本藥物；(2)、將餌料投餵活體餌料魚；(3)、將活體餌料魚投餵水產動物。
噁喹酸(Qxolinic acid(OA))又名奧基索林酸，喹菌酮等，屬一代喹諾酮類，是我國推薦使用的水產專用抗菌素。噁喹酸殺菌範圍廣、殺菌力強，對大腸桿菌、沙門氏菌、巴氏桿菌、嗜血桿菌、葡萄球菌、孤菌、氣單胞菌、假單胞菌等均有強烈的抑菌和殺菌作用，其安全性高，無副作用，口服易吸收，組織穿透力強，幾乎完全從尿中排洩，與各類抗生素無交叉耐藥。噁喹酸對水產動物因細菌性感染引起疾病如豎鱗病、赤皮病、爛鰓、爛尾、淡水魚類細菌性敗血症，鰻的愛德華氏菌病、弧菌病、赤鰭、潰瘍、赤點、爛尾、爛鰓，牛蛙的紅腿、腹水、腸炎、爛皮病，蝦、蟹的爛鰓、黑鰓、紅腿病、螢光病、甲殼附肢潰瘍病等，甲魚的白斑、底板出血、白板、腹甲紅腫、細菌性腸炎、腹水、爛頸尾等均有良好的療效。在殘留方面，噁喹酸在魚肉及魚皮內的殘留量較少。
作為噁喹酸的主要輔劑的維生素C又稱抗壞血酸，屬於水溶性維生素。是魚類維持生理機能所必需的物質。自從Kitamura等(1965)首次通過實驗證實魚類的正常生長需要攝人維生素C之後，更多的研究表明維生素C對魚類的繁殖、生長發育、抗病和存活率提高等方面有重要的作用。維生素C為魚類維持其正常的生長功能和生命活動所必需。在膠原蛋白的合成過程中維生素C作為脯氨酸羥化酶的輔酶，直接影響膠原蛋白的合成，參與細胞間質的生成。有降低毛細血管的通透性、刺激凝血功能、增加對感染的抵抗作用，並參與解毒功能。用於各種急、慢性傳染病或其它疾病以增強抵抗力，病後恢復期、創傷癒合期的輔助治療。此外，在體內幾種藥物的解毒反應中必須有維生素C存在，維生素C還可促進鐵的吸收，有益於造血功能。維生素C還參與體內的氧化還原反應，參與葉酸、鈣等的代謝及類激素的合成。在水產動物病害防治方面，經研究發現，維生素C可影響魚類傷口的癒合速度，飼料中缺乏維生素C時，大馬哈魚出現椎前、眼損傷等症狀；在溝鯰中也觀察到維生素C能增強其對細胞感染。
本發明與現有技術相比，具有下列優點試驗報告如下樣品臨床試驗報告
抑菌試驗的報告一、試驗材料白色粉未狀的樣品；試驗菌株河蟹的氣單胞菌致病菌CL990909-3中華鱉溫和氣單胞菌致病菌TL97424嗜水氣單胞菌致病菌ATCC51208
淡水魚類細菌性敗血症病原菌嗜水氣單胞菌BSK-10淡水魚類細菌性敗血症病原菌嗜水氣單胞菌DF-30鰻弧菌鰻愛德華氏菌魚害粘球菌二、試驗方法試驗方法按農業部《新漁藥臨床試驗技術規範》(暫行)和國家環保局等編著的《水和廢水監測分析方法》及中的有關細菌學方法進行。
三、樣品對8株不同水產動物致病抑菌、殺菌濃度的測定培養基細菌培養基用肉汁腖培養基。
菌液的製備用接種環沾取純化的試驗菌株，接種到肉汁腖培養基上，28℃培養18小時後，將菌液稀釋到200萬個細菌/ml。
測定方法取滅菌試管10支，再以無菌操作每管加滅菌生理鹽9ml(第1管)、5ml(第2-10管)。無菌操作吸取待測純噁喹酸稀釋液1ml入放第1管，混勻後吸取5ml放入第2管中，混勻後吸取5ml放入第3管中，以此作逐管稀釋第9管，混勻後吸取5ml棄去，第10管不加藥物作對照。
每管加稀釋好的菌液0.5ml，混勻後28℃培養。24小時後移取1ml至無菌培養基中，培養24小時後肉眼觀察，含最小量尚呈不混蝕的試管所含藥物的濃度為最小抑菌濃度。試驗結果樣品對河蟹的氣單胞菌致病菌CL990909-3菌株的最小抑菌濃度為1.1mg/L。
樣品對中華鱉溫和氣單胞菌致病菌TL97424菌株的最小抑菌濃度1.8mg/L。
樣品對嗜水氣單胞菌致病菌ATCC51208菌株的最小抑菌濃度0.91mg/L。
樣品對淡水魚類細菌性敗血症病原菌嗜水氣單胞菌BSK-10的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
樣品對淡水魚類細菌性敗血症病原菌嗜水氣單胞菌DF-30的最小抑菌濃度為2.1mg/L。
樣品對鰻弧菌的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
樣品對鰻愛德華氏菌的最小抑菌濃度為0.91mg/L。
樣品對魚害粘球菌的最小抑菌濃度為1.82mg/L。
對淡水青蝦的急性毒性試驗一、試驗材料樣品、健康青蝦。
二、試驗方法在面積0.5m2、深0.5m的網箱內飼養淡水青蝦40隻，暫養7天後進行急性毒性試驗，試驗前三天停止餵食。試驗採用拌餌口服法，飼料投餵量為淡水青蝦體重的5％。
試驗前，將淡水青蝦飼料粉碎後，加入20％的魚粉和0.5％的飼料粘合劑，將適量的樣品拌入已粉碎的淡水青蝦飼料中，加水重新製成顆粒飼料並45乾燥。藥物餌料中含有樣品分別為2、4、6、8和10g/Kg，按5％的投飼量計算，則相當於每公斤淡水青蝦每天攝入100、200、300、400和500mg樣品。
試驗時，每天投餵含樣品的藥餌一次，連續投餵四天後統計每隻網箱內淡水青蝦數量並計算成活率。同時設空白對照組。每24小時至少觀察三次，記錄死亡數，進行96小時觀察記錄。試驗期間的水溫為22±2℃，PH為7.50。
三、試驗結果各給藥組和對照組的淡水青蝦未出現大量死亡，對照組淡水青蝦的成活率為90％，100mg/Kg組成活率為95％；200mg/Kg組成活率為90％；300mg/Kg組成活率為97.5％；400mg/Kg組成活率為92.5％；500mg/Kg組成活率為90％。經SPSS統計軟體分析，試驗組和對照組成活率無顯著差異，因此結果表明樣品對淡水青蝦的96小時LD50≥500mg/kg體重。結果見表表 對青蝦的急性毒性試驗
四、基本結論根據使用說明，樣品的使用劑量僅1mg/kg，而對青蝦的LD50≥500mg/kg，因此本產品的使用是安全的。
對鱖魚細菌性出血病的防治試驗一、材料與方法
1、試驗材料1.1試驗動物試驗用鱖魚體重為87.4克-112.9克，購自農貿市場。試驗前先在水溫為25℃～28℃的室內水泥池中暫養一周後，並隨機抽取五隻鱖魚，對血液和肌肉、肝胰腺、心臟進行細菌分離，確認無細菌感染後進行試驗。
1.2試驗菌株鱖魚細菌性出血病的病原菌溫和氣單胞菌GY20010506菌株(由中國水產科學研究院淡水漁業中心分離)，接種於普通肉腖培養液中，25-27℃培養20-24小時的菌懸液備用。在進行魚體試驗時，先測菌株對河鱖魚的半致死量(LD50)，再以LD50的倍量腹腔注射接種魚體，注射的劑量為2000萬/只。
1.3樣品。
2、試驗方法2.1試驗分組飼料中添加劑量為2％的樣品，並以5％投餌量投餵餌料魚，再用7-8％的餌料魚投餵鱖魚。即餌料魚攝入樣品的量為0.100g/Kg試驗分三組，高劑量組，餌料魚口灌劑量為1.000g/Kg，將餌料魚去頭勻漿製成肉糜後，再以80g/Kg魚糜口灌鱖魚。使用劑量組，餌料魚口灌劑量為0.100g/Kg，再以80g/Kg魚糜口灌鱖魚。低劑量組，口灌劑量為0.010g/Kg，再以80g/Kg魚糜口灌鱖魚。同時每組再成分別鱖魚口灌魚糜給藥4小時後攻毒和攻毒2小時後口灌魚糜兩組，以評價本產品對鱖魚細菌性出血病的預防和治療效果。攻毒劑量為2×107CFU/尾。同時設口灌生理鹽水攻毒組和口灌生理鹽水空白對照組。
2.2試驗方法在試驗時，分別稱取0.500克、5.000克和50.00克的樣品，加水製成糊狀後，定容於250毫升，口灌劑量為每公斤鯽魚口灌20ml。使鯽魚攝入樣品的量分別為0.005g/Kg、0.050g/Kg、0.500g/Kg。口灌60分鐘後，將鯽魚捕出，去除鱗片、頭部和鰭條，用組織勻漿機，以8000rpm勻漿5min，製成肉糜後，4℃保存。
在2M×3M網箱內隨機飼養141.7～275.3克的鱖魚10隻，暫養一周後開始試驗。將已勻漿的魚糜吸入10ml注射器，注射器連接硬質膠管。將鱖魚從水池中撈取出，稱重後，從嘴器插入膠管約2cm，根據鱖魚的體重，分別灌入高中低三組含樣品的魚糜，使鱖魚攝入魚糜的量為80g/Kg。隔天口灌一次，口灌4天，同時設按口灌空白魚糜80g/Kg的攻毒組和空白對照組。每24小時至少觀察三次，記錄死亡數，進行觀察記錄7天。試驗期間水溫為25±1℃，PH為7.4。
二、試驗結果結果表明口灌樣品高劑量組中，口灌4小時後攻毒組鱖魚的成活率為100％，攻毒2小時後口灌組鱖魚的成活率為90％；使用組中，口灌4小時後攻毒組鱖魚的成活率為80％，攻毒2小時後口灌組鱖魚的成活率為80％；低劑量組中，口灌4小時後攻毒組鱖魚的成活率為50％，攻毒2小時後口灌組鱖魚的成活率為40％；口灌飼料攻毒組的死亡率為100％，口灌飼料空白組的成活率為100％。結果見下表表 對鱖魚細菌性出血病的防治效果
本發明對由氣單胞菌引起的鱖魚細菌性出血病有較好的防治作用，防治的有效率在80％左右，使用劑量是合理的。
藥物製劑的穩定性測定一、試驗材料白色粉未狀樣品(噁喹酸的含量約為1％)。
儀器與藥品液相色譜儀系統，高速離心機；25ul和100ul的微量注射器；高效液相色譜分析用噁喹酸標準品(純度≥99％)，二氯甲烷、NaOH、磷酸氫二鉀為分析純；甲醇、磷酸為色譜純。
二、實驗方法色譜條件Alltech C18反相色譜柱(15mm×4mm，粒度5um)；流動相為甲醇∶稀磷酸(體積比為40∶60，pH2.5)，用0.45um微孔有機相過濾膜過濾，並超聲脫氣。流速1.0mL/min；檢測波長280nm；進樣體積10uL，保留時間為7～8min；檢測靈敏度0.01AUFS；最低檢出濃度0.010ug/ml。
標準曲線精密稱取樣品0.0500mg於50ml容量瓶中，加少量0.1mol/LNaOH溶解後，再加流動相稀釋至標線。分別取2.50、5.00、7.50、10.00、15.00、20.00ml於50ml容量瓶，用流動相稀釋至刻度，則樣品的濃度分別為0.05、0.10、0.1、0.2、0.3、0.4mg/ml，分別取10ul進樣，以峰面積(Y)對濃度(C)回歸，兩者線性關係良好，回歸方程C＝24536.58X+9719.24，r＝0.999樣品回收率測定精密稱取樣品6.670g(按7.5％生產標準，應含噁喹酸50mg)，置250ml燒杯中，加入甲醇20ml。振蕩10min，置具塞離心管中，高速離心機4℃、5000rpm離心15min，取上清，殘渣繼續加入甲醇20ml攪拌均勻後，繼續用按上述方法處理，離心後合併上清於50ml容量瓶定容。然後取10ml提取液置100ml容量瓶中，加流動相至標線，用0.45um濾膜過濾後，取10ul進樣，記錄峰面積並計算噁喹酸的回收率。見下表
三、藥物製劑穩定性考察漁用藥物製劑穩定性考察參照衛生部藥政局《新藥臨床前研究指導原則彙編》有關加速試驗進行。
由於本產品的主劑為噁喹酸，而輔劑為高穩維生素C和澱粉，因主劑與輔劑間不會產生氧化、水解等降解反應。因此將三個批次的樣品分裝於棕色玻璃瓶中，置於40±2℃，相對溼度為75±5％的培養箱中，隔5、15、30、60、90天取樣，按樣品回收率測定中的方法提取樣品中的噁喹酸，用高效液相色譜法測定製劑中噁喹酸的含量，結果見下表
三個批次的樣品中有效成份—噁喹酸在進行加速試驗前的平均含量為9.975μg/ml，在90天加速試驗後的平均含量為9.800μg/ml，平均減少1.77％。加速試驗結果表明，該藥物製劑穩定性較好，有效期暫訂為兩年。
四、基本結論三批次的樣品的平均回收率為99.75％，表明樣品中有效成分的含量符合標準；在40±2℃，相對溼度為75±5％條件下保存三個月後的平均回收率為98.00％，降低1.77％。因此本發明較為穩定，根據其穩定性暫訂有效期為二年。
具體實施例方式
一種水產動物抗菌藥，它含有噁喹酸、維生素C、澱粉，所述的維生素C通常採用穩定型維生素C。所述的噁喹酸的重量配比為5％～10％，所述的維生素C的重量配比為1％～4％，所述的澱粉的重量配比為88％～92％。
更進一步的配方是所述的噁喹酸的重量配比為7％～8％，所述的維生素C的重量配比為2％～3％，所述的澱粉的重量配比為89.5％～90.5％。
一種水產動物抗菌藥的製備方法，它包括如下步驟，(1)、將澱粉於105℃～110℃的溫度條件下烘乾2小時，冷卻後過40目篩；(2)、按比例稱取噁喹酸和維生素C；(3)、取與噁喹酸和維生素C的總重量相等的澱粉，使得澱粉與噁喹酸、維生素C充分混合製成母粉；(4)、將母粉與剩餘的澱粉再進行充分混合。
在步驟(2)中所稱取的噁喹酸的純度含量大於或等於98％。
一種水產動物抗菌藥的餵藥方法，它包括如下步驟，(1)、在餌料中按重量配比2％添加本藥物；
(2)、按重量配比5％左右將餌料投餵餌料魚；(3)、按重量配比7％～8％將餌料魚投餵鱖魚等水產動物。
鱖魚在患有腸炎、嚴重爛鰓和出血病時，需服用藥餌。但鱖魚是捕食活魚的，藥餌需先由飼料魚吃進肚中，再由鱖魚捕食，屬間接服藥法。按飼料魚攝食量一般為魚體重的6-7％，鱖魚捕食飼料魚的量一般為體重的10％，再按藥物的有效劑量設計出藥方配方。故對於鱖魚等水產動物，本發明採用上述餵藥方法。
本發明的水產動物抗菌藥的主要優點可通過試驗具體證明，其最小抑菌濃度較小，使用安全，對由氣單胞菌引起的鱖魚細菌性出血病有較好的防治作用，防治的有效率在80％左右，且該抗菌藥物製劑的有效成分的穩定性較好。
權利要求
1.一種水產動物抗菌藥，其特徵在於它含有噁喹酸、維生素C、澱粉。
2.根據權利要求1所述的水產動物抗菌藥，其特徵在於所述的噁喹酸的重量配比為5％～10％，所述的維生素C的重量配比為1％～4％，所述的澱粉的重量配比為88％～92％。
3.根據權利要求2所述的水產動物抗菌藥，其特徵在於所述的噁喹酸的重量配比為7％～8％，所述的維生素C的重量配比為2％～3％，所述的澱粉的重量配比為89.5％～90.5％。
4.根據權利要求1所述的水產動物抗菌藥，其特徵在於所述的維生素C為穩定型維生素C。
5.一種水產動物抗菌藥的製備方法，其特徵在於它包括如下步驟，(1)、將澱粉於105℃～110℃的溫度條件下烘乾2小時，冷卻後過40目篩；(2)、按比例稱取噁喹酸和維生素C；(3)、取與噁喹酸和維生素C的總重量相等的澱粉，使得澱粉與噁喹酸、維生素C充分混合製成母粉；(4)、將母粉與剩餘的澱粉再進行充分混合。
6.根據權利要求5所述的水產動物抗菌藥的製備方法，其特徵在於在步驟(2)中所稱取的噁喹酸的純度含量大於或等於98％。
7.一種水產動物抗菌藥的餵藥方法，其特徵在於它包括如下步驟，(1)、在餌料中添加本藥物；(2)、將餌料投餵活體餌料魚；(3)、將活體餌料魚投餵水產動物。
全文摘要
一種水產動物抗菌藥，它含有噁喹酸、維生素C、澱粉。該抗菌藥在特殊的工藝中製得，並且針對鱖魚等水產動物採用特殊的方法餵藥。通過臨床試驗證明，該水產動物抗菌藥的最小抑菌濃度較低，使用安全，對由氣單胞菌引起的鱖魚細菌性出血病有較好的防治作用，防治的有效率在80％左右，且該抗菌藥物製劑的有效成分的穩定性較好。
文檔編號A23K1/16GK1660084SQ20041010322
公開日2005年8月31日 申請日期2004年12月30日 優先權日2004年12月30日
發明者徐建春, 惠永樂, 孫濤, 譚雲娥, 鮑俊傑 申請人:吳江市魚病防治中心