一種雷公藤紅素衍生物的製備方法及其產品和應用的製作方法

2023-12-05 15:19:31 2

一種雷公藤紅素衍生物的製備方法及其產品和應用的製作方法
【專利摘要】本發明提供一種雷公藤紅素衍生物的製備方法及其產品和應用，該製備方法以雷公藤紅素為微生物代謝藥物，通過特殊誘導子對微生物代謝雷公藤紅素，同時得到多種、高產率的基於雷公藤紅素的羥基、還原或羧基化等取代修飾的雷公藤紅素衍生物。本發明方法綠色環保、選擇性強、產率高，能夠大規模利用微生物製備雷公藤紅素衍生物，且製備的雷公藤紅素衍生物具有高效、低毒等特點，能夠實際地用於腫瘤、病毒性疾病和神經損傷性疾病的治療，為雷公藤紅素衍生物提供了廣闊的應用前景。
【專利說明】—種雷公藤紅素衍生物的製備方法及其產品和應用
【【技術領域】】
[0001]本發明涉及一種雷公藤紅素衍生物的製備方法及其產品和應用。
【【背景技術】】
[0002]衛矛科植物雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook.F.),收載於《滇南本草》,其產地主要分布在中國南部，包括浙江、湖南、安徽、雲南、福建和臺灣等地，其中以福建泰寧產的雷公藤質量為最優[1]。而雷公藤紅素(celastrol, CS)，屬醌甲基三萜類化合物，是雷公藤主要的活性成分之一，其在抗癌、抗炎、特別是治療神經系統疾病包括:阿爾茲海默病(早老性痴呆，AD)、帕金森病(PD)、亨延頓氏退行性疾病(HD)和脊髓損傷、肌萎縮性側索硬化(ALS)疾病等方面表現出了突出的藥理活性，特別是對「全長變異亨延頓神經元細胞顯型的逆轉作用十分突出，其對其聚合穀氨酸調節積累的半數抑制率為(IC5(i=2.5um)，這一抑制率與美國國立神經疾病研究所(NINDS)，所列出的全部1040個治療HD的藥物中排列於前10位，而在另一方面，雷公藤紅素作為有效的蛋白酶體抑制劑，通過抑制伴侶蛋白(Hsp90)表達，發揮誘導腫瘤凋亡，顯示了非常突出的抗腫瘤作用，為此，雷公藤紅素在抑制腫瘤和神經系統保護的藥物開發方面，顯示了巨大的應用前景。然而，雷公藤紅素極低的水溶性所引起製劑困難、對酸鹼敏感而引發的分解、還原和重排，聚合不穩定性等都限制了其研發進程和臨床應用(引用文獻如下:孫紅莉.雷公藤紅素衍生物的化學合成及其活性研究[博士論文].暨南大學，2010)。[0003]鑑於上述問題，國內外學者成功運用化學法對雷公藤紅素進了多種修飾改造，其中化學合成法合成的衍生物包括:二氫雷公藤紅素及多種雷公藤紅素類似物(公開文獻如下:(Nagase M, Oto J, Sugiyama S，et al.Apoptosis induction inHL_60cells and inhibition of topoisomerase II by triterpene celastrol.Bioscience,biotechnology, and biochemistry, 2003, 67(9):1883-1887)、(Devlin, JP.Derivatives of pentacyclic nortriterpene quinone methides as compounds usefulin the treatment of inflammatory neurodegenerative and neoplastic diseases, USpatent 2004/0220267 Al, 2004-11-04))，雷公藤紅素有機酯類衍生物(雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯(公開專利為:王玉強，孫紅莉，徐立朋，等。一種雷公藤紅素衍生物及其用途，中國專利20101015042 8.6.2010-04-23)、雷公藤紅素磺酸鈉類衍生物(2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙醯基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯)(公開專利為:(Zeng JF, Pan JF1Li BY etal.Water-soluble triterpenephenol compound having antitumor activity and thepreparation thereof, US patent 2010/0267983, 2010-10-21), (Zeng JF, Pan JF, Li BYet al.Water-soluble triterpenephenol compound having antitumor activity andthe preparation thereof, European patent，EP，2012/2213679 BI，2012-06-06))和雷公藤紅素醯胺類衍生物(28- (4，-甲氧基)-苄基醯胺雷公藤紅素，28-苄基醯胺雷公藤紅素，28- (3，-吡啶)甲醯胺基雷公藤紅素，28-異丙基醯胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲醯胺雷公藤紅素，28-吡咯烷醯胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基醯胺雷公藤紅素、28-嗎啉醯胺雷公藤紅素、28-N-甲基醯胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪醯胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯)(公開專利為:Ze，ev A, R, Anindita, B, Nicholas DP, C etal.Compositions and methods for inhibiting growth and metastasis melanoma.USpatent 2011/7888355 B2，2011-02-15)。雖然化學修飾為大規模製備雷公藤紅素相關衍生物提供了廣闊的前景，但是但化學合成法存在得率低、選擇性差、副產品多、過程較繁雜等缺點，而且目前大多數衍生物的作用與雷公藤紅素相比，還相對較弱，為此，具有一定的局限性。[0004]由於雷公藤紅素水溶性極差，其在體內發揮最用的應該以其體內代謝產物為主，雖然雷公藤紅素體內代謝產物已經部分闡明，但是利用化學方法直接得到與雷公藤代謝相同的成分，比較少，而在另一方面，利用具有仿生代謝能力的微生物直接通過微生物特殊的酶促作用直接轉化生物雷公藤紅素產生多種體內代謝、減毒後的雷公藤紅素的衍生物已經取得了很好的效果，但該代謝的方法在雷公藤紅素方面的應用極少，目前尚未見到系統的報導結果。因此，需要利用生物工程的這項技術，以此得到更多的雷公藤紅素衍生物。
【
【發明內容】
】
[0005]本發明要解決的技術問題之一，在於提供一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，該方法綠色環保、選擇性強、產率高，能夠大規模利用微生物製備雷公藤紅素衍生物。
[0006]本發明是這樣實現上述技術問題之一的:
[0007]一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，包括以下步驟:
[0008]步驟一:取保存於4°C、土豆斜面培養基培養的、轉化菌種一支，置於25°C恆溫培養箱中培養7天後，以適量無菌水將斜面上的孢子充分吹打下來，使單孢子懸液的濃度調整至107~108個/mL，既得種子孢子液；
[0009]步驟二:以lOOmL，5mL的接種量，在土豆液體培養基上接種步驟一所得孢子液，在pH至6.0，溫度30°C ±1°C，振蕩速度為200r/min條件下培養12h後；按0.1~4ug的接種量，加入各種不同比例的聯合誘導子，繼續培養12h後，再按I~IOug的接種量加入雷公藤紅素，然後繼續培養5天，每天檢測各種雷公藤紅素衍生物的含量和轉化率，當產物轉化率低至0.5~3%時,停止培養,過濾後收集菌絲體，然後將濾液於8000r/min,離心IOmin去除沉澱既得到發酵提取液；
[0010]步驟三:將步驟二所得提取液過濾，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取3遍，合併萃取液；而菌絲體則用重量比為1:3~1:10的乙酸乙酯超聲提取30min，然後濾去菌絲體，所得濾液與萃取液合併，既得分離提取液，提取液濃縮至幹，得到提取後殘渣；
[0011]步驟四:將經過步驟三處理所得的殘渣，用Img:1~IOmL的比例用丙酮溶解後，採用矽膠拌樣後揮幹，稱取20倍於樣品量的矽膠，使用溼法進行填柱(矽膠柱，欣維爾，MCT-G-05 ;裝樣量為每mL為20g矽膠)和上樣；首先用5倍柱體積的100%石油醚將樣品中低極性油類物質洗脫乾淨，然後依次用體積比為:5:2，2:3，2:5，0:5的石油醚:二氯甲烷的洗脫液，體積比為10:0，8:1，6:1，4:1，2:1，1:1，1:2，1:4，1:6，1:8的二氯甲烷:乙酸乙酯洗脫液，以及100%乙酸乙酯洗脫液，依次對柱子進行洗脫，TLC控制收集主餾分，最後使用旋轉蒸發儀將各個餾分的流動相蒸乾後，用適量色譜純的甲醇溶解後，用0.22 μ m的有機膜過濾後，得到分離液。
[0012]步驟五:將經過步驟四處理所得的分離液，採用高效液相半製備法分離純化，HPLC梯度洗脫法控制收集不同的雷公藤紅素衍生物洗脫液，減壓蒸去溶劑後，用甲醇結晶後所得到的化合物，即為所述的雷公藤紅素衍生物。
[0013]進一步地，所述土豆培養基為:土豆200g/L，葡萄糖20g/L ;配置時將土豆去皮後將其切成小塊，加水加熱煮沸30min，過濾，取濾液定容至1L，加入葡萄糖20g，攪拌溶解後，121°C滅菌30min，即得；[0014]斜面培養基為:取上述土豆培養基1L，加入瓊脂粉各20g，加熱溶解後分裝於玻璃試管中，於121 °C下滅菌30min後取出，傾斜45度，靜置、冷卻既得。
[0015]進一步地，所述轉化菌種為下述微生物中任意一種:
[0016]短刺小克銀漢黴(Cunninghamellablakesleana)AS3.970;AS3.153;AS3.910 ；AS3.954, AS3.2016 ;AS3.2017 ;AS3.2018 ;AS3.3401;或者刺孢小克銀漢黴(Cunninghamellaechinulata)AS3.154;AS3.952;AS3.953;AS3.1969;AS3.1970;AS3.1971;AS3.1977;AS3.1978;AS3.1979;AS3.1980;AS3.1981;AS3.1987;AS3.1988;AS3.1989;AS3.1990;AS3.2000;AS3.2004;AS3.2005;AS3.2006;AS3.2011;AS3.2015;AS3.2473;AS3.2474;AS3.2475;AS3.2716 ;AS3.400;或者雅致小克銀漢黴(Cunninghamella elegans.) AS3.156;AS3.1207;AS3.1659;AS3.2028;AS3.2031;AS3.2032;AS3.2033;AS3.2041;AS3.2476;AS3.2477;AS3.2717 ;AS3.3402 ;AS3.2476;小克銀漢黴 CFCC5029;或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner) Lunn et Shipton,teleomorph ATCC9245 ；ATCC8688a ；ATCC8983 ；或者 Cunninghamella echinulata(Thaxter)Thaxter var.echinulata, teleomorphATCCl1585a；ATCC36190 ；ATCC11585b ；ATCC9244 ；或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCCl1064 ；ATCC10028a ；或者Cunninghamella elegans ATCC36112 ；ATCC26269 ；ATCC10028b ；黑麴黴 Aspergillusniger AS3.40;AS3.315;AS3.316;AS3.350;AS3.429;AS3.739;AS3.879;AS3.939;AS3.940;AS3.1858 ;AS3.2931 ;AS3.3882;AS3.3883;AS3.4303 ; AS3928 ; AS3.4304 ;AS3.4309;AS3.4463;AS3.4304;AS3.4523 ;黃麴黴、刺囊毛黴、細孢毛黴、鏈格孢、微紫青黴和蕁麻青黴。
[0017]進一步地，所述的聯合誘導子為下述三組物質中的至少兩組中的任意一種物質組成:
[0018]A組:A1為α -環糊精，Α2為β _環糊精，A3為2，6- 二甲基-β -環糊精，Α4為
2-羥丙基-β -環糊精，Α5為甲基化-β -環糊精、Α6為羥乙基-β -環糊精，Α7為葡萄糖-β -環糊精，AS為磺丁基-β -環糊精，Α9為Y -環狀糊精，AlO為羧甲基-β -環糊精；
[0019]B組:B1為茉莉酸甲酯，B2為水楊酸，B3為殼聚糖，B4為茉莉酸，B5為真菌聚糖類，B6為β -葡聚糖，Β7為穀胱甘肽，Β8為2-羥乙基茉莉，Β9為油菜素內酯，BlO為雲酯，Bll為甲殼素；Β12為小克銀漢黴屬AL4粗誘導子；
[0020]C組:C1為卡馬西平，C2為莫達非尼，C3為奈韋拉平，C4為利福平，C5為貫葉連翹，C6為異煙肼，C7為胰島素，C8為奧美拉唑，C9為苯巴比妥，ClO為潑尼松，Cll為潑尼松龍，C12為地塞米松，C13為倍他米松，C14為倍氯米松，C15為戊酸倍他米松，C16為醋酸地塞米松，C17為9-氣~16 α -甲基11 β , 17- 二羥基_3-氧-1,4-雄二稀-17 β -竣酸等。
[0021]進一步地，TLC控制收集主餾分，用體積比為70:12的氯仿和甲醇為展開劑；
[0022]所述產物轉化率的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18柱，其中分析柱內徑乘以長度為4.6mmX250mm，粒徑為5μπι;雷公藤紅素檢測波長:427nm，室溫；進樣量:10 μ L ;
[0023]所述梯度洗脫法控制不同的雷公藤紅素衍生物的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其中分析柱內徑乘以長度為4.6mmX 250mm，粒徑為5 μ m ;吸收波長:427nm ；
[0024]流動相:甲醇:0.1%磷酸水的體積比和洗脫時間分別如下:27:73、洗脫時間Omin ；5:95、洗脫時間 20min ；17:83、洗脫時間 25min ；27:73、洗脫時間 28min，27:73、洗脫時間30min ；
[0025]上述對應的流速為:0.5ml/min ;0.5ml/min ； lml/min ； lml/min ；0.5ml/min ；柱穩:25°C、進樣量:20 μ I。
[0026]進一步地，所述方法可用於製備的雷公藤紅素衍生物如下:二氫雷公藤紅素，二氫扁塑藤素，二氫雷公藤酹Β6, 二氫tingenine B4, 二氫雷公藤酸A、二氫雷公藤酸C、二氫pristimerol、雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、
3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯、2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙醯基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯、28-(4』_甲氧基)-苄基醯胺雷公藤紅素，28-苄基醯胺雷公藤紅素，28- (3』 -吡啶)甲醯胺基雷公藤紅素，28-異丙基醯胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲醯胺雷公藤紅素，28-吡咯烷醯胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基醯胺雷公藤紅素、28-嗎啉醯胺雷公藤紅素、28-N-甲基醯胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪醯胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯等雷公藤紅素衍生物。
[0027]本發明要解決的技術問題之二，在於提供一種雷公藤紅素衍生物，其具有高效、低毒等特點，能夠實際地用於腫瘤、病毒性疾病和神經損傷性疾病的治療，為雷公藤紅素衍生物提供了廣闊的應用前景。
[0028]本發明是這樣實現上述技術問題之二的:
[0029]一種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物的結構式a如下:
[0030]
【權利要求】
1.一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於:包括以下步驟: 步驟一:取保存於4°c、土豆斜面培養基培養的、轉化菌種一支,置於25°C恆溫培養箱中培養7天後，以適量無菌水將斜面上的孢子充分吹打下來，使單孢子懸液的濃度調整至IO7~IO8個/mL，既得種子孢子液； 步驟二:以100mL，5mL的接種量，在土豆液體培養基上接種步驟一所得孢子液，在pH至 6.0，溫度30°C 土 TC，振蕩速度為200r/min條件下培養12h後；按0.1~4ug的接種量，加入各種不同比例的聯合誘導子，繼續培養12h後，再按I~IOug的接種量加入雷公藤紅素，然後繼續培養5天，每天檢測各種雷公藤紅素衍生物的含量和轉化率，當產物轉化率低至0.5~3%時,停止培養,過濾後收集菌絲體,然後將濾液於8000r/min,離心IOmin去除沉澱既得到發酵提取液； 步驟三:將步驟二所得提取液過濾，濾液用等體積的乙酸乙酯萃取3遍，合併萃取液；而菌絲體則用重量比為1:3~1:10的乙酸乙酯超聲提取30min，然後濾去菌絲體，所得濾液與萃取液合併，既得分離提取液，提取液濃縮至幹，得到提取後殘渣； 步驟四:將經過步驟三處理所得的殘渣，用Img:1~IOmL的比例用丙酮溶解後，採用矽膠拌樣後揮幹，稱取20倍於樣品量的矽膠，使用溼法進行填柱和上樣；首先用5倍柱體積的100%石油醚將樣品中低極性油類物質洗脫乾淨，然後依次用體積比為:5:2，2:3，2:5，0:5的石油醚:二氯甲烷的洗脫液，體積比為10:0，8:1，6:1，4:1，2:1，1:1，1:2，1:4，1:6，1:8的二氯甲烷:乙酸乙酯洗脫液，以及100%乙酸乙酯洗脫液，依次對柱子進行洗脫，TLC控制收集主餾分，最後使用旋轉蒸發儀將各個餾分的流動相蒸乾後，用適量色譜純的甲醇溶解後，用0.22 μ m的有機膜過濾後，得到分離液； 步驟五:將經過步驟四處理所得的分離液，採用高效液相半製備法分離純化，HPLC梯度洗脫法控制收集不同的雷公藤紅素衍生物洗脫液，減壓蒸去溶劑後，用甲醇結晶後所得到的化合物，即為所述的雷公藤紅素衍生物。
2.如權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於:所述土豆培養基為:土豆200g/L，葡萄糖20g/L ;配置時將土豆去皮後將其切成小塊，加水加熱煮沸30min，過濾，取濾液定容至1L，加入葡萄糖20g，攪拌溶解後，121°C滅菌30min，即得； 斜面培養基為:取上述土豆培養基1L，加入瓊脂粉各20g，加熱溶解後分裝於玻璃試管中，於121 °C下滅菌30min後取出，傾斜45度，靜置、冷卻既得。
3.如權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於:所述轉化菌種為下述微生物中任意一種: 短刺小克銀漢黴(Cunninghamella blakesleana)AS3.970;AS3.153;AS3.910 ；AS3.954, AS3.2016 ;AS3.2017 ;AS3.2018 ;AS3.3401;或者刺孢小克銀漢黴(Cunninghamellaechinulata)AS3.154;AS3.952;AS3.953;AS3.1969;AS3.1970;AS3.1971;AS3.1977;AS3.1978;AS3.1979;AS3.1980;AS3.1981;AS3.1987;AS3.1988;AS3.1989;AS3.1990;AS3.2000;AS3.2004;AS3.2005;AS3.2006;AS3.2011;AS3.2015;AS3.2473;AS3.2474;AS3.2475;AS3.2716 ;AS3.400;或者雅致小克銀漢黴(Cunninghamella elegans.) AS3.156;AS3.1207;AS3.1659;AS3.2028;AS3.2031;AS3.2032;AS3.2033;AS3.2041;AS3.2476;AS3.2477;AS3.2717 ;AS3.3402 ;AS3.2476;小克銀漢黴 CFCC5029;或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans (Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCC9245 ；ATCC8688a ；ATCC8983 ；或者 Cunninghamella echinulata(Thaxter)Thaxter var.echinulata, teleomorphATCC11585a；ATCC36190 ；ATCC11585b ；ATCC9244 ；或者 Cunninghamella echinulatavar.elegans(Lendner)Lunn et Shipton, teleomorph ATCCl1064 ；ATCC10028a ；或者Cunninghamella elegans ATCC36112 ；ATCC26269 ；ATCC10028b ；黑麴黴 Aspergillusniger AS3.40;AS3.315;AS3.316;AS3.350;AS3.429;AS3.739;AS3.879;AS3.939;AS3.940;AS3.1858;AS3.2931 ;AS3.3882 ;AS3.3883 ;AS3.4303 ; AS3928 ; AS3.4304 ;AS3.4309; AS3.4463;AS3.4304;AS3.4523 ;黃麴黴、刺囊毛黴、細孢毛黴、鏈格孢、微紫青黴和蕁麻青黴。
4.如權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於:所述的聯合誘導子為下述三組物質中的至少兩組中的任意一種物質組成: A組:Al為α -環糊精，Α2為β -環糊精，A3為2，6_ 二甲基-β -環糊精，Α4為2-羥丙基-β -環糊精，Α5為甲基化-β -環糊精、Α6為羥乙基-β -環糊精，Α7為葡萄糖-β -環糊精，AS為磺丁基-β -環糊精，Α9為Y -環狀糊精，AlO為羧甲基-β -環糊精； B組:B1為茉莉酸甲酯，B2為水楊酸，B3為殼聚糖，B4為茉莉酸，B5為真菌聚糖類，B6為β -葡聚糖，Β7為穀胱甘肽，Β8為2-羥乙基茉莉，Β9為油菜素內酯，BlO為雲酯，Bll為甲殼素；Β12為小克銀漢黴屬AL4粗誘導子； C組:C1為卡馬西平，C2為莫達非尼，C3為奈韋拉平，C4為利福平，C5為貫葉連翹，C6為異煙肼，C7為胰島素，C8為奧美拉唑，C9為苯巴比妥，ClO為潑尼松，Cl I為潑尼松龍，C12為地塞米松，C13為倍他米松，C14為倍氯米松，C15為戊酸倍他米松，C16為醋酸地塞米松，C17為9-氟-16 α -甲基11 β，17- 二羥基_3_氧_1，4_雄二烯-17 β -羧酸。
5.如權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於:TLC控制收集主餾分，用體積比為70:12的氯仿和甲醇為展開劑； 所述產物轉化率的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX EclipseXDB-C18柱，其中分析柱內徑乘以長度為4.6mmX 250mm,粒徑為5 μ m ;雷公藤紅素檢測波長:427nm，室溫；進樣量:10yL ; 所述梯度洗脫法控制不同的雷公藤紅素衍生物的高效液相色譜檢測方法為:色譜柱Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱，其中分析柱內徑乘以長度為4.6_X250_，粒徑為5 μ m ;吸收波長:427nm ； 流動相:甲醇:0.1%磷酸水的體積比和洗脫時間分別如下:27:73、洗脫時間Omin ；5:95、洗脫時間20min ；17:83、洗脫時間25min ；27:73、洗脫時間28min，27:73、洗脫時間30min ；
上述對應的 '流速為:0.5ml/min ；0.5ml/min ；lml/min ；lml/min ；0.5ml/min ;柱 I急:25°C、進樣量:20 μ I。
6.如權利要求1~5任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法，其特徵在於: 所述方法可用於製備的雷公藤紅素衍生物如下:二氫雷公藤紅素，二氫扁塑藤素，二氫雷公藤酚Β6，二氫tingenine B4，二氫雷公藤酸A、二氫雷公藤酸C、二氫pristimerol、雷公藤紅素甲酯、雷公藤紅素乙酯、雷公藤紅素丙酯、雷公藤紅素丁酯、雷公藤紅素卞酯、14N-甲基-哌嗪酸-雷公藤紅素酯、3-乙基雷公藤紅素、3- 丁基雷公藤紅素、3-丙基雷公藤紅素、3-異丁基雷公藤紅素、3-川芎嗪酸雷公藤紅素、28-川芎嗪酸雷公藤紅素、a-硫辛酸雷公藤紅素酯、2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素甲酯，2，3羥基-6-磺酸鈉-雷公藤紅素丁酯，2，3，7羥基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2-羥基-3乙醯基-6磺酸鈉-雷公藤紅素，2，3羥基-6磺胺-雷公藤紅素甲酯、28- (4』 -甲氧基)-苄基醯胺雷公藤紅素，28-苄基醯胺雷公藤紅素，28- (3』_吡啶)甲醯胺基雷公藤紅素，28-異丙基醯胺雷公藤紅素、28- (N-甲基)-甲醯胺雷公藤紅素，28-吡咯烷醯胺雷公藤紅素、28-甲氧基乙基醯胺雷公藤紅素、28-嗎啉醯胺雷公藤紅素、28-N-甲基醯胺雷公藤紅素、雷公藤紅素28-N-甲基哌嗪醯胺、雷公藤紅素苯甲酸酯、雷公藤紅素異丙酯等雷公藤紅素衍生物。
7.—種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物是利用權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法製得，其特徵在於:所述雷公藤紅素衍生物的結構式a如下:
8.如權利要求7所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特徵在於: 當R1是甲基時，基團X1和X2中一個為羥基，一個為氫，或者均為羥基； 當R1是羥甲基時，基團X1和X2 —個為羥基，一個為氫，或者均為羥基； 當R1是羧基時，基團X1和X2均為羥基，或者均為氫。
9.如權利要求7所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特徵在於: 所述雷公藤紅素衍生物具體為:6_羥基雷公藤紅素、7-羥基雷公藤紅素、6，7- 二羥基雷公藤紅素、23-羥基雷公藤紅素、6，23-雙羥基雷公藤紅素、7，23-雙羥基雷公藤紅素、6，7，23-三羥基雷公藤紅素、6，7- 二羥基-23-羧基-雷公藤紅素、23-羧基雷公藤紅素。
10.如權利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與腫瘤相關的疾病，包括肺癌、肝癌、前列腺癌、人卵巢癌、腺癌、乳腺癌、粒細胞白血病、結腸癌、阿黴素敏感的肺癌、乳腺癌、肝癌、阿黴素抗藥的肺癌、乳腺癌、肝癌等腫瘤系統疾病。
11.如權利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與病毒相關的疾病，包括愛滋病、B肝、皰疹、流感病毒。
12.如權利要求7~9任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與神經損傷相關的疾病，包括阿爾茲海默病、帕金森病、亨延頓氏退行性疾病和脊髓損傷和肌萎縮性側索硬化疾病。
13.—種雷公藤紅素衍生物，所述雷公藤紅素衍生物是利用權利要求1所述的一種雷公藤紅素衍生物的製備方法製得，其特徵在於:所述雷公藤紅素衍生物的結構式b如下:
14.如權利要求13所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特徵在於:當R/是氫時，基團X/和X2'中，一個為羥基，一個為氫；或基團X/和X2'均為羥基；當R/是羥基時，基團X/和中，一個為羥基，一個為氫；或基團X/和均為氫。
15.如權利要求13所述的一種雷公藤紅素衍生物，其特徵在於:所述雷公藤紅素衍生物具體為:6_氫-7-羥基雷公藤紅素、6-氫-23-羥基雷公藤紅素、6-氫-7，23- 二羥基雷公藤紅素、6-氫-6, 7- 二羥基雷公藤紅素、6, 7,8-三氫-6, 7- 二羥基雷公藤紅素、6-氫-6,23-二羥基雷公藤紅素。
16.如權利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與腫瘤相關的疾病，包括肺癌、肝癌、前列腺癌、人卵巢癌、腺癌、乳腺癌、粒細胞白血病、結腸癌、阿黴素敏感的肺癌、乳腺癌、肝癌、阿黴素抗藥的肺癌、乳腺癌、肝癌等腫瘤系統疾病。
17.如權利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與病毒相關的疾病，包括愛滋病、B肝、皰疹、流感病毒。
18.如權利要求13~15任一項所述的一種雷公藤紅素衍生物可以用於治療與神經損傷相關的疾病，包括阿爾茲海默病、帕金森病、亨延頓氏退行性疾病和脊髓損傷和肌萎縮性側索硬化疾 病。
【文檔編號】A61P25/14GK103642887SQ201310597162
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月21日 優先權日:2013年11月21日
【發明者】張景紅, 謝深霞, 葉龍飛 申請人:華僑大學